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Gua preparatoria para entrenamiento

de los analizadores hematolgicos automatizados Sysmex serie XE

Sysmex Amrica Latina Sysmex Amrica Latina


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5721 N.W. 158 Street Av. Ibirapuera- 2120- 22o andar- Cj. 224
Miami Lakes, Florida 33014, E.U.A. CEP 04028-001- So Paulo- SP- Brasil
Tel: 305-828-8646 Tel: 55-11-5054-7788
Fax: 305-826-7637 Fax: 55-11-5054-7780
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Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE Bienvenida, ndice e introduccin


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Sysmex Amrica Latina (Miami, EUA, mayo del 2005)
Bienvenido!

Bienvenido a la primera etapa de su entrenamiento de la serie XE de Sysmex, proporcionada a usted por el


centro de entrenamiento de Sysmex.

El propsito de esta gua es prepararlo por adelantado para la sesin de entrenamiento a la cual usted
asistir. Esta gua proporciona informacin bsica sobre los analizadores hematolgicos automatizados serie
XE de Sysmex. Leer esta gua completa antes de asistir a clase permite a todos los participantes en la sesin
de entrenamiento llegar con niveles similares de conocimiento. Tambin disminuye la necesidad de charlas
largas para suministrarle con ms tiempo de prctica directa con los analizadores.

NOTA: esta gua contiene informacin de todos los posibles parmetros reportados por el XE-2100. El
modelo XE-2100L de la serie XE de Sysmex no reporta reticulocitos (esta seccin no aplicar a su clase). El
modelo XE-2100D de la serie XE de Sysmex no reporta reticulocitos, eritroblastos y no utiliza el canal IMI.
Las secciones correspondientes a estos parmetros o tecnologa no sern discutidos en su entrenamiento
pero si son presentados en esta gua para su informacin.

Por favor traiga esta gua a la sesin de entrenamiento, pues ser utilizada para revisar tpicos
seleccionados y responder cualquier pregunta que usted pueda tener.

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2002, 2003 Sysmex America, Inc. Todos los derechos reservados.

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La informacin en este documento est sujeta a cambio sin previo aviso. Sysmex America, Inc. no es
responsable de los errores tcnicos o editoriales u omisiones contenidos aqu.

No puede reproducirse parte de este documento, ni transmitido en cualquier forma o por cualquier medio,
electrnico o mecnico, para cualquier propsito sin el permiso escrito expreso de Sysmex America, Inc.

Sysmex es una marca registrada de Sysmex America, Inc.

Esta gua ha sido creada por Sysmex America, Inc. Preguntas/ comentarios en relacin al contenido de esta
pueden dirigirse a su representante local, o a:

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I. Generalidades del instrumento...........1-4
37 parmetros analizados..............................................................................................................................1
Histogramas y dispersogramas......................................................................................................................2
Mensajes interpretativos................................................................................................................................2
Procesamiento de muestras..........................................................................................................................2
Rendimiento...................................................................................................................................................3
Control de calidad..........................................................................................................................................3
Almacenamiento de resultados de pacientes................................................................................................3
Reactivos....................................................................................................................................................3-4

II. Partes del instrumento..............................................................................................................................5-17


La estacin de trabajo del XE-2100...............................................................................................................5
Componentes (vista frontal) de la unidad principal del XE-2100...................................................................6
Teclado del panel LCD................................................................................................................................7
Componentes (vista frontal interior) de la unidad principal del XE-2100.......................................................8
Componentes (vista lateral panel derecho) de la unidad principal del XE-2100............................................9
Componentes (vista lateral panel izquierdo) de la unidad principal del XE-2100..........................................9
Componentes (vista izquierda interior) de la unidad principal del XE-2100.................................................10
Componentes (vista frontal) de la unidad neumtica del XE-2100..............................................................11
Componentes (visin derecha exterior) de la unidad neumtica del XE-2100............................................12
Funciones de presin y vaco......................................................................................12
Componentes de la unidad de muestreadora del XE-2100.........................................................................13
Componentes (vista frontal) de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100................14
Componentes (vista posterior) de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100............15
Despliegue de la pantalla de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100....................16
Reemplazo de reactivos.........................................................................................................17

III. Encendido del instrumento...................................................................................................................18-21


Gua bsica (inicio)......................................................................................................................................18
Breve descripcin de los programas de computacin.................................................................................19
Impresiones............................................................................................................................................19-21

