Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Tesis
Que para obtener el grado de:
Presenta:
Asesores:
Con fundamento en el dictamen emitido por el jurado revisor del colegiado del rea: de
Biotecnologa de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis de Maestra y en virtud de que
efectu las correcciones y acat las sugerencias que le haban indicado los integrantes del mismo,
se le autoriza la impresin de la tesis " Aislamiento y evaluacin de hongos nemtofagos
asociados a quistes de Globodera rostochiensis (Woll) en la regin Cofre de Perote ", misma
que ha sido dirigida por los C.C. Dr. Oscar Rebolledo Dominguez y la M.C. Gloria Luz Laura
Carrin Villarnovo, Profesor-Investigador de la Universidad de Colima e Investigadora del
Instituto de Ecologa de Xalapa, Veracruz.
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para
obtener el grado de Maestro en Ciencias; Area: Biotecnologa y fue revisado en cuanto a forma
y contenido por los C.C. Dr. Alfonso Pescador Rubio. Dr. Oscar Rebolledo Domnguez y la
M.C. Edelmira Galindo Velasco, Profesores-Investigadores de la Universidad de Colima.
ATENTAMENTE
ESTUDIA * LUCHA * TRABAJA
TECOMN, COL., A 27 DE AGOSTO DEL 2002.
A mi esposa Conchita, mis hijos Mara del Carmen, Luisa Fernanda y Angel
Enrique, por ensearnos que este logro es el resultado de el esfuerzo conjunto, con
todo lo que exige de renuncia y entrega, de lucha y de esperanza, de contagiar valores,
de soar utopias y generar proyectos, de sealar causes y seguir con constancia nuestro
propio camino.
A mis padres Jos Cruz y Mara del Carmen, por tanto ejemplo por tanto orgullo,
por su invaluable apoyo y su lucha incansable para sacarnos adelante.
A mis hermanos, Mara Araceli, Luis Carlos, Marco Antonio, Carmen Patricia,
Mario Alberto, Mara Cristina, Edna Guadalupe, Jos Cruz y Jos Manuel, Angel Armando
y Alma Angelina, Gerardo Alonso; por ese espritu de lucha que los caracteriza y la
seguridad de saber que nunca hemos estados solos.
A mis cuados y cuadas, nuestros sobrinos por formar parte una gran familia.
A la comisin revisora, integrada por el Dr. Alfonso Pescador Rubio, Dr. Oscar
Rebolledo Domnguez y M. en C. Edelmira Galindo Velazco por su dedicacin,
observaciones y sugerencias al manuscrito del presente trabajo.
Al Dr. Jaime Molina Ochoa, por apoyar mi ingreso a la Universidad de Colima, por
su amistad y ayuda desinteresada.
Al Tcnico Tiburcio Laez Aponte, del Instituto de Ecologa Xalapa A.C. por su
ayuda en la toma de fotografas en el microscopio electrnico de barrido.
A Doa Chepi, por su apoyo moral, pero sobre todo por su confianza y amistad.
Pgina
Cuadro 1. Zonas ms infestadas con nematodo dorado de la papa 11
Globodera rostochienis en Mxico.
Pgina
FIGURA 27: Parte interna del corin con micelio de a Phialophora malorum
los 18 das 750x. 65
1
Isolation and evaluation of nematophagus fungi associated to cyst of
Globodera rostochiensis in the region Cofre de Perote.
ABSTRACT
The golden cyst nematode Globodera rostochiensis is one of the main pest in the
crop potato Solanum tuberosum to world level; in Mexico is extended practically in the
whole regions where it cultivated. Diverse species of fungi work in the nature like
controllers of populations, however on this nematode few species know. The objectives
of this work were isolate and determine parasites fungi parasites of G. rostochiensis in
cultivation potato of the region of Cofre de Perote, Veracruz, Mxico and describe the
process of infection on the cysts of selected species.
Were taken samples of soil of six localities (Conejos, Tembladeras, Rancho
Nuevo, Escobillo, Pescados and Los Altos). The cysts were obtained by means of the
technique of the float of Fenwick, were quantified. The amount of obtained cysts was
from 300 up to 2216 cysts/kg soil. From each sample taken 100 young cysts at random
in order to isolate parasites fungi . The natural parasitism obtained of the total of
worked samples was from 3.5%. 21 stumps were obtained: Aspergillus sp. (1),
Chetomidium sp. (1), Cladosporium sp. (3), Drechslera sp. (1), Fusarium sp. (1),
Micelia sterilia (1), Pteroconium sp. (1), Trichocladium asperum (2), Ulocladium atrum
(1), Acremonium incrustatum (1), Paecilomyces carneus (5), Phialophora malorum (1),
Phialophora sp. (2).
Acremonium incrustatum, Paecilomyces carneus and Phialophora malorum, were
selected to study the process of infection. In the cysts inoculated with A. incrustatum
and P. carneus was evidence of germination, penetration and mycelium was
development on the chorion and in the eggs, the vitelline membrane separated and was
observed vacuolization in the surface of the eggs and the mucilage disappeared; the
conidiophore emerged of the cyst, and they were formed the first spores to the 72hrs.
However, in the cysts inoculated with P. malorum was not observed the germination of
the spores up to 5 days after the inoculation, the mycelium inside the cysts continued its
growth and 15 days later were some black cysts, this because great amount of
mycelium was developed inside the cyst, later on between the 18-20 days their
sporulation was observed. A. incrustatum and P. carneus could be considered good
candidates to use them in tests of biological control to level of experimental parcels, for
the speed in order to infect and destroy the cysts.
Key words: Biological control, potato, golden cyst nematode, Globodera rostochiensis,
nematophagus fungi.
2
I.- INTRODUCCIN
3
Cuando el nivel poblacional del nematodo en el suelo alcanza 16 y 32 huevos/g
de suelo, el rendimiento de la papa puede ser reducido entre 20 y 50%
respectivamente; y puede disminuir completamente cuando la poblacin inicial del
nematodo es de 64 huevos/gr de suelo (EPPO, 1994; Perry, 1996; Greco, 1993).
4
Sin embargo en la naturaleza las poblaciones de los animales mantienen una
fluctuacin cclica, cuyo nmero varia ao con ao y de generacin en generacin. Los
nematodos son muy pequeos y sus hbitats han sido raramente estudiados. En este
aspecto los nematodos no se diferencian de los animales (Varley et al. 1973; Knipling,
1979; Berryman, 1981).
Hay dos factores que gobiernan la abundancia de los animales; una, que opera
independientemente de la densidad y otra, que depende de la densidad. Pero en el
suelo, la ms comn, son los factores que actan independientemente de la densidad.
Los factores que ms influyen sobre las poblaciones de los nematodos fitoparsitos son
la humedad y la temperatura, as como, las prcticas agrcolas, adems de los parsitos
facultativos y depredadores (Stirling, 1991; Varley et al., 1973; Knipling, 1979;
Berryman, 1981).
5
segn Tribe (1980), no se puede concluir que este exento de microorganismos parsitos
y depredadores.
6
El nematodo dorado de la papa Globodera rostochiensis representa un grave
problema en la Regin Cofre de Perote, sin embargo poco es el conocimiento, sobre la
diversidad de especies de hongos nematofagos asociados y el potencial de estos como
agentes de control biolgico.
HIPTESIS
OBJETIVOS
7
II.-ANTECEDENTES
Otro aspecto que influye en la magnitud del dao ocasionado por este nematodo,
son los cinco patotipos identificados; (Ro1, Ro2, Ro3, Ro4, Ro5) a nivel mundial (Evans
y Trudgill, 1993; Greco, 1993).
