Clase 4

Citogentica Mdica y
Mutagnesis

Gisel Padula
 Qu es la Citogentica?

Es la rama de la gentica que tiene por objeto el

estudio de la estructura y comportamiento
cromosmico, a travs de tcnicas de microscopa
 Qu son los cromosomas?

Cuerpos coloreados (cromo:

color; soma: cuerpo)
Cromosoma: unidad de
organizacin y funcional,
estructura microscpica
Es un estado permanente
dentro del ciclo celular, pero
su condensacin es mxima
en metafase
Cules son las partes de un
cromosoma?

brazo corto

brazo largo
 Cmo se obtienen los cromosomas?

Los cromosomas se pueden obtener a partir de diferentes

tejidos u rganos
- Diagnstico prenatal: lquido amnitico y vellosidad
corial
- Diagnstico postnatal: sangre perifrica, mdula
sea, clulas tumorales, etc
 0,5 a 5 ml de sangre perifrica (heparina)

siembra de las clulas en medio de cultivo +
suero + antibitico y antimictico + mitgeno
Incubacin a 37 C durante 48 a 72 hs

Agregado de un agente antimittico

Agregado de solucin hipotnica

Fijacin de las clulas

Goteo del material en portaobjetos

Coloracin

Anlisis microscpico
 Cariotipo
Ordenamiento sistemtico de los cromosomas. Se
establece a partir de las tres constantes
cromosmicas (nmero, morfologa y estructura).
Los cromosomas se ordenan de a pares, de mayor
a menor tamao y de acuerdo a la posicin del
centrmero
Segn lo establecido por ISCN (Sistema
Internacional de Nomenclatura en Citogentica
Humana), la clasificacin bsica comprende 7
grupos
Citogentica Clnica

Se trata de la investigacin y
diagnstico de patologas
cromosmicas, a nivel fetal
Diagnstico Prenatal y en
individuos ya nacidos y adultos
Diagnstico Postnatal
 Anomalas Cromosmicas
Se presentan en 1 de cada 150 nacidos vivos
Son la principal causa conocida de retraso mental
y de prdida de la gestacin
Se observan anomalas cromosmicas entre el 50
y el 20 % de los abortos espontneos del 1er y
2do trimestre
Se clasifican en:
Anomalas del Nmero (ACN)
Anomalas de la Estructura (ACE)
 Anomalas Numricas
Euploida: presencia de uno o ms juegos haploides
en las clulas.
- Monoploida (x)
- Poliploida (3n, 4n)
Aneuploida: se pierden o se ganan algn/os
cromosomas.
- autosmicas
- gonosmicas
 Anomalas del Nmero de
Cromosomas
Poliploidas

Triploidas (3n = 69)

Tetraploida (4n = 92)
 Causas de Poliploidas
Dispermia; Diandria; Diginia
 Aneuploidas Autosmicas

Monosomas (2n-1= 45): una nica copia de un

cromosoma en una clula (incompatibles con la
gestacin a trmino)

Trisomas (2n+1= 47): tres copias

Ejemplos de trisomas
 Aneuploidas
Causas: No-disyuncin; Anafase lag
 Trisoma 21 (47,
XY,+21), Sindrome de
Down: frecuencia
1/750 nv.

Trisoma 18 (47,XX,+18),
Sindrome de Edwards:
1/ 6.000 nv. El grado de
retraso es mayor que en
S. de Down.

Trisoma 13
(47,XX,+13), Sindrome
De Patau: 1/12.000 nv.
 Trisomas y Edad Materna
La mayora de las trisomas aumenta su prevalencia
a medida que avanza la EM
Ej. S. Down: en < 30 aos 1/800; a los 35 aos
1/400; a los 40 aos 1/100
2 factores:
Por envejecimiento celular y cambios en el medio
hormonal;
Se pierde la capacidad de reconocer concepciones
anormales y eliminarlas
 Aneuploidas Gonosmicas
Las consecuencias son menos graves que las
aneuploidas de los autosomas por la inactivacin del X
Ejemplos

Monosoma del X (45, X0), S. de Turner: 1/2700 mujeres

nv
Sindrome de
Klinefelter
(47,XXY): 1/ 1.000
varones nv

(47,XXX): 1 /1.000 mujeres nv

48,XXXX o 49,XXXXX: aumento del retraso mental y fsico
47,XYY: 1/1.000 varones nv (trastornos menores de conducta y CI
levemente disminuido)
 Anomalas de la estructura
cromosmica
Equilibradas: la redistribucin no causa una
prdida o ganancia de material cromosmico
Desequilibradas: hay prdida o ganancia

Las anomalas estructurales, especialmente las

desequilibradas, pueden originar enfermedades
en los individuos o en su descendencia
 Equilibradas
Translocaciones: intercambio de material gentico
entre cromosomas no homlogos. Frecuencia
1/500 individuos

Translocaciones Recprocas: las roturas ocurren

en dos cromosomas diferentes y el material se
intercambia mutuamente.
 Translocaciones Robertsonianas: se pierden los
brazos cortos y se funden los brazos largos de los
cromosomas acrocntricos. El nro. cromosmico
disminuye en 1.

