Biorremediacin estimulada por efluentes cloacales

tratados de suelos contaminados con hidrocarburos.

Autor: Leandro Pellini.

Directora de Tesis: Lic. Mara Eugenia Parolo.

Co - Directora de Tesis: Bioq. Irene E. Zajonskovsky.
Tutor: Ing. Juan D. Vasallo

Escuela Superior de Salud y Ambiente

Universidad Nacional del Comahue

Lugar de Trabajo: Laboratorios de la Escuela Superior de Salud y Ambiente

Departamento de Qumica de la Facultad de Ingeniera. Universidad Nacional del
Comahue. 2006
Agradecimientos
Mara Eugenia Parolo, Irene E. Zajonskovsky: Directoras del alumno en el presente trabajo.

Lelia McKormack: Coordinadora de los laboratorios N 1 y N 2 de la Escuela Superior de Salud y

Ambiente, por su invaluable colaboracin.

Gabriela Paladino: Compaera de laboratorio a lo largo de todo el trabajo.

Juan D. Vasallo: Tutor del alumno durante la presente investigacin.

A la Universidad Nacional del Comahue: Porque me permiti cambiar mi realidad.

Resumen / Abstract

Introduccin
1.1. Propiedades y Composicin del Suelo
1.2. Hidrocarburos
1.3. Productos Derivados del Petrleo
1.4. Efecto de los Hidrocarburos en los Seres Vivos
1.5. Actividad Hidrocarburfera en la Regin
1.6. Contaminacin del Suelo
1.7. Remediacin de Suelos Contaminados con Hidrocarburos
1.8. Tcnicas de Remediacin
1.9. Mtodos Analticos para la Determinacin de Hidrocarburos
Objetivos Fundamentacin - Hiptesis
Materiales y Mtodos
1.10. Caractersticas del rea
1.11. Obtencin del Suelo y Pretratamiento
1.12. Enmienda del Suelo Correspondiente al Tratamiento EST
1.13. Fortificacin del Suelo con Hidrocarburos
1.14. Diseo Experimental
 1.15. Determinacin de Microorganismos Mesfilos Hetertrofos Totales
Resultados y Discusin
1.16. Anlisis Fsico-Qumico del Suelo Estudiado.
1.17. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petrleo en el Suelo Seleccionado para el
Estudio.
1.18. Caractersticas Qumicas y Microbiolgicas del Efluente Utilizado.
1.19. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petrleo en los Tratamientos EFL y EST.
1.20. Bacterias Hetertrofas Totales en los Tratamientos EST y EFL
Conclusiones
Bibliografa
Anexos
1.21. Normativa Internacional Aplicable
1.22. Normativa Provincial Relacionada
1.23. Tabla de McCrady para Tres Replicas por Dilucin
1.24. Anlisis Estadstico

RESUMEN

El suelo es un sistema complejo que se forma en la superficie del terreno, inicialmente

por la alteracin fsica y qumica de las rocas y luego tambin por la influencia de los
seres vivos, desarrollando una estructura en niveles superpuestos, el perfil, y una
composicin qumica y biolgica definidas. Se lo considera contaminado o en proceso
de contaminacin, cuando sus componentes qumicos y biolgicos estn agredidos
por sustancias ajenas a l, incompatibles con su estado de equilibrio.

Aos atrs, las malas prcticas empleadas en la explotacin de hidrocarburos y la

ausencia de un marco legal apropiado, afectaron la calidad del suelo. En la actualidad
la principal causa de contaminacin del suelo con estas sustancias, se debe
principalmente a situaciones imponderables. Estas circunstancias, originan la
necesidad de recomponer el suelo contaminado siendo la biorremediacin, una de las
tcnicas ms empleadas para su restitucin.

El objetivo del presente trabajo es comparar dos tratamientos de biorremediacin, el

primero es un tratamiento a travs de tcnicas reconocidas o tradicionales, y en el
segundo tratamiento, la humedad y los nutrientes inorgnicos son aportados por
efluentes cloacales tratados.

Segn los resultados obtenidos, se puede concluir que un tratamiento de

biorremediacin en el cual se aportan los nutrientes inorgnicos a travs de efluentes
cloacales tratados, no es ms eficiente que un tratamiento de biorremediacin
fertilizado con productos comerciales y humedecido con agua pura

ABSTRACT

The soil is a complex system formed on the surface of the land, initially by the physic
and chemic alterations of de rocks and by the influence of live beings, developing a
structure of superposed layers. Its considered contaminated or in contamination
process, when its biological and chemical components are attacked by substances
detached from it, which are incompatible with it balance status.

Years ago, bad practices employed in the hydrocarbon exploitation and the absence of
an appropriate legal matrix, damaged soil quality. Today the first source of soil
contamination by these substances is mainly because of imponderable situations.
Those circumstances originate the necessity to recompose the contaminated soil,
being bioremediation one of the most employed techniques for its restitution.

The aim of the present work is to compare two bioremediation treatments, one of those
is a treatment through the recognized or traditional techniques, and in the second
treatment the moisture and the inorganic nutrients are incorporated by refined sewage
effluents.

Depending on the obtained results, those allows to conclude that a bioremediation

treatment in that inorganic nutrients are incorporated by refined sewage effluents, is
not more efficient that a bioremediation treatment fertilized by commercial products
and moistured with fresh water

1.1. Propiedades y Composicin del Suelo

El suelo est constituido por tres fases: la fase slida, compuesta a su vez por la fraccin
mineral y la orgnica; la fase lquida; y la gaseosa; que ocupa el espacio que la fase lquida
deja libre en la porosidad presente en el suelo. Como consecuencia de estas tres fases, el
suelo presenta determinadas propiedades que dependen de su composicin. La fase lquida
constituye el medio ideal que facilita la reaccin entre las tres fases, pero tambin se
producen reacciones dentro de cada una de ellas.

En un promedio general la materia orgnica constituye un 5% del suelo, el agua 25%

mientras que la fraccin mineral est representada en un porcentaje del 45%.

Los minerales constituyen la base del armazn slido que soporta el suelo.
Cuantitativamente en un suelo normal la fraccin mineral representa de un 45 a un 49% del
volumen del mismo, pero dentro de la fase slida constituyen, para un suelo representativo,
del orden del 90 al 99% (el 1-10% restante corresponde a la materia orgnica). La fase
slida, muy heterognea, representa la fase ms estable del suelo y la ms ampliamente
estudiada.

La fase lquida se caracteriza por su variabilidad en el espacio y el tiempo, tanto a nivel

cualitativo como cuantitativo, esta variabilidad est condicionada por las propiedades
especficas de esa fase lquida, por las caractersticas de los espacios en que se encuentra
y por las propiedades del suelo que la sustenta. Esta fase lquida del suelo es
fundamentalmente una solucin acuosa, y por ello, y al contener sustancias en solucin, se
le llama solucin del suelo. Las soluciones del suelo proceden de la alteracin de los
minerales y de la materia orgnica. El agua ejerce importantes acciones, tanto para la
formacin del suelo (interviene decisivamente en la meteorizacin fsica y qumica, y
translocacin de sustancias) como para su fertilidad. La fase lquida circula a travs del
espacio poroso, quedando retenida en los huecos del suelo; est en constante competencia
con la fase gaseosa. Los cambios climticos estacionales, y concretamente las
precipitaciones atmosfricas, hacen variar los porcentajes de cada fase en cada momento.
El agua que se mueve por la fuerza de gravedad se denomina agua libre o agua
gravitacional, y se encuentra en los poros ms grandes del suelo, que frecuentemente
estn llenos de aire. Parte del agua se retiene contra la fuerza gravitacional como resultado
de la atraccin entre el agua y los otros constituyentes. No toda el agua del suelo es
aprovechable biolgicamente y slo una parte de esta pocin retenida en contra de la
atraccin gravitacional puede ser usada por los sistemas vivientes.

La fase gaseosa es una mezcla de gases que ocupa los espacios que la fase lquida deja
libres en la porosidad del suelo. Debido a sus caractersticas intrnsecas como fluido, la fase
gaseosa presenta una marcada similitud con la fase lquida, sobre todo en lo que se refiere
a su dinmica, aunque tiene algunas diferencias con respecto a esta. La atmsfera del suelo
est condicionada por la dinmica de los procesos biolgicos que se producen en relacin a
ella, y que estn determinados por el consumo de oxgeno y por la produccin de CO2 que
realizan los microorganismos y las plantas durante sus procesos de oxidacin (Campbell,
1987).

En cuanto a la textura el suelo est constituido por partculas de muy diferente tamao. El
trmino textura se usa para representar la composicin granulomtrica del suelo. Conocer
esta granulometra es esencial para cualquier estudio. Para clasificar la textura del suelo,
bsicamente todas aceptan los trminos de grava, arena, limo y arcilla, hay diferencia en los
valores de los lmites establecidos para definir cada clase. Cada trmino textural se
corresponde con una determinada composicin cuantitativa de arena, limo y arcilla (Figura
N 1). En los trminos de textura se prescinde de los contenidos en gravas; se refieren a la
fraccin del suelo que se estudia en el laboratorio de anlisis de suelos y que se conoce
como tierra fina.
Figura N 1: Tringulo de textura a partir del cual se obtienen los nombres de las
clases de textura.

Las partculas no estn sueltas sino que forman agregados, siendo por lo tanto necesario
destruir la agregacin para separar las partculas individuales, por ello antes de proceder a
la extraccin de las diferentes fracciones hay una fase previa de preparacin de la muestra.
En esta fase previa existen diversos mtodos para separar a las partculas del suelo.
Algunos son mtodos fsicos (trituracin suave, agitacin lenta, agitacin rpida,
ultrasonidos, lavado y coccin) y otras son tcnicas qumicas (oxidacin de la materia
orgnica con agua oxigenada, ataque cido de los carbonatos y compuestos de Fe con ClH,
dispersin de las arcillas con hexametafosfato sdico o amonaco). Como los agentes
agregantes pueden ser muy distintos, normalmente no sirve uno solo de estos mtodos sino
que se monta una cadena de tratamientos. La extraccin final de las fracciones se realiza
por tamizado para las arenas, mientras que la sedimentacin en fase acuosa es el mtodo
normal de separacin de los limos y de las arcillas. Si se necesita subfraccionar la fraccin
de arcilla se ha de recurrir a la centrifugacin.

El pH influye en las propiedades fsicas y qumicas del suelo. Entre otros aspectos, el pH del
suelo influye en el nivel de toxicidad de algunos elementos como, por ejemplo, aluminio y
manganeso. Tambin influye decisivamente en procesos microbiolgicos de tanta
trascendencia como son la mineralizacin y humificacin de los restos vegetales
incorporados, y en la dinmica y transformaciones de numerosos nutrientes (por ej.
nitrgeno), ejerciendo una poderosa influencia sobre la fertilidad del suelo.

En los suelos, los iones H+ estn en la solucin como tambin en el complejo de

intercambio, o sea hay dos tipos de acidez, activa o real (en solucin) y de intercambio o
reserva (para los adsorbidos); ambas estn en equilibrio dinmico. Si se eliminan protones
de la solucin se liberan otros tantos protones adsorbidos. Como consecuencia el suelo
muestra una fuerte resistencia a cualquier modificacin de su pH, est fuertemente
tamponado. (Alexander, 1994)

1.2. Hidrocarburos
El petrleo crudo contiene una gran variedad de elementos combinados de diferentes
formas. Los principales constituyentes son carbono e hidrgeno que en forma combinada
componen los hidrocarburos. Adems estn presentes otros compuestos orgnicos que
contienen azufre, oxgeno y nitrgeno y constituyentes metlicos en concentraciones
relativamente bajas. Es imposible identificar todos los componentes, por ello los compuestos
del petrleo son caracterizados en trminos de rangos segn el punto de ebullicin y
nmero aproximado de carbonos. A pesar de la complejidad de este grupo de compuestos
se los puede clasificar en dos grandes grupos: los hidrocarburos y los compuestos que no
entran en dicha categora (TPH CRITERIA WORKING GROUP TPHCWG-; 1998).

Los hidrocarburos se clasifican en: hidrocarburos saturados, insaturados y aromticos.

a.-Hidrocarburos saturados: son la clase principal presente en el petrleo. Estn

compuestos por enlaces simples C-C, con los dems enlaces restantes saturados con
tomos de H. Las molculas pueden encontrarse en distintas configuraciones.

Alcanos e isoalcanos: responden a la siguiente frmula:

Contienen solamente enlaces simples entre los tomos de carbono. Pueden ser de cadena
lineal o ramificados (el prefijo n corresponde a los alcanos con configuracin estructural de
cadena lineal). La industria del petrleo se refiere a ellos como parafinas e isoparafinas,
respectivamente.

Ejemplos:
Cicloalcanos: son compuestos cclicos con la siguiente frmula general:

Estos compuestos son hidrocarburos saturados donde los carbonos forman estructuras
cclicas. La industria del petrleo se refiere a ellos como naftenos o cicloparafinas.

Ejemplos:

b.- Hidrocarburos no saturados (o insaturados): esta clase de compuestos tiene al

menos dos tomos de carbono en la molcula unidos por un doble o triple enlace (doble
para alquenos y triple para alquinos). Estos compuestos no se encuentran en el petrleo
crudo, y son producidos principalmente en los procesos de craqueo en la produccin de
molculas pequeas a partir de las ms grandes. Se forman estos enlaces mltiples cuando
no hay suficiente hidrgeno para saturar la molcula.

Alquenos/olefinas: pueden ser lineales, ramificados o cclicos y su frmula general es:

Estos compuestos tienen uno o ms enlaces dobles entre los tomos de carbono. A los
alquenos que contienen dos dobles enlaces se los denomina dienos y cuando los dos
dobles enlaces estn separados por un enlace simple, se los llama dienos conjugados.

Ejemplos:
Alquinos/acetilenos: pueden ser lineales o ramificados y responden a la siguiente frmula
general:

Ejemplos:

c.- Hidrocarburos Aromticos: son una clase especial de hidrocarburos no saturados.

Tienen como base la estructura de anillo de benceno. Este anillo contiene seis carbonos.
Cada carbono est unido a un hidrgeno. La molcula es plana y simtrica con nubes de
electrones por debajo y sobre el plano de la molcula. Los enlaces C-C son enlaces de
resonancia, en los cuales los electrones son compartidos entre varios tomos de carbono.
Los electrones se encuentran deslocalizados (participando en varios enlaces); esto le otorga
estabilidad qumica a la molcula. Las nubes de electrones que rodea a las molculas de los
anillos pueden deformarse por la carga de las molculas adyacentes. Esto produce sitios de
carga positiva y negativa dentro de la molcula, lo cual le otorga a la misma una moderada
polaridad. Esta polaridad determina la interaccin de las molculas entre ellas y con el agua.
Generalmente, a medida que la polaridad aumenta, se incrementa el punto de ebullicin y la
solubilidad en agua. Los compuestos monoaromticos poseen un anillo de benceno,
pudiendo estar uno o ms hidrgenos sustituido por grupos alquilo. Los diaromticos tienen
como base dos anillos bencnicos fusionados. Aquellos que tienen como base ms de dos
anillos fusionados son los hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs). Todos los tipos de
petrleo crudo y casi todos los productos derivados contienen hidrocarburos aromticos.

Los compuestos aromticos son contaminantes comunes en sitios afectados por productos
de petrleo. Los monoaromticos, como benceno, tolueno, y xileno (BTEX) tienen una
solubilidad en agua significativa y son mviles en el ambiente. Muchos HAPs que se
encuentran en petrleo crudo y sus productos pueden ser contaminantes persistentes,
particularmente en suelo y sedimentos.

Ejemplos:

Dentro de cada familia y sub-familia de hidrocarburos, hay series homlogas. A cada

miembro de la serie se lo llama homlogo y difiere del miembro adyacente en la serie por
una unidad que se repite, como por ejemplo el grupo metileno (CH2). Dentro de cada serie
las propiedades fsicas de los compuestos varan con el nmero de tomos de carbono. Por
ejemplo, hay un incremento de aproximadamente 20C en el punto de ebullicin por cada
tomo que se suma en una cadena de los alcanos lineales. Generalmente, la persistencia
de los hidrocarburos en el ambiente se incrementa con el aumento del punto de ebullicin.

Otra caracterstica de los hidrocarburos es que tienen una gran cantidad de ismeros. Los
ismeros son compuestos que tienen la misma frmula elemental pero tienen
configuraciones estructurales diferentes. Hay distintos tipos de ismeros. En general, a
medida que el nmero de carbonos aumenta, se incrementa significativamente el nmero de
ismeros posibles. Por ejemplo, un alcano con seis tomos de carbono tiene cinco posibles
ismeros, mientras que unos de diez carbonos posee setenta y cinco (TPHCWG; 1998).

Otros Compuestos: el petrleo crudo contiene cantidades significativas de compuestos que

no entran dentro de la categora de hidrocarburos, especialmente los que contienen
oxgeno, azufre y nitrgeno. Dentro de estos compuestos los que predominan son los
aromticos heterocclicos con azufre. Estn presentes tambin, en menor cantidad
compuestos organometlicos y sales inorgnicas. Se encuentran principalmente
concentrados en las fracciones de destilacin ms pesadas y los residuos provenientes de
la refinacin. Se los llama tambin asfaltenos y resinas (TPHCWG; 1998).