8
9
La papa que se produce en Mxico se siembra en 25 estados de la Repblica en
tres ciclos agrcolas otoo-invierno, invierno-primavera y primavera-verano en este
ltimo se hace el 80% de la siembra. La superficie cultivada es de alrededor de 70 mil
hectreas aproximadamente, con una produccin de 1200,000 toneladas los principales
estados productores de papa son: Chihuahua, Sinaloa, Sonora, Guanajuato, Mxico,
Nuevo Len, Coahuila, Puebla y Veracruz (ASERCA, 1999).
10
Cuadro 1. Zonas ms infestadas con nematodo dorado de la papa Globodera
rostochiensis en Mxico.
ESTADO MUNICIPIO
Coahuila Arteaga
Hidalgo Metztitn
Guanajuato Len, San Francisco del Rincn, Silao, Romita, Pursima del
Rincn.
11
La hembra se adhiere y alimenta cerca del cilindro vascular, dando origen a
unidades multinucleadas denominadas sincitio (hiperplasia de las clulas) cerca de la
cabeza del nematodo, las que se forman por incorporacin de un conjunto de las clulas
adyacentes cuyas paredes se han disuelto.
La formacin del sincitio ocasiona una interrupcin de los vasos cribosos y leosos
limitando notablemente la funcionalidad de las races. Las plantas de papa atacadas por
el nematodo presentan crecimiento y rendimiento reducidos, la senectud se anticipa y
en suelos muy infestados, el follaje presenta un ligero amarillamiento; las hojas
individuales de las plantas infectadas son pequeas por la pobre divisin celular. Por
consiguiente las plantas infestadas tienen una mayor proporcin de materia en la pared
celular, el volumen de materia seca es mayor que en las plantas sanas.
12
Las larvas se vuelven activas a 10C y la mxima invasin de las races se realiza
a 16C. Temperaturas del suelo de 26C, en perodos prolongados limitan el desarrollo
del nematodo y reducen su reproduccin.
En pases con clima clido, la superficie del suelo, en el verano, se calienta mucho
y los nematodos que se encuentran en los primeros 5-10 cm mueren naturalmente. Por
lo tanto, las prcticas agrcolas en la preparacin del suelo en esta poca del ao,
reducen sensiblemente el nivel poblacional del parsito. Los huevos enquistados toleran
la desecacin y pueden sobrevivir 20 aos o ms en suelos bajo condiciones extremas
del medio ambiente. Cuando la cosecha se realiza al final del ciclo biolgico de la papa,
todos los nematodos que han penetrado en las races alcanzan el estado de quiste,
logrando un nivel poblacional muy alto. No ocurre as cuando se cosecha temprano la
papa; de esta forma muchos nematodos se encuentran todava en los estados juveniles
y el nivel poblacional en el suelo permanece bajo.
13
En la ausencia de un hospedero viable en suelos infectados los quistes del
nematodo de la papa pueden persistir por 20-30 aos. Dentro del quiste pueden pasar
al segundo estado juvenil (J2) o bien entrar en extrema inactividad conocida como
letargo.
14
En un campo, el primer foco de infeccin se manifiesta en una pequea rea
circular que luego se agranda hasta afectar toda la superficie. El nematodo, por accin
propia, puede moverse 1-2 m/ao; sin embargo, el movimiento pasivo es ms rpido. El
suelo adherido a los implementos agrcolas, zapatos y patas de los animales, puede
contener quistes, favoreciendo la diseminacin de los nematodos dentro de la misma
unidad de produccin o a otras unidades. Todo sistema de riego que favorezca la
escorrenta del agua, as como las inundaciones pueden ser importantes.
Phylum: Nematelmintos
Clase: Nematoda
Subclase: Secernentea
Orden: Tylenchida
Suborden: Tylenchinae
Superfamilia: Tylenchoidea
Familia: Heteroderidae
Gnero: Globodera
Especie: rostochiensis
15
2.3. Caractersticas morfolgicas de Globodera rostochiensis
Machos con cuerpo vermiforme con torcedura axial de 890-1270 x 22-36 m y de 31-
46 m de ancho a la mitad del cuerpo, disco labial de bajo perfil. Estilete fuerte de 25-
27 m con protuberancias bien formadas. Distancia de la base de los ndulos a la
desembocadura de la glndula esofgica dorsal de 5-7 m. Cola de 1.6-6.7 m; una
bolsa seminal, y una sola espcula en la punta (Franklin, 1971).
16
Figs. 2-5. Globodera rostochiensis. 2:Cuello y puntuaciones del quistes 750x; 3: Corte
transversal del quiste, corin y masa de huevos 750x; 4:Cono vulvar 500x;
5:Estras del corin 1000x.
17
2.4. Biologa
18
Fig. 6. Ciclo biolgico del nematodo Globodera rostochienis.
19
Globodera rostochiensis posee un promedio de 21.6 estras y G. pallida 12 (Stone,
1979). A veces, el nmero promedio puede ser de 15, lo cual causa confusin; en este
caso, es necesario identificar la especie. A la madurez tanto G. rostochiensis como G.
pallida se convierten en quistes redondeados de color castao oscuro, con un diseo
irregular de puntuaciones en la superficie del cuerpo. El largo del cuerpo de las larvas,
del estilete y de la cola son generalmente mayores en G. pallida que en G. rostochiensis
(Mulvey y Stone, 1976).
Las condiciones que lo favorecen son una temperatura de 20-26C, una humedad
en el suelo y pH de 2.6-4. Cuando las condiciones ambientales son desfavorables, como
en casos de alta temperatura (28C), sequas, cuando la planta se aproxima al final del
ciclo, o bien las races estn muy daadas; las hembras se transforman temprano en
quiste y el ciclo es ms corto; en cambio si la temperatura del suelo es menor de 20C,
el ciclo de vida es ms largo. Estudios comparativos han demostrado que G. pallida se
desarrolla mejor que G. rostochiensis a bajas temperaturas (Greco et al., 1982).
20
2.5.1. Control qumico
21
2.5.2. Control fsico
Sin embargo es poco utilizado ya que se requiere que el terreno este libre de
cultivos en el verano y que la temperatura sea muy elevada, lo cual no es factible donde
se cultiva papa ya que las temperaturas a lo largo del ao son muy bajas. El efecto
detrimente en otros agentes de control biolgico en el suelo tiene que ser tambin
considerado (Mani et al., 1993).
Las inundaciones matan a los nematodos del suelo, pero las inundaciones
artificiales resultan ser una herramienta costosa en el control de nematodos, an para
los productores comerciales, y no es recomendable para los pequeos productores
(Bridge, 1996). En Mxico, la mayora de la superficie dedicada al cultivo de papa se
localiza en zonas de montaa bajo rgimen de temporal (CONPAPA, 1994).
22
Para poder recomendar una rotacin efectiva, es necesario determinar el nivel
poblacional de los nematodos (Trudgill, 1991). El ciclo de siembra primavera-verano es
el ms favorable para la reproduccin del nematodo y ocasiona el dao ms grave, la
tasa de reproduccin de G. rostochiensis es en promedio de 39% con siembra de
primavera y el 8-9% con siembra en verano e invierno (Greco y Moreno, 1992).
23
Por otro lado, ambas especies o diferentes patotipos de ellas, pueden encontrarse
en el mismo campo, de manera que el uso de un cultivar resistente puede reducir la
incidencia de una especie o patotipo, pero favorece el desarrollo de la otra. Se ha
determinado que el uso continuo de un mismo cultivar resistente ocasiona la seleccin
de patotipos que antes no eran importantes.
