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BIORREMEDIACION

Proceso que utiliza organismos vivos (generalmente


microorganismos) para degradar o transformar
compuestos txicos en menos txicos o inocuos.
Contaminantes biorremediables
Hidrocarburos lineales y halogenados

Hidrocarburos mono aromticos


(benzeno,Tolueno,Etil benzeno)

Hidrocarburos policclicos
(Naftaleno, pireno, bezopireno) Biotransformacin:
Coversin a compuestos
Bifenilos policlorados menos txicos (o mas txicos)

Pesticidas (DTT)

Explosivos (TNT)
Mineralizacin:
Nitrocompuestos polimricos Conversion a H2O, CO2 (aerbica),
(celulosa, lignina) CH4 (anaerbica)

Colorantes

Frmacos (antibiticos)

Metales pesados: Cd,Pb,As


Contaminantes potencialmente biodegradables
Hidrocarburos

Presentes en combustibles y petrleo


Tamao uno-cientos tomos de carbono.

Algunos hidrocarburos del petrleo


Hidrocarburos aromticos monocclicos

Comunes en gasolinas y petrleo


Altamente voltiles utilizados como solventes en diversos procesos industriales
Cancergenos, hepatotxicos.
Hidrocarburos aromticos
Policclicos (PAHs)

Productos de la combustin
incompleta de material
orgnico, muchos de ellos
son cancergenos
Compuestos aromticos policlorados
Solventes halogenados (pesticidas) cancergenos
disruptores endocrinos
Nitro compuestos aromticos y no aromticos
Organofosforados

Metolachlor

Herbicidas, plaguicidas prohibidos


Vas de degradacin de diversos contaminates

Aerbicas:

Mono y dioxigenasas: Monooxigenasas y epoxigenasas del citocromo P450

Enzimas aerbicas catalizan degradacin de alcanos, monoaromticos ,


policclicos, hidrocarburos clorinados, nitroaromticos.
Monooxigenasas insertan un oxgeno y el otro es reducido como H2O.
Dioxigenasas insertan ambos oxgenos.

Enzimas ligninolticas: Ligninoperoxidasas, Manganeso peroxidasas.

Utilizan H2O2 como aceptor de electrones y catalizan la oxigenacin de diversos


compuestos incluyendo los polmeros de lignina.

Anaerbicas:

Decloracion reductiva: Dehalogenasas reductoras

Adicin de fumarato: Alquil succinato sintetasas


Hidrocarburos lineales y cicloalcanos: biodegradacin aerbica

Numerosas bacterias y hongos degradan hidrocarburos en condiciones aerbicas.


El paso limitante es la insercin de oxgeno mediada por enzimas monooxigenasas
y dioxigenasas.
Hidrocarburos lineales : biodegradacin anaerbica
Hidrocarburos monoaromticos: Biodegradacin anaerbica del Benzeno
Solventes halogenados son degradados en condiciones aerbicas y anaerbicas:

Anaerbicas: Dehalogenacin reductiva de un halgeno a la vez, puede ser utilizado como


fuente nica de carbono.

Aerbicas: Solventes halogenados son mineralizados por bacterias como co oxidacin de otros
metabolitos, es mediada por monooxigenasas y dioxigenasas

Dehalogenacin reductiva de tetracloruro de carbono y tetracloroetileno


Biorremediacin: ventajas y desvetajas
VENTAJAS
Proceso natural, aceptado por la opinin publica y normativas medioambientales.
El proceso no corresponde a transferencia de txicos de un ambiente a otro sino su
degradacin final.
Los residuos del procesos son generalmente inocuos CO2, H2O , biomasa.
Utilizable para la destruccin de diversos compuestos considerados txicos o
potencialmente txicos para las personas o el medio ambiente.
Puede realizarse en el mismo lugar o en las cercanas de el, ello no afecta las
actividades normales, disminuye el costo y el riesgo potencial de dao a la salud
humana o del ambiente debido al traslado de grandes cantidades de material
contaminado.

