VESCULAS TRANSPORTADORAS

7.37. Durante su formacin, las vesculas transportadoras se envuelven con una cubierta
proteica

Con excepcin de los fogosomas, que suelen ser mucho ms grandes, las vesculas transportadoras
tienen un dimetro que flucta entre los 50 y los 250 nm. La medida mayor corresponde a las
vesculas secretorias.

La figura 7-37 muestra que las vesculas trasportadoras se originan en la membrana plasmtica y
en la membrana de los organoides del sistema de endomembranas. Lo hacen con el concurso de
una cubierta proteica de la que existen varias clases, aunque de algunas no fueron descubiertas
todava sus protenas. Las ms estudiadas se conocen con los nombres de cubierta de COP y
cubierta de clatrina.

La cubierta de COP (por coat protena) se forma mediante la asociacin ordenad de mltiples
unidades proteicas. Existen dos clases de cubiertas de COP, las cules se diferencian no solo porque
se componen de unidades proteicas distintas denominadas COPI y COPII -, sino tambin porque
generan vesculas en lugares diferentes del sistema de endomembranas. As la cubierta de COPII
genera las vesculas que se forman en el RE y se dirigen a la cara de entrada del aparato de Golgi,
mientras que la cubierta de COPII genera tanto las vesculas que se forman en el aparato de Golgi
y retornan al RE como las que interconectan las cisternas del complejo de Golgi.

Por su parte la cubierta de catrina (del latn clathrun o del griego Kleter, enrejado de varilas)
resulta dela asociacin de mltiples unidades proteicas llamadas triqueliones (del griego khelos,
pierna). Genera las vesculas que surgen de la membrana plasmtica durante la endocitosis y las
que se forman en la cara de salida del complejo de Golgi, compuesta por unidades COPI.

Las vesculas transportadoras comienzan a formarse cuando las unidades proteicas de la futura
cubierta se apoyan sobre el lado citosolico de una rea circunscrita de una membrana celular
plana, a la que le proveen la fuerza mecnica para que se curve hacia el citosol, con muestra la
figura 7-33, el progreso de la curvatura desarrolla una fosita, que finalmente se desprende de la
membrana convertida en vescula.

En el caso de las vesculas cubiertas de clatrina, el desprendimiento se produce cuando varias

unidades de la proteinamotora dinamina rodean el cuello de las fositas y lo estrangulan hasta
seleccionarlo (cap.5-8). Estas vesculas tienen forma esfrica, a diferencia de las vesculas cubiertas
de COP, que en algunos lugares suelen ser poliedros irregulares y en otros padecen una apariencia
tubular.

7-38. Las cubiertas de COP se construyen con el concurso de las unidades proteicas COPI o
COPII.

En la seccin anterior se dijo que existen dos tipos de cubiertas de COP y que se construyen
mediante las cubiertas compuestas por las unidades proteicas COPI Y COPII. Debe agregarse que
cada unidad COPI se compone de sus unidades proteicas, identificadas con letras griegas ,,,,
, , .En cambio cada unidad COPI consta de so subunidades proteicas heterodimericas, las cuales
se identifican con las siglas Sec13/Sec31 y Sec23/Sec24 (por seven transmembrane). En la figura 7-
33 se observa que las unidades COPI y COPII se construyen en el citosol, se adosan a la membrana
y la curvan, cuando se conectan a la membrana lo hacen a travs de una membrana llamada ARF
(por adenosine diphosphate ribosylation factor) y el dominio citosolico receptor de la molcula
que va a ser transportada por la vescula en formacin (fig. 7-34).

Debe agregarse que la COPI y la COPII se unen a protenas ARF especficas denominadas ARF1 y
SAR1 (por smil ARF), respectivamente.

Las ARF y las COP desempean funciones complementarias, ya que las ARF determinan en qu
lugar debe formarse la vescula transportadora, reclutan a las unidades COPI o COPII estas se
asocian y componen la cubierta proteica que provoca la curvatura de la membrana.