Sin embargo pocas veces las legumbres son utilizadas por los productores,
porque los abonos verdes no generan ganancia directa y al usarlos solo para el control
de quistes de nematodos no ser econmicamente viable (Prot et al., 1992).
24
Es por ello que la Secretaria de Agricultura, con base en la Ley de Sanidad
Fitopecuaria de los Estados Unidos Mexicanos y su Reglamento en materia de Sanidad
Vegetal establece cuarentenas en regiones afectadas, la cual comprende aspectos
oficiales que deben cumplirse para fomentar y proteger contra el ataque del nematodo
dorado a la produccin nacional de papa (siembra, cosecha, tratamiento, transporte y
movilizacin de semillas, entre otras).
El quiste de la papa puede difundirse con los tubrculos utilizados como semilla,
es necesario que la papa para semilla sea producida en reas donde estos parsitos no
estn presentes y debe ser certificada como libre de nematodos y otros patgenos. En
muchos pases el uso de semilla certificada es limitado; mucha semilla es producida por
los mismos agricultores o por otros de la misma zona, sin ningn tipo de control
fitosanitario (Trudgill, 1991).
Varios aspectos del control biolgico de los nematodos parsitos de plantas han
sido revisados por Mankau (1981) y han impulsado, el estudio de los enemigos
naturales para el control de nematodos (Sayre y Walter, 1991). El manejo apropiado de
organismos antagnicos dispuestos a la proteccin de la planta contra patgenos
constituyen una forma de control biolgico y una alternativa para el control de
nematodos (Azcon Aguilar y Barea, 1997).
25
2.6.1. Las bacterias en el control biolgico de nematodos fitopatgenos
2.6.2. Rickettsias
26
vive en el suelo, hay observaciones de laboratorio sobre la alimentacin de los
monochidos que concluye que estos depredadores no tienen eficiente habilidad de
alcance o tropismo hacia la presa (Nelmes y Mculloch, 1975).
Otro grupo importante de depredadores de nematodos son los caros Sayre et al.
(1991). Los colmbolos y caros estn entre los ms numerosos artrpodos del suelo, la
mayora de los colmbolos se alimentan de materia descompuesta de plantas, hongos,
humus y a veces son depredadores de nematodos (Mankau, 1981).
27
2.7. Hongos parsitos de nematodos
Diversos investigadores han agrupado a los hongos segn el modo de infectar o
el estado del nematodo que infecta: predadores o atrapadores de nematodos,
endoparsitos, parsitos de huevos, hembras y productores de toxinas.
28
modificacin y especialmente los parsitos atacan a los nematodos, antes o despus de
haber utilizado el sustrato.
Todo lo que se conoce sobre el hongo examinado es que en algn punto, este
haba atrapado a los nematodos. El criterio general que se emple para escoger a un
hongo como agente de control fue que ste deba ser til y fcilmente cultivado (Abawi
y Thurston, 1992).
29
orgnicas en el suelo resulta en un aumento de la poblacin de nematodos disolutos; de
hecho el incrementar el nmero de modificaciones podra resultar en una reduccin en
la actividad de depredacin de los hongos.
El factor que requieren los hongos depredadores para ser activados cuando la
materia orgnica es adicionada al suelo ha sido auxiliar para mantener a los hongos de
inters como agentes biolgicos (Mankau, 1981; Gray, 1988). Sin embargo los estudios
sobre ecologa nutricional tienen poco inters en este grupo de hongos como mayores
contribuidores de un control biolgico (Cook y Baker, 1983).
Las adaptaciones de las hifas que hacen las trampas de hongos predadores son
comunes, sin embargo, estudios recientes han demostrado que especies que producen
30
trampas o clavijas de infeccin que penetran a los nematodos capturados, despiden una
sustancia o toxina que inmoviliza al nematodo casi inmediatamente. Algunos hongos
predadores tienen rganos que expulsan sustancias atractivas para los nematodos
(Jansson, 1982).
Estos hongos no forman hifas para atrapar los nematodos, en estos hongos las
esporas hacen contacto con la cutcula del nematodo o por la ingestin de ellas,
posteriormente germinan en el esfago y desarrollan su micelio en el interior del
nematodo, hasta que las estructuras reproductoras de los hongos rompen su pared
debido a la esporulacin. Pueden parasitar larvas, hembras, quistes y huevos. Los
grupos a los que pertenecen son Chytridiomycetes, Oomycetes, Zygomycetes,
Deuteromycetes y Basidiomycetes. La habilidad saprofitica/parasitica de los hongos
nematfagos es importante en la relacin de biocontrol de nematodos por hongos
(Kerry y De Leij 1992; Barron, 1992).
Esto sugiere que poseen similitudes que los habilitan para alimentarse sobre los
nematodos y sobrevivir en el ecosistema del suelo (Nordbring-Hertz et al., 1993).
31
Aunque el inters en los endopatgenos ha sido poco por la bsqueda de
antagonistas comercialmente viables; el potencial antagonista de los endoparsitos
puede ser manejado.
Tambin parece ser buena evidencia que las hifas asimilativas o haustorios de los
hongos predadores encontrados dentro del nematodo liberan un antibitico que impide
el desarrollo de microorganismos competidores en el nematodo capturado (Barron,
1977). El contenido de los cuerpos de los nematodos capturados es consumido
solamente hasta que una cutcula llena de hifas asimilativas lisas, permanece.
Existen aberturas naturales tales como la cavidad bucal, poro excretorio, vulva, y
ano, a travs de las cuales microorganismos secundarios pueden introducirse. No
obstante, los organismos competidores rara vez se desarrollan en los nematodos
capturados en las trampas de hifas de la mayora de las especies de hongos predadores.
32
Los conidios de los hongos predadores de nematodos son de mayor tamao que
la mayora de saprofitos del suelo y tienen abundantes reservas de nutrientes que
pueden ser utilizados para producir inmediatamente una o ms trampas de las cuales
los hongos dependern para as alimentarse y desarrollarse en un medio predatorio.
Los hongos mas estudiados han sido los que se presentan en larvas; Barron
(1977) registr 19 especies de hongos predadores y 19 de hongos endoparsitos
(cuadro 2).
Cuadro 2. Hongos predatores y endoparsitos de larvas de nematodos (Barron, 1977).
Predatores Endoparsitos
33
2.7.3. Productores de toxinas
Son hongos que se desarrollan dentro de los tejidos de las plantas, como las
endomicorrizas, y manifiestan tener influencia en la relacin de parasitismo para
nematodos endoparsitos sedentarios y migratorios.
Los hongos que infectan a los huevos de nematodos parsitos de plantas han
sido clasificados como patgenos facultativos, u hongos facultativos oportunistas
(Morgan-Jones y Rodrguez-Kabana, 1985; Sikora et al., 1990).
34
2.7.5. Hongos parsitos de huevos, hembras y quistes
La mayora de los hongos atacan a los huevos y parecen producir hifas internas
bastante similares y solo pueden ser identificados despus del aislamiento y la
subsecuente esporulacin (Kerry y De Leij, 1992).
35
Es importante hacer notar que Pseudoeurotium ovale y Humicola grisea (Traaen)
tambin han sido reportados por encontrarse sobre quistes de H. glycines (Ichioche)
(Gintis et al., 1983).
36
Verticillium chamydosporium ha sido recientemente seleccionado por ser
competente en la rizosfera (De Leij y Kerry, 1991). Esta afinidad por las races pudo ser
utilizada para intensificar el control sobre las hembras. La seleccin del cultivo y la
manipulacin, tratamientos fsicos y biolgicos del hospedero son factores que pueden
incrementar la colonizacin y control en la rizosfera.