Ej.: t(14;21) segregacin adyacente: S. Down

Translocacin Robertsoniana y Origen Humano
Inversin: dos roturas en un cromosoma seguidas de
la reinsercin del fragmento en orden invertido.
Puede ser: i. Pericntrica (incluye el centrmero) o
i.Paracntrica (no lo incluye). Frecuencia: 1/1.000.
 Desequilibradas
Deleciones: causada por una rotura cromosmica y la
consiguiente prdida del material gentico
Ejs.: S. de cri-du-chat: del (5p); S. De Wolf: del (4p)

Microdeleciones: deleciones identificadas con las tcnicas de

bandeo de alta resolucin y citomoleculares. Ejs.: S. de Prader-
Willi (15q paterno); S. de Angelman (15q materno).
 Duplicaciones: copias extras de un segmento
cromosmico. Pueden originarse de cruzamientos
desiguales o aparecer en la descendencia de
portadores de una translocacin recproca.
 Citogentica del Cncer
La combinacin de citogentica convencional, FISH y
anlisis molecular permite la clasificacin de las
neoplasias y la monitorizacin del efecto del tratamiento
Leucemias
LMC t(9;22) (q34;q11)
LMA t(8;21) (q22;q22)
Tumores slidos
Linfoma de Burkitt t(8;14) (q24;q32)
Retiniblastoma del (13) (q14)
Tumor de Wilms del (11) (p13)
Mutagnesis

La citogentica se utiliza
tambin para medir el
efecto de agentes
mutagnicos valorando la
presencia de ACN y ACE
Genotoxicidad
Agentes genotxicos,
artificiales y naturales,
pueden producir
alteraciones sobre el
genoma, en clulas
somticas y germinales.
Estos eventos pueden ser
causa de cncer y
defectos del desarrollo
 Obtencin de Cultivos

Diferentes tejidos (sangre perifrica, mdula sea,

clulas tumorales, lq.amnitico y vellosidad corial)
Los estudios pueden ser:
- In vivo (epidemiolgicos o de intervencin)
- In vitro (clulas, lneas celulares o animales de
laboratorio)
 Evaluacin de Cito y Genotoxicidad
De Nivel Primario: procariotas
De Nivel Secundario: lneas celulares
De Nivel Terciario: animales de laboratorio
De Nivel Cuaternario: poblaciones expuestas

Anlisis de Aberraciones Cromosmicas

Estructurales (ACE)
Ensayo de microncleos por bloqueo de la
citosinesis (CBMN)
Ensayo de electroforesis en gel de clulas
individuales (Cometa)
 Anlisis de ACE
TIPO - Brechas intersticiales o gaps (chtg, chrg)
SUBCROMTIDA
- Adhesividad cromosmica (tas)

TIPO - Fractura de cromtida (chtb, chrb)

CROMTIDA

TIPO - Cromosomas en anillo (r)

CROMOSOMA

- Intercambios Asimtricos o Cromosomas

dicntricos (dic)

- Fragmentos Cromosmicos (ace)

 0,5 a 5 ml de sangre perifrica (heparina)

siembra de las clulas en medio de cultivo +
suero + antibitico y antimictico + mitgeno
Incubacin a 37 C durante 48 a 72 hs

Agregado de un agente antimittico

Agregado de solucin hipotnica

Fijacin de las clulas

Goteo del material en portaobjetos

Coloracin

Anlisis microscpico
 Anlisis microscpico

Se analizan 200 metafases por cada punto

experimental, establecindose la frecuencia de cada
tipo de alteracin cromosmica

Con esta tcnica podemos evaluar la citotoxicidad a

travs del establecimiento del ndice Mittico (IM)

IM= metafases/1000 clulas

 Ensayo CBMN
Los microncleos (MN) son pequeas masas de cromatina
que se ubican prximos a los ncleos en interfase

Se originan durante la divisin celular por la prdida de

fragmentos y/o cromosomas enteros

Esta tcnica permite tambin detectar :

- Cromosomas dicntricos
(Puentes nucleoplsmicos o NPBs)
- Amplificacin del ADN
(Brotes nucleares o NBUDs)
 0,5 a 5 ml de sangre perifrica (heparina)

siembra de las clulas en medio de cultivo +
suero + antibitico y antimictico + mitgeno
Incubacin a 37 C durante 72 hs

Agregado de un agente bloquedor de la citosinesis

Agregado de solucin hipotnica

Fijacin de las clulas

Goteo del material en portaobjetos

Coloracin

Anlisis microscpico
 Anlisis microscpico
Se contabilizan los MN, los NPBs y
los Nbuds en 1000 clulas
binucleadas (BN)
Se contabilizan clulas apoptticas
y necrticas en 500 BN
Asimismo, se puede establecer el
ndice de divisin nuclear (IDN)

IDN= 1 x nro. de clulas

mononucleadas + 2 x nro. de clulas
binucleadas + 3 x nro. de clulas tri y
tetranucleadas/nro. total de clulas
contadas (500)
 Ensayo Cometa
Consiste en la electroforesis en gel de clulas nicas

Es una tcnica muy sensible que detecta roturas de

cadena sencilla. Se basa en la migracin, durante la
electroforesis, de fragmentos rotos de ADN
 50 l de sangre perifrica (heparina)

las clulas se mezclan con agarosa

siembra de la preparacin en portaobjetos
con capa de agarosa

los preparados se sumergen en lisis
(desnaturalizacin de protenas)

corrida electrofortica
(desnaturalizacin del ADN)

Coloracin
(colorante fluorescente)

Anlisis al microscopio
(de fluorescencia)
 Anlisis microscpico
Se analizan 100 imgenes por punto experimental utilizando
un microscopio de fluorescencia.

Anlisis cualitativo: se asignan niveles o grados de dao segn

la extensin que adquiere la cola del cometa. Las clulas se
clasifican en 5 categoras, de 0 (cola no visible) a 4 (cabeza de
cometa detectable pero ms ADN en la cola).

Anlisis cuantitativo: a travs de un programa se realizan

mediciones (dimetro de la cabeza, largo y ancho de la cola) y
se calculan diferentes ndices (Tail Length, Tail moment, Olive
Tail moment).