El proceso por el cual las vesculas COPI o COPII se unen a la vescula en formacin es el siguiente:
1) en su estancia libre en el citosol las AFR contienen un GDP y un cido graso oculto en sus
molculas; 2) una protena reguladora llamada GEF (por guanine nucleotide Exchange factor) hace
que GDP delas ARF se intercambie por un GTP; 3) este cambio torno visible al cido graso de las
ARF y lo inserta en la membrana por lo que las ARF quedan unidas a ella ; 4) Las ARF reclutan a las
COP que se hallan en citosol y las reclutan a la membrana; 5) las COP se unen a la membrana por
medio de las ARF y del dominio del receptor citado anteriormente, debido a que ese dominio es
siempre el mismo en todos los receptores, las COP se unen a el inespecficamente, a diferencia del
dominio no citosolico, que vara y se une especialmente a la molcula que va a ser transportada.

Si bien se sabe que en la formacin de una vescula transportadora intervienen mltiples unidades
de COP, se ignora cmo se ensambkan entre s para curvar a la membrana.

Despus que la vescula se desprende de la membrana, las ARF y las COP se desligan de esta y
quedan libres en el citosol, donde pueden ser reutilizadas (fig. 7-32). La salida de la ARF se debe a
que hidrolizan el GTP contenido en sus molculas, lo cual hace replegar el cido graso que las une
a la membrana, las ARF hidrolizan el GTP a GDP y P al ser estimuladas por una protena
reguladora llamada GAP (por GTPase activing protein).

Surge que lo mencionado de las ARF poseen alternadamente, un GTP o un GDP, cuando poseen un
GTP se activan y ello las une a la membrana, en cambio cuando poseen un GDP se inactivan se
separan de la membrana y quedan libres en el citosol, dado que el GDP deriva de la hidrolisis del
GTP que se alla en las propias ARF y a que estas catalizan la reaccin, se las clasifica como GTPasas.

Debe advertirse que en la clula existen- adems de las ARF- otras GTPasas que funcionan
asociadas a las protenas reguladoras GEF y GAP. Recurdese que las GEF intercambia el GDP por
un GTP y que la GAP estimula la hidrolisis del GTP a GTP y P. Las acciones reguladoras de las
protenas GEF y GAP se ilustran en la figura 11-9.
Las otras GTPasas de esta familia son las Rho (cap.5-24), Rac (cap.5-26), Cdc42 (cap.5-26), Rab
(seccin 7-40), Ras (cap.11-12) y Ran (cap. 12-4). Al igual que las ARF se activan cuando poseen un
GTP y se inactivan cuando hidrolizan a GDP y P.

7-39. Las cubiertas de clatrina se destruyen a partir de trisqueliones

La serie de micrografas electrnicas agrupadas en la figura 7-35 muestran como la cubierta de

clatrina forma una vescula trasportadora. En la seccin 7-37 se dijo que cubierta de clatrina se
compone de varias unidades proteicas denominadas trasqueliones, se calcula que una vescula de
200 nm de dimetro contiene alrededor de 1000 de esas unidades.

El trisquelion esta integrado por tres cadenas polipeptidicas grandes y tres pequeas, cuyo peso es
de 180 kDa y de 35 kDa, respectivamente. Como muestra la figura 7-36, esas cadenas den lugar a
tres brazos flexibles de 44,5 nm de largo, doblados hacia un mismo lado.

Para generar una vescula, los trisqueliones se colocan sobre una circunscrita de la cara citosolica
de la membrana y se ensamblan entre si hasta formar un poliedro con aspecto de canasta. La
pared del poliedro est compuesto por hexgonos y pentgonos, cuyos vrtices corresponden a
los puntos de convergencia de los brozaos de los trisqueliones, en cambio sus aristas se forman al
adosarse otros dos o ms brazos de otros tantos trisqueliones vecinos (figs. 7-36 y 7-37).

La unin de los trisqueliones a la membrana le confiere fuerza mecnica que provoca su curvatura.
Inicialmente forman una fosita la cual al desprenderse de la membrana se convierte en una
vescula que se libera en el citosol, al igual que las cubiertas de COP, la cubierta de clatrina se
desarma inmediatamente y los triqueliones libres pueden volver a usarse para generar nuevas
vesculas (fig. 7-33).

La forma como se asocian los trisqueliones entre s permite que las membranas resulten con
curvaturas entre si con distintos radios y vesculas de diferentes tamaos. No obstante, cuando las
vesculas son muy grandes- como en los fogosomas- no se forman cubiertas si no reas aisladas
que cubren parcialmente sus superficies.