La relacin de los hongos con la patologa del quiste fue reexaminado por Tribe
(1980), quien enlisto a V. chlamydosporium y otros hongos contorsionistas no
esporuladores. Como resultado de sus estudios Tribe (1989) encontr a C. destructans
en quistes de Heterodera schachtii en Inglaterra y Alemania.
En trminos generales, el 14% de todos los quistes tomados del suelo estaban
enfermos, sin embargo, en monocultivos de remolacha azucarera poco ms del 50%
estuvieron enfermos y observ una gran viabilidad entre las muestras con algunos que
no contenan ningn quiste enfermo.
Las hembras tomadas de las races tenan mas o menos porcentajes similares de
ataque de hongos, pero fueron infestados por parsitos especficos en Catenaria
auxiliaris y algunos de los parsitos de huevos ya mencionados estuvieron involucrados.
37
Muchos hongos que habitan el suelo colonizan constantemente quistes de
Heterodera, sin embargo no se tiene una percepcin en el control e influencia sobre la
poblacin (Morgan-Jones y Rodrguez-Kabana, 1988).
Del pequeo y selecto grupo que son los patgenos de nematodos enquistados,
Verticillium spp. es uno de los ms importantes; ms especies en este gnero, se han
registrado ocurriendo en quistes y en huevos de Globodera, Heterodera y Meloidogyne
(Morgan-Jones y Rodriguez-Kabana, 1988).
38
con nematodos parsitos de plantas por el establecimiento del mismo en las especies de
nematodos de la raz, pero ese comportamiento de colonizacin requiere confirmarse en
un ambiente ms natural.
Con los estudios realizados en muchas reas del mundo se ha comprobado que
las especies conocidas de los hongos endoparsitos, depredadores de nematodos son
cosmopolitas. Lo que ahora se requiere con respecto a la distribucin son
investigaciones sobre: las relaciones de varas especies con los factores biticos y
abiticos en el suelo, efectos de cosecha, diferentes tipos de suelo y microhbitats. Se
han observado algunas diferencias en la distribucin vertical en el suelo; sin embargo, la
mayora de las especies parecen acontecer en las capas superiores de cualquier tipo de
suelo (Kerry y De Leij, 1992).
39
Algunos hongos depredadores asemejan ser organismos que habitan la rizsfera,
mientras que otros pueden ser clasificados como no-rizsferos. Las relaciones con las
plantas rizsferas podran ser aspectos importantes de las capacidades de control
biolgico de dichos hongos. Las especies que suceden en la rizsfera pueden estar
mejor situados para influir en las poblaciones de nematodos parsitos de plantas.
40
Cuadro 3. Reportes de hongos parsitos de hembras, huevos y quistes de nematodos en diferentes regiones en el mundo.
41
III. MATERIALES Y MTODOS
3.1.1. Clima
3.1.2. Geologa
42
Fig. 7 Ubicacin geogrfica de la zona de estudio.
43
3.1.3. Suelos
3.1.4. Hidrografa
3.1.5. Topografa
3.1.6. Vegetacin
44
sobre suelos apropiados para el cultivo de la papa, Solanum tuberosum, se han talado
grandes reas para el cultivo. En la actualidad solo se encuentran manchones
representativos del bosque alrededor de la montaa, mejor conservados hacia el
noroeste, al sur de la congregacin del Escobillo y en los alrededores de El Conejo.
Tembladeras. Se localiza a 3110 msnm; en comparacin con los otros sitios de estudio
son los suelos ms hmedos; el clima predominante es fro hmedo; con una topografa
irregular con inclinacin que vara de 15 a 25 de pendiente. En el sitio de estudio el
cultivo se encuentra intercalado con rboles de Abies spp. (oyamel). La variedad de
papa ms sembrada es San Jos, en esta localidad solo cultivan papa (monocultivo) y
despus de la cosecha se utiliza para pastoreo de ovejas; las labores culturales se
realizan con arado de yunta y con azadn. Las enfermedades de la papa ms
importantes son el tizn tardo causado por el hongo Phytophthora infestans y la
pudricin del tubrculo causado por el mixomiceto Spongosptera subterrnea (Wall.
Lag.). El consumo de agroqumicos es considerado alto.
Rancho Nuevo. Se localiza a 3040 msnm; son frecuentes los vientos de suaves a
moderados; los suelos presentan alta erosin con pendientes aproximadas de 20 con
45
textura arenosa y alta pedregocidad. La vegetacin arbrea que se localiza en los lmites
de los predios son pinos y encinos; aunque son considerados suelos pobres, cidos y
con poca fertilidad, se cultiva papa y se rota el cultivo con maz o haba. El consumo de
plaguicidas se considera moderado.
Pescados. Esta localidad se ubica a los 2980 msnm; y los terrenos destinados a la
agricultura en general tienen una topografa plana, son suelos con buen drenaje. El tipo
de clima corresponde a un templado hmedo con lluvias casi todo el ao; la vegetacin
dominante son especies de pinos. Los productores cultivan variedades de papas blancas
y de color, como son: Alfa, Atlantic, Atzimba, Diamante, Gema, Gigant, Marciana y San
Jos; la secuencia en la rotacin de cultivos es papa, haba o maz. En lo general los
productores aplican elevadas dosis de agroqumicos.
Los Altos. En esta comunidad el cultivo de papa se siembra desde hace mas de 50
aos, se ubica a 2800 msnm. Aunque son considerados suelos pobres con poca
fertilidad en ellos se puede cultivar papa, maz y haba. La textura del suelo es franco
arenosa con buen drenaje, son suelos con severa erosin elica. La vegetacin en este
sitio esta severamente afectada, debido al cambio de uso de suelo de bosque a uso
agrcola; las variedades de papa ms utilizadas son Alfa, Gema y San Jos y el factor
limitante es la falta de humedad. La utilizacin de fertilizantes y plaguicidas es elevada.
46
3.1.7. Toma de muestras
47
3.1.9. Densidad de la poblacin de quistes
Para cumplir con el primer objetivo (aislar e identificar hongos nativos parsitos
de quistes de G. rostochiensis en la regin del Cofre de Perote, Veracruz) se procedi de
la siguiente manera: una vez seleccionados los quistes aparentemente jvenes y sanos
de cada localidad, se tom un grupo de 100 quistes, se desinfectaron primero con
hipoclorito de sodio al 3% y despus con alcohol al 70%, ambos durante un minuto,
posteriormente se lavaron tres veces con agua destilada estril y se colocaron en papel
estril para secarlos. La metodologa de lavado aqu usada difiere con la de Morgan-
Jones et al. (1986), ya que ellos desinfectaron la superficie de los quistes nicamente
con alcohol al 70%. Cada quiste fue colocado en cajas Petri (56x15 mm) con placas de
48
agar con dextrosa y papa (PDA) a la que se le agreg un antibitico (tetraciclina al 5%)
para evitar el crecimiento de bacterias
Las cajas fueron selladas con cinta parafilm, se etiquetaron por localidad de
estudio y numeradas del uno al 100 (n=100), de manera que se obtuvo una muestra
total de 600 quistes de G. rostochiensis y se mantuvieron a temperatura ambiente 21+
2C.
Los quistes fueron examinados diariamente para detectar la presencia de micelio.
Aquellos quistes que presentaron desarrollo de micelio, se utilizaron para generar los
cultivos puros en placas de PDA, para llevar cabo la determinacin de los hongos y
reproducirlos para su conservacin.