Ejemplos:
1.3. Productos Derivados del Petrleo
Los productos del petrleo son tanto fracciones de destilacin del crudo o
mezclas de fracciones luego de un proceso de refinacin. Los productos son
utilizados para fines industriales o militares o en gran escala en numerosos
productos de consumo. Algunos de los productos son: gasolinas, naftas, solventes,
naftas de aviacin, kerosene, combustible diesel, fuel oil, aceites lubricantes
(TPHCWG; 1998).
Debido a que puede resultar extremadamente difcil identificar todos los
componentes del petrleo, tanto el petrleo como sus derivados pueden ser
caracterizados en trminos de rangos segn el punto de ebullicin y el nmero
aproximado de carbonos.
La tabla I muestra los puntos de ebullicin y rangos de nmero de carbonos para
seis fracciones del petrleo crudo.

Tabla N 1: Rangos de punto de ebullicin para las distintas fracciones del

petrleo (McMILLEN et al.; 2001).

Fraccin

Gasolina
El
Nafta
aceite lubricante tanto para uso en automviles e industrias, est compuesto en general
(excepto en aceites sintticos) por una base orgnica y aditivos, estos ltimos utilizados
para aumentar su rendimiento, eficiencia y vida til. La composicin de la base orgnica est
formada de cientos de miles de compuestos orgnicos, siendo la gran mayora compuestos
aromticos polinucleares (PNA). Algunos de estos PNA (principalmente estructuras de 4, 5 y
Kerosene
6 anillos) son considerados cancergenos como el benzopireno, sin embargo, existen otros
combustibles cuyas concentraciones de PNA son superiores, por lo que los PNA tanto en
aceite lubricante virgen como usado no son la mayor fuente de preocupacin. Los aditivos

Diesel y fuel oil

de la base orgnica del aceite que pueden llegar a constituir hasta un 30 % en volumen del
total de aceite virgen, tpicamente contienen constituyentes inorgnicos como azufre,
nitrgeno, compuestos halogenados y trazas de metales (Ruz, E., 1991).

Las bases lubricantes minerales son refinadas del crudo del petrleo, sus caractersticas
estn determinada por la fuente de crudo y el proceso especifico de refinacin usado por el
fabricante. Existen dos tipos principales de crudos de petrleo: crudo parafnico y crudo
naftnico.

El crudo parafnico es el ms usado para la fabricacin de aceites lubricantes, su alta

composicin en componentes parafnicos hace que su ndice de viscosidad sea ms
elevado que el de el crudo naftnico (Pit & Quarry. 2000).

Los aceites lubricantes para motores a gasolina se pueden clasificar de acuerdo a dos
criterios generales: segn su viscosidad (SAE) y segn requerimientos industriales (API).

La sociedad de ingenieros automotores SAE ha generado una clasificacin que depende

exclusivamente del grado de viscosidad del lubricante. En aceites para motor existen los
monogrados que van del 0W hasta el 60 y en los multigrados desde el 5W 50 hasta el
20W 50.

El instituto Americano del Petrleo (API) clasifica los aceites para motor de acuerdo a sus
caractersticas y a las condiciones exigidas por los lubricantes de automviles. La
designacin para aceites segn API ha variado desde SA hasta SG que es el recomendado
en la actualidad.is fsico-qumico.

1.3.1. Biodegradabilidad de los Componentes del Petrleo

El petrleo crudo, as como sus fracciones, son mezclas complejas de hidrocarburos y las
caractersticas estructurales de cada grupo de compuestos, determinarn la velocidad y
viabilidad de la degradacin.

Es necesario distinguir entre degradacin y mineralizacin; frecuentemente un compuesto

con una estructura qumica compleja, ser degradado en sucesivas fases, y con la
participacin de diversos grupos de microorganismos y de enzimas, pero una porcin de la
molcula puede resultar recalcitrante (resistente a la biodegradacin), por lo cual puede no
alcanzarse la mineralizacin.

Usualmente la fraccin ms liviana de los hidrocarburos es ms rpidamente degradada que

la fraccin ms pesada, siendo en general mineralizada, es decir, completamente convertida
en dixido de carbono (CO2) y agua. El factor limitante para que lo propio ocurra con las
fracciones ms pesadas, suele ser el escaso grado de solubilizacin del compuesto y su
lenta liberacin desde los poros del suelo.
En lneas generales, las transformaciones aerobias hacen que el producto de la
metabolizacin sea un compuesto menos voltil, ms soluble y ms degradable que el
original. Una excepcin pueden ser los hidrocarburos poliaromticos, los cuales pueden
degradarse a productos ms voltiles, como resultado de la ruptura del anillo aromtico y
formacin de compuestos de bajo peso molecular (Eweis et al., 1998).

Los alcanos lineales son los hidrocarburos del petrleo ms biodegradables debido a la
simplicidad de su estructura molecular. Sin embargo, altas concentraciones de alcanos con
nmero de carbonos entre 5 y 10, inhiben la biodegradacin, ya que como solventes lisan la
membrana lipdica del microorganismo. Los alcanos de C20 a C40 tienen, en general, muy
baja solubilidad en agua, lo cual interfiere en la degradacin biolgica.

Una ramificacin muy extensa compleja del alcano, tambin puede significar una dificultad
para su metabolizacin microbiana. Por ejemplo, el alcano lineal n-octano es degradado
ms fcilmente que el 3-etil hexano, aunque ambos tienen la misma frmula emprica: C8H18
(Gibson, 1984).

En general, la degradacin de alcanos origina productos muy oxidados, los cuales son
menos voltiles que sus compuestos parentales (Eweis et al., 1999).

Los Cicloalcanos son menos biodegradables que sus ismeros de cadena lineal, pero ms
biodegradables que los Hidrocarburos Aromticos Policclicos (HAPs) por ser, estos ltimos,
muy estables qumicamente. La susceptibilidad a la degradacin de los Cicloalcanos tiende
a decrecer con el incremento del nmero de anillos en su estructura, como es el caso de los
HAPs.

La biodegradabilidad de los compuestos aromticos disminuye con el incremento del

nmero de anillos y del nmero de sustituyentes alquilos. Los compuestos monoaromticos,
como los BTEX, son degradados con mayor facilidad que los compuestos que contienen
ms de un anillo en su estructura (Altamirano, 2000).

En los HAPs, el aumento del peso molecular y del nmero de anillos, produce una
disminucin en la solubilidad y volatilidad e incrementa la capacidad de adsorcin a las
partculas slidas del suelo, dificultando el acceso de los microorganismos degradadores
(Brubaker, 1991). No obstante, las enzimas requeridas para la degradacin de los HAPs,
pueden ser inducidas por la presencia de compuestos aromticos de bajo peso molecular,
como el naftaleno el antraceno (Atlas, 1991).

Los asfaltos y muchas resinas son compuestos por largas cadenas de hidrocarburos,
nitrgeno, azufre y tomos de oxgeno ligados a aromticos policclicos, los cuales incluyen,
a su vez, elementos tales como nquel y vanadio. Debido a su insolubilidad y a la presencia
de grupos funcionales y extensivas estructuras de anillos, que los protegen de los ataques
microbianos, estos grupos de compuestos tienden a ser muy recalcitrantes (Atlas, 1991).
Pese a ello, algunos estudios han publicado la eliminacin de asfaltos por cometabolismo,
en presencia de n-alcanos de C12 a C18 (Leahy & Colwell, 1990).
Generalizando, entre los factores estructurales que dificultan la biodegradacin de los
compuestos, se encuentran: la presencia de grupos amino, metoxi, sulfonatos y nitro; la
halogenacin extensiva; pesos moleculares muy altos cadenas de longitud larga;
bencenos sustituidos en la posicin meta; enlaces ter y cadenas muy ramificadas de
carbonos.

Los factores sealados, determinan la siguiente secuencia de biodegradacin, en orden

decreciente: n-alcanos, alcanos de cadena ramificada, alquenos ramificados, compuestos n-
alquil aromticos de bajo peso molecular, monoaromticos, alcanos cclicos, aromticos
polinucleares y asfaltenos.

1.3.2. Concentracin y Toxicidad del Contaminante

Dos parmetros primordiales que afectan significativamente la tasa de biodegradacin de un

contaminante son su concentracin y toxicidad.

Concentraciones menores a la concentracin lmite, es decir aquella concentracin mnima

suficiente como para soportar el crecimiento mantenimiento de la poblacin microbiana
degradadora, pueden detener el proceso y el contaminante podra persistir en el ambiente
por aos. Una explicacin de este fenmeno es que, a muy bajas concentraciones, los
compuestos no generan suficiente energa para el crecimiento de los microorganismos, no
inducen el sistema enzimtico necesario para su metabolismo, si se encuentran presentes
otros sustratos ms fcilmente biodegradables. Por otro lado, una alta concentracin del
contaminante puede resultar txica para la microflora autctona del suelo, generando una
disminucin supresin en la actividad de degradacin y/ muerte de la comunidad
(Alexander, 1981, 1994).

Diversos autores acuerdan en que concentraciones de hidrocarburos superiores al 10 %,

pueden ser inhibitorias para el proceso de biodegradacin (Ferrari et al., 1994; Atlas &
Bartha, 1992; Leahy & Colwell, 1990). Por ello, previamente a aplicar un tratamiento de
biorremediacin, es necesario establecer la concentracin apropiada del contaminante en
cuestin, para que este factor no signifique una razn de fracaso. Una posibilidad para
reducir la concentracin es agregar suelo no contaminado en el sitio a remediar, logrando,
de este modo, un efecto de dilucin del residuo.

La toxicidad constituye otro factor clave en la biorremediacin. Si la mezcla contaminante no

es txica por s misma para los microorganismos degradadores, algunos de sus
componentes pueden serlo, retardando la biodegradacin de otros contaminantes
fracciones presentes (Volke Seplveda, 2002). Algunos autores afirman que la toxicidad
aparece debido a la presencia de alcoholes y solventes clorados, no considerando txicos a
los hidrocarburos del petrleo en s mismos, cuando stos componen el nico contaminante
presente y en la concentracin adecuada (Norris et al., 1994). Sin embargo, es frecuente la
presencia de metales pesados acompaando a los residuos del petrleo, como Pb, As, Cd,
Ba, Hg, Zn, Cu, Ni, V y Se entre otros, de probado efecto ecotxico.
1.3.3. Comportamiento de los Hidrocarburos en el Suelo

El petrleo crudo y los productos del petrleo liberados al ambiente sufren con el tiempo
procesos de intemperizacin. Estos procesos incluyen, entre otros, volatilizacin,
transferencia a la fase acuosa, oxidacin qumica y degradacin microbiolgica. La
velocidad de transformacin depende principalmente de las condiciones ambientales. Por
ejemplo, la gasolina, un producto voltil se evaporar rpidamente en un derrame
superficial, mientras que el mismo producto liberado bajo una capa de arcilla cubierta con
asfalto tender a evaporarse con lentitud (el proceso de intemperizacin no ser detectado
por aos). Adems, cada proceso de intemperizacin afecta a las familias de hidrocarburos
de manera diferente. Por ejemplo, los aromticos tienden a ser ms solubles en agua que
los alifticos, mientras que estos ltimos tienden a ser ms voltiles. Dentro de los
compuestos aromticos, los BTEX (benceno, tolueno, etilbenceno y xileno) tienen una
solubilidad en agua bastante significativa. Los cuerpos de agua contaminados por petrleo
suelen estar enriquecidos por estos compuestos en relacin con las otras fracciones de
petrleo. Otros hidrocarburos relativamente insolubles en agua pueden transferirse al agua a
travs de la adsorcin a partculas suspendidas en la fase acuosa o como aglomeraciones
de gotas muy pequeas (microemulsin) (TPHCWG; 1998).

En el caso del suelo estos procesos pueden tener una variedad de escenarios potenciales.
Por difusin, lentamente, los hidrocarburos pueden redistribuirse desde la superficie del
suelo hacia el interior del mismo. Tambin pueden unirse a las partculas del suelo,
modificndose su disponibilidad y movilidad (Beck, 1997). Cuando los hidrocarburos entran
en el suelo, se produce una separacin natural de los distintos constituyentes, debido a la
exposicin de la fase no acuosa a las fases slida, gaseosa y acuosa del suelo. Los
compuestos de alto peso molecular tienen, en general, menor movilidad y permanecen
cerca de la fuente, mientras que los ms livianos migran hacia porciones ms profundas del
perfil debido a su mayor solubilidad en agua. A medida que la cantidad de hidrocarburos
disminuye, ya sea por disolucin u otro mecanismo de remocin, la fraccin del espacio
poroso ocupada por los mismos disminuye. Los conductos de comunicacin entre los poros
se tornan ms pequeos y tortuosos, reduciendo la capacidad de la fase orgnica de
desplazarse. Cuando ya no existe suficiente volumen para que continu la migracin, la fase
no acuosa en el suelo es denominada saturacin residual (API, 2003).

Parte de la fraccin aromtica de un derrame de petrleo puede particionarse en el agua

que est en contacto con la contaminacin. Los procesos de volatilizacin, tambin actan
simultneamente en la remocin de aromticos voltiles como el benceno y tolueno,
adems de los alcanos de bajo nmero de carbonos. Comnmente, la fraccin soluble en
agua se difunde del punto de origen del derrame, al estar en contacto con agua, utilizando
cualquier medio que se lo permita (TPHCWG; 1998).

1.4. Efecto de los Hidrocarburos en los Seres Vivos

1.4.1. En los Microorganismos
Dada la naturaleza hidrofbica del rea entre las monocapas de la membrana
citoplasmtica, y en bacterias gram-negativas, de la capa exterior, no es extrao que las
molculas lipoflicas como los hidrocarburos se incorporen en ellas.

Los hidrocarburos tienden a alojarse en el rea hidrofbica entre las monocapas de la

membrana en las cadenas acilo de los fosfolpidos, su incorporacin est relacionada con el
coeficiente de particin octanol-agua del compuesto lipoflico. La insercin de los
hidrocarburos en la membrana altera la estructura de la misma, ocasionando cambios en su
fluidez y en la conformacin de las protenas de membrana. Esto provoca la disrupcin de la
membrana y de las funciones de transduccin de energa.

La bacteria puede formar biofilms en respuesta al estrs, es decir, alterar la hidrofobicidad

de su superficie celular para regular esta incorporacin. De la misma forma, pueden ser
utilizados mecanismos de reparacin con gasto de energa para compensar las prdidas en
la integridad de la membrana a causa de la intrusin de los compuestos lipoflicos (Van
Hamme et al, 2003).

1.4.2. En las Plantas

En los primeros abordajes, se haca una distincin entre los efectos agudos y crnicos, y
entre los efectos biofsicos y bioqumicos. Los hidrocarburos del petrleo pueden producir un
efecto directo sobre las plantas al disolver los tejidos. La disminucin en el crecimiento se
atribuy a la sofocacin de las plantas causada por el desplazamiento del aire de los poros
por los hidrocarburos o por la falta de oxgeno debido al aumento de la actividad microbiana.
Adems, durante la descomposicin microbiana, pueden encontrarse compuestos con
azufre y manganeso en cantidades que resulten txicas. En estudios realizados tambin se
detect dao a membranas celulares, reduccin en la transpiracin y aumento en la
respiracin. La gravedad de los efectos detectados dependen tanto de los constituyentes y
cantidad de producto, de las condiciones ambientales y de las especies de plantas. Ha
habido una diferenciacin, adems, entre los efectos agudos y rpidos causados por aceites
livianos y los efectos crnicos y lentos resultantes de los aceites pesados.

Un grupo a tener en cuenta al analizar la toxicidad de los hidrocarburos del petrleo es el de

los hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs). Las plantas pueden acumular este grupo
de compuestos. Tambin este proceso ocurre en sedimentos y plantas acuticas y por lo
tanto puede impactar en especies herbvoras de peces y vida silvestre en general. Algunas
plantas pueden catabolizar benzo(a)pireno. Esto es un factor importante a tener en cuenta,
ya que cuando los HAPs son degradados metablicamente se transforman en compuestos
an ms txicos, carcingenos y mutagnicos. Las transformaciones metablicas hacia
compuestos ms peligrosos tambin pueden ocurrir a travs de la degradacin microbiana
en el suelo o sedimentos (Irwin, 1997).

A una concentracin igual o menor al 1% (p/p) de hidrocarburos, se espera que la reduccin

en la produccin de las plantas sea muy baja o nula. Adems, cuando esta concentracin es
de 1 a 5% de hidrocarburos en suelo, el sitio puede recuperarse naturalmente en un
transcurso de tiempo menor a un ao (Deuel, 1991). Esta recuperacin es el resultado de la
asimilacin de hidrocarburos en el suelo, que es una combinacin de biodegradacin,
prdida por evaporacin, y la unin de los hidrocarburos a la materia orgnica del suelo.

Se descubri que la fitodisponibilidad de mezclas complejas de hidrocarburos que tienen

bajo coeficiente de reparto octanol-agua (Kow) es muy baja, an cuando el contenido de HTP
es tan alto como 1%. La fitotoxicidad result ser mayor para los hidrocarburos de bajo peso
molecular y aromticos.

Segn lo expuesto, se ha demostrado que el valor gua propuesto por el Instituto Americano
de Petrleo (1% HTP) tiene la finalidad de proteger la vida vegetal, el agua subterrnea y
adems puede lograrse a travs del mtodo de biorremediacin. A pesar de ello an se
requieren valores gua para ciertas mezclas de hidrocarburos, que estn basados en el
riesgo para la salud humana. Los componentes especficos del petrleo crudo deben ser
identificados y su riesgo potencial evaluado para aquellos sitios donde se deba tener en
cuenta la exposicin humana (Mc Millen et al., 2001).