DESVENTAJAS
Limitado a compuestos biodegradables.
Algunos productos de biodegradacin pueden ser mas persistentes o txicos que
sus precursores.
Requiere de diversos factores presentes en el sitio: presencia de microorganismos
activos, condiciones de crecimiento adecuadas (niveles de nutrientes v/s contaminantes)
Requiere investigacin multidisciplinaria para determinar y optimizar las condiciones de
biorremediacin.
Es difcil de extrapolar condiciones del laboratorio o planta piloto al sitio final a remediar.
Los contaminantes pueden estar en diversas condiciones (disueltos en agua, adsorbidos
en rocas, en fase gaseosa, etc.)
En general toma mas tiempo que otros tipos de tratamiento.
La evaluacin del proceso de biorremediacin es compleja y limites de eficiencia no estn
claramente definidos.
FACTORES QUE AFECTAN LA BIORREMEDIACION

MICROORGANISMOS:

Especies
Crecimiento
Fisiologa
Competencia
Diversidad metablica
Enzimologa

CONTAMINANTES:
FACTORES
AMBIENTALES:
Transferencia de masa
Biodisponibilidad
pH
Hidrofobicidad
Temperatura
Recalcitrancia
Humedad
Estructura
Oxgeno
Toxicidad
Nutrientes
Metabolitos
Tipo de suelo
Condiciones generales necesarias para la degradacin de contaminantes
BIORREMEDIACION

in situ ex situ

Tratamiento de material contaminado Tratamiento del material contaminado


en el mismo lugar en un lugar diferente

Biorremediacin pasiva Bioreactor


Biorremediacin acelerada: Biopila
Bioestimulacin (biosparging) Landfarming
Bioaumentacin Composting
Fitoremediacin
Biorremediacin in situ
Biorremediacin ex situ

Biopila (fase solida) Bio reactor (fase lquida, lodos)


Biorremediacin in situ usando biorreactores
Las propiedades del contaminante determinan el tipo de
biorremediacin a realizar

.
Biorremediacion aerbica y anaerbica

Proceso Reaccion Potencial Redox (Eh en


mV )
+
Aerbico: O2 + 4e + 4H 2H2O 600 ~ 400

Anaerbico:

+
Denitrificacin 2NO3 + 10e + 12H N2 + 500 ~ 200
6H2O
+ 2+
Reduccin de MnO2 + 2e + 4H Mn + 400 ~ 200
manganeso IV 2H2O
+ 2+
Reduccin de Hierro Fe(OH)3 + e + 3H Fe + 300 ~ 100
III 3H2O
2 +
Reduccin de sulfato SO4 + 8e +10 H H2S + 0 ~ 150
4H2O
Fermentacin 2CH2O CO2 + CH4 150 ~ 220

Oxgeno es esencial para reacciones aerobicas puede ser entregado como gas o como H2O2 en solucin
Potencial redox distinto del O2 es esencial para reacciones anaerobicas

Para biorremediacin in situ la evaluacin de las condiciones redox del terreno implica multiples puntos para
delinear un mapa del estado redox del terreno.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA BIORREMEDIACIN in situ
Factores favorables Factores desfavorables
Caractersticas Caractersticas Caractersticas qumicas Caractersticas
qumicas y biolgicas hidrogeolgicas y biolgicas hidrogeolgicas
- Abundancia de - Porosidad media - Componentes muy - Rocas fracturadas
hidrocarburos alifticos - Elevada permeabilidad pesados abundantes en la - Baja permeabilidad
lineales y escasa -Mineraloga uniforme mezcla - Compleja mineraloga
presencia de resinas y - Homogeneidad - Mezcla de compuestos -Heterogeneidad
asfaltenos orgnicos e inorgnicos
-Concentraciones bajas - Concentraciones txicas
contaminantes de contaminantes
- Presencia de - Escasa actividad
poblaciones microbianas microbiana
diversas - Ambientes anxicos
- Adecuada oxigenacin - pH extremos
- pH = 6-8 -Temperaturas bajas
- Temperaturas
superiores a 15 C
Biorremediacin in situ: Bioestimulacin

Modificacin del ambiente para estimular el crecimiento o la actividad de


bacterias ya existentes.

Adicin de nutrientes y aceptores de electrones (fsforo, nitrgeno, oxgeno, o


carbono). Generalmente se inyecta aire a la forma de burbujas en el agua o como
peroxido de hidrogeno soluble. En los lugares de clima fro donde la temperatura
del agua es baja, el el uso de calefactores sobre el terreno ayuda a aumentar la
temperatura del suelo y la tasa de degradacin.

Ventaja: Utiliza organismos presentes en el lugar probablemente mas adaptados


para dichas condiciones ya distribuidos en la superficie a remediar.

Desventaja: Entrega de nutrientes depende de las caractersticas hidrogeolgicas


del terreno. Terrenos compactos, rocosos, impermeables as como fracturas en la
superficie disminuyen distribucin de nutrientes.