49
3.3. Bioensayo del proceso de infeccin de hongos sobre quistes de Globodera
rostochiensis
50
3.3.3. Inoculacin de los quistes de Globodera rostochiensis
Los quistes sanos obtenidos de las macetas se lavaron con hipoclorito de sodio al
3% durante 1 minuto y se enjuagaron 5 veces con agua destilada estril. Una vez
desinfectados los quistes, se prepararon para cada especie de hongo seis cajas Petri con
papel filtro esterilizado, en cada caja se colocaron seis grupos (cinco quistes/grupo)
conjuntndose un total de 30 quistes por caja.
51
utilizado fue completamente al azar con cuatro tratamientos y cinco repeticiones,
haciendo un total de 15 unidades experimentales; los datos obtenidos, porcentajes, se
les hizo la transformacin al Arco-sen de la x, y se lea hizo el anlisis de varianza,
ANOVA, y pruebas de medias de Tukey con 0.05 de probabilidad.
Toma de Muestras
Determinacin
de hongos
Seleccin
de hongos
IV.- RESULTADOS
52
La densidad de poblacin de quistes G. rostochiensis fue muy alta en todo los sitios
estudiados. La cantidad obtenida de quistes totales de quistes/kg de suelo en cada
localidad fueron los siguientes: Conejos 1220, Tembladeras 2216, Escobillo 360,
Rancho Nuevo 1856, Pescados 1656, Los Altos 1140. Estas cantidades son superiores al
lmite de tolerancia considerado por EPPO (1997) que indica que hasta con una
densidad de 40 quistes/kg de suelo no hay prdidas o afectacin en el desarrollo del
cultivo (Fig. 9). La Prueba G de Bondad de Ajuste con Repeticin mostr, que la
densidad de poblacin en cada localidad es significativamente diferente (Cuadro 4).
2500
No. de quistes/kg. de suelo
2000
1500
1000
500
0
S
AS
O
S
S
O
LL
JO
EV
TO
ER
AD
BI
NE
AL
AD
SC
.N
O
CO
S
R
BL
PE
LO
ES
M
S
TE
LO
Fig. 9. Total de quistes obtenidos por kilogramo de suelo por cada localidad de estudio
en el Cofre de Perote.
PRUEBA g. l. G.
Datos agrupados 2 775.556*
Heterogeneidad 10 185.8069*
TOTAL 12 961.3629
53
* Significativo
x 20.05 (3-1)= X 20.05 (2)= 5.9915
El nmero de quistes jvenes (QJ) fue mayor en las localidades de Escobillo y Los
Altos, que la de los quistes maduros (QM), con valores de 99 y 300, respecto a 87 y 266
respectivamente, (Figura 10); mientras que el nmero de quistes maduros (QM), en las
localidades de Tembladeras, Pescados, Rancho nuevo y Conejos fue mayor que la de los
jvenes, con valores de 696, 557, 468 y 331, respecto a 620, 228, 451 y 317,
respectivamente (Figura 10).
1000
800
No. de quistes/kg. de suelo
600
400
200
0
O
O
AS
S
S
O
EV
TO
LL
JO
ER
AD
BI
NE
AL
.N
AD
SC
CO
S
C
R
BL
LO
PE
ES
M
TE
54
Fig. 10. Clasificacin de los quistes obtenidos de acuerdo a condiciones fsicas por
localidad.
El anlisis de los datos mostr que existen diferencias significativas entre todas
las localidades y, que son independientes (Cuadro 6).
Conejos 2 96.055*
Tembladeras 2 55.6516*
Escobillo 2 35.2618*
R. Nuevo 2 231.622*
Pescados 2 401.472*
Los Altos 2 141.914*
TOTAL 12 961.9764
* Significativo
x20.05 (3-1)= X20.05 (2)= 5.9915
55
De las muestras de suelo de las localidades de estudio se determinaron los
siguientes niveles de pH y contenido de materia orgnica (M O). El nivel de pH en los
suelos de estudio vari de 4.54 a 6.0 en las localidades de Los Pescados y Los Altos
respectivamente. (Cuadro 7). El contenido de materia orgnica de los suelos vari de
1.47% en la localidad de Los Altos y 13.80% en Tembladeras (Cuadro 7).
LOCALIDAD pH MO
Conejos 5.61 5.89
Tembladeras 4.90 13.80
Escobillo 5.60 3.88
Rancho Nuevo 5.00 5.29
Los Pescados 4.54 4.82
Los Altos 6.00 1.47
56
Los resultados obtenidos en la correlaciones nos indican que no hay correlacin
entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la cantidad total de quistes, quistes
jvenes, quistes maduros, quistes daados en las seis localidades estudiadas (Cuadro
8).
Cuadro 8. Resultado de la correlacin entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la
cantidad total de quistes, quistes jvenes, quistes maduros, quistes daados
en las seis localidades estudiadas.
Variable Variable Coeficiente probabilidad
dependiente independiente de correlacin
Total quistes Materia orgnica 0.067104 0.1445 ns
pH - 0.67642 0.1401 ns
Quistes Jvenes Materia orgnica 0.77391 0.0709 ns
pH - 0.33985 0.5098 ns
Quistes Maduros Materia orgnica 0.73506 0.0960 ns
pH - 0.75246 0.0658 ns
Quistes Daado s Materia orgnica 0.46710 0.3503 ns
pH - 0.711152 0.1128 ns
ns= no significativo con una confiabilidad del 95%
57
ESCOBILLO Cladosporium sp. (2)
Fusarium sp.
La especie con mayor frecuencia fue Paecilomyces carneus Duch (cinco cepas),
seguida de Cladosporium sp. (tres cepas), Phialophora sp. (dos cepas) y Trichlocladium
asperum Harz (dos cepas), de los dems hongos se obtuvo una cepa Acremonium
incrustatum Gams, Aspergillus sp., Chetomidium sp., Drechslera sp., Fusarium sp.,
58
Phialophora malorum Kidd, Pteroconium sp., y Ulocladum atrum. En el cuadro 10, se
presenta la a clasificacin taxonmica de los gneros de las especies obtenidas.
SUBDIVISIN DEUTEROMYCOTINA
Clase Subclase Orden Familia Gnero
Hyphomycetes Monilialies Moniliaceae Acremonium
Aspergillus
Paecilomyces
Dematiaceae Pteroconium
Cladosporium
Drechslera
Phialophora
Trichocladium
Ulocladium
Turberculariaceae Fusarium
SUBDIVISIN ASCOMYCOTINA
Clase Subclase Orden Familia Gnero
Euascomycetes Pyrenomycetidae Chaetomiales Chaetomiaceae Chaetomidium
4.5. Proceso de infeccin de tres hongos aislados de quistes de Globodera
rostochiensis
59
observaron a las 96 hrs, las hifas emergiendo desde el interior del mismo. Finalmente a
las 120 hrs haba hifas y conidiforos esporulando en el exterior del quiste (Figs. 15-16).
Proceso de Infeccin de Acremonium incrustatum sobre quistes de G. rostochiensis
60
Figs. 11-16: Acremonium incrustatum. 11: Esporas sobre el corin 12 hrs despus de
la inoculacin 2,000x; 12: Tubos germinativos vistos en la parte interna del
corin 24 hrs despus de la inoculacin 1,500x; 13: Tubos germinativos a
las 48 hrs 1,500x; 14: Huevos con micelio a las 72 hrs 1,000x; 15: Micelio
61
saliendo del corin 96 hrs 1,000x; 16: Conidiforo emergiendo del corin
120 hrs 2,000x.