IV. Flujo de muestras y principios de medicin.......................................................................................22-38


Principio de deteccin.............................................................................................................................22-24
Mtodo de deteccin radio frecuencia/ corriente directa (RF/CD)........................................................22
Enfoque hidrodinmico (deteccin CD).................................................................................................23
Mtodo de citometra de flujo utilizando lser semiconductor..........................................................23-24
Reticulocitos: principios de medicin y flujo de muestra..............................................................................25
Tincin fluorescente.....................................................................................................................................25
Mtodo de hemoglobina SLS....................................................................................................................26
Anlisis de hemates/ plaquetas (RBC/PLT) y hemoglobina (HGB)............................................................27
Procedimiento del anlisis de hemoglobina..........................................................................................28
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Clasificacin de leucocitos (procedimiento del anlisis 4DIFF)...................................................................29


Procedimiento del anlisis de leucocitos/ basfilos (WBC/BASO)..............................................................30
Procedimiento del anlisis del canal IMI......................................................................................................31
Procedidmiento del anlisis de hemates nucleados (NRBC)......................................................................32
Procedimiento del anlisis de reticulocitos (RET)........................................................................................33
Distribucin del tamao de la partcula de hemates (RBC)........................................................................34
Distribucin del tamao de la partcula de plaquetas (PLT)........................................................................35
Sistema adaptivo del anlisis de grupos.................................................................................................36-38
Principio del anlisis del dispersograma del XE-2100...........................................................................36
Principio del anlisis del dispersograma de la CITOMETRA DE FLUJO.............................................36
Determinacin del centroide inicial.....................................................................................................36
Anlisis de seales................................................................................................................................37
Identificacin de seales.......................................................................................................................37
Anlisis del centroide secundario..........................................................................................................38

V. Sistema de mensajes (concepto de la identificacin positiva/ negativa y mensajes interpretativos)


Lista de mensajes interpretativos (IP) del Sysmex XE-2100..................................................................40-41
Sumario de mensajes del Sysmex XE-2100................................................................................................42

VI. Control de calidad..................................................................................................................................43-48


Consideraciones generales..........................................................................................................................43
Tabla No. 9: tipos de controles con sus ventajas y limitaciones..................................................................44
Principios del control de calidad...................................................................................................................45
Ejemplo #1..............................................................................................................................................46-47
Ejemplo #2...................................................................................................................................................47
Control de calidad del XE-2100...................................................................................................................47
Ejemplo #3..............................................................................................................................................47-48

VII. Mantenimiento: lista de comprobacin de mantenimiento del XE-2100...............................................49

VIII. Reticulocitos.........................................................................................................................................50-60
Maduracin de los hemates (RBC)........................................................................................................50-51
Aplicaciones para el conteo de reticulocitos...........................................................................................52-53
Conteos manuales de reticulocitos.........................................................................................................54-56
Correcciones de los valores de porcentaje de reticulocitos manuales...................................................57-59
Correccin del hematocrito (HCT)....................................................................................................57-59
Mtodo actual de conteo de reticulocitos.....................................................................................................60

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SYSMEX AMERICA, INC.
Los analizadores hematolgicos automatizados serie XE de Sysmex son fabricados en Kobe, Japn por la
corporacin Sysmex. La corporacin Sysmex ha venido fabricando analizadores de hematologa desde 1961.
Sysmex es una palabra compuesta creada a partir de las dos palabras en ingls SYSTEMATIC MEDICINE
(que provienen originalmente del latn medicus systematicalis). La letra X simboliza crecimiento ilimitado.

Los productos Sysmex son distribuidos en ms de 150 pases en el mercado mundial. Sysmex es el
fabricante ms grande de instrumentacin de hematologa en el mundo fuera de los Estados Unidos de
Amrica, con participacin en el mercado ocupando el puesto nmero 1 en el Japn y nmero 2 en Europa y
en los Estados Unidos de Amrica.

Sysmex America, Inc. fue fundada en el 2003 para el suministro de ventas, mercadeo, entrenamiento y
soporte de los productos Sysmex. La oficina de Sysmex America, Inc. est localizada en Mundelein, Illinois,
E.U.A. y es la interfaz directa entre clientes y la corporacin Sysmex en Japn.