La bioestimulacin in situ se usa satisfactoriamente en el tratamiento de suelos,


lodos y aguas subterrneas contaminados con hidrocarburos, derivados del
petrleo, pesticidas, disolventes, conservantes de la madera y otros qumicos
contaminantes.
Biorremediacin in situ: Bioaumentacin

Es la introduccin exgena de microorganismos nativos o genticamente


modificados para mejorar y acelerar el proceso de biorremediacin del suelo
o agua.

Generalmente requiere del estudio de los microorganismos presentes en el sitio y su


capacidad para realizar la remediacin deseada. Esta sujeta a las restricciones de
geologa e hidrogeologa ya descritas para la bioaumentacin.

Ventaja: Aceleramiento y optimizacin del proceso de remediacin

Desventaja: Alteracin del ecosistema bacteriano del lugar y/o introduccin de


microorganismos genticamente modificados.
Diseo de microorganismos para biorremediacin

Objetivos:

Crear nuevas rutas metablicas (clonamiento y expresin de genes en tandem)


Evitar la formacin de intermediarios inhibitorios
Generacin de protenas recombinantes para incrementar el rango de substratos
metabolizables (ej: enzimas modificadas genticamente)
Aumentar el acceso a los substratos (produccin de biosufractantes, secuestradores
de metales, diseo de protenas secretorias o de superficie celular)
Mejorar la estabilidad gentica
Generacin de vectores transferibles a la poblacin bacteriana
Establecer mecanismos de control de crecimiento (genes de muerte)

Estrategias:

Evolucin dirigida
Crecimiento bajo condiciones de presin selectiva en presencia
de contaminantes.
Manipulacin gentica mediante tcnicas de DNA recombinante.
ASPECTOS IMPORTANTES PARA LA PLANIFICACION DE UN PROCESO
DE BIORREMEDIACION in situ:

Caracterizacin de los contaminantes y su distribucin en el terreno


Caracterizacin del terreno determinar caractersticas geolgicas e
hidrogeolgicas. (Ej presencia y velocidad de aguas subterrneas)
Seleccin de los nutrientes y condiciones de biorremediacin. Ej: Oxgeno (proceso
aerobico) y/o poder reductor (proceso anaerbico), necesidad de calefaccin o
electroestimulacin.
Optimizacin de acceso a nutrientes y contaminantes: Vas de inyeccin o entrega
de nutrientes,uso de biosufractantes.
Evaluar uso de procesos qumicos y/o fsicos complementarios a la
biorremediacin
Determinar las vas metablicas principales y la posible produccin de metabolitos
inhibitorios o txicos.
Disear e implementar mtodos de evaluacin del proceso de biorremediacin:
NMP, BIOLOG, determinacin de sustratos, productos y metabolitos intermediarios.

Esencial un estudio piloto previo a la biorremediacin full scale.

.
Biorremediacin ex situ

Landfarming: Deposito de material contaminado en sitios excavados bajo techo,


con movimiento del terreno, humidificacin y aireacin. Muchas veces los contaminantes
son removidos por volatilizacin mas que por degradacin.

Composting: Material contaminado es mezclado con residuos vegetales


(forraje, desechos de agricultura), apilados como en las biopilas y agitados como
en landfarming.

Biopila: Deposito de material contaminado en pilas cubiertas con ventilacin y


entrega de nutrientes en agua mediante caeras, los contaminantes y productos
de biorremediacin son recolectados de los percolados de la biopila.

Biorreactor:
Recipiente cerrado con agitacin, oxigenacin, temperatura, pH y humedad controladas
con sensores y sistemas de toma de muestra que permiten evaluar la biorremediacin
En tiempo real. Preferentemente utilizado en biorremediacin anaerbica.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA BIORREMEDIACIN ex situ

Factores favorables Factores desfavorables

Proceso mas rpido Costo de transporte y


almacenamiento
Bajo condiciones
controladas Mayor gasto energtico

Mayor rango de Impacto en el medio


compuestos ambiente por remocin
del terreno o agua
Permite el uso de distintos
microorganiasmos Requiere espacios
amplios y controlados
Fcil de monitorear
Riesgo de impacto en la
poblacin.
Comunidades bacterianas

Distribucin en escala macroscpica Distribucin en escala microscpica:

Consorcios bacterianos

Biofilm
Caracterizacin de poblaciones bacterianas

Mtodos no moleculares:
Cultivo e identificacin en placa obtencin de Nmero ms probable (NMP), solo
identifica aquellos microorgnismos cultivables.
Caracterizacion de cidos grasos de fosfolpidos bacterianos (cidos grasos
ramificados, hidroxilados, de cadena impar, etc).