Paecilomyces carneus. Las esporas germinaron a las 12 hrs sobre los quistes, en
general desarrollaron tubos germinativos cortos 2 X 1 m (Fig. 17), as mismo en
algunas esporas se observaron apresorios despus de desarrollar un pequeo tubo
germinativo. El tamao de los tubos germinativos fue menor sobre los quistes que los
observados provenientes de la suspensin de esporas sobrante (5 X2 m). A las 24 hrs
se continu observando los apresorios, la mayora de las esporas formaron hifas
ramificadas de 46 X 3 m; en esta etapa hubo mayor desarrollo micelial en la zonas de
la boca y cono vulvar, que son aberturas naturales del quiste (Figs. 18-19). A las 48 hrs
hubo mayor desarrollo micelial en la parte externa e interna del quiste. El micelio
desarrollado en la parte media del quiste empez a formar una clula conidiogena
(fialide) de 10 X 3 m a las 72 hrs (Fig. 20) y posteriormente se diferenciaron las
estructuras reproductoras, se encontraron conidiforos con 3 filides de 20 X 3 m ya
estaban esporulando. En un corte transversal del quiste se pudo observar el desarrollo
micelial en la masa de huevos as como en larvas que estaban apunto de eclosionar
(Fig. 22). A las 96 hrs se manifestaron los siguientes cambios, la capa vitelina se separ,
tambin se observ la vacuolizacin en la superficie de los huevos y el muclago
desapareci. Se observaron tambin cambios anlogos en la cutcula de algunos huevos
con larvas en estado J2. Las hifas endgenas en los huevos reemergieron pasando por
ambos lados, en cuya superficie se encontraron esporas provenientes de conidiforos
maduros. Los quistes se cubrieron de conidiforos maduros a las 120 hrs (Figs. 17-22).
Con esta prueba queda comprobada la capacidad nematofaga de P. carneus.
62
Proceso de infeccin de Paecilomyces carneus sobre quistes de G. rostochiensis
63
Phialophora malorum. Se encontraron pocas esporas que germinaron a las 12 hrs
(Fig. 23); la mayora de las esporas germinaron a las 48 hrs y se empez a desarrollar
micelio. Los quistes cambiaron de color de sus tonalidades de caf claro y brillantes a
caf opaco ennegrecido a 72 hrs. Algunas esporas todava estaban en proceso de
germinacin a las 96 hrs y las que haban germinado desarrollaban su micelio sobre el
corin. El micelio invadi la masa de huevos a las 120 hrs. Despus de este tiempo el
micelio sigui desarrollndose en el interior y fuera del quiste, sin ser conspicuo. El
crecimiento del micelio fue bastante lento; a los 18 das de haber sido inoculados se
observ en la parte bucal y el cono vulvar, mayor desarrollo de micelio (Fig. 28). Se
mantuvo en observacin hasta los 28 das cuando los quistes estaban completamente
negros por el color del micelio (Figs. 23-28).
64
Proceso de infeccin de Phialophora malorum sobre quistes de G. rostochiensis
Figs. 23-28 Phialophora malorum. 23: Germinacin de una espora 12 hrs despus de
la inoculacin 3,500x; 24: Tubos germinativos 72 hrs 1,500x; 25: Micelio
desarrollndose sobre el corin a las 96 hrs 750x; 26: Micelio sobre huevos
120 hrs despus de la germinacin 750x; 27: Parte interna del corin con
micelio a los 18 das 750x; 28: Quiste cubierto de micelio a los 28 das.
65
4.6. Patogenicidad y esporulacin de tres hongos sobre quistes de Globodera
rostochiensis
100
% Quistes con esporulacin
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
4 7 11 14 18 22 30
Das
Acremonium incrustatum Phialophora malorum
Paecilomyces carneus Testigo
Total 14 509.333
R2 = 0.7713 66 CV= 23.3586 MSE= 3.114482
66
La prueba de Tukey nos indic que el desarrollo de Acremonium incrustatum y
Paecilomyces carneus es similar pero difieren del desarrollo de Phialophora malorum
(cuadro 12).
Cuadro 12. Porcentajes de quistes de G. rostochiensis con la esporulacin de hongos
nativos inoculados.
TRATAMIENTOS X
Acremonium incrustatum 19.0 a
67
A. incrustatum. El 100% de los quistes fueron infectados. A los 7 das despus de la
inoculacin, el hongo esporul sobre el 35% de los quistes; a los 11 das el 61 % de los
quistes estaban cubiertos por condiforos, aumentando a los 14 das a 64% y a los 18
das a 65%. La esporulacin aument en el 82% a los 22 das, finalmente el 95% de los
quistes estaban cubiertos a los 30 das (Figs. 33-35).
68
P. carneus. El 100% de los quistes inoculados, estuvo infectado por el hongo. La
esporulacin se observ en el 20% de los quistes a los siete das, posteriormente la
esporulacin aument lentamente a los 11 das a 32%, el 61% a los 14 das, el 63% a
los 18 das, 66% a los 22 das y 72% a los 30 das (Figs. 36-41).
Figs. 36-41 Paecilomyces carneus. 36: Conidiforo 2,000x; 37: Cadenas de conidios y
micelio sobre el quiste 750x; 38: Micelio sobre la masa de huevos 750x;
39:Quiste cubierto por micelio y conidiforos 150x; Testigos 40: Quiste
sano 100x; 41: Huevos en el interior del quiste 500x.
69
P. malorum. El micelio sobre los quistes inoculados con este hongo inici su desarrollo
hasta los 11 das, la esporulacin se present en 8% a los 22 das y 33% a los 30 das
(Figs. 42-51).
Figs. 42-47 Phialophora malurum. 42: Grupo de esporas 1,500x; 43: Espora y micelio
sobre el quiste 100x; 44: Micelio sobre el corin 200x; 45: Micelio en la masa de
huevos 750x; 46: Micelio en la masa de huevos y corin 500x; 47: Quiste
cubierto por micelio 150x.
70
Pruebas de Patogenicidad de Phialophora malorum sobre quistes de G. rostochiensis
Figs. 48-49 Globodera rostochiensis. Testigos 48: Quiste sano 250x, 49: Conjunto de
huevos en el interior del quiste 500x.
71
V. DISCUSIN
Los datos muestran que no existe correlacin entre el nmero de quistes con la
materia orgnica y el pH del suelo. Este resultado no es raro ya que se menciona que
este factor no tienen efecto significativo sobre las poblaciones de los fitonematodos
enquistados (Stirling, 1991).
72
Kerry y Crump, 1977; Jones, 1976; Willcox y Tribe, 1980; Stirling, 1991), lo anterior
debido a la reducida apertura del cono vulvar y la presencia de una capa de cutcula
adicional que funcionan como barreras, para la penetracin de los hongos parsitos y
depredadores (Tribe, 1980).
Diversas investigaciones han sido enfocadas sobre la asociacin entre los hongos
nativos, llamados oportunistas, en el suelo, y quistes de Heterodera especficamente H.
avenae; H. glycines, y H. schachtii (Tribe, 1980; Jones, 1976; Morgan-Jones, et al.,
1981; Gintis et al.,1983; Dackman, et al., 1985), pero investigaciones de la actividad de
hongos nematofagos sobre quistes de especies de Globodera, eran mnimas,
comparativamente (Stirling, 1991), sin embargo, a la fecha se puede decir que la
73
situacin no ha cambiado, debido al uso de los nematicidas qumicos, el problema de
resistencia de los fitonematodos a esos productos y la contaminacin ambiental activar
los estudios sobre estos tpicos (Stirling, 1991).
74
infestacin mencionados, podran tener potencial, como agentes de control biolgico de
este nematodo.