La unin de los trisqueliones a la membrana celular se produce a travs de una protena ARF
semejante a la que se unen a las unidades COPI y COPII (seccin 7-38)

Por aadidura, en la membrana plasmtica los trisqueliones se unen tambin al dominio citosolico
de los receptores de las sustancias que ingresan a la clula por endocitosis regulada (fig. 7-38)
(vase en el ejemplo que analiza en la seccin 7-42). Algo similar ocurre en la membrana de la cara
de salida del complejo de Golgi- en las zonas formadas por las vesculas que se dirigen a los
endomsomas y membrana plasmtica durante la secrecin regulada-, donde adems de unirse a la
ARF los trisqulione se ligan al dominio citosolico de los receptores de las molculas que van a ser
transportadas (fig. 7-38) (uno de esos receptores es el de la manosa 6-fosfato, visto n la seccin 7-
20).
Debido a que los dominios citosolicos de los receptores varan, para unirse a ellos los trisqueliones
se valen de unas protenas intermediarias heterodimricas llamadas adaptinas (fig.7-38), las cuales
poseen el dominio especifico que interacta con cada tipo de receptor y un dominio comn que se
une a los trisqueliones.

Apenas la cubierta de clatrina se desconecta de la membrana vesicular, las ARF y las adaptinas al
igual que los trisqueliones- quedan libres en el citosol para que puedan volverse a usar (fig. 7-33).

7-40 Las protenas membranosas llamadas SNARE aseguran la llegada de las vesculas
transportadoras a sus puntos de destino.

Cada compartimiento del sistema de endomembranas posee en su membrana y en su interior

molculas distintas a las de otros compartimientos. Como se mencion en las secciones 7-1, 7-2,
7-22 y 7-29, esos compartimientos- junto con la membrana plasmtica y la matriz extracelular-
intercambian algunas de sus molculas mediante vesculas transportadoras, las cuales se trasladan
por el citosol movidas por el citoesqueleto (caps. 5-8 y 5-23). Cuando una vescula transportadora
emerge de uno de los compartimientos y se dirige hacia el compartimiento receptor con que
habr de fusionarse, debe avanzar por el camino adecuado y no extraviarse en medio de las
mltiples membranas que atraviesan el citoplasma.

Esto lo logra porque existe un mecanismo diseado para asegurar la llegada de la vescula
transportadora al compartimiento correcto. Depende de dos protenas receptoras mutuamente
complementarias, una perteneciente a la membrana del compartimiento donante y otra a la
membrana del compartimiento receptor. Se denominan respectivamente, v-SNARE y t-SNARE (por
vesicle- y targuet- SNAP receptor) (fig. 7-39).

Como muestra la figura 7-40, las t-SNARE no abandonan nunca la membrana de los
compartimientos receptores. En cambio las v-SNARE abandonan la membrana de los
compartimientos donantes cuando se transfieren a las vesculas transportadoras. La figura 7-40,
muestra tambin que las v-SNARE quedan expuestas y en condiciones de actuar una vez que las
vesculas se desprenden de las cubiertas proteicas de COP o de clatrina.

Debido a que este mecanismo requiere especificidad, por cada pareja de compartimientos
donante y receptor existe una pareja particular de protenas v-SNARE y t-SNARE complementarias.
Ello hace que durante el traslado de la vescula transportadora su v-SNARE deba tantear
mltiples t-SNARE antes de encontrar su complementaria.

El retorno de una vescula recicladora al compartimiento donante apropiado y no a otro se debe a

que su membrana recupera la v-SNARE original y a que la membrana del compartimiento de
origen posee una t-SNARE idntica a la de la membrana del compartimiento receptor (fig.7-40).
Por consecuencia, durante el reciclaje de la vescula transportadora los compartiemientos
invierten sus comportamientos, pues el donante se conduce como receptor y el este como
donante.
La unin entre una v-SNARE y su t-SNARE complementaria depende de una protena llamada Rab
(por Ras protein from brain), que acta sobre ambas (fig.7-39). Se han identificado cerca de 30 Rab
diferentes, una para cada pareja de v-SNARE/t-SNARE.