Sysmex Amrica Latina tiene dos oficinas regionales, una en Miami, Florida, E.U.A. y otra en So Paulo,
Brasil. Estas dos oficinas se encargan del mercadeo, soporte cientfico y tcnico para los distribuidores en
Amrica Latina. Sysmex do Brasil localizada en So Jos dos Pinhais, Brasil fabrica reactivos para el
mercosur y actualmente contina expandiendo su mercado y su portafolio de productos. Las personas que
usted ha conocido o conocer en su laboratorio son los representantes de ventas, soporte cientfico y tcnico
del distribuidor de Sysmex en su pas.

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I. Generalidades del instrumento
Los analizadores hematolgicos automatizados de la serie XE de Sysmex llevan a cabo conteos completos de
sangre (CBCs) y diferenciales de leucocitos (WBCs). El modelo XE-2100 es el instrumento ms completo de
la serie e incluye conteos de hemates nucleados (NRBCs), clulas inmaduras y reticulocitos. La siguiente
tabla ilustra en detalle las diferencias entre cada modelo de la serie XE de Sysmex de acuerdo al nmero de
sus parmetros:

Conteo completo de sangre

Diferencial

Hemates nucleados

Reticulocitos

Plaquetas fluorescentes

Clulas pluripotenciales
hematopoyticas

*IG
*Aprobado por la FDA

Tabla No. 1

37 parmetros analizados
9 La siguiente tabla lista los parmetros analizados por cada modelo de la serie XE de Sysmex:

XE-2100 XE-2100L XE-2100D


37 parmetros analizados 30 parmetros analizados 26 parmetros analizados
WBC, RBC, HGB, HCT, MCV, WBC, RBC, HGB, HCT, MCV, WBC, RBC, HGB, HCT, MCV,
MCH, MCHC, PLT-I, PLT-O, MCH, MCHC, PLT-I, NEUT%, MCH, MCHC, PLT-I, NEUT%,
NEUT%, LYMPH%, MONO%, LYMPH%, MONO%, EO%, LYMPH%, MONO%, EO%,
EO%, BASO%, NRBC%, NEUT#, BASO%, NRBC%, NEUT#, BASO%, NEUT#, LYMPH#,
LYMPH#, MONO#, EO#, BASO#, LYMPH#, MONO#, EO#, MONO#, EO#, BASO#, RDW-SD,
NRBC#, RDW-SD, RDW-CV, BASO#, NRBC#, RDW-SD, RDW-CV, PDW, MPV, P-LCR,
PDW, MPV, P-LCR, PCT, RET%, RDW-CV, PDW, MPV, P-LCR, PCT, IG%, IG#
RET#, IRF, LFR, MFR, HFR, IG%, PCT, IG%, IG#, HPC%, HPC#
IG#, HPC%, HPC#
Tabla No. 2

9 Los parmetros se miden directamente o se calculan a partir de los parmetros medidos directamente.
Las mediciones directas se realizan en los siguientes bloques detectores: (1) HGB, (2) RBC/PLT, (3)
WBC/BASO, (4) DIFF, (5) NRBC (no presente en el XE-2100D), (6) RET (no presente en el XE-2100L y
XE-2100D) e (7) IMI (no presente en el XE-2100D).

Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE I. Generalidades del instrumento


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9 Los principios y tecnologa usados en estos bloques detectores se explicarn en detalle a continuacin.
Estos principios incluyen:
Enfoque hidrodinmico y corriente directa: hemates, plaquetas
Mtodo de hemoglobina SLS libre de cianuro: hemoglobina
Citometra de flujo: leucocitos/ basfilos, linfocitos, monocitos,
eosinfilos, granulocitos, hemates nucleados,
reticulocitos y granulocitos inmaduros
Deteccin por medio de la acumulacin
de la altura de los pulsos elctricos: hematocrito
Radio frecuencia & corriente directa: canal de clulas inmaduras y clulas
pluripotenciales hematopoyticas

Histogramas y dispersogramas
El XE-2100 reporta 6 dispersogramas y 2 histogramas para una revisin y tamizaje detallados de los
resultados:

XE-2100 XE-2100L XE-2100D


Dispersogramas
4DIFF X X X
WBC/BASO X X X
IMI X X ---
NRBC X X ---
RET X --- ---
PLT-O X --- ---
Histogramas
RBC X X X
PLT X X X
Tabla No. 3

Mensajes interpretativos
Los instrumentos de la serie XE de Sysmex generan mensajes interpretativos que ayudan al laboratorio a
tamizar las muestras anormales que puedan necesitar verificacin. Estos mensajes son generados
basndose en el anlisis de todos los parmetros, histogramas y dispersogramas. En el XE-2100 el mximo
nmero de mensajes posibles son 40. En los modelos XE-2100L y XE-2100D los mensajes son generados
de acuerdo a los parmetros, histogramas y dispersogramas que miden.