Estos resultados indican, que en los suelos de la zona productora de papa del
Cofre de Perote, los quistes del nematodos dorado G. rostochiensis estn asociados a
hongos nematofagos habitantes del suelo, y estos hongos pertenecen, en su mayor
parte, a la clase Hyphomycetes. En otros reportes se menciona, que los quistes de G.
pallida y G. rostochiensis, estn asociados a varios hongos oportunistas, al menos a 28
especies (Morgan-Jones, et al., 1986); resultados similares se obtuvieron en otros
estudios (Morgan-Jones et al.,1988).
75
Tambin, parasita huevos (Jatala et al., 1983; Dunn, 1983) y hembras de M.
incognita (Godoy et al., 1983), y quistes de G. pallida, (Rodrguez- Kabana, 1986).
En una revisin exhaustiva de literatura no se encontr ningn reporte de este
hongo asociado a quistes de G. rostochiensis, por lo que al parecer, este es el primer
reporte.
76
especies de nematodos sobre placas de agar in vitro, y creciendo saprofiticamente sobre
huevos muertos. Sin embargo en diversos estudios han concluido, que otro saprofito
facultativo comn era causante de la afectacin de algunos huevos de H. schachtii bajo
ciertas condiciones en los campos (Nigh, 1979).
77
El hecho de que estas especies de hongos, estn asociados con quistes de G.
rostochiensis en la regin Cofre de Perote, estn adaptados a las condiciones ecolgicas
de esos suelos y son un potencial para usarse en el manejo integrado del nematodo
dorado de la papa.
78
En la literatura cientfica, se consideraba que este fitonematodo no tena
enemigos naturales, excepto en los ambientes de su zona de origen (Tribe, 1980;
Stirling, 1991), aunque en Inglaterra, fuera de su centro de origen, ya se haban
reportado hongos asociados a los quistes de este fitopatgeno, y no se demostr
patogenicidad (Willcox y Tribe, 1974); en este estudio se demuestra que lo quistes de
G. rostochiensis son atacados por hongos nativos de la regin del Cofre de Perote, Ver.
79
VI. CONCLUSIN
Los datos soportan la hiptesis de que existen hongos nativos que parasitan a
quistes de Globodera rostochiensis en los suelos de la zona productora de papa del
Cofre de Perote, Veracruz.
En este estudio, se aportan las bases, para continuar estudios de hongos, que
parasitan quistes de G. rostochiensis y el potencial de stos, como agentes de control
biolgico.
80
VII. LITERATURA CITADA
Adams, P.B. (1990). The potential of mycoparasites for biological control of plant
diseases. Annual Review Phytopathology 28:59-72.
Barron, G.L. (1977). The nematode destroying fungi. Canada Biology Publication Ltd.
140. Guelph.
Barron, G.L. (1992). Lignolytic and cellulotytic fungi as predators and parasites The
Wicklow, Eds.), 2da. Ed. 311-326. Marcel Dekker, Inc., New York.
Berry, M.M. Stone, A.R. y Parrot D.M. (1977). The biology of cyst nematodes.
Nematology Departament. Report of Rothamsted Experimental Station 1976.
pp. 198.
Bursnall, L.A. y Tribe, H.T. (1974). Fungal parasitism in cyst of Heterodera avenae
Transactions of British Mycological Society 62: 595-601.
Cabanillas, E., Baker, K.R. y Nelson, L.A. (1989). Growth of isolates of Paecilomyces
lilacinus and their efficacy in biocontrol of Meloidogyne incognita on Tomato.
Journal of Nematology. 21: 164-172.
81
Canto-Senz M. y Mayer de Scurrach, M. (1993). Races of the potato cyst nematode
in the andean region and a new system of classification. Nematologica 23:340-
349.
Carries, L.M., Glawe, D.A., Smyth, C.A. y Edwards, D.I. (1989). Fungi associated with
populations of Heterodera glycines in two Illinois soybean fields. Mycologia 81:
66-75.
Cook J.R. y Baker, K.R. (1983). The nature and practice of biological control of plant
pathogens. Phytopathological Society Biological 8:539.
Cook, R.J. (1993). Making greater use of introduced microorganism for biological
control of plant pathogen. Annual Review Phytopathology 31:53-80.
Crump, D.H. (1991). Biological control of the beet cyst nematodes. British Sugar Beet
Review 59:54-55.
Davide, R.G. y Zorrilla, R.A. (1995). Farms trials by potato growers on the use of
Paecilomyces lilacinus for biological control of potato cyst nematodes and other
species. Biocontrol 1:63-75.
82
de Hoog, G.S. y Hermanides-Nijhof, E.J. (1977). Survey of the black yeasts and allied
fungi. Studies in Mycology 15:178-221.
Evans, K. y Stone, A.R. (1977). A review of the distribution and biology of potato
cyst-nematodes Globodera rostochiensis and G. pallida Rothamsted
Experimental Station Crown 23: 178-189.
Evans, K. y Trudgill, D.L. (1992). Pest aspects of potato production, Part 1. Nematode
pest of potatoes. The Potato Crop 730 pp.
Fenwick, D.M. (1940). Methods for the recove and counting of cyst of Heterodera
schachtii from soil. Journal of Helminthology 18: 155-172.
Ferris V.R. Miller, L.I. Faghihi, J. y Ferris, J.M. (1995). Ribosomal DNA comparisons of
Globodera from two continents. Agronoma Tropical 21: 273-283.
Franco, J. (1977). Studies on the taxonomy and biology of potato cyst nematodes
Globodera sp. Mulvey and Stone 1976. Ph D Tesis. University of London.
83
Franklin, M.T. (1971).Taxonomy of Heteroderidae. Plant parasitic nematodes 1:139-
162.
Gommers, F.J., Roosien, J., Schouten, A. Boer, J. M. de, Overmars, H. A., Bouwman,
L. (1992). The identification and management of virulence genes in potato cyst
nematodes. Netherlands Journal of Plant Pathology 98 2:157-163.
Greco, N., Di Vito, Brandonisio, A., Giordano, I. y De Marinis, G. (1982). The effect of
Globodera pallida and Globodera rostochiensis on potato yield. Nematologica
28:379-386.
84
Inverson, L.G.K. (1972). Golden nematode-infestation found in Mxico. Plant Disease
Reporter 49:281.
Jaffee, B.A., Ferris H., Stappleton, J.J, Norton M.V.K. y Muldoon A.E. (1994).
Parasitism of nematodes by the fungus Hirsutella rhossiliensis as affected by
certain organic amendments. Journal of Nematology 26: 152-161.
Jaffee, B.A., Muldoon, A.E., Anderson C.E. y Westerdahl B.B. (1991). Detection of the
nematophagous fungus Hirsutella rhossiliensis in California sugarbeet fields.
Biological Control 1: 63-67.
Jaffee, B.A., y Zehr, E.I. (1982). Parasitism of the nematode Criconemella xenoplax
by the fungus Hirsutella rhossiliensis. Phytopathology 72:1378-1381.
Kerry B.R. y Crump D.H. (1991). Methods for studying nematophagous fungi
Organization Biological International. Control Noxious Animal Plants
IOBC/WPRS BULLXIV/2 64 pp.
Kerry, B.R. (1990b). Biological control in principles and practice of nematode control
in crops. Ed R.A. Brown, BR Kerry pp. 233-263.
85
Kerry, B.R. 1987. Biological control cyst nematodes. In principles and practice of
nematode control in crops. Edited by Brown, and B.R. Kerry. Academic Press
Sydney Australia.233-263.
Kerry, B.R. y De Leij, A.A.M. (1992). Key factors in the development of fungal agents
for de control of cyst and root-knot nematodes. Biological Control Plant
Diseases. Athens, Greece, New York.