1.4.3. En Vertebrados

Los daos biolgicos sobre los organismos vivos dependen de varios factores que pueden
actuar juntos o por separado, como por ejemplo: el tipo de hidrocarburos al que estn
expuestos, en especial al contenido de compuestos aromticos, a la concentracin y tiempo
de exposicin, el grado de intemperismo de los hidrocarburos, la forma en que se encuentre
(emulsin, disperso, absorbido en materia orgnica) y por ltimo a la especie expuesta.

Es de destacar que, a parte de los diferentes hidrocarburos, el petrleo contiene otros

componentes como sulfuro, oxgeno, nitrgeno y diversos metales pesados, y que todos
ellos, de una manera u otra, afectan negativamente a los animales. Pueden observarse
efectos ms o menos comunes en las distintas vas de ingreso al organismo de los
animales.

a. Por Va Inhalatoria
A nivel local se produce una irritacin del epitelio respiratorio, y una inhalacin
severa de las emanaciones txicas puede producir graves problemas como
inflamacin, congestin y hemorragias pulmonares. Si estos compuestos voltiles
llegan a ser absorbidos (por ejemplo por causa de lesiones en el interior del
pulmn), se producirn lesiones sistmicas a nivel heptico, renal y del sistema
nervioso central (Farr, 2002).
b. Por Va Gastro Intestinal
La entrada por va oral de petrleo produce irritacin y una posterior destruccin
de los epitelios esofgicos, gstrico e intestinal. Estos efectos producen a su vez
una alteracin en la motilidad gastrointestinal y los consecuentes sndromes de mal
digestin y mala absorcin. Otras consecuencias ms graves son las gastroenteritis
y gastroenteritis hemorrgicas (Farr, 2002).
c. Por Contacto con la Piel y las Mucosas

Es importante considerar, el efecto en la fauna marina, ya que los sucesos ms importantes

de contaminacin por contacto con la piel y mucosas se presentan en este grupo. La
impregnacin externa con petrleo produce una accin lesiva directa sobre la piel de los
delfines, las focas y las tortugas marinas, pero es especialmente negativo en las focas, ya
que el mecanismo termorregulador de estos animales marinos no depende nicamente de la
capa de grasa sino, en una parte importante, de la presencia del pelo.

Los efectos de esta alteracin de los mecanismos de regulacin trmica, pueden producirse
en dos sentidos opuestos: puede instaurarse una hipotermia (por la imposibilidad de retener
el calor corporal) o bien, una hipertermia (por la imposibilidad de eliminarlo).

Los efectos del contacto directo del petrleo con las mucosas producirn una
irritacin de stas, siendo las afectaciones ms graves a nivel ocular. Las lesiones
oculares van desde la simple irritacin hasta las graves lceras corneales, pasando
por los diferentes grados y tipos de conjuntivitis y el blefaroespasmo (Farr, 2002).

La respuesta biolgica se puede clasificar en: efectos txicos letales cuando los
hidrocarburos interfieren en procesos celulares produciendo la muerte, efectos subletales
cuando los hidrocarburos alteran el comportamiento y las actividades fisiolgicas pero no
provocan la muerte. Su ingestin puede producir la carcinognesis en el individuo. Otros
efectos se relacionan con la interferencia en la bsqueda de alimentos, o en el escape de
predadores (Farr, 2002).

1.4.3.1. En el ser Humano

La exposicin a HTP proviene de muy diversas fuentes, incluyendo qumicos utilizados en el

hogar y el trabajo, en estaciones de servicio, algunos plaguicidas, etc. Una pequea
cantidad de los HTP ms livianos se encuentran en el aire. Una gran parte de las
exposiciones proviene de las ocupaciones que involucran la manipulacin de productos de
petrleo. La exposicin puede provenir tambin a travs del consumo de agua de acuferos
subterrneos contaminados, de derrames o prdidas donde puede entrar en contacto directo
con los productos o inhalarlos. Los nios pueden estar expuestos al jugar en terrenos
contaminados.

Los HTP pueden entrar y salir del cuerpo cuando se los inspira con el aire; cuando se los
ingiere con los alimentos, el agua o cuando se los toca. La mayora de los componentes de
este grupo entran en el torrente sanguneo rpidamente cuando se los inhala en forma de
vapor o cuando se los ingiere. Algunos componentes son ampliamente distribuidos por la
sangre y rpidamente transformados a compuestos qumicos menos peligrosos. Otros
pueden ser transformados en qumicos ms dainos. Otros compuestos son transportados
muy lentamente a travs del cuerpo y no son transformados en otros. Cuando la va de
exposicin es la drmica, los compuestos son absorbidos mucho ms lentamente que
cuando son inhalados o ingeridos. La mayora de los HTP abandonan el cuerpo a travs de
la orina o con el aire exhalado.

Los efectos en la salud por la exposicin a los HTP dependen de muchos factores. Estos
incluyen el tipo de compuesto qumico, la cantidad y la duracin de la exposicin. Se conoce
muy poco sobre la toxicidad de algunos compuestos que integran este grupo.

Los constituyentes de diferentes fracciones de HTP afectan a la salud de manera distinta.

Algunos, especialmente los de bajo peso molecular, como el benceno, tolueno y xileno,
pueden afectar al sistema nervioso central. Si la exposicin es suficientemente alta, pueden
ocasionar la muerte. La inhalacin de tolueno a concentraciones mayores a 100 ppm por
varias horas puede causar fatiga, dolor de cabeza, nuseas y adormecimiento. Cuando la
exposicin cesa, los sntomas desaparecen. Sin embargo, si la exposicin se extiende por
un largo tiempo, puede ocurrir dao permanente al sistema nervioso central. El n-hexano,
puede afectar el sistema nervioso central (SNC) de una forma diferente, causando un
desorden nervioso llamado neuropata perifrica caracterizada por el entumecimiento de
las extremidades y en casos graves, parlisis. Esto ha ocurrido a trabajadores expuestos a
una concentracin de 500 a 2000 ppm de n-hexano en el aire. La ingestin de algunos
productos como gasolina y kerosene causa irritacin de garganta y estmago, depresin del
sistema nervioso central, dificultad para respirar y neumona. Los compuestos de ciertas
fracciones pueden tambin afectar a la sangre, el sistema inmune, hgado, riones,
pulmones y el desarrollo embrionario, algunos compuestos son irritantes de la piel y las
mucosas, otros, como ciertos aceites minerales no son txicos y son utilizados en alimentos.

Se ha demostrado que el benceno es responsable de causar cncer (leucemia) en los seres

humanos. La Agencia Internacional de Investigacin del Cncer (IARC) ha determinado que
el benceno es carcinognico para humanos (grupo 1). Adems la gasolina y benzo(a)pireno
son considerados como probables carcinognicos para humanos (IARC gupos 2B y 2A,
respectivamente) (ATSDR, 1999).

Los principales peligros provenientes de elevadas concentraciones de

hidrocarburos totales de petrleo en general estn relacionados a los HAPs
encontrados en la contaminacin de petrleo, principalmente por sus efectos
carcingenos. Aunque los HAPs son generalmente ms peligrosos que los alcanos,
stos tambin tienen efectos biolgicos. Los alcanos presentes en las gasolinas son
depresores del SNC. De hecho, la gasolina en el pasado fue evaluada como agente
anestsico. Sin embargo, muertes repentinas, posiblemente como resultado de
ritmo cardaco irregular, han sido atribuidas a los vapores de hidrocarburos
inhalables, como los presentes en las gasolinas (Irwin, 1997).
Es fundamental tener en cuenta los procesos de intemperizacin, ya que estos
cambian la composicin de los productos y puede afectar los resultados, la
capacidad para biorremediar y la toxicidad del producto liberado al ambiente. Como
resultado de este proceso, y en relacin a la evaluacin de riesgo de sitios
contaminados, los materiales que han sufrido intemperizacin, en general presentan
menor riesgo para la salud humana y el medio ambiente respecto de los mismos
materiales provenientes de un derrame ms reciente (Beck, 1997).

1.5. Actividad Hidrocarburfera en la Regin

La primera perforacin con el objeto de obtener hidrocarburos, se realiz en 1918 en Plaza
Huincul, desde entonces y hasta 1992 aproximadamente, la exploracin y explotacin se
realizaba sin considerar el ambiente o los superficiarios. A partir de 1992 comenzaron
profundos cambios en la actividad hidrocarburfera de nuestro pas respecto al manejo de
los hidrocarburos y el cuidado ambiental. Estos cambios se producen a causa de la
transformacin empresaria, la privatizacin de Y.P.F. S.E. (ley 24.145), y la generacin de
reglamentaciones que principian la matriz legal actual a nivel nacional y provincial. En la
provincia de Neuqun, durante estos ltimos aos, se ha logrado una lenta y progresiva
modificacin de las prcticas que involucraban la exploracin y explotacin, hacia otras que
producen un menor impacto en el medio, a travs de la promulgacin de legislacin y el
seguimiento por parte de la Autoridad de Aplicacin (Ley Provincial 1875, Modificada por
Ley 2267 (T.O.)).

La actividad petrolera en la provincia de Neuqun tiene un significado estratgico de primera

magnitud, que se manifiesta por los niveles de contribucin a la economa de la provincia.
Se sabe que la industria del petrleo presenta ciertos riesgos inherentes a su actividad. La
contaminacin del aire, agua y suelo con hidrocarburos es uno de los impactos potenciales
asociados a dicha actividad. Entre algunas de las prcticas ms nocivas para el medio
ambiente se puede observar: picadas ssmicas, derrames de hidrocarburos en suelo y agua,
lneas de conduccin areas, locaciones de pozos cortando los frentes de barda, piletas de
lodos sin impermeabilizar, agua de purga vertida al campo o al ro, contaminacin de napas
freticas, etc. Entre las posibles causas de derrames en suelo se encuentran: roturas de
lneas de conduccin (pinchaduras, fractura completa o parcial, actos de sabotaje), pozos
fuera de control, prdida en los tanques de almacenamiento, derrame en bateras y
cargaderos, etc.

En este contexto, los derrames de hidrocarburos se presentan como los problemas ms

importantes que las empresas petroleras tienen que combatir con planes de prevencin y
contingencia adecuados.

As como la legislacin provincial data de poco tiempo atrs, la concientizacin en la

comunidad con respecto a los problemas ambientales se encuentra en una etapa incipiente
de evolucin, pero que lentamente se fortalece.

No slo se logra un control sobre la actividad hidrocarburfera a travs de las normas

oficiales, sino que existen otras reas de control como son los organismos nacionales e
internacionales no gubernamentales, los organismos de certificacin de normas
internacionales y las comunidades que se organizan y reclaman una mejor calidad de vida.
1.6. Contaminacin del Suelo
Tradicionalmente, el impacto en suelos por hidrocarburos en sitios de exploracin y
explotacin ha sido tratado tomando como base el contenido total de hidrocarburos de
petrleo (HTP). El uso de concentraciones de HTP es comnmente utilizado para establecer
niveles objetivos de limpieza para suelo y agua. En Estados Unidos, aproximadamente el
75% de los estados utilizan criterios de limpieza basados en HTP.

Se ha confirmado que la migracin de hidrocarburos no es un problema a bajas

concentraciones en el suelo. Segn Raymond (1976) agregando 2% de petrleo en los
15cm superficiales del suelo, el 99% permanece en los 20cm superiores luego de un ao.
En base a este y otros estudios disponibles, la concentracin de 1% HTP parece justificarse
adems por ser protectiva de las fuentes de agua subterrnea

El grupo de compuestos que se agrupa bajo el trmino HTP, se lo denomina tambin aceites
minerales, hidrocarburos de petrleo, hidrocarburos extrables y aceites y grasas. En
algunas jurisdicciones provinciales se toma como valor objetivo (a alcanzar luego de una
remediacin) una concentracin de Hidrocarburos Totales de Petrleo del 1% p/p (10.000mg
HTP /Kg de suelo), que coincide con el nivel de referencia desarrollado y propuesto por el
Instituto Americano del Petrleo (API). Este valor est por debajo del nivel mnimo requerido
para la movilidad de los hidrocarburos (o por debajo de la saturacin residual). Por lo tanto
este valor gua previene el movimiento de los hidrocarburos hacia el agua subterrnea.

El valor gua de 1% HTP parece ser confirmado por las investigaciones sobre
biodegradacin. Los niveles de limpieza menores a 1%, si bien son posibles de lograr en
determinadas situaciones, son difciles de lograr en sitios que contienen hidrocarburos de
petrleo intemperizados.

1.7. Remediacin de Suelos Contaminados con

Hidrocarburos
Debido a los problemas de contaminacin mencionados, principalmente en zonas
hidrocarburferas, se ha dado considerable importancia al desarrollo de tecnologas para la
recuperacin de suelos contaminados con el fin de reutilizarlos.

De acuerdo a Sellers (1999) cualquier tecnologa de remediacin debe cumplir alguno de los
siguientes objetivos:

- Separar los contaminantes del suelo, agua algn otro medio afectado;

- Aislar inmovilizar dichos contaminantes

- Destruirlos.
Por su parte, la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (US EPA),
recomienda el uso de tcnicas de remediacin de suelos que impliquen, en forma
significativa y permanente, una reduccin del volumen, toxicidad y movilidad de las
sustancias peligrosas y contaminantes y define el trmino tecnologa de tratamiento
como cualquier operacin unitaria, serie de operaciones unitarias, que altera la
composicin de una sustancia peligrosa o contaminante a travs de acciones qumicas,
fsicas o biolgicas, de manera que reduzcan la toxicidad, movilidad volumen del material
contaminado ( US EPA, 2001).

Obviamente las tcnicas de destruccin del contaminante o de transformacin en un

producto inocuo o de menor toxicidad, son las preferidas en el momento de enfrentar un
problema de remediacin, mientras que la aplicacin de cualquiera de las restantes
representan un problema para el futuro.

El uso de una tecnologa en particular depende, adems de los factores mencionados, de su

disponibilidad, fiabilidad (demostrada o proyectada), estado de desarrollo (laboratorio,
escala piloto o gran escala) y de su costo.

De hecho, en la seleccin de la metodologa a implementar en un sitio a tratar, es necesario

disponer de la siguiente informacin (Volke Seplveda & Velasco Trejo, 2002):

- Ubicacin geogrfica y uso del suelo afectado.

- Tipo de instalacin que dio origen a la contaminacin.

- Magnitud y distribucin del contaminante.

- Formas de acceso al sitio, ubicacin de poblaciones cercanas y cuerpos de agua.

- Tipo de vegetacin, clima y topografa del sitio.

- Caractersticas ecolgicas (ecosistemas involucrados).

- Caractersticas hidrogeolgicas (formaciones geolgicas, ciclo hidrolgico y flujo de

cuerpos de agua).

1.8. Tcnicas de Remediacin

Para enfrentar la recuperacin de los ambientes contaminados por la incorporacin de
residuos txicos, particularmente en suelos y aguas, tanto superficiales cmo subterrneas,
existen diversas tecnologas, cada una de ellas con sus ventajas y desventajas.
Las tecnologas de remediacin pueden agruparse de diferentes maneras, en base a los
siguientes principios: (I) lugar en que se realiza el proceso de remediacin, (II) estrategia de
remediacin, y (III) tipo de tratamiento (Van Deuren et al., 1997; US EPA, 2001).

(I) - De acuerdo al lugar donde se realiza el tratamiento de remediacin:

In situ: el tratamiento se realiza en el mismo sitio en donde se encuentra la

contaminacin.

Ex situ: en este caso se requiere realizar una excavacin, dragado cualquier

otro proceso, para remover el suelo contaminado antes de su tratamiento, que
puede realizarse en el mismo sitio (on site) o fuera de l (off site).

(II) - Estrategia de remediacin: pueden usarse separadas o combinadas:

Destruccin modificacin de los contaminantes: Este tipo de tecnologas

busca alterar la estructura qumica del contaminante.

Extraccin separacin: Los contaminantes se extraen y/o separan del medio

contaminado, en base a sus propiedades fsicas qumicas (volatilizacin,
solubilidad, carga elctrica, etc.).

Aislamiento inmovilizacin: en este caso se trata de estabilizar o solidificar

los contaminantes por mtodos fsicos o qumicos.

(III) - Por otra parte, el principio de remediacin funcionamiento determina tres tipos
distintos de tratamientos:

Tratamientos trmicos: Por medio de la accin del calor se logra la

volatilizacin (separacin), quema, descomposicin fusin (inmovilizacin) de
los contaminantes en un suelo.

Tratamientos fisicoqumicos: en base a las propiedades fsicas y/ qumicas

de los contaminantes del medio contaminado, se separa destruye, el
contaminante.

Tratamientos biolgicos (Biorremediacin): Esta metodologa utiliza el

metabolismo de organismos vivos (plantas, hongos, bacterias) para degradar
transformar los contaminantes a productos metablicos inocuos de menor
toxicidad.

1.8.1. Tecnologas de Remediacin Trmica

La mayora de estos mtodos pueden aplicarse in situ y ex situ. Producen vapores, residuos
slidos (cenizas) y, en ocasiones, residuos lquidos que deben ser tratados.
Si bien poseen la ventaja de ser procesos rpidos, tienen el inconveniente de ser los ms
costosos y en algunos casos destruyen el suelo.

Las tecnologas trmicas ms importantes son: Incineracin, Vitrificacin, Pirlisis y

Desorcin Trmica (Volke Seplveda & Velasco Trejo, 2002):

Incineracin:

Se utilizan altas temperaturas de operacin, que van desde los 870 a los 1200 C, para
lograr volatilizar y quemar compuestos orgnicos y halogenados, en presencia de oxgeno.
Puede llevarse a cabo in situ o ex situ.