Procesamiento de muestras
La serie XE de Sysmex tiene 4 modos en los cuales una muestra puede ser analizada. La siguiente tabla
describe en detalle cada uno de estos modos:
Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE I. Generalidades del instrumento
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Modo Cerrado/ Abierto Descripcin Volumen de muestra
Modo automtico Cerrado El XE mezcla la muestra, 200 L
perfora el tubo y aspira la muestra
Modo manual cerrado Cerrado El operador mezcla la muestra; 200 L
el XE perfora el tubo y aspira
Modo manual Abierto El operador mezcla y remueve el 130 L
tapn; el XE aspira
Modo capilar Abierto El operador prepara una dilucin 1:5 130 L
de muestra y remueve el tapn; de una dilucin 1:5;
el XE aspira y los resultados son 40 L de sangre es la
multiplicados por 5 mnima cantidad
recomendada para la
dilucin
Tabla No. 4

Rendimiento
El rendimiento del XE-2100 es de 150 muestras por hora con orden de CBC, DIFF y NRBC y de 113 muestras
por hora con orden de CBC, DIFF, NRBC y RET.

Control de calidad
La serie XE de Sysmex tiene 20 archivos de control de calidad disponibles. Cada archivo de control contiene
300 puntos de resultados. En adicin a estos 20 archivos, hay un archivo X-barM (media ponderada mvil de
una poblacin normal de pacientes). El control de calidad se discutir mas adelante en esta gua.

Los controles comerciales diseados para el uso con el XE-2100 son preparaciones estabilizadas de clulas
producidas de componentes de sangre humana. Estos controles se usan para evaluar la exactitud de los
parmetros de CBC, diferencial y reticulocitos. Actualmente, el e-Check (C + D + R) es el producto de control
comercial.

Almacenamiento de resultados de pacientes


El XE-2100 almacena resultados (incluyendo todos los histogramas y dispersogramas) para 10,000 muestras.
Esto incluye todos los resultados, histogramas, dispersogramas y reportes acumulativos. Se pueden
almacenar hasta 1,000 muestras en una lista de trabajo, y hasta 5,000 demogrficos de pacientes. Los
resultados pueden bajarse a un disco floppy.

Reactivos
9 El XE-2100 usa un mximo de 9 reactivos dependiendo del modelo, cada uno de los reactivos con una
funcin especfica diferente. La siguiente tabla lista estos reactivos y sus funciones:
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Reactivo Funcin Volumen/ Ciclo
CBC/DIFF + NRBC + RET
CELL PACK Diluyente para hemates/plaquetas y 30 mL
hemoglobina; enjuague del instrumento
CELLSHEATH Usado para enfoque hidrodinmico 2.1 mL
en hemates/ plaquetas
STROMATOLYSER-4DL Reactivo lisante para DIFF 1.8 mL
STROMATOLYSER-4DS Tincin DIFF 1.8 L
STROMATOLYSER-FB Diluyente y lisante para basfilos; 1.8 mL
lisa todas las clulas excepto los basfilos
STROMATOLYSER-NR Lisa los hemates excepto los leucocitos y 1.8 mL
lisante (kit) los hemates nucleados
STROMATOLYSER-NR Tie los leucocitos y los hemates nucleados 1.8 L
colorante
STROMATOLYSER-IM Usado en el canal IMI; lisa todas las clulas 3.1 mL
maduras y proporciona informacin de inmadurez
SULFOLYSER Lisante para hemoglobina 0.5 mL
RETSEARCH (II) Diluye la muestra 1.8 mL
diluyente (kit)
RETSEARCH (II) Tie reticulocitos y plaquetas para el anlisis 1.8 L
solucin colorante
Tabla No. 5

9 La siguiente tabla ilustra los reactivos que utiliza cada modelo de la serie XE de Sysmex:

Tabla No. 6

Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE I. Generalidades del instrumento


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II. Partes del instrumento
Esta seccin le ofrece una perspectiva general sobre las partes del XE-2100, as como la funcin de cada
parte.

