COORDENAO DE BIOSSEGURANA - 2011

O QUE DEVO FAZER COM OS RESDUOS DE BROMETO DE ETDIO NO LABORATRIO?

As muitas controvrsias sobre os mtodos de descontaminao e descarte do brometo de etdio motivaram a Coordenao de
Biossegurana do CCS a elaborar este documento, guiada por literatura com reconhecido embasamento tcnico-cientfico. Por
isso, recomendamos os procedimentos abaixo para o descarte seguro de brometo de etdio.
A nossa sade e o meio ambiente agradecem!

O QUE O BROMETO DE ETDIO?

Utilizado na colorao de gis de eletroforese, o brometo de etdio identifica fragmentos de
cidos nuclicos atravs da formao de complexos fluorescentes de intercalao com o
DNA. Por essa caracterstica considerado um agente mutagnico, txico, possivelmente
carcinognico e teratognico. O brometo de etdio amplamente empregado em biologia
molecular, biologia celular, citofluorometria e citologia. Sua manipulao deve ser feita
com a devida precauo (uso de luvas de nitrila, culos e mscara) para evitar
contato com a pele, inalao e ingesto. Lembre-se que o brometo de etdio sob a forma
de p muito mais txico do que em soluo e sua inalao pode causar srios danos ao
aparelho respiratrio.

O brometo de etdio ou brometo de 3,8-diamino-5-etil-6-fenilfenantridinium um corante

Fig. 1: Brometo de etdio
vermelho-escuro, com frmula molecular C21H20N3Br (Fig. 1). Solvel em gua (5 g/100 mL), o (massa molar 394,31;
brometo de etdio estvel nas condies habituais de laboratrio, porm reage violentamente ponto de fuso 238-240 C)
em condies fortemente oxidantes. A abreviatura EtBr geralmente utilizada para se referir ao
brometo de etdio (ethidium bromide). No confundir com a representao para a frmula do brometo de etila (C 2H5Br). Neste
documento adotou-se uma abreviatura em portugus (BE).

COMO DESCARTAR RESDUOS DE BROMETO DE ETDIO?

Os resduos de brometo de etdio (BE) devem ser submetidos a tratamento e disposio final
especficos, conforme estabelecido na Resoluo CONAMA N 358/05 para compostos txicos.
Por serem resduos txicos, no devero ser descartados no lixo comum ou na pia. A
segregao de resduos lquidos e slidos de BE deve ser feita em recipientes separados, Figura 2: Pictograma para
Produto
assegurando-se da devida identificao com o rtulo de resduo perigoso, acrescido do
Qumico Txico
pictograma de produto txico (Fig. 2).
As etiquetas dos recipientes devem indicar a data, os seus componentes contidos (inclusive
gua), a concentrao aproximada, perfazendo um total de 100% para todos os componentes e o pH. Os recipientes sero
lacrados, exceto os que ainda estiverem em preenchimento.

Ateno! Preste sempre muita ateno na concentrao de brometo de etdio com a qual est
trabalhando, pois com base nela que voc vai adotar o procedimento adequado de
descontaminao e descarte!

1 - Resduos Slidos
1.1 Gis de Eletroforese: De acordo com a Resoluo 358/05 do CONAMA, os gis e outros
resduos slidos provenientes do tratamento de solues de BE devem ser coletados e
descartados como rejeito qumico orgnico halogenado (grupo C na classificao utilizada para Fig. 3: Gel corado com BE.
o descarte de resduos qumicos no CCS). Imagem cedida por Ricardo
Oliveira
2 - Resduos Lquidos
Aplicam-se os tratamentos descritos a seguir, de acordo com a concentrao da soluo.

Ateno! Todos os procedimentos devero ser realizados em capela com sistema de exausto e em local prximo gerao do resduo.

2.1 Descontaminao por adsoro em carvo ativo de soluo de BE em concentrao inferior ou igual a 10 g/mL
(Bensaude, 1988):
Este mtodo destinado a solues diludas de BE eficiente, de baixo custo e no oferece perigo.

Adicione 300 mg de carvo ativo para cada 100 mL de soluo de brometo de etdio ( 10 g/mL);
Deixe a mistura sob agitao durante 1 h, temperatura ambiente;
Filtre a mistura em papel de filtro;
Verifique se o filtrado est livre de BE atravs da fluorescncia sob luz Ultravioleta (UV);
Descarte o filtrado na pia sob gua corrente;
O filtro e o carvo com resduos descontaminados so descartados conforme j mencionado para resduos slidos, em recipientes adequados.
Obs: Existem kits comerciais para a realizao deste procedimento, por exemplo: Funnel Kit (VWR), Green Bag (VWR) e Destaining Bags (Amresco).
2.2 Descontaminao por adsoro em resina Amberlite XAD-16 de soluo de BE em concentrao inferior ou igual a
100 g/mL (Lunn & Sansone, 1987):
Este mtodo permite a descontaminao de solues um pouco mais concentradas. Os autores no recomendam diminuir a quantidade de resina
para solues mais diludas, de modo a garantir a total descontaminao.

Adicione 2,9 g de Amberlite XAD-16 para cada 100 mL de soluo de brometo de etdio segundo os limites de concentrao ( 100 g/mL);
Agite a mistura por 12 h temperatura ambiente;
Filtre atravs de papel de filtro;
Verifique se o filtrado est livre de BE atravs da observao de fluorescncia sob luz UV;
Descarte o filtrado na pia sob gua corrente;
Coloque o filtro e a resina Amberlite em um saco plstico para descarte como resduos do grupo C no CCS.

