Sembrado en placa de Microorganismos del

Medio Ambiente
OBJETIVOS
- Observar la gran variedad de microorganismos presentes en
el medio ambiente, determinando las diferentes morfologas
de colonias que se obtienen.
- Los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento
de colonias de bacterias en un medio de cultivo en cajas de
Petri.
MATERIAL
3 cajas de Petri estriles preparadas con Agar nutritivo
Caja de hisopos estriles sin abrir toallas de papel
3 cajas de petri estriles preparadas con Agar sangre.
Cinta pegante
Marcador permanente o lpiz de cera
Un desinfectante con 70% de solucin de alcohol, 10%
de una solucin blanqueadora, jabn lquido Extran o alkox.
INTRODUCCIN
La poblacin microbiana existente en nuestro entorno es
grande y compleja. Cientos de especies microbianas habitan
normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas
la boca, el tracto intestinal y la piel. Al nacer, los microbios
inmediatamente empiezan a colonizar nuestros cuerpos, as
como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan
alrededor hasta que entran en contacto con una superficie
que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran ms
frecuentemente en la oscuridad, en objetos hmedos que a
menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la
vegetacin. Las superficies del bao, los cepillos para el
cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las tablas de
cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las
paredes tienen menos porque son pobres en nutrientes y
secos.
Un estudio adecuado de microorganismos que hay en estos
hbitat requiere tcnicas que permitan conocer y ordenar la
compleja poblacin mixta o cultivo mixto, separndole en
sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivo puro
consta de una poblacin de clulas derivadas todas ellas de
una clula parental. Los microorganismos se cultivan en el
laboratorio sobre materiales nutritivos denominados medios.
Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase que se
debe de utilizar depende de muchos factores, uno de los
cuales es la clase de microorganismos que se va a cultivar. El
material que se inocula sobre el medio se denomina inculo
mediante alguna tcnica (siembra por estra en placa o
siembra en masa en placa). Durante la incubacin a 37:C ,
las clulas microbianas individuales se reproducen tan
rpidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen
masas visibles de clulas denominadas colonias. Una colonia
es visible a simple vista. Cada colonia diferente es
presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de
microorganismo. Si dos clulas microbianas procedentes del
inculo original quedan muy cerca una de otra sobre el
medio de Agar, la masa de clulas observables no ser un
cultivo puro. La mayora de los microbios en nuestro cuerpo
y otras superficies son inofensivas, pero algunos son
patgenos o causan enfermedad. Por esta razn, queremos
controlar el nmero de microbios que nos rodea. La
posibilidad de infectarnos aumenta con el nmero de
microbios en los objetos circundantes. Pero qu podemos
hacer para reducir el nmero de microbios en las superficies
que nos rodean?
PROCEDIMIENTO
En esta actividad escogers un fomite (cualquier objeto
inanimado que pueda causar enfermedad en los organismos
por contener microorganismos como: la manija, el marco, el
control remoto de la televisin, una moneda). Este fomite
ayudar a confirmar la presencia de microbios y los efectos
de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de
bacterias en un medio de cultivo en cajas de Petri.
1. Si tienes el cabello largo, recgetelo para mantenerlo lejos
de las cajas de Petri cuando ests trabajando. Lava tus
manos. Limpia t rea de trabajo frotando suavemente, con
la solucin desinfectante en una toalla de papel. Saca tus
cajas de Petri pero no abras las cajas hasta que se te indique.
 2. Escoge un objeto del saln de
laboratorio (la manija, el marco, el control remoto de la
televisin, una moneda, etc.). Toma una caja de Petrisin
abrir y con t lpiz de cera o marcador, divide la base de la
caja en cuatro secciones iguales. Escribe el nombre del
objeto al otro lado y designa las secciones de 1 hasta 4. Abre
la caja de hisopos de algodn y escoge uno con cuidado para
no tocar la punta. Limpia t objeto escogido con todos los
lados de la punta del hisopo voltendolo y retorciendo el
hisopo a medida que lo mueves por la superficie del objeto.