Figura No. 1

La estacin de trabajo del XE-2100


Componente Funcin
Unidad principal Contiene los componentes mecnicos hidrulico/
electrnicos para medicin
Unidad muestreadora (Sampler) XE-2100 (usada cuando no es parte de una lnea de
automatizacin): suministra automticamente muestras a
la unidad principal
XE-ALPHA: la unidad muestreadora es reemplazada por la
lnea Alfa de transporte que suministra muestras al XE-2100
y mueve gradillas hacia el SP-100 o SP-1000
XE-HST: la unidad muestreadora es reemplazada por la
lnea HST que suministra muestras al XE-2100 y mueve
gradillas hacia el SP-100 o SP-1000
Unidad de procesamiento de informacin Contiene componentes computacionales y control del
(UPI) manejo de resultados
Unidad neumtica Suministra la presin y vaco requeridos para el anlisis
Impresora (grfica) Imprime copias de registros de anlisis incluyendo
dispersogramas, histogramas y listas de resultados
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Componentes (vista frontal) de la unidad principal del XE-2100

Componente Funcin
(1) Cubierta frontal Cubre las partes de la unidad principal
(2) Indicador de listo (Ready) Enciende una luz cuando la unidad principal
est lista para aspirar una muestra
(3) Pipeta de aspiracin manual Usado para la aspiracin abierta de muestra
(manual y capilar)
(4) Interruptor de inicio Se presiona para iniciar el anlisis en los
modos manual (abierto), capilar o manual
(cerrado)
(5) Pantalla de cristal lquido (LCD) Despliega el estado de la unidad principal,
el nmero de identificacin de la muestra y el
anlisis de resultados
(6) Teclado del panel LCD Usado para seleccionar las operaciones
bsicas (ingreso de la identificacin de la
muestra, tecla de ayuda, cierre, anlisis con
la unidad muestreadora en auto modo, etc.)
(7) Cubierta de la unidad perforadora de tapn Cubierta protectora de la unidad perforadora
del tubo de muestra

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Teclado del panel LCD
La unidad principal del XE-2100 est provista con un teclado de 28 teclas del panel LCD.

Tecla Funcin
MANUAL Usada cuando se establece el nmero de identificacin de la muestra en los modos
manual, capilar y manual cerrado. Se despliega la pantalla para configurar el nmero
de la muestra (seleccin de un perfil de anlisis) y usted puede seleccionar un perfil
de anlisis en adicin al nmero de identificacin de la muestra
SAMPLER Usada para iniciar o cancelar el anlisis con el muestreador. Cuando inicia el
anlisis del muestreador, se despliega la pantalla para configurar el nmero de la
muestra y usted puede establecer el nmero de identificacin del muestreador, el
nmero de gradilla (rack) y la posicin de tubo desde la cual va a iniciar el anlisis
ENTER Usada para confirmar el nmero de identificacin de la muestra ingresada
0/QZ - 9/DEF Usada para especificar el nmero de identificacin de la muestra y el nmero de
(teclas alfanumricas) men, seleccin de submens, etc.
-/. Usada para ingresar guin [-] durante el ingreso del nmero de identificacin de la
muestra o un punto decimal durante un ingreso numrico
C Usada para borrar un carcter durante el ingreso por el teclado o para parar la
alarma
NUM./ALPH. Usada para cambiar los modos de ingreso (nmeros, maysculas, minsculas)
Usada para cambiar la pantalla de cristal lquido (LCD) o para mover el cursor hasta
el parmetro seleccionado
Usada para seleccionar el men de funciones desplegado en la parte inferior de la
pantalla de cristal lquido (LCD)
MORE Usada para cambiar el despliegue del men de funciones en la pantalla que tiene
cinco o ms funciones (items) a seleccionar en el men de funciones
RETURN Usada para cancelar la ejecucin del men y regresar al estado antes de seleccionar
el men
SHUTDOWN Usada para ejecutar la secuencia de apagado
HELP Cuando se presiona en caso de que haya error presente, se mostrar el contenido
del error y el mtodo de restauracin
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Componentes (vista frontal interior) de la unidad principal del XE-2100