Kerry, B.R., Crump, D.H. y Mllen, L.A. (1982). Natural control of the cereal cyst.
Nematode, Heterodera avenae Woll. By soil fungi at three sites. Crop
Protection 1: 99-104.
Kerry, B.R., y Crump, D.H. (1980). Two Fungi parasitic on females of cyst nematodes
Heterodera spp. Transactions of British Mycological Society 74: 119-125.
Kerry, B.R., y Crump, D.H. (1977). Observations on fungal parasites of females and
eggs of the cereal cyst-nematodes, Heterodera avanae and other cyst
nematodes. Nematological 23:193-201.
Knipling, E.F. (1979). The basic principles of insect population suppression and
management. United Estate Dept. Agriculture. Handbook Number 512.
86
Mani, A. Prakahs, K.S. y Zidgali T.A. (1993). Comparative effects of soil solarization
and nematicides on three nematode species infecting potato. Current
Nematology 4: 65-70.
Narave, F.H. (1985). La vegetacin del Cofre de Perote, Veracruz. Biotica 10:35-63.
Nicolay, R. y Sikora, R.A. (1989). Techniques to determine the activity of fungal egg
parasites of Heterodera schachtii in field soil. Review Nematology 12:97-102.
87
Nicolay, R. y Sikora, R.A. (1991). Interrelationships between fungal egg parasitism in
Heterodera schachtii (Schmidt) and nematode population density. Review
Nematology 14:231-249.
Nigh, E. A., Thomason, I.J., y Van Gundy, S.D. (1980). Identification and distribution
of fungal parasites of Hetertodera schachtii eggs in California, USA.
Phytopathology 70: 884-889.
Nigh, E. L. (1979). Acremonium strictum and Fusarium oxysporum, two fungal egg
parasites of Heterodera schachtii, the sugarbeet cyst nematode. Ph.D. thesis.
Univ. Calif., Riverside. 79.
Niles PK. y Freckman DW. (1998). From the ground up: nematode ecology.
Bioassessment and Ecosystem Health 13 pp 65-85.
Nordbring-Hertz, B., Jansson, H.B., Friman, E., Persson, Dackman, C., Hard, T. y
Poloczek, E. (1993). Film V 2603, Institute Wiss. Film, Gottingen, Germany.
Perry, R.N. (1996). Root diffuses and hatching factors. Aspect of Applied Biology
22:121-128.
Prot J.C., Soriano J. y Matias D.M. (1992). Use de green manure crops in control of
Hirschmanniella mucronata and H. oryzae in irrigated rice. Nematologica
Mediterranea 18:213-17.
88
Rogers, G.W.T. (1987). Fungi associated with cyst Heterodera avenae. M. Sc. Thesis,
University of Canterbury pp.31-67.
Samson, R.A. (1974). Paecilomyces and some allied Hyphomycetes Studies Mycology
6: Centraalbureau voor Schimmelcultures Baarn.
Sayre R.M., Wergin, W.P., Nishizawa, T. y Starr, M. (1991). Light and elector
microscopically study of bacterial parasite from cyst nematodes, Heterodera
glycines. Journal of the Helminthological Society of Washington 58:69-81.
Sayre, R.M. y Walter, D.E. (1991). Factors affecting the efficacy of natural enemies of
nematodes. Annual Review of Phytopathology 29:149-66.
Schuster, R.P. y Sikora, R.A. (1992a). Behavior of fungal egg pathogens in filed soil
and its importance for effective biological control of potato cyst nematode
Globodera pallida. Reviews Nematology 50: 259-264.
Schuster, R.P. y Sikora, R.A. (1992b). Persistence and growth of an egg pathogenic
fungus, applied in alginate granules to field soil and pathogenicity towed
Globodera pallida. Fundaments Applied Nematolology 4: 66-72.
Shepherd, A.M., Clark, S.A. and P.J. Dart. 1972. Cuticle structure in the genus
Heterodera. Nematologica 18:1-17.
89
Sikora, R.A. (1992). Management of the soil antagonistic potential in agroecosystems
for nematode control of plant parasitic nematode, Annual Review
Phytopathology 30:245-270.
Sosa-Moss, C. (1986). Cyst nematodes in Mexico Central and South America Cyst
nematodes. Nematologica 23:397-398.
Stirling, G.R. (1991). Biological control of plant parasitic nematodes. Progress, problems
and prospects. CAB International, Wallingford, U.K., 282 pp.
Stirling, G.R. y Kerry, B.R. (1983). Antagonists of the cereal cyst nematode Heterodera
avenae Woll. in Australian soils. Australian Journal of Experimental Agriculture and
Animal Husbandry 23:318-24.
Stone, A.R. (1979). Co-evolution of nematodes and plants. Symbolae Botanicae 49-
66pp.
Stone, A.R. (1986).Taxonomy and phylogenic of cyst nematodes. Cyst Nematodes pp.
113-119.
Tribe, H.T. (1980). Prospects for the biological control of plant parasitic nematodes.
Parasitology 81. 619-639.
90
Trudgill, D.L. (1991). Resistance and tolerance of plant parasitic nematodes in plants.
Annual Review of Phypatology 29:167-192.
Van Der Laan, P.A. (1986). Onderzoekingen over schimmels, die parasiteren op de
cyste-inhoud van het aardappelcystenaaltje (Heterodera rostochiensis
Wollenw).Tijdschrift over Plantenziekten 59:101-103.
Varley, C.G., Gradwell, G.R. y Hossell, M.P. (1973). Insect population ecology an
analytical approach. University of California Prees Berkeley. USA.
West, C.P., Izekor, E., Oosterhuis, D. M., y Robbins, R. (1988). The effect of
Acremonium coenophialum on the growth and nematode infestation of tall
fescue. Plant Soil 112:3-6.
Whitehead, A.G. Nichols, A.J.F. y Senior J.C. (1994). The control of potato pale cyst
nematode (Globodera pallida) by chemicals and cultural methods in different
soils. Journal of Agricultural Science Cambridge 7: 207-218.
Winslow D.R. y Willis, J.R. (1972). Nematode diseases of potatoes In: Economic
nematology edited by Webster M.J. Academy Press, London. F.p.
Yeates, G.W. (1994). Modification and qualification of the nematode maturity index.
Pedobiologia 38:97 101.
91
INSTITUTO DE
ECOLOGIA, A.C.
DIVISIN DE SISTEMTICA
Por medio de la presente le comunico a Ud. de la manera ms atenta, que el trabajo titulado
Aislamiento y Evaluacin de Hongos Nematofagos Asociados a Quistes de Globodera
rostochiensis (Woll.) en la Regin Cofre de Perote, realizado por el C. ngel Enrique Nez
Snchez, alumno del posgrado en Biotecnologa para optar por el grado de Maestro en Ciencias, ha
sido terminado satisfactoriamente desde mi punto de vista. Por esta razn, considero que puede
continuar con los trmites correspondientes. que marca el reglamento del posgrado que Ud. dirige.
ATENTAMENTE
Departamento Hongos
Km 2.5 Antigua carretera a Coatepec, A.P. 63 Xalapa 91000, Veracruz, Mxico
Tel. (228) 8-42-1 8-29 Fax (228) 8-18-78-09 Email: carrion@ecologia.edu.mx
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR
PROGRAMA DE POSGRADO DE LA FCBA
PRESENTE
Sin ms por el momento. aprovecho para saludarle afectuosamente y le reitero la mas alta
de mis consideraciones.
ATENTAMlENTE
Tecomn Colima., a 07 de Junio de 2002.
ATENTAMENTE
Tecomn, Colima., a 23 de Julio de 2002