Vitrificacin:

Como en el caso anterior, este proceso puede llevarse a cabo in situ o ex situ, y se realiza
mediante una corriente elctrica que funde los suelos contaminados, con temperaturas que
van de 1600 a 2000 C. Estabiliza la mayora de los contaminantes inorgnicos y destruye
los orgnicos. Con esta tecnologa se produce un material cristalino qumicamente estable
que no produce lixiviados, en el cual quedan incorporados los compuestos inorgnicos.
Durante el proceso, las altas temperaturas provocan la destruccin o remocin de los
materiales orgnicos (US EPA 2001).

Pirlisis:

Mediante este mtodo se produce la descomposicin qumica de materiales orgnicos

inducida por calor en ausencia de oxgeno. Se realiza a presin y a temperaturas de
operacin mayores a 430 C, en hornos y equipos similares a los utilizados para la
incineracin, pero se deben operar a temperaturas menores y en ausencia de aire.

Desorcin Trmica (DT):

La DT consiste en calentar el suelo contaminado por compuestos orgnicos hasta

temperaturas entre 90 y 540 C, con el fin de vaporizarlos y por consiguiente separarlos de
ste. Los contaminantes liberados son dirigidos hasta un sistema de tratamiento de gases,
con el uso de un acarreador de gases o un sistema de vaco. Es un proceso de separacin
fsica no destructivo.

1.8.2. Tecnologas de Remediacin Fisicoqumicas

La mayora de estas tecnologas se aplican in situ y se basan en el aprovechamiento de las

propiedades fsicas y/o qumicas de los contaminantes del material contaminado, para
destruir, separar contener la contaminacin. Entre ellas se encuentran:

Extraccin por Solventes:

Como su nombre lo indica, se disuelven los contaminantes utilizando solventes orgnicos y
as removerlos del suelo, a travs de la circulacin del solvente.

El lquido que resulta del lavado de suelo y de la extraccin por solventes, requiere de un
tratamiento posterior para remover destruir los contaminantes (Sellers, 1999; US EPA,
2001).

Extraccin de Vapores (EV):

Esta tecnologa, tambin conocida como ventilacin del suelo, vaporizacin y volatilizacin,
es una metodologa en la que se aplica vaco para inducir un flujo controlado y continuo de
aire, removiendo as contaminantes voltiles y semivoltiles del suelo. (Riser-Roberts 1998).

Inundacin del Suelo:

Se aplican al suelo o se inyectan en cuerpos de agua cercanos, para aumentar el nivel en la

zona contaminada, grandes cantidades de agua para favorecer el paso de los
contaminantes hacia el cuerpo de agua. sta es extrada y tratada en forma separada. Este
tratamiento puede llevarse a cabo con la incorporacin de algn aditivo.

Lavado de Suelos:

Los contaminantes son removidos mediante la circulacin de soluciones acuosas. El suelo

es realmente lavado y de esta manera se reduce el volumen del material contaminado, ya
que las partculas finas con el contaminante sorbido en ellas son extradas, quedando
retenidas en la solucin acuosa.

Remediacin Electrocintica (RE):

Esta tecnologa est en desarrollo. Aprovecha las propiedades conductivas del suelo, cuyo
objetivo es separar y extraer contaminantes orgnicos e inorgnicos (metales) de suelos,
lodos y sedimentos, con el uso de un campo elctrico que permite remover las especies
cargadas (iones). Implica la aplicacin de una corriente directa de baja intensidad entre un
electrodo positivo y uno negativo (US EPA, 2001).

Solidificacin/Estabilizacin (S/E):

Es una tcnica en el que el suelo contaminado es mezclado con aditivos para inmovilizar los
contaminantes, con el objeto de disminuir eliminar la lixiviacin. La solidificacin se refiere
a las tcnicas que encapsulan (atrapan fsicamente) al contaminante formando un material
slido.

La estabilizacin limita la solubilidad o movilidad del contaminante, generalmente por la

adicin de materiales, como cemento Portland, cal o polmeros, que aseguren que los
constituyentes peligrosos se mantengan en su forma menos mvil o txica. La S/E puede
realizarse tanto in situ como ex situ.

Los mtodos mencionados tiene la ventaja de necesitar equipos accesibles y pueden

utilizarse para un amplio rango de contaminantes, tanto orgnicos como inorgnicos, pero
tienen el incoveniente de que generan residuos que a su vez necesitan tratamiento y
disposicin final lo que encarece el proceso.

Adems los solventes utilizados pueden aumentar la movilidad del contaminante

1.8.3. Tecnologas de Remediacin Biolgicas (Biorremediacin)

Cmo ya se mencion la biorremediacin involucra tratamientos que utilizan organismos

vivos (plantas, hongos, bacterias, etc.) para degradar transformar, compuestos orgnicos
txicos, a productos metablicos inocuos de menor toxicidad (Van Deuren et al., 1997).

En esta tecnologa se pueden emplear organismos autctonos, propios del sitio

contaminado exgenos, de otros sitios, tambin puede realizarse in situ o ex situ y en
condiciones aerobias (en presencia de oxgeno) anaerobias (sin oxgeno).

La degradacin de contaminantes orgnicos, por parte de los microorganismos, constituye

un proceso que se produce en forma natural en el ambiente y que depende de las
actividades catablicas de stos, los cuales utilizan los contaminantes como fuente de
carbono y energa para su subsistencia. Sin embargo dicho proceso se encuentra, la
mayora de las veces, limitado por factores qumicos, fsicos y medioambientales (Eweis et
al., 1999; Volke Seplveda, 2002).

El grado de biodegradacin depende principalmente de la toxicidad y de la concentracin

inicial del contaminante, su biodegradabilidad, las propiedades del suelo contaminado y el
sistema de tratamiento que se seleccione. La eficacia de las medidas biocorrectivas es
limitada en lugares con una alta concentracin de metales, compuestos orgnicos altamente
clorados o sales inorgnicas, por ser, stos compuestos, txicos para los microorganismos
si se encuentran en grandes cantidades.

An cuando no todos los compuestos orgnicos son susceptibles a la biodegradacin, los

procesos de biorremediacin se han utilizado con xito para el tratamiento de suelos, lodos
y sedimentos contaminados con hidrocarburos del petrleo (HTPs); solventes (Benceno y
Tolueno); explosivos (TNT), clorofenoles (Pentaclorofenol-PCP); plaguicidas (cido 2,4-
Diclorofenoactico: 2,4-D); conservadores de madera (creosota) e Hidrocarburos Aromticos
Policclicos (HAPs), entre otros. (Van Deuren et al., 1997; Semple et al., 2001).

Asimismo, la biorremediacin de suelos ha demostrado ser una tecnologa eficaz para el

tratamiento de la contaminacin por petrleo, debido a que gran parte de los componentes
del crudo y sus productos refinados son biodegradables (Van Hamme et al., 2003).
En la biorremediacin realizada in situ, se debe proporcionar a los microorganismos las
condiciones ambientales ptimas para que desarrollen a partir del contaminante. Una de las
maneras de lograr esto es con el bioventeo (aporte de aire y oxgeno), bioestimulacin
(aporte de nutrientes), bioaumentacin (aporte de microorganismos) adems del control de
humedad temperatura y pH (US EPA, 2001).

Los procesos ex situ incluyen: procesos de biodegradacin en fase de lodos (biorreactores),

donde el suelo contaminado es mezclado con agua, microorganismos y nutrientes, y
procesos de biodegradacin en fase slida, en el que el suelo se coloca en una celda de
tratamiento (composteo) sobre membranas impermeables (biolabranza Landfarming),
con el agregado de agua y nutrientes (US EPA, 2001).

Otra tecnologa de biorremediacin y que cada vez tiene mayor importancia es la

Fitorremediacin, que es un proceso que utiliza plantas superiores para remover, transferir,
estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes (orgnicos e inorgnicos) en suelos, lodos
y sedimentos, y puede aplicarse tanto en forma in situ como ex situ (Hutchinson, 2001).

En general, el trmino biorremediacin, es utilizado para designar los tratamientos que

utilizan organismos microscpicos (principalmente bacterias y hongos), en la recuperacin
de ambientes contaminados.

En la actualidad, esta metodologa es de uso preferencial debido a que presenta ventajas

tales como bajo costo, fcil implementacin, efectividad en la remocin de contaminantes
(los cuales pueden ser eliminados o transformados en productos inocuos), casi no se
necesita tratamiento posterior y, lo que es muy importante, es mnimo el impacto en el
ecosistema involucrado.

No obstante, en el momento de pensar en la aplicacin de este tipo de tratamientos se

deben tener en cuenta una serie de factores que pueden constituirse en desventajas, tales
como:

El tiempo requerido para completar la degradacin es mayor que en los

tratamientos fsico qumicos.

El contaminante debe ser biodegradable.

No siempre se puede predecir la efectividad.

El xito del proceso depende de la destreza para mantener las condiciones

ptimas para el crecimiento microbiano.

Se debe verificar que el contaminante no sea txico para los microorganismos y que el suelo
sea apto para los mismos.
1.8.3.1. El proceso de Biorremediacin

Numerosos microorganismos indgenas autctonos, presentes en el suelo y el agua

subterrnea, poseen la capacidad metablica de transformar diversos compuestos
orgnicos txicos, y en particular hidrocarburos, vertidos al ambiente. En los ambientes
contaminados existen en abundancia especies con stas capacidades metablicas
especficas, debido a la adaptacin de la microflora presente al contaminante (Marchal et al.,
2003).

El trmino "biodegradacin" puede referirse a la completa mineralizacin de los

contaminantes orgnicos, obteniendo como producto final Dixido de Carbono (CO2), agua,
compuestos inorgnicos y componentes celulares, a la transformacin parcial de
contaminantes orgnicos en otros compuestos de menor, igual, mayor toxicidad para el
ecosistema involucrado, as como con menor mayor movilidad en el ambiente (US E.P.A,
1994).

En ambos procesos los microorganismos se desarrollan sobre la sustancia contaminante,

obteniendo carbono y energa para su crecimiento y reproduccin.

La biodegradacin es fundamentalmente un proceso metablico de transferencia de

electrones. La energa necesaria para el crecimiento microbiano se obtiene durante el
proceso de oxidacin de materiales reducidos, donde las enzimas microbianas catalizan la
transferencia de los electrones. Cuando la materia orgnica es utilizada como fuente de
energa (dador de electrones) y un compuesto exgeno (extracelular) es utilizado como
aceptor terminal de electrones, el proceso metablico es denominado respiracin
microbiana. Si el oxgeno (O2) es utilizado como aceptor de electrones, se produce
respiracin aerobia; cuando se utiliza otro aceptor de electrones (por ejemplo, Fe3+, NO2-,
NO-3 SO4 2- ), el proceso de respiracin se producir en forma anaerobia.

Entonces, la biodegradacin de los contaminantes orgnicos puede darse en forma

aerobia en forma anaerobia, y el compuesto orgnico a degradar acta como dador de
electrones substrato orgnico.

La respiracin degradacin aerobia soporta un rango ms amplio de reacciones, en las

que el oxgeno molecular (O2) es incorporado en las molculas por enzimas oxigenasas y es
llevada a cabo por microorganismos aerobios estrictos.

La respiracin degradacin anaerobia es realizada por microorganismos anaerobios

estrictos (no sobreviven en presencia de oxgeno) y anaerobios facultativos
(microorganismos capaces de crecer tanto en presencia como en ausencia de oxgeno).

El oxgeno es, generalmente, el mejor aceptor de electrones, es decir, el que produce la

mayor energa libre en una reaccin completa. En consecuencia, para un mismo substrato
orgnico, los microorganismos que emplean el oxgeno como agente oxidante pueden
generar mayor energa que aquellos que emplean nitratos, sulfatos otros aceptores de
electrones alternativos, logrando de esta forma crecer a mayor velocidad, lo que implica un
mayor consumo del sustrato. Por lo tanto la biodegradacin aerobia es tpicamente ms
eficiente que la biodegradacin de contaminantes orgnicos en forma anaerobia (Eweis et
al, 1999; US EPA, 1996, 1994).

El proceso de biodegradacin aerobia puede esquematizarse de la siguiente manera:

Substrato orgnico + O2 = biomasa + CO2 + H2O + compuestos inorgnicos

As, el substrato orgnico es oxidado (adicin de oxgeno), y el O2 molecular es reducido

(adicin de electrones e hidrgeno) a agua (H2O). En este caso, el substrato orgnico sirve
como fuente de energa (electrones) y como fuente de carbono para la biosntesis de
componentes celulares (biomasa).

Estrategias involucradas en la biodegradacin: Cohortes microbianos y Cometabolismo

La biodegradacin de componentes orgnicos es catalizada por enzimas producidas por los

microorganismos. Las enzimas son generalmente especficas para cada sustancia a
degradar, es por ello, que para una mezcla compleja de compuestos, como son el petrleo
sus derivados, ser necesaria una gran variedad de enzimas para biodegradar totalmente
los componentes orgnicos. De esta forma, la biodegradacin de un compuesto es
tpicamente un proceso gradual, que implica la participacin de varias especies de
microorganismos, generalmente organizados en asociaciones, consorcios cohortes
microbianos (US EPA, 1994).

La cooperacin asociacin entre especies y el cometabolismo, son los principales

mecanismos que explican la demostrada eficiencia de la microflora presente en ambientes
poludos, para la eliminacin de los contaminantes (Marchal et al., 2003).

Una asociacin consiste en varias poblaciones microbianas viviendo en estrecha proximidad

e interactuando entre s. La asociacin implica, generalmente, una interaccin positiva,
donde un grupo de microorganismos se beneficia de las acciones del otro, y de esta forma
varias especies estn involucradas en cada etapa de la mineralizacin conversin de un
compuesto. Las especies que mejor se adapten a un ambiente en particular, determinado
principalmente por la presencia de una fuente de carbono y energa utilizable, las
condiciones de humedad, temperatura y pH, son las que predominarn (Eweis et al., 1999).

El proceso denominado cometabolismo cooxidacin consiste en la transformacin de

aquellos compuestos orgnicos, que no pueden ser utilizados como fuente de carbono
energa por los microorganismos, pero pueden ser potencialmente degradados por enzimas
generadas por los mismos, para metabolizar otras sustancias. Estos compuestos, de los
cuales s pueden obtener energa nutrientes para su subsistencia, se denominan
cosustratos (Atlas, 1997; US EPA, 1994).
El uso del trmino cometabolismo se encuentra en discusin en el mbito cientfico, ya que
algunos autores utilizan este trmino slo si el cosustrato se encuentra presente durante la
metabolizacin del compuesto secundario (aquel que no aporta nutrientes y energa para el
crecimiento). Sin embargo, el trmino cometabolismo, ha sido el ms ampliamente
empleado para describir el proceso donde un compuesto es transformado fortuitamente, sin
ser utilizado como sustrato para el crecimiento como fuente de energa.

Generalmente, los productos del cometabolismo son metabolitos subproductos

parcialmente oxidados transformados, que pueden ser utilizados por otros
microorganismos y de esta forma continuar hasta la degradacin completa del compuesto
contaminante.

El cometabolismo puede suponer un requisito previo a la mineralizacin de muchos

compuestos recalcitrantes, tales como los Hidrocarburos Aromticos Policclicos (PAHs)
(Atlas, 1997; US E.P.A, 1994).

1.8.3.2. Factores que inciden en la biorremediacin de suelos

contaminados

Los factores que afectan al rendimiento de la biorrecuperacin pueden clasificarse en tres

grandes grupos:

Medioambientales, Fisicoqumicos y Biolgicos (propiedades del contaminante y

caractersticas del suelo).

Estos factores pueden ser modificados, en algn grado, por el hombre, con el objeto de
acelerar y/ reformar estos procesos naturales, optimizndolos para conseguir mejores
resultados en el menor tiempo posible.

Factores Medioambientales:

Los factores medioambientales son aquellos que afectan directamente el crecimiento y

actividad de los organismos que llevan a cabo la biodegradacin. Dichos factores
determinan la efectividad y velocidad de la degradacin, y pueden limitar el crecimiento
microbiano y la disponibilidad de los contaminantes en el suelo (Volke Seplveda, 2002).

Entre stos, los que revisten mayor importancia en el proceso de biodegradacin son:

o Temperatura
o pH del suelo
o Humedad del suelo
o Disponibilidad de oxigeno
o Disponibilidad de nutrientes.
Temperatura:

La temperatura del suelo afecta considerablemente la actividad microbiana y las tasas de

biodegradacin. La mayora de las especies bacterianas presentes en los suelos son
clasificadas como mesfilas, las cuales se desarrollan entre 15 C y 45 C, teniendo un
intervalo de crecimiento ptimo entre 25 C y 35 C (Madigan et al., 1999).Por regla general,
se considera que aproximadamente por cada 10 C de incremento en la temperatura, la tasa
de biotransformacin se duplica (Eweis et al., 1999; Van Deuren et al., 1997). Ello se
atribuye a un aumento en la solubilidad del contaminante y a una disminucin de los
compuestos adsorbidos en la matriz del suelo, conforme aumenta la temperatura. De esta
forma, se maximiza la biodisponibilidad del compuesto contaminante, resultando en un
crecimiento en la tasa de biodegradacin.

Regularmente, a temperaturas mayores a 40C decrece la biotransformacin, debido a la

desnaturalizacin de las protenas y enzimas microbianas; a temperaturas aproximadas a 0
C, se detiene esencialmente la biodegradacin (Sims et al., 1990).

