Aire ascendente, manteniendo as el gas en el sistema ms largo.

En sistemas
de fermentacin multifsica que implican slidos, el componente axial del flujo
debido a la agitacin es til para mantener los slidos en suspensin (115).
Los desarrollos recientes en el diseo del impulsor han llevado a la aparicin de
impulsores de alta eficiencia como MIG e INTERMIG, que requieren un 25% y un
40% menos de entrada de energa para obtener el mismo grado de mezcla
como un impulsor de turbina. Recientemente, se inform que los propulsores
hidrodinmicos de alta solidez con un modo de operacin de bombeo
ascendente aumentan la transferencia de masa y calor, y mejoran la mezcla.
La mezcla, que es menos complicada que la transferencia de masa, no es
eficiente a gran escala en comparacin con los pequeos fermentadores a
escala de laboratorio debido a la formacin
De las zonas muertas entre los impulsores. Por lo tanto, la mezcla ptima es
esencial para obtener el mximo rendimiento y productividad en
fermentaciones a gran escala (116).
Debido a la eficiente distribucin del gas, a un mayor tiempo de residencia en
la fase gaseosa, a un aumento de la retencin de gas, a unas caractersticas
superiores de flujo de lquido (flujo de clavijas) ya un menor consumo de
energa por cada uno de los dos reactores (con impulsores fijados a varias
alturas en el eje central) Impulsor en comparacin con sistemas de un solo
impulsor (117, 118). Utilizando las turbinas Rushton y los impulsores de flujo
axial de alta eficiencia en el mismo eje, se informa que mejora el rendimiento
del fermentador con una disminucin en el consumo total de energa (119).

3.5.2.3Aireacin
El modo ms barato de suministrar oxgeno al medio de fermentacin es el
aire. El sistema de aireacin comprende esencialmente un compresor de aire,
un filtro de aire (prefiltro y filtro estril) y un rociador. El compresor de aire
utilizado para la fermentacin puede ser un desplazamiento positivo o una
unidad de desplazamiento no po- sible, siendo el primero un compresor
alternativo o rotatorio y el ltimo un compresor centrfugo. La eleccin del
compresor depende de factores tales como la presin de descarga, el tipo de
accionamiento, la capacidad y el coste (120). El dimensionado del equipo del
compresor suele depender del requerimiento de flujo de aire mximo de una
escala de produccin completa para todos los fermentadores. La programacin
cuidadosa de las fermentaciones puede reducir frecuentemente la brecha entre
las demandas mximas y medias y resultar en un uso ms econmico del
equipo. La presin de descarga del aire desde el compresor se somete a una
cada de presin a lo largo de la ruta en lugares predecibles, tales como
vlvulas y tuberas a lo largo de las lneas de suministro,
Los filtros de aire, el rociador, la cabeza hidrosttica y la presin esttica, antes
de que llegue al fermentador. El dimetro de la lnea de suministro se elige de
tal manera que el flujo mximo de aire pueda ser activado sin prdida de
presin indebida. Una cada de presin de 1-2 p.s.i. Por cada 100 pies de tubo
se puede usar como primera aproximacin. Las primeras tres cadas de presin
discutidas anteriormente aumentan con el caudal creciente, pero la presin
hidrosttica y la presin esttica son independientes del flujo de aire. La
cabeza hidrosttica es la profundidad del lquido no aireado por encima del
rociador, corregida por la densidad, y por lo general representa una gran
fraccin de la prdida de presin total. El aire, filtrado usando filtros de aire
estril, se pasa al fermentador desde inmediatamente despus de la
esterilizacin durante el ciclo de enfriamiento hasta el final de la fermentacin
para mantener una presin positiva y eludir la contaminacin.
En la mayora de las fermentaciones aerobias, el consumo mximo de oxgeno
se produce durante perodos muy cortos cerca del final de la fermentacin. Es
posible aumentar la tasa de absorcin de oxgeno proporcionando altos niveles
de velocidad de transferencia de oxgeno (OTR). OTR es la velocidad a la cual el
oxgeno puede ser transferido desde el aire al caldo de fermentacin. Se puede
expresar como:

Donde kLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de masa, c * es la

concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con la fase gaseosa, y cL es la
concentracin de oxgeno disuelto en el lquido.
El coeficiente de transferencia de masa de oxgeno, kLa, est directamente
relacionado con la entrada de potencia por aireacin y aireacin por (121):