Componente Funcin
(1) Medidor de ajuste de radio frecuencia (RF) Indica el estado del poder de la radio frecuencia
para los detectores DIFF e IMI
(slo para uso de representantes de servicio)
(2) Cmara de reaccin Donde toma lugar la dilucin e incubacin de la
muestra antes de enviarla al bloque de deteccin
para la medicin
(3) Sensor de aspiracin de sangre Monitorea la aspiracin de sangre completa en los
modos manual (cerrado) y en el muestreador
(4) Vlvula de dosificacin de muestra (SRV) Hace alcuota de la muestra de sangre completa
para su dilucin
(5) Bloque detector de hemoglobina (HGB) Contiene el detector de hemoglobina (cubeta): SLS-
HGB
(6) Bomba de aspiracin de sangre completa Aspira la muestra de sangre completa
(7) Motor de aspiracin de sangre completa Impulsa la bomba de aspiracin de sangre
completa
(8) Bloque detector de granulocitos inmaduros (IMI) Contiene detectores de granulocitos inmaduros
(incluyendo cmaras de transduccin) Tecnologa
radio frecuencia/ corriente directa (RF/CD)
(9) Bloque detector de hemates (RBC) Contiene detector de hemates/ plaquetas
Tecnologa de enfoque hidrodinmico (utilizando el
cellsheath como una capa de flujo) y CD
(10) Motor de mbolo de la capa de flujo cellsheath Impulsa la jeringa de la capa de flujo creado por el
cellsheath
(11) Pistn de inyeccin de la capa de flujo Inyecta un volumen prefijado de muestra diluda
cellsheath o mbolo 1:500 al detector de hemates/ plaquetas
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Componentes (vista lateral panel derecho) de la unidad principal del XE-2100

Componente Funcin
(1) Conector del lector manual de cdigo de barras Conexin del lector manual de cdigo de barras
para el ingreso de la identificacin de la muestra
(2) Conector de la unidad de procesamiento de Conexin del cable hacia la unidad de
informacin (UPI) procesamiento de informacin (UPI)
(3) Conector de la impresora de resultados (tarjetas) Conexin de la impresora de resultados (tarjetas)
(4) Interruptor de encendido Enciende (ON) y apaga (OFF) la unidad principal

Componentes (vista lateral panel izquierdo) de la unidad principal del XE-2100

Componente Funcin
(1) Regulador de 0.16 MPa Ajusta la presin de 0.16 MPa (la capa de flujo de cellsheath es transportada
a la cmara de transduccin)
(2) Regulador de 0.07 MPa Ajusta la presin de 0.07 MPa (transporta desechos a la cmara de desechos)
(3) Regulador de 0.03 MPa Ajusta la presin de 0.03 MPa (presin necesaria para el detector RBC/PLT)
(4) Filtro de aire Previene que entre polvo a la unidad de fuelle
(5) Unidad de fuelle Ajusta el vaco a 0.04 MPa (con este vacio se transportan los lquidos entre las
Bellows Unit cmaras)
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Componentes (vista izquierda interior) de la unidad principal del XE-2100

Componente Funcin
(1) Motor de mezclado Mezcla diluyente y muestra para anlisis
de la cmara de reaccin 4DIFF, leucocitos/ basfilos (WBC/BASO),
hemates nucleados (NRBC) y reticulocitos
(RET)

(2) Detector de leucocitos (WBC) Mide, identifica y enumera leucocitos (WBC)

(3) Cmara de reaccin Donde toma lugar la dilucin e incubacin de la


muestra

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Componentes (vista frontal) de la unidad neumtica del XE-2100

Componente Funcin
(1) Indicador de presin 1 Indica la presin suministrada a la unidad principal
(0.23 hasta 0.27 MPa) (0.23 hasta 0.27 MPa)

(2) Regulador de 0.25 MPa Regula la presin de 0.25 MPa suministrada a la


unidad principal

(3) Indicador de presin 2 Indica el vaco suministrado a la unidad principal


(VACO) (rango normal 0.04 0.001 MPa)

(4) Cmara de atrapa lquidos Impide que ingrese fluido al compresor si ocurre
una falla del instrumento (contiene pelota flotante)

(5) Interruptor de poder Suministra poder a la unidad neumtica


(el interruptor puede permanecer encendido (ON),
ya que el poder de la unidad neumtica es
controlado por el poder de la unidad principal)

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Componentes (vista derecha exterior) de la unidad neumtica del XE-2100

Componente Funcin
(1) Conector de entrada del control de la Conecta la unidad principal para controlar el poder de la
unidad neumtica unidad neumtica
(2) Fusible Fusible con retraso de tiempo
(3) Conector de poder Conector de cordn de poder A/C
(4) Tubo de unin de la salida de presin Conecta con el tubo de unin de entrada de presin en la
unidad principal (secador de aire) para suministrar presin
a la unidad principal
(5) Tubo de unin de la salida de vaco Conecta con el tubo de unin de entrada de vaco en la
unidad principal para suministrar vaco a la unidad principal