Es necesario considerar que el clima de la regin norpatagnica presenta temperaturas

promedio menores a las reportadas como ptimas, durante perodos de tiempo prolongados,
por lo cual los tratamientos biolgicos realizados a campo pueden extenderse ms de lo
esperado, debido a las fluctuaciones de la temperatura ambiente.

pH del suelo:

La presencia de contaminantes extremadamente cidos alcalinos, pueden llevar el pH del

suelo a valores inhibitorios para el desarrollo microbiano. El crecimiento de muchos
microorganismos, particularmente del suelo, es mximo a pH aproximadamente neutro, es
decir en un intervalo de 6.5 a 8. Por lo tanto, condiciones altamente cidas alcalinas
generalmente inhiben las funciones microbiolgicas.

El pH del suelo afecta tambin la solubilidad del fsforo, un nutriente importante para los
microorganismos, y el transporte de metales peligrosos en el suelo, los cuales se
encuentran presentes en muchos contaminantes. La solubilidad del fsforo se maximiza a
niveles de pH de 6.5 y el transporte de metales se minimiza a valores de pH superiores a 6
(Eweis et al., 1999).

Humedad del suelo:

El agua presente y el Potencial de Matriz del suelo revisten una gran importancia en el
proceso de biorremediacin, ya que regulan la actividad microbiana.

El agua es el mayor constituyente del protoplasma bacteriano, por lo tanto su suministro es

esencial para el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. En adicin, es el medio de
transporte por el que los compuestos orgnicos y nutrientes se difunden al interior de la
clula, y los productos metablicos emigran al exterior.
El Potencial de Matriz es la energa requerida para superar las fuerzas capilares y
adsorbentes (originadas en la interfase slido - lquido) y extraer el agua de los poros del
suelo. Segn sea menor mayor el contenido de agua, la energa destinada por los
microorganismos para este proceso, ser mayor menor respectivamente (Eweis et al.,
1999; US E.P.A, 1996).

La presencia de agua determina muchas propiedades del suelo, afectando el estado de

aireacin (difusin del oxgeno), la naturaleza y cantidad de materiales solubles, y el pH. La
aireacin y humedad se encuentran estrechamente relacionadas ya que el espacio poroso
del suelo no llenado por agua, es llenado por gas; un exceso de agua origina un suelo
saturado, inhibiendo as el intercambio de gases y la difusin del oxgeno (la solubilidad del
oxgeno en el agua es muy baja) a travs del perfil edfico. De esta forma, pueden
generarse zonas de anaerobiosis y, como consecuencia, la eliminacin de especies
bacterianas aerobias, principales responsables de la biodegradacin.

Generalmente, la actividad microbiana, medida como tasa de biodegradacin, es ptima a

niveles de humedad comprendidos entre el 60 y 80% de la capacidad de retencin de agua
del suelo capacidad de campo[1] (US E.P.A, 1996).

Disponibilidad de Oxgeno:

El oxgeno (O2) puede constituir uno de los factores limitantes para el desarrollo del proceso
de biodegradacin en suelos, sedimentos y acuferos.

La presencia del oxgeno como aceptor terminal de electrones es esencial en el

metabolismo microbiano aerbico. En particular, como ya se mencion anteriormente, los
pasos iniciales en la biodegradacin de hidrocarburos, implican generalmente, la oxidacin
del sustrato mediante oxigenacin (ganancia de oxgeno), lo cual supone una gran demanda
de este elemento (Atlas, 1997).

Las concentracin de oxgeno en el suelo, puede ser aumentada labrando, drenando y/

volteando el suelo no saturado, para incorporar el oxgeno atmosfrico en el sistema
(Kincannon, 1972).

En prcticas de biotratamiento realizadas en forma ex situ (compostaje, biopilas, predios de

tratamiento), y en sistemas de tratamiento in situ, el oxgeno puede ser incorporado
mediante dichos procedimientos. El uso de sistemas de bioventeo, donde el aire es forzado
a ingresar en el suelo, llevando el oxgeno a los microorganismos, constituye otra opcin
pero a un mayor costo (US E.P.A, 1996).

Disponibilidad de Nutrientes:

El metabolismo microbiano est orientado hacia la reproduccin de los organismos. Ello

requiere que los componentes qumicos de la clula se encuentren disponibles para la
asimilacin y sntesis del nuevo material celular. Los nutrientes necesarios son asimilados
slo si se encuentran en determinados estados elementales, es por ello que la cantidad y el
estado de los mismos, es muy importante en el diseo y operacin de los tratamientos
biolgicos de suelos y aguas contaminados.

El carbono, el nitrgeno y el fsforo son los nutrientes de mayor importancia. stos pueden
limitar la velocidad de degradacin microbiana, si no se encuentran en concentraciones
suficientes y en un estado asimilable por los microorganismos. (US EPA, 1994; Atlas, 1997).

Los contaminantes orgnicos biodegradables proveen una fuente de carbono. El Carbono

total es medido como Carbono Orgnico Total (TOC: En Ingls: Total Organic Carbon), y
sta es una medida del sustrato disponible para el crecimiento microbiano. Todos los
compuestos orgnicos presentes en el suelo estn incluidos en el TOC.

El nitrgeno puede ser asimilado por la flora microbiana en forma de nitrgeno orgnico,
amonaco (NH3), nitritos (NO2) y nitratos (NO3), y el fsforo en su forma soluble
reactiva (o-PO4).

Numerosos estudios y experiencias han demostrado la importancia de la presencia de stos

nutrientes en los procesos de biodegradacin de derrames de petrleo (Atlas & Bartha,
1972; Bartha & Atlas, 1973; Leahy & Colwell, 1990).

Se considera que una relacin C:N:P (Carbono/ Nitrgeno/ Fsforo) = 100:10:1 es ptima
para el proceso de biodegradacin de contaminantes orgnicos (US EPA, 1994), siempre
que los nutrientes se encuentren en forma disponible para su asimilacin.

Los suelos de la Patagonia presentan naturalmente un marcado dficit de nitrgeno y de

fsforo, y las comunidades bacterianas presentes en estos sitios se encuentran altamente
adaptadas a estas condiciones ambientales. La incorporacin de nutrientes en altas
concentraciones puede provocar un efecto adverso al deseado, provocando una fase de
latencia retardo en el crecimiento microbiano.

Se han realizado trabajos en suelos patagnicos contaminados por hidrocarburos del

petrleo (Luque et al., 1996; Pucci et al., 2003), con el objeto de determinar la cantidad
ptima de nutrientes para la biorremediacin, llegando a la conclusin de que una relacin
C:N:P = 100:1:0.1, sera efectiva en este tipo de suelos.

Otros nutrientes como el potasio, el calcio, el magnesio y el azufre, se encuentran

habitualmente disponibles en forma natural en la mayora de los suelos. Sin embargo, altas
concentraciones de calcio y de magnesio pueden precipitar los fosfatos, y reducir la cantidad
disponible para el metabolismo microbiano. En la Tabla III se sintetizan los parmetros
ambientales crticos para la actividad microbiana en el suelo:

Factores Fisicoqumicos:
Entre los factores fisicoqumicos se incluyen aquellas propiedades tanto del suelo como del
contaminante, que pueden afectar la biodegradacin.

El xito de la biorrecuperacin de un contaminante orgnico en el suelo, depende de que

ste sea biodegradable, es decir que la flora microbiana presente posea las rutas
metablicas adecuadas, y de que se encuentre biodisponible accesible al organismo.

Los factores fisicoqumicos que determinan la biodegradabilidad del contaminante y su

biodisponibilidad, pueden ser divididos en dos grandes grupos:

Factores relativos al sustrato

Factores relativos al suelo

Factores relativos al sustrato:

La composicin y estructura qumica del contaminante (tipo de compuesto, elementos

qumicos constituyentes, grado de ramificacin, grado de insaturacin, naturaleza y efecto
de los sustituyentes, peso molecular, etc.), la concentracin y sus propiedades fsicas como:
solubilidad, viscosidad, volatilidad y densidad, determinarn la interaccin del contaminante
con el suelo y con la comunidad microbiana presente.

En suelos contaminados por vertidos de productos del petrleo, la identificacin y evaluacin

de las propiedades fsicas y qumicas del residuo es esencial para llevar a cabo la
remediacin del sitio afectado.

La biodegradabilidad de un compuesto depende de su solubilidad. En general, al aumentar

la solubilidad de un contaminante, la disponibilidad para los microorganismos aumenta.
Como ya se describi anteriormente, los microorganismos toman el carbono orgnico, los
nutrientes inorgnicos y los aceptores de electrones necesarios para el crecimiento, de la
fase lquida, as, si el contaminante se encuentra en esta fase, ser incorporado con mayor
facilidad en el metabolismo microbiano. No obstante, un microorganismo puede tener la
capacidad de asimilar un compuesto poco soluble en agua, mediante el contacto directo con
gotas del contaminante ms grandes que la clula, con gotas de ste suspendidas en la
fase acuosa (Reddy et al., 1982; Singer & Finnerty, 1984).

Volatilidad:

La volatilizacin es el proceso en el cual un contaminante se difunde desde la fase slida

liquida a la fase gaseosa. La velocidad de este proceso en el suelo es funcin de su
concentracin, presin de vapor y solubilidad.

La humedad, temperatura, porosidad y el contenido de materia orgnica y arcillas del suelo,

tambin influirn en la volatilizacin del compuesto de lo contrario, en su retencin en las
fases slida lquida del suelo (Eweis et al., 1999; Mc Millen et al., 2001).
Los hidrocarburos del petrleo ms livianos, como las gasolinas, tienden a ser mayormente
removidos del suelo por volatilizacin y, en menor grado, por biodegradacin. Los productos
medios del petrleo, como el kerosene y el gas oil, contienen menores porcentajes de
constituyentes voltiles, por lo cual la remocin por biodegradacin de estas fracciones,
puede suponerse ms significativa que por volatilizacin. En el caso de los componentes
ms pesados no voltiles, como los aceites lubricantes, la biodegradacin es uno de los
principales mecanismos de eliminacin de los mismos desde la matriz del suelo, siendo la
volatilizacin insignificante en su sustraccin (Maila & Cloete, 2005).

Densidad:

La densidad de los hidrocarburos es expresada convencionalmente en Grados API

(American Petroleum Institute). Los Grados API son una medida de la densidad especfica
del hidrocarburo, medida a 60 F (15C). Como punto de referencia, el agua tiene 10 API.

La composicin de los distintos tipos de crudo es reflejada en su valor de Grados API. A

modo de ejemplo, los crudos pesados, de menos de 20 API, tienen mayores
concentraciones de asfaltenos y resinas que aquellos crudos ms livianos, de densidades
mayores a 20 API. Los Grados API de los productos de refinacin del crudo varan
dependiendo del producto, partiendo de 15 para el Fuel Oil N 6 hasta 62 para las
Gasolinas.

Tomando la densidad especifica como medida, el petrleo crudo es menos denso que el
agua, con una densidad entre 0.85 a 0.98.

La migracin de un compuesto en un medio depende de su densidad y viscosidad. La

densidad determina la tendencia de la fase inmiscible del contaminante, a flotar
sumergirse en la superficie del suelo, y por consiguiente la zona donde ste quedar
concentrado (Volke Seplveda, 2002).

Viscosidad:

Este parmetro es una medida de la resistencia interna de una sustancia a fluir. Los
materiales altamente viscosos no fluyen rpidamente, mientras que los ms livianos y
menos viscosos, como el agua, pueden fluir fcilmente, atrados por la gravedad. La
viscosidad de un fluido tiende a decrecer conforme aumenta la temperatura a la que est
expuesto.

La viscosidad constituye una propiedad significativa del contaminante, ya que determina, en

parte, su percolacin en el suelo.

Factores Relativos al Suelo:

Tamao de partcula. Los suelos se clasifican en funcin de su tamao de partcula, siendo

sus tres principales componentes las arcillas (< 0.002 mm), los sedimentos (0.002 - 0.05
mm) y las arenas (0.05 - 2.0 mm). Es importante considerar esta propiedad, ya que la
relacin rea/volumen de los diferentes tipos de partcula, tienen un impacto directo sobre
las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del suelo, y por consiguiente en las
tecnologas de remediacin. En general, los materiales no consolidados (arenas y gravas
finas) son ms fciles de tratar (Van Deuren et al. 1997, Eweis et al. 1998).

Heterogeneidad. Un suelo demasiado heterogneo puede impedir el uso de tecnologas in

situ que dependan del flujo de un fluido. Pueden crearse canales indeseables de fluidos en
las capas arenosas y arcillosas, dando como resultado tratamientos inconsistentes (Van
Deuren et al. 1997).

Densidad aparente. Es el peso del suelo por unidad de volumen, incluyendo agua y
espacios. Es importante considerar que el suelo est compuesto por slidos y espacios
llenos de agua y/o aire, y que su densidad depender de su humedad. Es til para realizar
clculos para el transporte del material (Van Deuren et al. 1997).

Permeabilidad. Se refiere a la facilidad o dificultad con la que un lquido puede fluir a travs
de un medio permeable. La permeabilidad de un suelo es uno de los factores que controla la
efectividad de tecnologas in situ (Sellers 1999). En general, una baja permeabilidad en el
suelo disminuye la efectividad de la mayora de las tecnologas de remediacin.

Factores Biolgicos:

Para que una tcnica de biorremediacin opere eficientemente, deben cumplirse varias
condiciones:

El residuo debe ser susceptible de biodegradarse biolgicamente, y presentarse

en una forma fsica que sea susceptible a los microorganismos.

Deben estar disponibles los microorganismos apropiados.

Las condiciones ambientales (como el pH, la temperatura y el nivel de oxgeno)

deben ser las apropiadas.

(Braid, 2001)

1.9. Mtodos Analticos para la Determinacin de

Hidrocarburos
Debido a la diversidad de compuestos que forman el petrleo, generalmente no es prctico
analizarlos a cada uno individualmente, siendo til medir la cantidad total de hidrocarburos
que se encuentran en una muestra particular de suelo, agua o aire. A este grupo de
compuestos que forman el petrleo se lo denomina hidrocarburos totales del petrleo (HTP
o TPH).
Los HTP son definidos por el mtodo analtico que se utiliza para determinarlos. Las
tcnicas convencionales cuantifican solamente aquellos hidrocarburos que son extrados de
la muestra y debido a que la extraccin de hidrocarburos vara de una tcnica a otra, la
misma muestra analizada por distintos mtodos, producirn distintos resultados (API, 2001).

Existen diversas tcnicas analticas disponibles que miden concentraciones de HTP en el

ambiente. Las tcnicas varan en la forma en que los hidrocarburos son extrados,
purificados, y detectados, cada uno mide un subgrupo de derivados de hidrocarburos
presentes en las muestras. La definicin de los HTP depende del mtodo analtico utilizado
(TPHCWG; 1998).

Mtodo 418.1 U.S. E.P.A.: consiste en una extraccin con solvente seguido de un
tratamiento en columna de slica gel y luego la cuantificacin por espectroscopia
infrarroja.

Mtodo 413.1 para aceites y grasas: es un mtodo gravimtrico que consiste en una
extraccin con solvente, evaporacin del solvente, y determinacin del peso.

Mtodo 8015M para Compuestos Orgnicos del Rango Diesel (DRO): es una
extraccin con solvente seguida de una determinacin por cromatografa gaseosa
(GC).

Mtodo 8015M para Compuestos Orgnicos del Rango de las Gasolinas (GRO): es
una extraccin con solvente seguida de una determinacin por cromatografa
gaseosa.

1.9.1. Anlisis Qumicos de Hidrocarburos Totales por Espectroscopia

Infrarroja.

Se define Hidrocarburos Totales (HTP) analizados por espectroscopia IR, a cualquier

hidrocarburo extractable por un solvente, el cual no es removido por la slica gel y que puede
ser detectado por un espectrofotmetro de radiacin infrarroja. La principal ventaja del
mtodo es que resulta simple, rpido y comparativamente econmico. Las desventajas son
la menor especificidad, comparndolo con GC, y su incapacidad de proveer informacin en
la identificacin de los hidrocarburos y su riesgo potencial.

Cuando una molcula absorbe radiacin IR aumenta la frecuencia de vibracin de la misma.

La espectroscopa infrarroja determina la energa absorbida por las molculas en esta regin
del espectro electromagntico. Los distintos grupos funcionales y tipos de enlaces tienen
distintas frecuencias e intensidades de absorcin. Los mtodos para la medicin de HTP
miden la absorcin de los enlaces C-H. La mayora de los mtodos miden la absorcin a una
nica frecuencia (generalmente 2930cm-1) que corresponde a los grupos alifticos CH2.
Otros mtodos usan ms de una frecuencia, por ejemplo 2960cm-1 para el grupo CH3 y de
3000 a 3100cm-1 para los enlaces C-H de los compuestos aromticos (Willard et al, 1991).

La espectroscopa IR puede medir cualquier compuesto que contiene grupos alqulicos en

su molcula. Cuando se utiliza esta nica frecuencia, se mide cadenas parafnicas,
cicloalcanos, alquenos, aromticos sustituidos, hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs)
si tienen algn grupo alquilo, y molculas oxigenadas (teres, alcoholes). Los mtodos
basados en una sola frecuencia no son adecuadas para la medicin de benceno o naftaleno
porque no contienen grupos alquilos.

La extraccin se realiza con un solvente adecuado que no contenga enlaces C-H.