Donde Pg / V es la entrada de potencia de gas por aireacin por unidad de

volumen y vs es la velocidad superficial del gas. Un alto kLa (coeficiente
volumtrico de transferencia de masa) indica una alta tasa de transferencia de
oxgeno (OTR) en el proceso de fermentacin. Dado que la tasa de absorcin de
oxgeno es la clave para una fermentacin aerbica exitosa, se requiere una
alta kLa. Sin embargo, proporcionar mayores niveles de transferencia de
oxgeno por lo general requiere unidades muy potentes, lo que aumenta los
problemas mecnicos y los costos, as como cargas de calor adicionales. OTR
vara con la naturaleza y la escala de la fermentacin. Para un recipiente de
1m3, a una OTR entre 250 y 300 mmol / L / h, la transferencia de calor no es un
problema importante. Sin embargo, para un recipiente de 10 m3, el OTR a las
velocidades anteriores plantea problemas significativos en trminos de
eliminacin de calor del fermentador, indicando la necesidad del uso de
serpentines de enfriamiento internos y refrigerantes de baja temperatura, lo
que aade costos de operacin considerables.

3.5.2.4 Supervisin y control de procesos

La complejidad de la biosntesis metablica involucrada en la fermentacin
requiere el uso de parmetros de control del proceso para la supervisin y el
control para asegurar un rendimiento ptimo del proceso. Las variables de
control del proceso en un proceso de fermentacin pueden clasificarse
ampliamente como fsicas, qumicas y biolgicas. Las variables fsicas incluyen
temperatura, velocidad del impulsor, velocidad de aireacin y presin. Las
variables qumicas incluyen pH, oxgeno disuelto, dixido de carbono disuelto y
potencial redox. Las variables biolgicas incluyen biomasa,
La tasa de absorcin de oxgeno, la tasa de produccin de dixido de carbono y
el cociente de respiracin. Mientras que las variables fsicas se miden
normalmente por sensores en lnea que forman parte integral del equipo de
fermentacin, las variables qumicas o de proceso se miden por medio de
sensores en lnea, cruciales para el xito de un proceso de fermentacin. Las
variables biolgicas son indicadores de proceso que dependen de la
supervisin y el control adecuados de las
Fermentacin. Una tcnica moderna para el monitoreo y control de bioprocesos
usa biosensores. Un biosensor es un dispositivo que detecta, transmite y
registra informacin relativa a un cambio fisiolgico o bioqumico que da como
resultado la generacin de seales electrnicas. La funcin principal de un
biosensor es la integracin de un componente biolgico con un transductor
electrnico para convertir los cambios bioqumicos en una respuesta elctrica
cuantificable. Los biosensores hacen uso de una variedad de transductores
tales como electroqumicos, pticos, acsticos y electrnicos (122).
El desarrollo de sensores in situ miniaturizados para la monitorizacin y control
en lnea de pH y oxgeno disuelto ha sido impulsado por procesos de
fermentacin y se muestra en la Figura 3.8 (123).
PH: La fermentacin al pH ptimo es esencial para el crecimiento celular y la
formacin del producto. Una sonda de pH esterilizable que funciona sobre la
base de un principio potenciomtrico consiste en un electrodo de vidrio y un
electrodo de referencia. El sistema de electrodos de referencia consiste en un
electrodo Ag / AgCl y un electrolito KCl. Un voltaje constante del sistema de
electrodos de referencia es proporcionado por el electrolito. Un diafragma
cermico mantiene el contacto electroltico entre el electrodo de referencia y el
caldo de fermentacin. Basndose en la respuesta de la sonda de pH al
controlador de pH, se activa la bomba de cido o de base para su correccin
De pH. Los electrodos de vidrio esterilizables con vapor tienen la limitacin de
una baja estabilidad mecnica durante un periodo de esterilizaciones
repetidas. Pueden ser reemplazados por sensores pticos basados en
absorbancia o fluorescencia de tintes sensibles al pH (124)
Oxgeno disuelto: El monitoreo de la concentracin de oxgeno disuelto (DO) es
esencial, porque el oxgeno escasamente soluble es uno de los sustratos
limitantes para la fermentacin. Dos tipos de electrodos de DO utilizados en la
fermentacin: polarogrfico y galvnico, siendo el primero ms comnmente
utilizado ya que es confiable y resistente a la esterilizacin, mientras que el
segundo no es ampliamente utilizado debido a la escasa estabilidad. El
electrodo polarogrfico o amperomtrico (# 0.7V) necesita una tensin externa
entre un ctodo Pt y un nodo Ag / AgCl. El ctodo Pt est en contacto con la
solucin de KCl encapsulada por una membrana de Tefln permeable al
oxgeno. La DO del caldo se difunde a travs de la membrana para reducirse en
la superficie del electrodo Pt. La concentracin de OD en un fermentador puede
ser manipulada por dos variables fsicas: la velocidad del impulsor y la tasa de
aireacin. La saturacin de OD (% pO2) para una fermentacin en particular
puede controlarse individualmente, secuencialmente o simultneamente
manipulando las variables basndose en una retroalimentacin desde el
controlador DO. El controlador compara la desviacin de la seal del electrodo
de DO con el punto de ajuste y ajusta el controlador de velocidad del impulsor
o el controlador de flujo de aire para el mantenimiento de la saturacin de DO.
Otra posibilidad de control de DO en fermentacin existe por la variacin de la
concentracin de oxgeno en el gas mediante la aplicacin de tres vlvulas
proporcionales para controlar los flujos de aire, oxgeno y nitrgeno (125). El
electrodo de OD (126) esterilizable por vapor es ampliamente utilizado para la
monitorizacin en lnea de bioprocesos de la concentracin de oxgeno disuelto
durante la fermentacin. Recientemente se ha introducido una alternativa
basada en el apagado de la fluorescencia (127). Dixido de carbono disuelto: El
dixido de carbono disuelto (DCD) es otro indicador del estado metablico de la
clula respiratoria. Se utiliza comnmente para el cultivo de clulas animales
donde la concentracin de DCD ayuda a mantener la saturacin de dixido de
carbono durante el bioproceso. El electrodo DCD funciona segn el principio de
cambio de pH de un tampn electroltico.
Los sensores DCD con tampones de bicarbonato no son esterilizables y tienen
las limitaciones de deriva e interferencia de cambios en la composicin del
medio. Se ha introducido un sensor DCD esterilizable in situ con un colorante
fluorescente radiomtrico HPTS (cido 8-hidroxipireno-1,3,6-trisulfnico) (128).