Funciones de presin y vaco


El sistema neumtico del XE-2100 usa clases especficas de presin y de vaco para controlar varios
aspectos de la operacin del instrumento, tales como dilucin, conteo, enjuague y desage. La siguiente
tabla lista las presiones y vaco de la unidad principal y sus funciones correspondientes:

Presin/ Vaco Funcin


0.25 MPa de presin 1. Abre o cierra las vlvulas maestras
2. Activa los mecanismos del cilindro de aire para la vlvula de dosificacin de
muestra, copa de enjuague, unidad perforadora de tapn y de mezclado
0.16 MPa de presin 1. Suministra reactivo de capa de flujo de cellsheath al bloque detector
0.07 MPa de presin 1. Activa las bombas de diafragma para dispensar
2. Mezclado de burbujas de aire en las cmaras de transduccin y en la celda de
flujo de hemoglobina
3. Desage de las cmaras de desechos o de las cmaras de reactivos
4. Remocin de obstculos en las cmaras de traduccin
0.03 MPa de presin 1. Sistema de flujo del cellsheath o enfoque hidrodinmico (hemates/plaquetas)
0.04 MPa de vaco 1. Transfiere fluido entre las cmaras

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Componentes de la unidad muestreadora del XE-2100

Componente Funcin
(1) Lnea de anlisis Donde la gradilla es automaticamente desplazada a la izquierda
(una vez por ciclo), se lee la etiqueta de la identificacin de la
muestra y el tubo de muestra es transferido a la unidad
perforadora de tapn

(2) Fondo izquierdo de gradillas Las gradillas son colectadas aqu despus del anlisis
(fondo de coleccin)

(3) Sensor de monitoreo Monitorea el volumen de sangre en cada tubo de muestra (si el
de volumen de sangre volumen es muy bajo, la muestra no se analiza)

(4) Fondo derecho de gradillas Las gradillas son colocadas aqu para ser analizadas (hasta 10
(fondo de inicio) gradillas a la vez); al presionar la tecla SAMPLER
START/STOP se voltean los gradillas hacia la lnea de anlisis

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Componentes (vista frontal)
de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100

Componente Funcin
(1) Pantalla de cristal lquido (LCD) Despliegue de datos (programas basados en Windows NT)

(2) Cuerpo principal de la UPI Cuerpo principal de la UPI

(3) Teclado Utilizado para el ingreso de resultados y comandos a la UPI

(4) Ratn Utilizado para operar varias funciones de la UPI

(5) Lector de disco compacto Utilizado para leer o guardar resultados de un disco compacto
o floppy

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Componentes (vista posterior)
de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100

(6) Conector de la impresora grfica


(7) Conector del computador husped
(2) Conector del Ethernet RJ-45
Conector husped (RS232)

(3) Conector del ratn


(1) Conector del cordn poder
(4) Conector del monitor
(5) Conector del teclado
Figura No. 12
Componente Funcin
(1) Conector del cordn de poder Conecta el computador a una salida de electricidad

(2) Conector del Ethernet RJ-45 Conecta la red Ethernet

(3) Conector del ratn Conecta el ratn (icono de color verde)

(4) Conector del monitor Conecta un monitor

(5) Conector del teclado Conecta el teclado (icono de color violeta)

(6) Conector de la impresora grfica Conector de impresora para impresin grfica

(7) Conector del computador husped Conector para computador husped

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Despliegue de la pantalla
de la unidad de procesamiento de informacin (UPI) del XE-2100

Figura No. 13
rea de la pantalla UPI Descripcin
(1) Lnea del ttulo Despliega el nombre del instrumento, el nombre de la funcin o la
ventana actual y el nmero de los datos memorizados o visualizados

(2) Barra de men Despliega funciones (items) del men tales como: Archivo, Edicin,
Ver, Resultados, Acciones, Perifricos, Configuracin, Ventana y Ayuda

(3) Barra de herramientas Acceso directo a funciones (items) del men por medio de smbolos

(4) Pestaa Se muestran los nombres de las ventanas que indican botones de
men. Puede designarse mas de una pestaa

(5) Carpeta con ventanas En estas reas se efectan operaciones de las ventanas

(6) Zona de indicacin ventana Pueden visualizarse distantas ventanas para observar simultaneamente
varias operaciones y procesos

(7) Estado del sistema Despliega el estado de la conexin de la unidad principal y del
computador husped

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Reemplazo de reactivos
Cuando un reactivo necesita reemplazo en el XE-2100, el analizador desplegar un cdigo de dos o tres
letras identificando el reactivo a reemplazar.