La tcnica que se utiliza para la extraccin es la recomendada en la norma 5520 E de los

mtodos normalizados utilizados generalmente para lodos. La extraccin de hidrocarburos
se obtiene utilizando CCl4 como solvente de extraccin. Posteriormente se trata la muestra
con silicagel para adsorber los compuestos polares que puedan interferir con la
determinacin de hidrocarburos totales de petrleo.

De acuerdo al mtodo 418.1 de la Environmental Protection Agency la cuantificacin se lleva

a cabo por espectroscopia infrarroja. El espectrofotmetro IR se utiliza para determinar la
absorbancia de los extractos en la regin cercana a 2930 cm.-1. Estndares especficos
para hidrocarburos totales de petrleo (HTP) se emplean para construir la curva de
calibracin del equipo. Los estndares se preparan a partir de una solucin stock de
hexadecano, isooctano y colorobenceno en proporciones definidas.

Debido a que el mtodo de cuantificacin del analito es sensible a hidrocarburos que derivan
de animales y vegetales as como a otros compuestos polares, es necesario eliminar tales
interferentes, para preservar en el extracto los hidrocarburos petrognicos. Este
procedimiento de purificacin del extracto, permite diferenciar las grasas y aceites de origen
animal y vegetal, de los hidrocarburos totales de petrleo. La eliminacin de interferentes
puede realizarse utilizando columnas con material adsorbente a travs de la cual se hace
pasar el extracto o se puede adicionar al extracto una sustancia adsorbente en forma de
pequeas partculas y luego removerla a travs del filtrado. Existe una variedad de tcnicas
que utilizan entre otros: almina, slica gel, geles que funcionan por el principio de exclusin
por tamao, cobre y mercurio (para la remocin de sulfuro).

NOTAS:

[1]
La Capacidad de Campo es un trmino frecuentemente empleado, asociado a la
humedad de un suelo, que describe la capacidad de un suelo para retener agua,
una vez que ha cesado el drenaje interno debido a la fuerza de gravedad
OBJETIVOS

1.1. Objetivos Generales

Participar en las distintas etapas de un trabajo de investigacin: bsqueda
bibliogrfica, diseo experimental, puesta a punto de tcnicas
analticas, interpretacin de resultados y redaccin de tesis.

Integrar las distintas disciplinas que conforman la Lic. en Saneamiento y

Proteccin Ambiental.

1.2. Objetivos Especficos

Determinar los niveles de hidrocarburos totales en suelos contaminados
artificialmente a lo largo de la experiencia.

Estudiar el comportamiento de la microbiota conformada por bacterias

hetertrofas totales a lo largo del tiempo.

Determinar la factibilidad del uso del agua residual tratada para estimular
los procesos de biodegradacin de hidrocarburos en suelos.

Comparar dos tratamientos de Biorremediacin de suelos en los que se

utiliza distintos mtodos de estimulacin del proceso.

FUNDAMENTACIN

La actividad hidrocarburfera ha producido y produce alteraciones en el suelo por la

ocurrencia de derrames de petrleo y derivados, tanto en forma accidental como por malas
prcticas operativas desarrolladas antiguamente. Como consecuencia de ello, se afectan las
propiedades fsicas y fisicoqumicas del suelo producindose la degradacin del mismo.

Las polticas ambientales actuales establecen un uso apropiado de los recursos naturales y
marcan la tendencia a la proteccin y recuperacin de los ambientes degradados como
resultado de la intervencin antrpica; con el fin de lograr la sustentabilidad de aquellas
actividades econmicas donde el ambiente se vea comprometido.

El desarrollo y aplicacin de tecnologas para la restauracin de ambientes degradados en

el nivel internacional ha sido considerable, sin embargo en nuestro pas el avance cientfico
en la temtica ambiental se encuentra en una etapa inicial. Una estrategia adecuada para
minimizar la contaminacin es la disminucin de la reactividad y peligrosidad del
contaminante. Existen diversas tcnicas destinadas a la rehabilitacin de ambientes
comprometidos, denominadas en su conjunto Tcnicas de Remediacin. Mediante el uso y
aplicacin de estas tecnologas es posible la restauracin recuperacin, es decir el retorno
a las condiciones previas a la contaminacin , al menos similares, de suelos y cuerpos de
agua subterrneos y superficiales, para su posterior reutilizacin y aprovechamiento

Es por ello que la investigacin para la optimizacin de mtodos de remediacin y su

adaptacin a las condiciones locales, es de extrema importancia y constituye un aporte al
progreso del conocimiento y la investigacin en el mbito nacional y regional.

HIPTESIS

Los microorganismos pueden degradar los hidrocarburos de suelos contaminados, utilizando

los nutrientes inorgnicos aportados por las aguas residuales tratadas

Materiales y Mtodos

1.10. Caractersticas del rea

El rea se encuentra prxima a la barda que se ubica paralela al Ro Neuqun,
presenta una superficie bastante quebrada, con pendientes cortas pero pronunciadas,
es una de las pocas reas relativamente llanas que se pueden encontrar en el
territorio. Presenta algunos cauces temporarios con gran concentracin de sales. Las
precipitaciones caractersticas de la zona son de corta duracin pero torrenciales, en
una sola lluvia puede completarse la media de precipitaciones esperada para ese mes
del ao, la cada del agua de lluvia modifica el relieve con regularidad arrastrando el
material erosionable de las bardas.

1.10.1.Caractersticas climticas

El aire que ingresa a la zona desde el Ocano Pacfico descarga toda su humedad al
pasar por la Cordillera de los Andes. No llegan vientos desde el Ocano Atlntico.
Durante el verano la regin presenta una temperatura media es de 25 C, mientras
que en invierno la media puede variar entre 4 y 6 C. Tambin pueden presentarse
algunas heladas.

Las precipitaciones son escasas, no superan los 200 mm. anuales, las altas
temperaturas y los vientos carentes de humedad evaporan el agua y contribuyen a la
aridez de la regin (Prez, D. R: Navarro, M. C. 2005).
 A pesar de su situacin dentro de un oasis es una regin bastante desrtica, tiene un
clima estival netamente desrtico, es decir caluroso y seco, atenuado por la gran
amplitud trmica que hace descender la temperatura por las noches. La diferencia
entre la temperatura del mes ms caliente y la del ms fro se eleva a 17.5 C. Los
vientos promedio son de 18 km/h en diciembre y de 9 km/h en julio. La temperatura
media del mes de enero - el mes ms clido- se ubica en los 23.2 C y en el mes ms
fro, julio, es de 5,7 C. La Tabla N 2 presenta los datos caractersticos el al regin en
estudio.

1.10.2.Condiciones climticas del rea.

Condicin climtica Medicin

Temperatura media anual 14 C
Amplitud media anual 16C
Temperatura mxima anual 20-23C
Perodo libre de heladas
150-180
(das)
Lluvias (mm) 130
Dficit hdrico anual 500>=600
Exceso anual de agua 0
Clima rido
Rgimen de humedad del
Ardico
suelo
Rgimen de temperatura Trmico
del suelo msico
Vegetacin Estepa
arbustiva

1.10.3.Caractersticas del Sitio Seleccionado

Para la realizacin de esta experiencia se trabaj con suelos provenientes de la

provincia de Neuqun, representativos de la regin. Se seleccion este sitio porque se
encuentra dentro de los lmites de la ciudad y en este lugar no se registraron derrames
de petrleo o sus derivados, tampoco se ha desarrollado la actividad hidrocarburfera.

A partir de estas observaciones es que se incrementan las posibilidades de obtener un

suelo sin afectaciones, lo cual facilita la labor de contaminacin del suelo con la
concentracin contaminante predeterminada.

1.10.4.Ubicacin

En la imagen satelital, se observa que el sitio donde se obtuvo el suelo se encuentra

en la zona Norte de la Ciudad de Neuqun.
 Ciudad de
Cipolletti

Ubicacin del
sitio

Ciudad de Ro Neuqun
Neuqun

Ro Limay

El lugar donde se extrajo el suelo para realizar la experiencia se ubica en el sector

norte de la Ciudad de Neuqun.

Acceso a Barrio
Rincn de Emilio

Sitio de
obtencin
del suelo

Universidad
Nacional del
Comahue

Calle Leloir

Sitio de obtencin del suelo tomando como referencia la Universidad Nacional del
Comahue. En imagen anexa la ampliacin del sitio, al Noroeste del acceso al Barrio
Rincn de Emilio.
 El suelo para realizar la experiencia, proviene de un sitio ubicado sobre las
coordenadas del sistema Gauss Kruguer campo inchauspe X: 2581750, Y: 4691616 y
Z: 270.

Sitio de donde se extrajo el suelo.

No se registraron precipitaciones en los siete das precedentes a la extraccin del

material por lo que el suelo se present relativamente seco.

1.11. Obtencin del Suelo y Pretratamiento

El suelo se extrajo de los 15 centmetros superficiales, utilizando una pala barreno
para excavar y bolsas de polietileno de alto micronaje como recipiente para el
transporte. El suelo en ese momento presentaba un aspecto suelto, con pocos
agregados y de apariencia arenopedregosa. Se tomaron alrededor de 80 Kg de suelo,
este lote fue homogenizado en el lugar por medio de volteos sucesivos sobre una
membrana de polmero plstico. Una vez transportado al laboratorio, el suelo se dej
secar al ambiente durante 48 horas. Posteriormente se homogeneiz utilizando un
mortero de porcelana y se pas a travs de una malla metlica de 2mm (12 mesh).

Este material que luego del proceso se torn en apariencia arenoso, como se muestra
en la Figura N 5, se deposit en cuatro bateas plsticas.
 Recipiente conteniendo el suelo pretratado en el laboratorio.

Una porcin de aproximadamente 300 g de suelo se envi al Laboratorio de Servicios

Agrarios y Forestales (LASAF) perteneciente al Ente Provincial de Agua y
Saneamiento para su anlisis fisicoqumico.

Se determin la textura de las muestras a travs del mtodo de Bouyocus.

Para la medicin del pH se utiliz la tcnica de medicin potenciomtrica de pH en

pasta y pH hidrlisis 1:2,5.

Para la determinacin de la materia orgnica se utiliz el mtodo Walkley Black

En la determinacin de la conductividad elctrica se utiliza un conductmetro sobre el

extracto de saturacin, aunque tambin pueden utilizarse distintas diluciones de suelo
en agua.

El contenido de Fsforo se determin por medio del mtodo Olsen sobre la cantidad
de fsforo extrada por una solucin de bicarbonato de sodio (extractante Olsen).

1.12. Enmienda del Suelo Correspondiente al

Tratamiento EST
La incorporacin de nutrientes al suelo se llev a cabo respetando la relacin C/N/P
100:10:0,1 (Adams Shroeder, R.H. et al. 1999). Para lo cual se agreg Triple 15 (15%
de N, 15% de P2 O5 y 15% de K2O) y NH4NO3.
 Se incorpor las siguientes cantidades a 1500 g de suelo:

Triple 15 450 mg.

NH4NO3 720 mg.

1.13. Fortificacin del Suelo con Hidrocarburos

Se utiliz una solucin de fortificacin de aceite mineral monogrado para motores de
vehculos, marca YPF, tipo SAE 30 normal, esta solucin se denomin solucin de
fortificacin. El solvente utilizado fue fren.

Para todas las experiencias se prepar una nica mezcla suelo- contaminante (el
contaminante fue aceite de motor virgen) que se distribuy en los distintos recipientes.

La solucin de fortificacin, se prepar, en una relacin de 500 mL de fren y 20 g de

aceite contaminante por cada 1000 g de suelo, con el objeto de obtener una
contaminacin inicial del 2%. Luego de agregada la solucin de fortificacin se
homogeneiz el suelo por completo, mezclando a intervalos de 2 h. El suelo
contaminado presentaba la textura arenosa original, aunque con una coloracin ms
oscura, consistencia pastosa y sin olor apreciable. El fren se dej volatilizar durante
24 horas bajo campana, homogeneizando el suelo a intervalos regulares. Una vez
finalizada sta operacin, el suelo fue dispuesto en los recipientes plsticos
correspondientes donde se sometern a los distintos tratamientos.

Imagen del suelo luego de la contaminacin.

1.14. Diseo Experimental
Se realizaron dos tratamientos de biorremediacin, el primer tratamiento es un proceso
de biorremediacin tradicional llamado en este trabajo EST, y el otro es un
tratamiento de biorremediacin donde los nutrientes inorgnicos y la humedad son
aportados por el efluente tratado de la Planta Depuradora de Lquidos Cloacales del
Parque Industrial de la Ciudad de Neuqun, y fue denominado EFL.

Los tratamientos se llevaron a cabo en recipientes plsticos, en cada uno de los cuales
se coloc 1500 g de suelo para facilitar la homogeneizacin del mismo (Figura N 6 y
N 7).

El diseo experimental fue el siguiente:

Cuatro recipientes correspondientes al tratamiento EST.

Cuatro recipientes correspondientes al tratamiento EFL.

Dos recipientes para los suelos control del tratamiento EST.

Dos recipientes para los suelos control del tratamiento EFL.

Estos recipientes fueron almacenados en estantes, a una temperatura de 20 C con

una variacin de 1 C. Dos veces por semana se aire y mezcl todo el contenido de
cada maceta con una esptula, y la reposicin del agua evaporada se realiz por
adicin de 50 mL de agua dos a tres veces por semana, esto ltimo con el objeto de
mantener la humedad del suelo cercana al 10% (Ercoli, E. et al., 2000).
Espacio fsico donde se almacenaron las macetas.

El muestreo para el anlisis de hidrocarburos totales de petrleo y recuento de

microorganismos hetertrofos totales se realiz a los 0, 15, 30, 60 y 90 das.

Se realizaron recuentos estndar en placa de los lquidos cloacales utilizados.

Reactivos y Materiales para la Determinacin de Hidrocarburos Totales en Suelos

Para la realizacin del presente trabajo, se utilizaron los siguientes reactivos de

laboratorio:

Tetracloruro de carbono pro anlisis (Merck).

Tetracloruro de carbono grado espectroscpico (Merck).

Acetona pura (Dorwil).

Silica Gel, 100-200mesh (Merck).

Sulfato de Sodio anhidro (Baker).

Mezcla de Referencia, en relacin 15:15:10 de n-hexadecano: isooctano:

clorobenceno; respectivamente (Buck Scientific, Inc.).

El Instrumental utilizado fue el siguiente:

Balanza analtica (Figura N 10).

Balanza granataria (Figura N 10).

Espectrofotmetro IR Buck Scientific M500, de Haz Simple (Figura N 8).

Espectrofotmetro IR.

Miscelneos

Mortero de porcelana.

Tamiz, 2mm.

Material de vidrio de uso corriente en el laboratorio.

Equipo para extraccin por Soxhlet.

Manta calefactora para balones de 25 mL.

Agitador magntico.

Papel de filtro, banda negra, Whatman N 40, de 9 cm de dimetro.

Estufa de secado (Figura N 9).

Pipeta automtica.

Dispenser para medios de cultivo.

Vrtex.

Autoclave.
Estufa para esterilizacin.

Estufa para cultivo de bacterias.

Estufa de secado.

Balanza analtica y balanza granataria.

Toma de Muestras de Suelo para Anlisis Qumicos

Se tom una muestra por cada maceta de la siguiente forma: primero se realiz la
homogeneizacin de todo el contenido de la maceta empleando una esptula, luego
se dividi la superficie del suelo dentro de las macetas, formando una cuadrcula de
nueve cuadrantes, de estos cuales se tom una porcin de suelo de tres de ellos
elegidos al azar, las porciones de suelo se mezclan para conformar una nica
muestra.

Se elige en forma
M
Maceta
M aleatoria tres
cuadrantes, de los
cuales se toma una
porcin de suelo, por
1 2 3 ejemplo: cuadrantes 2, 5
y 9.
4 5 6

9
7 8

Recipiente para
m
muestras
m

Metodologa de muestreo para anlisis de HTPs.

El procedimiento se repite para cada muestra a analizar.

Preparacin de las Muestras para el Anlisis de Hidrocarburos Totales en Suelo

A cada una de las muestras as obtenidas se las deposit en un erlenmeyer

numerado, el cual fue tarado, posteriormente se agrega Na2SO4 anhidro con el objeto
de capturar la humedad remanente en la muestra, la boca del erlenmeyer se cierra con
un film de polietileno para evitar el intercambio de humedad entre la muestra y el
ambiente.

De esta forma, la muestra queda preparada y debe almacenarse durante 24 hs, tiempo
suficiente para que el Na2SO4 retenga toda la humedad de la muestra.

Extraccin de Hidrocarburos del Suelo

El erlenmeyer conteniendo el suelo se pesa en balanza analtica para precisar su

contenido por diferencia entre el peso del erlenmeyer vaco y el peso del erlenmeyer
con el suelo. En el momento de la extraccin, el suelo contenido en el erlenmeyer se
trasvasa a un cartucho de papel para utilizar en el equipo de extraccin soxhlet.
Aproximadamente 7 g. se tulizarn para la extraccin

La extraccin se llev a cabo con CCL4 y realiz utilizando un equipo soxhlet por cada
muestra, y mantas calefactoras con balones de 25 mL.

Dentro del equipo de extraccin, el solvente recircula constantemente, evaporndose

desde el baln inferior y condensndose en el refrigerante superior para gotear sobre
la muestra en el cuerpo central del equipo de extraccin. Una vez que el solvente en el
cuerpo central alcanza determinado nivel, la muestra se encuentra completamente en
contacto con el solvente y un mecanismo sifn, drena el solvente desde el cuerpo
central al baln en la parte inferior del equipo recomenzando el ciclo.