Anlisis de gas: La composicin de gas de salida del fermentador,

particularmente oxgeno y dixido de carbono, se puede analizar mediante un
analizador de gas usando detectores paramagnticos e infrarrojos,
respectivamente. La espectrometra de masas tambin se puede usar para
analizar todos los componentes gaseosos, incluyendo voltiles orgnicos y
alcoholes inferiores, de la corriente de gases de escape (129). Desde el oxgeno
hasta el equilibrio del dixido de carbono a travs del fermentador, se puede
determinar la tasa de absorcin de oxgeno (NUO) o la tasa de produccin de
dixido de carbono (RCP). A partir de un conocimiento de la OUR y CPR durante
el proceso de fermentacin, el cociente respiratorio (RQ "CPR / OUR) se puede
determinar.

Potencial redox: El potencial redox del caldo de fermentacin est relacionado

con la disponibilidad general de electrones libres en la solucin. El potencial de
redox funciona segn el principio de que cuando un electrodo de metal noble
(Pt, Au o Ag) se sumerge en un sistema redox, se desarrolla un potencial cuya
magnitud depende de la relacin de concentracin de oxidacin-reduccin. El
potencial formado en el electrodo de metal noble es extrado por un electrodo
de referencia, que tambin est sumergido en la solucin. El valor del potencial
es una medida de la concentracin de agentes oxidantes o reductores. Los
valores de redox se encuentran que varan significativamente con pH
cambiante y se expresan en mV. El potencial redox disminuye con aumento del
pH de la solucin medida. La actividad metablica de los microorganismos est
fuertemente influenciada por el potencial redox del ambiente de cultivo. La
monitorizacin y control del potencial redox antes de la inoculacin facilita la
adicin controlada de agentes reductores para asegurar el intervalo apropiado
para el inicio del crecimiento. El control del potencial redox es una herramienta
vital para determinar su influencia en las vas metablicas de los
microorganismos, la utilizacin del sustrato o la produccin de metabolitos
especficos (130). Concentracin de biomasa: La concentracin de biomasa es
una variable biolgica importante, que indica el progreso de la fermentacin.
Los mtodos comunes de determinacin de masa de clulas fuera de lnea se
basan en el peso de clulas secas y el volumen de clulas empaquetadas. La
caracterizacin directa en lnea de poblaciones celulares en biorreactores en
trminos de cambios morfolgicos puede determinarse mediante microscopa
in situ equipada con un analizador de imgenes (131). Los mtodos indirectos
en lnea para la determinacin de la concentracin celular pueden basarse en
aproximaciones elctricas o pticas. Elctricamente, la capacitancia del medio
mide la fraccin de fluido retenida por las membranas polarizables (132).
Opticamente, la masa celular se mide a menudo por absorbancia luminosa
(turbidez) o dispersin (nefelometra) continuamente en los rangos visible e
infrarrojo cercano (133). Las ventajas de los sensores pticos para el monitoreo
de bioprocesos son que son muy sensibles, dan medidas especficas y
reversibles, tienen una respuesta rpida y versatilidad, e implican un fcil
mantenimiento. La desventaja del mtodo ptico es que la dispersin y la
absorcin no son linealmente dependientes de la densidad celular y son
vulnerables a la interferencia de partculas y burbujas de gas. Un receptor
biolgico, es decir, una enzima, un microorganismo o un anticuerpo que
produce una seal ptica tal como la fluorescencia de NADH (NADH tras la
radiacin UV a 366 nm emite fluorescencia a aproximadamente 460 nm) en un
biosensor ptico (134). La seal es convertida por un transductor electrnico
en una seal elctrica. Tambin se han desarrollado sensores bioluminiscentes,
que consisten en una enzima bioluminiscente y un transductor ptico. La masa
celular en cultivos de clulas animales tambin puede predecirse mediante