3.Ahoraabrelatapadelacaja
ysuavementehazcuatrosiembrassobrelasuperficiedela
caja como se muestra en la ilustracin, empezando en la
seccin designada "1" y continuando en el orden de las
secciones, de manera que la ltima siembra est en la
seccin4.Presionafirmeperosuavementeynoretiaslas
siembras anteriores. Tus siembras slo deben dejar una
impresinmuyligeraenelAgar.Cierralacajaysllalacon
dospedazosdecinta.Nocubraslacajaconcintaonopodrs
verlabien.
4. Divide una segunda caja de Petri en 4 secciones
numeradas de 1 hasta 4 y desgnalaControl.Limpiala
mitaddelobjetoqueescogisteanteriormenteconunatoalla
depapelhumedecidaconaguasolofrtalaunpardeveces;
no la restriegues. Con un nuevo hisopo estril, toma
muestradelrealimpiada.Abrelatapadelasegundacajay
hazSUAVEMENTE4siembrasenlasuperficiedelacaja,
siguiendo el orden de las secciones numeradas como lo
hicistepreviamente.Cierralacajaysllala.
5.DividelaterceracajadePetrien4seccionesnumeradasy
desgnalas con el nombre deldesinfectanteque escogiste
(porejemplo"blanqueador").Usaeldesinfectanteescogido
para limpiarla otra mitaddel objeto que trabajaste antes.
Conunnuevohisopoestril,tomamuestradelrea.Repite
elprocesodesembrarlacaja.Cirralaysllala.
6. Esteriliza los hisopos usados con desinfectante y
descrtalos. Pon las cajas en un lugar apartado y djalas
incubar a la temperatura de 37C durante24 a48 horas.
Limpiatureadetrabajoconlasolucindesinfectanteylava
tusmanos.
7.RepitetodoelexperimentoutilizandoCajasdecultivo
conAgarsangresloqueahoraseleccionaotroFomiteque
nohayasempleado
7.Despusdequehayanpasadodosdas,miralascajasde
Petriiniciales.Nolaabras.Alavezexaminalasotrascajas
dePetrisinabrirlas.Creaunatablaquecomparelascajas
sembradasantesydespusdelimpiarelobjeto(miralatabla
deejemplo).Asegratedeindicarsilosmicrobioscrecieron
encadasiembra.
8.Nota: un adulto supervisor debe hacer este paso
preferiblemente.CuidadosamenteabrelascajasdePetrien
un lavaplatos e inndalas con blanqueador o alcohol sin
diluir. Djalas por una hora y enjugalas completamente;
colcalas en una bolsa plstica, amrrala y descrtala.
Asegratedenotocarlasuperficiedelascajascuandolas
abras y lava tus manos cuidadosamente despus de
manipularlas. Limpia t rea de trabajo con la solucin
desinfectante.
Observacin de Bacterias
Introduccin
Son t cnicas qu prmitn obsrvar microorganismos n
funcio n d la capacidad d los mismos para rtnr o no
dtrminadas sustancias colorants, lo qu dpnd d la
carga d la c lula y dl colorant.
Los colorantes pudn sr d distintos tipos:
Catinicos. Son sustancias qu tinn carga positiva.
Pntran n l intrior d las c lulas y las tin n.
Ejmplos: azul d mtilno, cristal violta, safranina.
Aninicos. Con carga ngativa. No pntran n l
intrior clular, d modo qu no tin n las c lulas, sino l
ntorno. En st caso s habla d tincio n ngativa.
Ejmplos: eosina,nigrosina.
Liposolubles. S mzclan con los lpidos clulars y
los tin n. Ejmplo: ngro suda n.
Las tinciones pudn sr:
Simples. Utilizan un solo colorant. S basan n l
hcho d qu las c lulas tinn una composicio n qumica
difrnt a la d su ntorno, d modo qu ambos s
comportan d forma difrnt frnt a un colorant. El
colorant tin las c lulas (azul d mtilno, safranina) o
no (nigrosina).
Diferenciales. S basan n l hcho d qu distintos
tipos d c lulas tinn distinta composicio n qumica, y
por lo tanto raccionan d forma difrnt frnt a una
tincio n, lo qu prmit clasificar los microorganismos n
difrnts grupos, sgu n su capacidad d tincio n. En st
apartado sta n dos tincions d importancia taxono mica
y m dica: la tincio n d Gram y la d a cido-alcohol
rsistncia (d Zihl-Nlsn). Estas tincions utilizan
ma s d un colorant.
Selectivas. S basan n l hcho d qu distintas
structuras clulars tinn distinta composicio n
qumica, d modo qu s tin n slctivamnt con cirtos
colorants. Ej; tincio n d sporas, d flaglos, d pards
clulars, d corpu sculos mtacroma ticos. Pudn
utilizars uno o ma s colorants.
a) Azul de metileno (Tincin positiva). Prmit tn ir l
intrior clular. Tin microorganismos procario ticos
(vivos o murtos). Los ucario ticos so lo s tin n si
sta n murtos. Algunas structuras, como los
corpu sculos mtacroma ticos, s tin n ma s intnsamnt
con st colorant qu l rsto d la c lula.
b) Nigrosina (Tincin negativa). S trata d un
colorant anio nico, qu no pntra n l
intrior clular. Proporciona una visio n d la forma y l
taman o clulars al obsrvars los
microorganismos brillants sobr un fondo oscuro.
Objetivos
1. Ralizar una tincio n simpl d bactrias procdnts
d distintas mustras naturals.
2. Ralizar dos tipos d fijacions bactrianas y sabr
n qu casos s rcominda una u otra.
3. Obsrvar la morfologa bactriana y aprndr a
distinguir los distintos tipos d agrupacions qu xistn.
4. Practicar con l microscopio al ma ximo aumnto y
con l corrcto mplo dl acit d inmrsio n.
MATERIAL
Mchro Bunsn o d alcohol
Asa d simbra o aguja bmangada
Pinzas
Portaobjtos
Mustras bactrians d orign natural: yogurt,
vinagr, sarro dntal, sulo,tc.
Colorants para tincio n:
a) Solucio n d cristal violta al 1%
b) Solucio n d safranina al 0.5%
c) Azul d mtilno al 1%
Microscopio y acit d inmrsio n

BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lcteo producido por la
fermentacin natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4%
de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y
el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas
bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud)
facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica
con el enfoque del microscopio.

Procedimiento
1. Extension: Realizar el frotis disolviendo una mnima
porcin de yogur en una pequea gota de agua.
2. Fijacin Fijar con metanol o Xilol para eliminar parte
de la grasa.
3. Teir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de
tinciones y aadir unas gotas de azul de metileno ocon un
colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5
minutos.
4. Lavar con agua destilada
5. Secar. pasar l portaobjtos varias vcs por ncima
d la llama dl mchro d alcohol, sin prmitir qu
llgu a hrvir, hasta qu s squ.
6. aadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
7. Observar primro con el objetivo 40; luego se aade
aceite de inmersin y se observa con el objetivo 100
Resultados