Al completarse el tiempo de extraccin (4 hs.), se enfra y filtra la solucin, y se lleva a

volumen en matraz de 25 mL.

Equipos de extraccin por soxhlet.

Eliminacin de Interferencias

Debido a que el mtodo de cuantificacin del analito es sensible a sustancias que

derivan de animales o vegetales as como a otros compuestos polares, es necesario
eliminar tales interferentes, con el objeto de preservar en el extracto los hidrocarburos
petrognicos.

Para lograr esto, se tratan 10 mL. del extracto obtenido con 3 g. de slicagel 100-200
mesh utilizando un erlenmeyer, se homogeneiz por medio de un agitador magntico
durante 15 minutos, y posteriormente al extracto se lo filtr, empleando para ello papel
de filtro de tipo Whataman banda negra de 9 cm. de dimetro y embudos de vidrio. Los
extractos obtenidos del filtrado, se cierran hermticamente y se almacenan
refrigerados

Construccin de la Curva de Calibracin

Para cuantificar HTPs del suelo se prepararon soluciones estndar de hidrocarburos

de concentracin conocida, utilizadas para construir luego la curva de calibracin.

Las soluciones estndar fueron preparadas a partir de una solucin Stock obtenida de
una mezcla de Referencia (Referece Oil), La misma est compuesta por una mezcla
de 15:15:10 de n-hexadecano; isooctano y clorobenceno respectivamente. La solucin
de referencia tiene un valor certificado de 99,95% de HTP.

Posteriormente se registraron los valores de Absorbancia a 2939,7 cm-1 utilizando una

celda de cuarzo de 1cm.

En base a las soluciones concentraciones de las patrn preparadas y las absorbancias

obtenidas de las mismas, se logra confeccionar la Tabla N 3.

Valores de absorbancia de soluciones standard de hidrocarburos.

Concentracin (mg
Estndar Absorbancia
HC/ 100mL)
1 3,42 0,1286
2 6,84 0,2047
3 10,26 0,3229
4 13,68 0,4121
5 17,1 0,4673

La correspondiente curva de calibracin se muestra en la Figura N 13. En esta curva

de calibracin se exhibe en el eje de las ordenadas el valor de absorbancia obtenido, y
en el eje de las abscisas el valor de concentracin de las soluciones estndar.
Curva de calibracin para HTPs.

Limite de Deteccin

El lmite de deteccin de la tcnica se define como la concentracin de analito que da

una seal significativamente diferente a la seal de fondo blanco (Yb). Se especifica
tambin como la concentracin de analito que produce una seal tres veces mayor
que la desviacin estndar de la seal de fondo blanco, segn la siguiente ecuacin:

Y - Yb = 3 Sb

Donde:

Y: Lmite de deteccin

Yb: Seal del blanco (se estima utilizando el valor de la ordenada al origen de la recta
expresada en (3.1))

Sb= S x/y = [ (yi - yi*)2 / n-2]

Donde:

yi : valor de absorbancia registrado para cada solucin estndar

yi *: valor ajustado de yi, sobre la recta de tendencia calculada

 El lmite de deteccin para esta tcnica fue determinado previamente (Brissio, 2005):

x : 22,12 mg Hidrocarburo/ kg suelo seco

Recuperacin del Mtodo

La recuperacin del mtodo se realiza para conocer la eficiencia del mtodo de

extraccin, este procedimiento influye en gran medida en la confiabilidad de los
resultados.

Consiste en contaminar un suelo blanco con un aceite (que en este caso se trata del
mismo aceite utilizado a lo largo de todo el trabajo) a una concentracin conocida, y
luego extraer el contaminante por el mtodo de extraccin seleccionado.

La confiabilidad de los resultados obtenidos mediante la tcnica de extraccin por

solvente, recomendada por el Mtodo 3540C de la US EPA, puede verse afectada por
la prdida de analitos voltiles, lo cual constituye una limitacin reconocida de dicha
tcnica. No obstante, se utiliz este procedimiento de extraccin en el presente
trabajo, debido a que es altamente improbable encontrar compuestos orgnicos
voltiles en el suelo analizado y a que el hidrocarburo para cuantificar es pesado. An
as debe tenerse en cuenta que el mtodo puede no alcanzar el 100 % en la
extraccin debido a diversas variables, por ello se calcula el porcentaje de
recuperacin del mtodo.

La recuperacin de la extraccin en Soxhlet, con CCl4 como solvente, de muestras de

suelo contaminado de similares caractersticas a las analizadas, ha sido examinada en
trabajos anteriores, obtenindose una recuperacin del 85.8 % (Brissio, 2005).

Determinacin de Peso Seco del Suelo

Una fraccin de 10 g de suelo se coloc en un crisol y se llev a estufa a una

temperatura de 110 C hasta que el peso de la muestra se mantuvo constante. Las
determinaciones se llevaron a cabo por triplicado. El porcentaje de humedad del suelo
se calcul de la siguiente manera:

% H = (pssa-psse)/pssax100.

Donde: pssa: peso del suelo seco al aire.

psse: peso del suelo seco a estufa.

1.15. Determinacin de Microorganismos Mesfilos

Hetertrofos Totales
 Se utiliz la tcnica del Nmero ms Probable (NMP) en medio lquido (Boonchan et
al., 2000; Peressutti et al., 2003, Van Hamme et al., 2003), empleando un medio de
cultivo completo (PTGY), cuya composicin se presenta en la Tabla N 4.

Composicin del medio de cultivo.

Componente Peso
Peptona 0.25 g.
Triptona 0.25 g.
Extracto de
0.50 g.
Levadura
Glucosa 0.50 g.
MgSO4.7H2O 0.30 g.
CaCl2.2H2O 0.0035 g.
Agua Destilada 1000 mL.

Fraccionamiento del Medio de Cultivo y del Lquido de Dilucin

Luego de preparado, se fracciona el medio de cultivo en tubos de ensayo a razn de 5

mL por tubo, y se esteriliza en autoclave a 121 C y 1 atm de presin durante 15
minutos. El nmero de tubos conteniendo medio de cultivo, ser determinado por la
cantidad de tubos a sembrar segn las diluciones calculadas para cada muestreo,
siendo necesarios tres tubos por dilucin.

Por otro lado se dispone una determinada cantidad de tubos de ensayo con 9 mL de
agua destilada cada uno, para la realizacin de las correspondientes diluciones que la
tcnica a efectuar indica. Estos tubos se esterilizan previamente en autoclave.

1.15.1.Toma de Muestras y Diluciones para Recuento Microbiolgico

Se toma una muestra de cada uno de los cuatro microcosmos, correspondientes a un

mismo tratamiento, se recoge 1 g. en condiciones estriles, se conforma una muestra
nica (pool) por tratamiento y se homogeneiza.

De la misma forma se toman 5 g. en placa de petri para determinar el porcentaje de

humedad del suelo. Las placas de petri conteniendo 5 g. de suelo se colocan en estufa
a 110 C, hasta peso constante.

El contenido de humedad del suelo se determina por la diferencia de peso, antes y

despus de secarlo en estufa. El procedimiento se esquematiza en la Figura N 14.
 Tratamiento EST

Tubo de ensayo 9
mL. A.D.E. para
dilucin

1 gr.

Tubo de ensayo
esterilizado

Placa de Petri 5 gr.

A estufa en placa
de petri para
determinar su
peso seco

Macetas A.D.E.: Agua Destilada Estril.

Tratamiento EFL

Tubo de ensayo 9
mL. A.D.E. para
dilucin
1 gr.

Tubo de ensayo
esterilizado

Paca de Petri 5 gr.

A estufa en placa
de petri para
determinar su
peso seco

Macetas
A.D.E.: Agua Destilada Estril.

Toma de muestras para recuento microbiolgico.

De dicha muestra nica se pesa 1 gramo y se introduce en un tubo de ensayo,

conteniendo 9 mL del lquido de dilucin (agua destilada estril), el cual corresponde a
un primer nivel de dilucin de 1:10 (10-1). Se agita en el vrtex. Se toma 1 mL del
sobrenadante de sta primera dilucin, con una pipeta estril, y se lo coloca en un
segundo tubo conteniendo 9 mL de agua destilada estril, el cual corresponde a la
segunda dilucin (10-2). As, se procede de la misma manera hasta alcanzar el ltimo
nivel de dilucin establecido (10-10) (Figura N 15).

Dilucin de la muestra
1 mL. 1 mL. 1 mL.
Muestra (en 1 g.
este caso
slida)
A.D.E.
9mL
10 -1 10 -2 10 -3 10 -

Totalizando 10 tubos de ensayo desde la dilucin 10-1 a la dilucin 10-10

Dilucin de las muestras de suelo, para siembra de microorganismos.

Siembra de las Muestras

Mesada para siembra de bacterias hetertrofas totales.

Una vez que se dispone de todas las diluciones, se siembra una alcuota de 0,1 mL,
por triplicado, de cada dilucin en los tubos con medio de cultivo previamente
preparados (Figura N 17).
 Siembra de las diluciones

A.D.E 9
mL.
0,1 mL Diluciones

Medio de cultivo

10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 - 10 -10

Totalizando 30 tubos de ensayo con medio de cultivo (tres por cada

dilucin)

Siembra de medios de cultivo a partir de las diluciones.

Este procedimiento se realiza para cada tratamiento.

1.15.2.Incubacin y Lectura

Los tubos son incubados durante 7 das a temperatura ambiente. Al octavo da se

realiza la lectura de los mismos, tomndose como positivos a aquellos tubos que
presentan turbidez debido al desarrollo microbiano.

Luego se determina estadsticamente el nmero de bacterias por gramo de suelo seco

(N bact.gr suelo-1), mediante la tabla de Mc Crady, para tres rplicas por dilucin (Ver
en anexo).

1.15.3.Recuento de Microorganismos Viables

Con el objeto de estimar cual es la carga incorporada de bacterias vivas en el

tratamiento EFL a travs del lquido cloacal tratado, se realiz un recuento de
bacterias viables.

Clula viable, se define como la que es capaz de dividirse y formar una progenie.
El mtodo preferido para este trabajo es el Recuento Estndar en Placa por la tcnica
de agar volcado Pour Plate, en esta tcnica se realizan diluciones de la muestra en
forma similar a la tcnica del Nmero ms Probable

De cada dilucin se toman tres alcuotas de 1 mL. y se depositan cada una en una
placa de petri estril, a continuacin se agrega a cada placa una cantidad de 11 o 12
mL. de agar fundido, el cual a sido enfriado a 45 C (Figura N 18) luego las placas se
colocan en una mesa lisa y nivelada hasta que solidifica el agar, posteriormente se
deben invertir las placas en incubar mantenindolas a temperatura ambiente por 48
hs.

Es fundamental trabajar siempre en el rea de influencia del cono estril del mechero,
tanto para la siembra como para el volcado del agar.

Esta tcnica puede ser usada para determinar unidades formadoras de colonias por
mililitro o por gramo de muestra.

Para diluciones
10 -1 10 -2 10 -3 10 -
1 mL.
Muestra (en
este caso
lquida)

11 o 12 mL.
1 mL. Diluciones
Agar fundido
para recuento
(45 C) A.D.E 9
mL.

Placa de Petri
Estril

Por cada dilucin se realizan tres placas de petri como la que se muestra.

Ejemplo de siembra de bacterias en placa de petri.

La prctica comn, la que tiene el mayor significado estadstico, es la de contar

solamente aquellas placas que tengan entre 30 y 300 colonias.

Para obtener el nmero apropiado de colonias, usualmente se debe diluir la muestra a

contar. Como rara vez se conoce la cuenta viable aproximada en un momento dado,
suele ser necesario hacer ms de una dilucin
Resultados y Discusin

1.16. Anlisis Fsico-Qumico del Suelo Estudiado.

La tabla N 5 muestra las propiedades fisicoqumicas del suelo analizado. El suelo presenta
una textura gruesa (arenosa). El pH en pasta es moderadamente alcalino. La conductividad
elctrica medida en el extracto de saturacin indica suelo no salino. La relacin de adsorcin
de sodio (RAS) indica suelo no sdico.

En cuanto a la fertilidad est muy pobremente provisto en materia orgnica y nitrgeno, y

medianamente provisto de fsforo.

Anlisis fsico- qumico del suelo utilizado en el estudio.

Profundidad (cm.) 0-15

Textura Arenosa

PH (pasta) 8,38

PH (1:2,5) 9,35

Conductividad (dS/M) 0,9

Materia Orgnica () 0,2

Carbono Orgnico () 0,09

Nitrgeno () (Mox 0,05) 0,09

Fsforo Olssen (ppm) 13,8

Na+ 8,6

Sales solubles (meq/l) (Ext. Saturacin) cationes Ca2+

4,8
Mg2+

RAS 5,5

1.17. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petrleo

en el Suelo Seleccionado para el Estudio.
Previo al inicio de la experiencia se determin el contenido de HTPs del suelo seleccionado
para el estudio, con el objeto de evaluar los valores base o de fondo correspondientes. Los
resultados obtenidos se muestran en la Tabla N 6.

Concentracin de hidrocarburos totales en los suelos blanco.

 Muestra
Anlisis estadstico para HTPs en suelo blanco.

TPH Blancos
(
Muestras Media Mediana Mnimo Mximo Variancia Desvo Estndar

Muesta 1 98
3 102,7059 99,04780 98,93680 110,1332 41,37630 6,432441
Teniendo en cuenta los niveles propuestos por las Normas Holandesas, el suelo
seleccionado para el estudio se puede considerar apto como blanco.

La concentracin de HTPs presentes en el suelo seleccionado se encuentra en un orden

significativamente menor a los niveles alcanzados en la contaminacin experimental, por

Muestra 2 11
cuanto estos valores base no interferirn en la evaluacin posterior.

1.18. Caractersticas Qumicas y Microbiolgicas del

Efluente Utilizado.

Muestra 3
En la Tabla N 8 se muestran los anlisis qumicos realizados a los efluentes cloacales
tratados de la planta de tratamientos ubicada en la zona del Parque Industrial Neuqun
durante el tiempo del presente estudio. 99
Caracterizacin qumica del lquido cloacal de la Planta del Parque Industrial Neuqun.

Fechas de N-NH3 P total

Anlisis (mg/L) (mg/L)
En base a la cantidad de fsforo encontrado, en todos los casos, el agua analizada se
considera como un medio hipereutrfico, al superar la concentracin de 0,1 mg/L (Orea, D.
G. 1999).
T0 13 1,2
T 30 13 1,1
La relacin DBO/DQO se presenta siempre por debajo de 0.5 lo que implica que la mayor
parte de la materia orgnica presente en el agua no ser fcilmente utilizada como nutriente
por los microorganismos.

T 60 9 2,8
T 90 14 4
En la Tabla N 9 se muestran los recuentos de microorganismos viables realizados a los
efluentes cloacales tratados de la planta de tratamientos ubicada en la zona del Parque
Industrial Neuqun durante el tiempo del presente estudio

Recuento de microorganismos viables en el efluente a lo largo del tiempo.

Fecha Res
29/06/2005
Tratamiento de los Lquidos Cloacales.
104x1
14/07/2005
La Planta Depuradora de Lquidos Cloacales del Parque Industrial, ubicada en la zona Este
151x1
del Parque Industrial Neuqun, recibe los efluentes industriales y pluviales a travs de la red
de drenajes.

03/08/2005
La red de drenajes industriales y pluviales, desembocan en una cmara colectora de
efluentes. Un sistema de rejas retiene los slidos de mayor tamao arrastrados por las
aguas a tratar, los que pueden eliminarse por medio de un peine mecnico.
75x 1
21/09/2005
Posterior a la cmara, los efluentes avanzan sobre canales desarenadotes hasta un pozo de
bombas. Las bombas en el pozo operan en forma automtica por medio de un sensor de
nivel que acciona las mismas evacuando el lquido crudo a un tanque ecualizador, el cual
94x1
nivela el pH para que no llegue a los procesos biolgicos un pico cido o bsico. El tanque
ecualizador permite adems retirar los slidos gruesos que pudieran pasar el sistema de
rejas, la remocin se realiza por medio de un barredor de superficie.

El lquido ecualizado pasa luego a un sedimentador tipo Imhof que cumple la funcin de
sedimentador primario y digestor anaerobio de barros. Los barros estabilizados en esta
unidad, son enviados posteriormente a piletas de secado.

Una parte fundamental del proceso de depuracin de los efluentes es la aireacin del lquido
en el reactor aerobio que se ubica luego del sedimentador Imhof, la aireacin tiene el objeto
de facilitar el proceso de degradacin de la materia orgnica realizado por los
microorganismos residentes en l.

Despus de la etapa de oxigenacin, se deriva el lquido que lleva barros activados en

suspensin, hacia el clarificador, donde la baja velocidad de flujo en esta unidad provoca la
decantacin del los slidos suspendidos. El objetivo es promover una zona quieta, de
velocidad de flujo baja, de modo que el barro se separe del lquido, y sedimente en el fondo
donde es arrastrado por un barredor hacia la zona central, donde es retornado por medio de
bombas hacia el tanque de aireacin, manteniendo de este modo una edad de barro
estable.

Desde el clarificador y previo anlisis para verificar las composicin y aptitud del efluente
para su disposicin final, el agua tratada pasa a canal de desage por el cual es
transportada hasta las afueras de la planta y luego hasta su cuerpo de agua receptor
(Medcalf, 1977). El proceso se esquematiza en la Figura N 19.

Esquema de la planta.