Ateno! Os procedimentos a seguir devero ser realizados por pessoa familiarizada com reaes qumicas, devido ao risco de
manipulao.

2.3 Descontaminao de soluo de BE em concentrao inferior ou igual a 0,5 mg/mL por reao de inativao
qumica com cido hipofosforoso e nitrito de sdio (Lunn & Sansone, 1987)
Este protocolo se aplica a 100 mL de soluo aquosa de BE em concentrao de at 0,5 mg/mL. Se voc tiver uma soluo mais concentrada,
dever diluir em gua at alcanar essa concentrao ou uma concentrao inferior.

Adicione 20 mL de cido hipofosforoso a 5%, recm-preparado (o cido corrosivo e deve ser manipulado com cuidado na capela);
Adicione 12 mL de uma soluo recm-preparada de nitrito de sdio 0,5 M (com pH prximo de 3);
Homogeneze e deixe em repouso por 20 h, temperatura ambiente;
Neutralize o pH (7) com bicarbonato de sdio em p;
Verifique a fluorescncia indicadora de presena de BE, por meio de luz UV. Caso exista, repita o tratamento qumico para completa inativao
de BE;
Descarte a soluo na pia sob gua corrente.

2.4 Descontaminao de soluo de BE em concentrao de 10 mg/mL por reao de inativao qumica com
permanganato de potssio (Quillardet & Hofnung, 1988).
Este protocolo se destina soluo muito concentrada de brometo de etdio e requer muito cuidado na sua execuo.

Adicionar o volume de 1:1 de KMnO4 0,5 M e misturar cuidadosamente;

Adicionar HCl 2,5 N na proporo de 1:1; misturar cuidadosamente e deixar descansar temperatura ambiente por vrias horas;
Neutralizar a soluo com NaOH 2,5 N tambm na proporo de 1:1; misturar cuidadosamente;
Descartar a soluo em gua corrente.

Ateno! Caso os procedimentos de descontaminao no sejam adotados para as solues, o material dever ser encaminhado ao
descarte de resduos qumicos do Centro de Cincias da Sade.
CUIDADO! A inativao por hipoclorito de sdio fortemente desaconselhada, devido formao de substncias mutagnicas durante
a reao de oxidao (Lunn & Sansone, 1987).

O QUE FAZER EM CASO DE CONTAMINAO COM BROMETO DE ETDIO?

Luvas e outros materiais:
As luvas contaminadas com BE, papel toalha e outros descartveis devero ser colocados em um saco plstico, com a etiqueta adesiva de cor
laranja para identificao de resduo qumico txico. Este material dever ser descartado como rejeito qumico do grupo C no CCS.

Ateno! Em caso de contato da pele ou projeo sobre os olhos com soluo de brometo de etdio, lave abundantemente com gua a
regio afetada. Consulte um oftalmologista em caso de acidente com os olhos. Para evitar acidentes, nunca deixe de usar jaleco de mangas
compridas, luvas e culos de proteo ao manipular brometo de etdio!
Bancadas:
Em caso de derramamento acidental de BE em p sobre a bancada, recolher imediatamente o material dentro de um recipiente seco para descarte
posterior, devidamente identificado, como explicado anteriormente. Voc derramou soluo de BE na bancada, no cho? Enxugue com papel
toalha embebido com soluo de nitrito de sdio e cido hipofosforoso. Limpe cinco vezes com papel toalha molhado em gua. Os papis toalhas
utilizados podero ser descartados no lixo comum (Lunn, 1990).

COMO DIMINUIR A GERAO DE RESDUOS DE BROMETO DE ETDIO?

Revelao de DNA por outros reagentes menos txicos. Exemplos: Gel Red e Gel Green (Biotium) ou ainda SybrSafe (Invitrogen);
Utilizao de filtros comerciais para remoo de BE em tampes e solues aquosas;
Substituio, sempre que possvel, de solues concentradas de BE por solues diludas;
Utilizao de escalas micro e semimicro em laboratrio.

Agindo assim, contribumos para a melhoria das condies de trabalho e preservamos o meio ambiente.

Agradecimentos especiais aos alunos Ricardo Melo Oliveira (Ncleo de Boas Prticas de Laboratrio e Biossegurana, IBCCF, UFRJ;
Coordenao de Biossegurana do CCS, UFRJ) e Amanda Pietroluongo (estagiria em Biossegurana CCS, UFRJ) pela contribuio
elaborao do folheto sob a superviso tcnica da Prof Snia Costa (Coordenadora de Biossegurana no CCS).
Referncias bibliogrficas:
Bensaude, O. Ethidium bromide and safety readers suggest alternative solutions. Letters to editors. Trends in Genetics 4 (4): 90, 1988;
Lunn, G. Decontamination of ethidium bromide spills. Trends in Genetics 6: 31, 1990;
Lunn, G.; Sansone, E.B. Ethidium bromide: destruction and decontamination of solutions. Analytical Biochemistry 162: 453-458, 1987;
Quillardet, P.; Hofnung, O. Ethidium bromide and safety - readers suggest alternative solutions. Trends in Genetics 4 (4): 89-90, 1988;
Resoluo CONAMA n 358, DE 29 DE ABRIL DE 2005 (DOU n 84, de 4 de maio de 2005, Seo 1, pginas 63-65);
Sambrook, J; Fritsch, E.F.; Maniatis, T. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1989.