sensores de software (135). La determinacin directa de biomasa en lnea en
los procesos de fermentacin est limitada por la presencia de slidos en
suspensin. La productividad de un proceso de fermentacin depende
especficamente de la concentracin de biomasa alcanzada. La maximizacin
de la concentracin de biomasa a altas densidades de clulas (136) depende
del funcionamiento del fermentador en las condiciones de proceso controladas
ptimas.
Concentracin de sustrato y producto: La determinacin de la concentracin
exacta de sustrato y producto durante la fermentacin es crtica para el
mantenimiento de las concentraciones ptimas de alimento necesarias para
una productividad mxima y una utilizacin eficiente del sustrato. El Anlisis de
Inyeccin de Flujo (FIA) es un mtodo para la deteccin en lnea de la
concentracin con un detector adecuado, que puede utilizar amperometra,
potenciometra, NADH-fluorescencia, quimioluminiscencia o espectrofotometra
UV / Vis, e implica un tiempo de anlisis de slo unos minutos ). FIA junto con
un biosensor de -galactosidasa inmovilizado se ha informado para la
monitorizacin de la lactosa en un proceso de fermentacin (138). Los
biosensores utilizados para la FIA no necesitan condiciones estriles para el
anlisis. Los sistemas FIA inyectan pequeas cantidades de
La corriente portadora y la probabilidad de crecimiento celular y precipitacin
de protenas es baja debido a la alta dilucin (139). Se han utilizado
biosensores basados en enzimas para monitorear y controlar los sustratos y
productos involucrados en los procesos de fermentacin con glutamato y
penicilina (140). Se han empleado tcnicas cromatogrficas como
cromatografa de gases, cromatografa lquida de alta resolucin, cromatografa
lquida de protenas rpidas y cromatografa de membrana para el control de
proceso de procesos de fermentacin (141).

El producto proteico recombinante se puede determinar espectroscpicamente

uniendo el gen para la protena fluorescente verde (GFP) al gen del producto.
La concentracin del producto puede entonces determinarse analizando la
intensidad de fluorescencia de la GFP en el cultivo (142). El anlisis
espectromtrico de masas de gases como el oxgeno y el dixido de carbono
en el gas de salida abri el camino para la determinacin de gases disueltos
como oxgeno, dixido de carbono, metanol, etanol, butanol y acetona
mediante el uso de sistemas de muestreo adecuados. La precisin del anlisis
es mayor que la observada con las sondas en lnea. El muestreo para el anlisis
offline es crucial desde el punto de vista de la esterilidad y la representacin
adecuada del medio. Muchos dispositivos de muestreo basados en
microfiltracin, ultrafiltracin y dilisis se han utilizado en la industria de la
fermentacin (144). Una poderosa herramienta analtica para el anlisis no
invasivo de los metabolitos intracelulares es la resonancia magntica nuclear
(RMN) espectroscopia. La determinacin in vivo de metabolitos y procesos
metablicos por espectroscopia de RMN sirve como herramienta vital para el
anlisis del flujo metablico y la ingeniera metablica (145). La espectroscopia
FourierTransform-Near-Infrared (FTNIR), una tcnica estndar utilizada en la
industria alimentaria, se utiliza ahora en biotecnologa para el monitoreo de
procesos en lnea (146). Las narices artificiales o electrnicas, con sus
capacidades de deteccin de banda ancha, resultan tiles para el monitoreo en
lnea tanto de compuestos aerotransportados como lquidos. Con la ayuda de la
tecnologa de nariz artificial puede ser posible disear dos sensores de
agrupamiento para monitorizar las concentraciones de varios componentes
importantes tanto en las fases gaseosa como lquida en el fermentador,
eliminando la necesidad de utilizar un gran nmero de sensores para
monitorizar mezclas complejas ( 147).