Bacterias Hetertrofas Totales en Suelos no Contaminados

En los dos suelos no contaminados, se observa al final del tratamiento un aumento en las
poblaciones de microorganismos por un valor aproximado de un orden de magnitud. De
estos dos result mayor el que corresponde al tratamiento EFL. Estos datos se observan en
la tabla N 10.

Recuento de microorganismos aerobios totales en los suelos no contaminados

(microorganismos por gramo de suelo seco).

Muestra Tiempo Resultad

Suelo Bco. T Cero
Se presume que el aumento del valor obtenido en el recuento de microorganismos para el 7,65x10
tratamiento EST, es una consecuencia del agregado de nutrientes inorgnicos.

EST No Cont. T 90 1,57x10

EFL No Cont. T90 5,85x10
Es posible de que el aumento en la poblacin microbiana del tratamiento de suelo no
contaminado EFL radique en la incorporacin de microorganismos y materia orgnica a
travs del efluente tratado.

1.19. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petrleo

en los Tratamientos EFL y EST.
Los valores obtenidos en la determinacin de HTPs para los dos tratamientos (EST y EFL)
de biodegradacin a lo largo del tiempo, se muestran en las Tablas N 11 y 12
respectivamente.

Concentracin de hidrocarburos totales de petrleo registrados en tratamiento EST.

Tiempo HTPs Promedio HTPs

Muestra
(Das) (mg HC/Kg. suelo seco) (mg HC/Kg. Suelo Seco)
0 I 22449,56 19458,155

II 17041,67

III 18707,64

IV 19633,75

15 I 12458,53 11409,92

II 12638,8

III 10333,93

IV 10208,41

30 I 11919,385 11790,19

II 11997,12

III 12563,72

IV 10680,54

60 I 6796,77 5723,31

II 5586,81

III 4587,79

IV 5921,89

90 I 3420,65 3952,18

II 4324,02

III 3948,23
 IV 4115,81

mg HC/kg suelo seco 25000

20000

15000

10000

5000

0
0 20 40 60 80 100
Tiem po (das)

Concentraciones promedio de HTP en el Tratamiento EST.

Concentracin de hidrocarburos totales de petrleo registradas en tratamiento EFL.

Tiempo HTPs ( Promedio HTPs

Muestra
(das) mg HC/Kg. suelo seco) (mg HC/Kg. Suelo Seco)
0 I 22275,57 22696,07

II 23055,14

III 23186,27

IV 22267,28
15 I 16160,76 16187,25

II 16823,65

III 15800,37

IV 15964,22
30 I 10588,44 11140,72

II 10220,37

III 11316,92

IV 12437,16
60 I 12765,93 12041,69

II 12458,73

III 11808,64

IV 11133,46
 90 I 8805,28 7192,76

II 9676,24

III 1075,1

IV 9214,43

25000
mg HC / kg suelo seco

20000

15000

10000

5000

0
0 20 40 60 80 100

Tiempo (das)

Concentraciones promedio de HTP en el Tratamiento EFL.

25000
mg HC / kg suelo seco

20000
15000

10000
5000

0
0 20 40 60 80 100

Tiempo (das)

Concentraciones promedio de HTPs obtenidas en los Tratamientos: EST y EFL.

Con respecto a los niveles iniciales de hidrocarburos, en el tratamiento EFL son superiores a
los incorporados en el momento de la contaminacin (2%), posiblemente debido a contenido
de HTPs presentes en el agua tratada.

En el perodo 30-60 das se observa en el tratamiento EST una disminucin de la

concentracin de HTPs luego de los cuales los valores permanecen constantes para llegar
a niveles menores de 0,5% al final del estudio (90 das). Para el tratamiento EFL se
alcanzan niveles mayores que el EST (ver anexo).

Humedad del Suelo

A lo largo de la experiencia se determin el porcentaje de humedad de las muestras. El
mismo vari de un tratamiento a otro y a su vez en las distintas instancias de muestreo
debido principalmente a que el riego se realiz homogenizndolo en forma manual. Adems
deben considerarse las condiciones climticas diarias que pueden influir en la evaporacin
del agua desde el suelo.

Porcentaje de humedad hallado en los tratamientos.

Tiempo (das) Muestra pssa

EST 4,9024
T0
EFL 5,0876
EST 9,075
T 15
Donde: pssa: peso del suelo seco al aire.

EFL
psse: peso del suelo seco a estufa. 6,9631
EST
1.20. Bacterias Hetertrofas Totales en los 6,4138
T 30 EST y EFL
Tratamientos
EFL
Ambos tratamientos presentan un significativo incremento en sus poblaciones durante los
3,3809
EST
primeros 15 das de tratamiento. Los resultados se presentan en la Tabla N 23. Debido a
4,9965
T 60
que estos incrementos no se observaron en los suelos no contaminados, el crecimiento solo
puede atribuirse a la utilizacin del hidrocarburo como nica fuente de carbono.

EFL 5,422
EST 4,5425
T 90
EFL 4,8443
 Recuento de bactrias hetertrofas totales
Log del nmero de bact. x gr de suelo

9
8
7
6
5 EST
seco

4 EFL
3
2
1
0
T cero T 15 T 30 T 60 T 90

Crecimiento de la poblacin de bacterias hetertrofas totales en los tratamientos EST y EFL.

El crecimiento de las poblaciones es similar en los dos tratamientos durante los primeros 30
das, de la misma forma se destaca que una de las curvas se ubica por encima de la otra.
Esta particularidad en el tratamiento EFL, podra tener origen en la cantidad de
microorganismos aportados a dicho tratamiento a travs del efluente cloacal.

Alrededor de los 60 das de tratamiento, el nmero de microorganismos oscila en torno a

ordenes de magnitud de 107 y 108, lo cual se considera comn para microorganismos en
proceso de biodegradacin (Peressutti, 2003).

Sobre el final de la experiencia las poblaciones comienzan a decrecer, este hecho podra ser
consecuencia de las bajas concentraciones de hidrocarburos, ambos tratamientos se
encuentran por debajo del 1% P/P transcurridos 90 das. (Ercoli, 2000).

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En la Figura N 24 se observa el comportamiento de hidrocarburos y microorganismos a lo

largo de los 90 das que dur la experiencia.

Durante los primeros 30 das de estudio se observa una disminucin de los niveles de
hidrocarburos totales de petrleo y un aumento en los recuentos microbianos hasta llegar a
niveles constantes a partir de los 60 das, tal como se indic anteriormente

De la misma forma, los estudios estadsticos indican que el tratamiento EST se ajusta al
modelo exponencial (ver anexo) mientras que el tratamiento EFL no sigue el mismo
comportamiento.

Conclusiones
Ambos tratamientos alcanzan un nivel de hidrocarburos aceptable, segn lo dispuesto por el
Instituto Americano del Petrleo. El tratamiento EST adems alcanza los valores mnimos
dispuestos en la Holland List y en la Norma Mexicana NOM-138-SEMARNAT/SS-2003
para la fraccin media de hidrocarburos.

Segn los resultados obtenidos, se puede concluir que el tratamiento EST es ms efectivo
que el tratamiento EFL debido a los niveles de HTPs alcanzados al tiempo final (90 das), y
por la velocidad de degradacin alcanzada.

Es factible utilizar el agua residual tratada para estimular procesos de biodegradacin en

suelo, sin embargo el uso de este tipo de aguas implica una menor eficiencia en el
tratamiento.
Los tratamientos de biorremediacin de suelos contaminados artificialmente con
hidrocarburos en un porcentaje del 2%, presentan variaciones de concentracin a lo largo de
los primeros 90 das, suficientemente significativas como para ser cuantificadas por
espectroscopia infrarroja.

La microbiota nativa del suelo en un tratamiento de biorremediacin, aumenta

sensiblemente al incorporar el hidrocarburo como nica fuente de carbono y realizar la
bioestimulacin del tratamiento

Anexos

1.1. Normativa Internacional Aplicable

1.2. Normativa Provincial Relacionada
1.3. Tabla de McCrady para Tres Replicas por Dilucin
1.4.Anlisis Estadstico
1.4.1. Datos de HTPs Correspondientes a los Tratamientos de Biorremediacin
1.4.2. Anlisis de Regresin
1.4.3. Comparacin de medias de HTPs correspondiente a los 90 das (tiempo
final)

1.1. Normativa Internacional Aplicable

En el caso de contaminacin de suelos por hidrocarburos, dado que no existe en la
Legislacin Nacional y/o Provincial niveles gua de hidrocarburos totales de petrleo (TPH),
se adopta como valor objetivo en trabajos de remediacin un valor final del 1% P/P (10.000
ppm), el que coincide con el nivel gua desarrollado y propuesto por el Instituto Americano
del Petrleo (API), valor basado principalmente en dos criterios: el efecto de toxicidad para
las plantas y la movilidad de los hidrocarburos hacia el agua subterrnea.
Dicho valor final se toma como referencia para reas de exploracin y explotacin
hidrocarburfera; no obstante en reas de mayor sensibilidad ambiental, se podr adoptar un
valor gua inferior a fin de lograr los niveles de calidad adecuados para la actividad que se
desarrolla en el lugar. Para el caso de compuestos especficos,

Complementariamente, como valor objetivo para este estudio se han utilizado los niveles
gua difundidos en la informalmente denominada Holland List (Entidad Gubernamental de
Medio Ambiente de los Pases Bajos Norma "Leidraad Bodermbescherming" -edicin 1994).

Tambin se considera como referencia lo establecido en la Norma Oficial Mexicana NOM-

138-SEMARNAT/SS-2003, la cual establece Lmites Mximos de Hidrocarburos en Suelos
y las especificaciones para su caracterizacin y remediacin. Los lmites mximos
permisibles para fracciones de hidrocarburos en suelo establecidos en esta norma son los
siguientes:

Tabla N 1: Valores de referencia considerados.

Norma Matriz Parmetro Valor de Referencia (ppm)

100 (concentracin base)

Suelo
Holland List TPH (mineral oil) 1.000 (inicio investigacin)
(mg/kg base seca)
5.000 (saneamiento)

TPH (fraccin liviana) 500

Norma Mexicana
Suelo (Uso Industrial)
TPH (fraccin media) 5.000
NOM-138-
(mg/kg base seca)
SEMARNAT/SS-2003
TPH (fraccin pesada) 6.000

Suelo
API TPH (mineral oil) 10.000
(mg/kg base seca)

1.2. Normativa Provincial Relacionada

Ley Provincial 1875, Modificada por Ley 2267 (T.O.)

Decreto Reglamentario 2656/99

La reforma de la Ley y se realiz en Diciembre de 1998 y la reglamentacin en Septiembre

del ao 1999. Incorpora elementos nuevos que no se haban tenido en cuanta antes, como
por ejemplo:

Licencia ambiental Art. 24.

Participacin ciudadana a travs de la Audiencia Pblica Art. 31.,

 El proponente Pblico Art. 24.

Seguros Ambientales Art. 33.

Registros Ambientales Art. 20.

Rgimen de Sanciones Art. 28.

El control y la fiscalizacin Ambiental, antes y durante la ejecucin de la obra Art. 32.

Comit provincial de medio Ambiente Art. 27.

Reglamentacin Decreto N 2656/99

Define claramente el procedimiento administrativo que lo Proponentes deben cumplir.

Ley 1926 Actividad Hidrocarburfera.

Esta Ley regula la actividad hidrocarburfera de la provincia y crea la Polica de

Hidrocarburos.

La autoridad de aplicacin es la Direccin Provincial de Hidrocarburos y Combustibles, y

cuenta con Decreto Reglamentario 1147/96.

Las funciones principales:

Contralor operativo de toda la actividad dentro de la provincia (Pozos, bateras Plantas de

tratamiento de Gas, de Crudo, de Agua, separadoras y de bombeo, transporte y
almacenamiento, Refineras).

Exigir las declaraciones juradas de la produccin de hidrocarburos lquidos o gaseosos.

Controlar el buen uso del recurso hidrocarburfero, respecto a las tecnologas utilizadas, a
efectos de proteger el medioambiente.

Controlar los derrames de hidrocarburos.

Liquidacin y pago de regalas.

Ley N 1347

La provincia de Neuqun adhiere al rgimen de la Ley Nacional N 22.428 de uso y

conservacin del suelo
1.3. Tabla de McCrady para Tres Replicas por
Dilucin
Tabla de McCrady

Nmero Nmero de N
Caracterstico Microorganismos Cara
000 0,0
001 0,3
010 0,3
1.4. Anlisis 011
Estadstico 0,6
020Correspondientes a los Tratamientos
1.4.1. Datos de HTPs 0,6 de
Biorremediacin
100
Valores de HTPs para los tratamientos EST y EFL.
0,4
101
TIEMPO EST EFL
0,7 LN EST LN EFL

1 1020,000 22449,56 1,1

22275,57 10,019 10,011

3
1100,000

0,000
17041,67

18707,64
0,7
23055,14

23186,27
9,743

9,837
10,046

10,051

4 1110,000 19633,75 1,1

22267,28 9,885 10,011

6
12015,000

15,000
12458,53

12638,80
1,1
16160,76

16823,65
9,430

9,445
9,690

9,731

7 12115,000 10333,93 1,5

15800,37 9,243 9,668

8
13015,000 10208,41
1,6
15964,22 9,231 9,678

9 30,000 11919,39 12588,44 9,386 9,441

10 20030,000 11997,12 0,9

12220,37 9,392 9,411
 11 30,000 12563,72 12816,92 9,439 9,459

12 30,000 10680,54 12437,16 9,276 9,428

13 60,000 6796,770 10107,93 8,824 9,221

14 60,000 5586,810 10081,73 8,628 9,218

15 60,000 4587,790 10503,64 8,431 9,259

16 60,000 5921,890 10207,46 8,686 9,231

17 90,000 3420,650 8805,280 8,138 9,083

18 90,000 4324,020 9676,240 8,372 9,177

19 90,000 3948,230 9512,100 8,281 9,160

20 90,000 4115,810 9214,430 8,323 9,129

1.4.2. Anlisis de Regresin

TRATAMIENTO EST

Anlisis de variancia; VD: LN EST

Ho: b=0 (no hay dependencia entre el ln EST y el tiempo)

Suma de los Media de

df f Nivel p
cuadrados cuadrados

Regresin. 6,170833 1 6,170833 234,5863 0,000000

Residual 0,473493 18 0,026305

Total: 6,644326

Se rechaza Ho; la variabilidad de ln EST puede ser explicada por el tiempo.

Resumen de regresin para la variable dependiente: LN EST

R = 0,96371013 R = 0,92873722 Ajustado R = 0,92477817

F (1,18) = 234,59

p < 0,00000
Error de estimacin: 0,16219

Desvo
Desvo estndar
BETA estndar de B t(18) p-nivel
de B
Beta

Intercepcin 9,770914 ,056846 171,8843 ,000000

TIEMPO -,963710 ,062921 -,017191 ,001122 -15,3162 ,000000

Los datos ajustan al Modelo Exponencial EST= 17500.8 e 0.017 tiempo con un coeficiente
de determinacin (R2) de 0.9248.

Valores observados contra valores anticipados para el tratamiento EST.

ANLISIS DE LOS ERRORES CORRESPONDIENTES AL TRATAMIENTO EST

Valores residuales contra valores anticipados para el tratamiento EST.

Grfico de probabilidad normal de residuales

Valor normal esperado contra valores residuales para el tratamiento EST.

Se observa normalidad, Homocedasticidad e Independencia de los errores.

TRATAMIENTO EFL

Ho: b=0 (no hay dependencia entre el ln EST y el tiempo)

Anlisis de Variancia; DV: LN EFL

Suma de los Media de

df f Nivel p
cuadrados cuadrados

Regresin. 1,823838 1 1,823838 114,8662 0,000000

Residual 0,285803 18 0,015878

Total 2,109641

Se rechaza Ho; la variabilidad de ln EST puede ser explicada por el tiempo.

Resumen de regresin para la variable dependiente: LN_EFL

R= 0,92979859 R= 0,86452541 Ajustado R= 0,85699905

F(1,18)=114,87

p<0,00000

Error de estimacin: 0,12601

Desvo estndar de Desvo

BETA B t(18) p-level
Beta estndar de B

Intercepcin 9,869671 0,044165 223,4741 0,000000

TIEMPO -0,929799 0,086755 0,009346 0,000872 -10,7176 0,000000

 Valores observados contra valores anticipados para el tratamiento EFL.

Debido a la falta de independencia de los residuales y al coeficiente R2 obtenido, se

concluye que el Tratamiento EFL no ajusta al Modelo Exponencial esperado.

Anlisis de los errores correspondientes al tratamiento EFL

Valores residuales contra valores anticipados en el tratamiento EFL

Valores normales esperados contra valores residuales en el tratamiento EFL

1.4.3. Comparacin de medias de HTPs correspondiente a los 90 das (tiempo

final)

1 Prueba F de Homocedasticidad:

Ho= sEST 2 /sEFL 2 =1

F calculado= Sx 2/ Sy 2 = (386.25) 2 / (382.36) 2 = 1.020

F crtico (2,2, a=0.05)=19

No se rechaza la Hiptesis de Homocedasticidad.

2 Prueba t de comparacin de medias

T-test para muestras dependientes

Las diferencias marcadas son significativas para p < 0,05000

Desvo Diferencia del

Media N Diferencia t df P
Estndar desvo estndar

EST T FIN 3952,178 386,2553

EFL T FIN 9302,013 382,3597 4 5349,84 191,6041 -55,8426 3 0,000013

Las medias de HTPs correspondientes a los 90 das no son iguales