Las protenas Rab pertenecen a una subfamilia de GTPasas que depende de las protenas GEF y
GAP (seccin 7-38). As, cuando son influidas por la GEF reemplazan al GDP de sus molculas por
un GTP (fig. 11-9), y se activan, es decir, se unen a la membrana del compartimiento donante y
hacen que la v-SNARE y la t-SNARE se conecten entre s. En cambio, cuando son influidas por la
GAP hidrolizan un GTP (a GDP y P) y se inactivan, lo cual separa de la membrana del
compartimiento donante.

7-41 En el proceso de fusin de las membranas intervienen cuatro protenas fusgenas.

Al ligarse la v-SNARE con la t-SNARE, las membranas interactuantes se colocan a una distancia que
hace posible el proceso de fusin descrito en el captulo 3-6 e ilustrado en la figura 3-13.

En este proceso interviene un conjunto de protenas fusogenas que localizan en el citosol. Se

conocen cuatro, tres de las cuales se identifican con las siglas SNAP (por soluble NSF accesory
proteins) y la cuarta con la sigla NFS (por NEM sensitive factor;NEM, o N-etilmaleimida, es el
nombre del compuesto usado para revelar al NSF). As las tres SNAP y NSF- que es una ATPasa- son
requeridos por el par de membranas para que se concrete la fusin (fig. 7-41).

Cualquiera que sea el par de membranas- y por lo tanto la pareja de v-SNARE y t-SNARE-, siempre
se le unen las mismas cuatro protenas fusogenas, pues son inespecficas. Como se ve, pues la
especificidad de la unin depende nicamente de las SNARE.

El proceso de fusin de membranas consume energa que es provista por un ATP hidrolizado por la
ATPasa y la NSF. La energa es requerida para desarmar el complejo fusogeno luego de la fusin y
separar a las ESNAP y a las NSF de las membranas.

Las SNAP y las NSF regresan al citosol y pueden ser reutilizadas. Por su parte la v-SNARE se integra
a una vescula recicladora y retorna al compartimiento donante- ahora receptor-, al que identifica
por que la membrana de este posee una t-SNARE complementaria (fig. 7-40).

7-42. El ingreso del colesterol y su destino ulterior se conocen detalladamente.

En virtud de que son molculas muy hidrofobicas, el colesterol y sus steres circulan por la sangre
como lipoprotenas. El ejemplo ms conocido corresponde al colesterol-LDL (por low-density
lipoprotein), que es un compuesto lipoproteico originado en el REL de los hepatocitos (seccin 7-
27).

El colesterol- LDL ingresa a las clulas por endocitosis, previunion con receptores especficos
situados en la membrana plasmtica. Esta unin atrae a trisqueliones libres en el citosol los cuales-
por intermedio de adaptinas especificas- se conectan con los receptores en el lado citosolico de la
membrana y generan una cubierta de clatrina (fig. 7-42).
Como se sabe, la cubierta se desprende de la membrana de la vescula apenas esta se forma. En la
luz vesicular el colesterol-LDL continua unido a los receptores heredados de la membrana
plasmtica, la vescula se conecta con un endosoma primario cuyo PH acido hace que el colesterol-
LDL se desprenda de los recptores, los cuales retornan a la membrana plasmtica con una vescula
recicladora. El colesterol LDL de endosoma primario contina en el interior del endosoma
secundario, el cual se convierte en lisosoma cuando el descenso de PH activa a las enzimas
hidroliticas aportadas por el aparato de Golgi (fig. 7-42). Las enzimas actan sobre el colesterol-
LDL y separan al LDL del colesterol, que pasa por el citosol y se utiliza como materia prima para la
sntesis de otras molculas o se incorpora a la membrana del RE ( seccin 7-10).

La hipercolesterolemia familiar es una enfermedad causada por una mutacion del gen que codifica
al receptor del colesterol-LDL, que resulta defectuoso o est ausente. Como consecuencia, el
colesterol no ingresa en las clulas y su concentracin se eleva en la sangre, lo que lleva a la
aparicin de cuadros tempranos de arteriosclerosis.

7-43. En las membranas plasmticas de algunas clulas existen invaginaciones llamadas

caveolas.