Mtodos moleculares:

Reaccin en cadena de polimerasa (PCR) para regiones variables de los genes


que codifican para 16S rRNA.
PCR y electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente (DGGE)
Amplificacion de regiones de los 16S rRNAs y corte de secuencias con enzimas de
restriccion (T-RFLP)
Hibridizacion in situ con sondas flurorescentes (FISH): sondas especficas para
regiones 16S rRNA unida a colorante fluorescente, visualizacin al microscopio y/o
recuento por citometra de flujo.

Estas tcnicas no necesariamente reflejan la poblacin bacteriana total ni


permiten evaluar la actividad de un microorganismo y su contribucin a la
biorremediacin
Biodisponibilidad

Eficiencia de proceso de biorremediacin depende de el acceso del contaminante


a la maquinaria enzimtica del microorganismo.

Propiedades fisicoqumicas del contaminante:

Contaminante slido, gas, lquido.


Solubilidad en agua, adsorcin, desorcin.

Propiedades del microorganismo:

Produccin de enzimas secretorias


Produccin de biosufractante
Sensores y quimiotaxis
Presencia de protenas de superficie (molculas de adhesin, receptores y/o
transportadores de contaminantes).
Disponibildad de coactivadores y/o cosustratos.
Evaluacin de los procesos de biorremediacin:

Mtodos no moleculares

Cultivo y nmero mas probable de organismos con actividad catalitica (NMP)


Patrones de utilizacin de sustrato (BIOLOG)
Respirometra (metabolismo aerbico), evaluacin del potencial redox (metabolismo
anaerbico)
Anlisis de biomasa (acido murimico para bacterias, ergosterol para hongos)
Anlisis de la formacin de sub productos, metabolitos o desaparicin de sustratos
en el terreno, aguas contaminadas y/o percolados de pilas de biorremediacin. Uso
de tcnicas de anlisis qumico.
Prediccin de biodegradabilidad mediante modelos (QSBRs)
Acidos grasos de los fosfolpidos (PLFAs)
Enzimas en suelo (deshidrogenasas, lipasas, ureasas, fosfatasas cidas y alcalinas)
Mtodos inmunoqumicos (Elisa para el contaminante, inmunofluorescencia directa)
Evaluacin de los procesos de biorremediacin:

Metodos Moleculares:

Razn rDNA/rRNA 16S (RNA aumentado en condiciones de alto


metabolismo)

FISH

PCR / microarray para genes catablicos especie especficos

Biosensores
Mtodos analticos para estimar el grado de biorremediacin
Mecanismos mixtos de remediacin abiticos +biticos

Reacciones qumicas o procesos fsicos que complementan los procesos de


Biorremediacin.
Ejemplos:

Reacciones de fenton en hongos ligninolticos


Fotocatlisis mediada por TiO2
Oxidacin por Ozono, Permanganato, Ion ferrato (FeVI)

Reaccin de Fenton

Fe2+ + H2O2 ----> Fe3+ + .OH + OH-


Fe3+ + H2O2 ----> Fe2+ + .OOH + H+

Adicin: .OH + C6H6 ----> (OH)C6H6


Abstracin de hidrogeno : .OH + CH3CH2OH ----> CH2CH2OH + H2O
Transferencia de electrones : .OH + [Fe(CN)6]4- ----> [Fe(CN)6]3- + OH-
Interaccin con otros radicales: .OH + .OH ----> H2O2
Ejemplos de remediacin abiotica/biotica

Mineralizacin de TNT Mineralizacin de TNT


foto catlisis +hongos reaccin Fenton+hongos

6h foto catlisis
+ Hongo

Fenton +467mg/L biomasa

2h foto catlisis
+ Hongo
Fenton +93mg/L biomasa

6h foto catlisis

Fenton

No tratamiento
Fitoremediacin

Tratamiento de terrenos contaminados a travs del uso de plantas


Generalmente utilizado para biorremediar metales pesados

Fitoacumulacin: Concentracin de contaminantes en el tejido de la planta


Fitotransformacin y degradacin: Metabolizacin de los contaminantes por la planta
Fito estabilizacin: La presencia de la planta disminuye la dispersin y mobilizacin
de algunos contaminantes.
Fitoestimulacin: La presencia de las plantas mejora el crecimiento de
microorganismos remediadores.

Ventajas: Barato, amigable con el medio ambiente, fcil de monitorear, permite


Recuperar metales valiosos.

Desventajas: Limitado a la superficie y alcance de las races, sistema lento y requiere


mucha biomasa, depende del suelo y toxicidad del compuesto, puede afectar la cadena
alimentaria por consumo de la planta.