En la membrana plasmtica de muchos tipos de clulas se desarrollan invaginaciones muy

pequeas llamadas caveolas (del latn caveolae, cuevas pequeas) (fig.7-43), cuya presencia es
particularmente abundante en las clulas endoteliales, musculares lisas y adipocitos.

Las caveolas se forman a partir de reas circunscritas de membrana plasmtica llamadas balsas
lipdicas, que son ricas en colesterol y esfingofosfolipidos. La fuerza mecnica que invagina a estas
reas para que se formen las caveolas no es generada por una cubierta proteica (como ocurre con
las vesculas de endocitosis) sino por protenas que se distribuyen entre los fosfolpidos de la
propia membrana. As en cada rea de invaginacin en la monocapa cistolica de la membrana se
ubican mltiples unidades de una protena integral de 21kda llamada caveolina, que es la que
produce la invaginacin. La caveolina tiene forma de horquilla y sus dos extremos se orientan
hacia el citosol (fig. 7-34).

Debido a que en sus luces se concentran sustancias inductoras y en sus membranas se instalas los
receptores de esas sustancias, las caveolas hacen posible que haya inducciones celulares con
mnimas demoras. Las sustancias inductoras ms comunes detectadas en el interior de las
caveolas son la insulina, el EGF y el PDGF (cap.11-12), mientras que en sus membranas se hallaron
varios tipos de receptores membranosos, algunos asociados a protenas G (cap. 11-14).

Las caveolas sirven tambin para intentar permeasas y canales inicos hacia el citoplasma y
acorralar solutos en las cercanas de esos transportadores. Ello hace posible que los solutos- ante
estmulos adecuados ingresen masivamente en la clula. Por ejemplo en las luces de alunas
caveolas se detect Ca2+ y en sus membranas se detectaron canales y permeasas para el ion, lo
que ha llevado a compararlas con los tbulos T del musculo estriado (fig.5-39).
El mecanismo que interna solutos y sus transportadores mediante caveolas y permite que
primeros ingresen masivamente en la clula se denominan potocitosis (del griego potos, bebida).

EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS EN LA CELULA VEGETAL

7-44. En la clula vegetal el sistema de endomembranas posee vacuolas.

Consideraremos aqu algunas caractersticas especiales del sistema de endomembranas de las

clulas vegetales.

En las clulas indiferenciadas del meristema, las membranas del RE son relativamente escazas y
estn enmarcadas por los numerosos ribosomas libres que llenan el citosol. En cambio en las
clulas vegetales diferenciadas del RE es abundante y forma tbulos que ingresan en los
plasmodesmos (cap.6-15). En las clulas cribosas, sobre estos tbulos se forman depsitos de
callosa, que es un polisacrido compuestos por molculas de glucosa unidades a enlaces 1-3.

Igual que en las clulas animales, en las vegetales del complejo de Golgi es esencial para la
secrecin. En sus cisternas se procesan y concentran los productos secretorios, que
finalmente se descargan al exterior, por ejemplo en las clulas que sintetizan mucilago se
observan abundantes vesculas secretorias surgiendo del complejo de Golgi.

Adems, componentes del complejo de Golgi sirven para el transporte de ciertas protenas de
depsito, como vanicilina y la legumina en los cotiledones en algunas leguminosas, y la zena en la
endosperma del maz. Estas protenas se localizan en organoides especiales, denominados cuerpos
proteicos o granos de aleurona.

En la mayora de las clulas vegetales existe uno o ms compartimientos llamados vacuolas,

limitados por membranas (fig.1-7). Segn el tipo celular, en total representan entre 10 y el 90%
del volumen del citoplasma. Cuando son muy voluminosas, el citosol queda reducido a una fina
capa por debajo de la membrana plasmtica. Existen dudas sobre su origen; se cree que se forman
por la fusin entre si de vesculas surgidas del complejo de Golgi. Las funciones de las vacuolas son
variadas, algunas se comportan como lisosomas, ya que contienen enzimas hidroliticas. Otras
sirven de depsito para nutrientes y desechos metablicos. Finalmente otros usan lpidos y se
usan para regular el volumen y la turgencia de la clula.

En los captulos 3-30, 3-31 y 18-21 se estudia la participacin del complejo de Golgi en la
formacin de la pared de la clula vegetal.