NOTA: se recomienda esperar hasta que el recipiente del reactivo est VACO antes de reemplazar el
reactivo.

El STROMATOLYSER-NR (solucin lisante y colorante) tiene que ser reemplazado como un conjunto.
El RETSEARCH II (solucin diluyente y colorante) tiene que ser reemplazado como un conjunto.

MENSAJE REACTIVO A REEMPLAZAR


Camp. nivel react. EPK CELL PACK
Camp. nivel react. ESE CELLSHEATH
Camp. nivel react. FFD STROMATOLYSER-4DL
Camp. nivel react. FFS STROMATOLYSER-4DS
Camp. nivel react. FBA STROMATOLYSER-FB
Camp. nivel react. SIM STROMATOLYSER-IM
Camp. nivel react. SNR STROMATOLYSER-NR (reactivo lisante y colorante)
Camp. nivel react. RED RETSEARCH (II) (solucin diluyente y colorante)
Camp. nivel react. SLS SULFOLYSER

NOTA:
Mientras se muestra el error Camp. nivel react. SIM, Camp. nivel react. FFD o Camp. nivel react. FFS,
pueden realizarse anlisis CBC y RET.
Mientras se muestra el error Camp. nivel react. SNR pueden realizarse anlisis CBC, DIFF y RET.
Mientras se muestra el error Camp. nivel react. RED, pueden realizarse anlisis CBC, DIFF y NRBC.

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III. Encendido del instrumento
Gua bsica (inicio)
1. Revisar y comprobar: __________ Reactivo(s)
__________ Papel de la impresora
__________ Remover las gradillas de la unidad muestreadora
__________ Cmara de desechos (si se usa)

2. Encendido del XE-2100:


1. La UPI (unidad de procesamiento de informacin) tiene que estar completamente
lista antes de encender la unidad principal
2. Unidad principal (UP)
3. Impresora
NOTA: normalmente, dejar la unidad neumtica encendida (ON)

3. Secuencia de ingreso (Log On) en la UPI:


1. Cuando aparece en la pantalla el ingreso a Windows NT, presionar [Enter]. Se
inicia automaticamente el programa de aplicacin del XE-2100 y aparecer el
cuadro de dilogo de ingreso para el XE-2100
2. Ingresar su identificacin de ingreso (Log On ID)
3. Ingresar su contrasea o palabra clave - presione [Enter]

4. Se llevan a cabo autocomprobaciones en la unidad principal:


9 Comprobacin del microprocesador
9 Comprobacin de la presin
9 Comprobacin de la temperatura
9 Comprobacin de las partes mecnicas
9 Comprobacin de fondo (Background)

5. Lmites de fondo (Background Limits) aceptables:

Leucocitos (WBC) 0.1 x 103/L


DIFF-WBC 0.2 x 103/L
IMI Total 0.3 x 103/L
IMI# 0.005 x 103/L
Hemates nucleados (NRBC) - Leucocitos (WBC) 0.2 x 103/L
Hemates (RBC) 0.02 x 106/L
Hemoglobina (HGB) 0.1 g/dL
Plaquetas (PLT) 5 x 103/L
Plaquetas pticas (PLT-O) 10 x 103/L
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Breve descripcin de los programas de computacin
A continuacin se ofrece una breve descripcin de los principales programas disponibles en el computador
UPI del XE-2100. Estos programas se explorarn a profundidad durante el entrenamiento.

1. Pantalla de mens: permite ejecutar varios cambios tales como aadir, borrar, mover o cambiar la
carpeta segun las necesidades del usuario.
2. Lista de trabajo: men para mostrar, grabar o editar el orden de los anlisis en una lista de trabajo.
3. Explorador (memoria) de muestras: despliega una lista de las ltimas 20 muestras que fueron
analizadas, o recupera el resultado del anlisis de muestra de un mximo de 10,000 resultados
almacenados.
4. Navegador (visor) de resultados: despliega los resultados del anlisis de muestras en detalle, tales
como resultados numricos, dispersogramas e informacin de los mensajes de error.
5. QC/Cal (control de calidad/calibracin): 30 archivos de control de calidad, programa de X-BarM
media mvil, programas de calibracin/precisin.
6. Configuracin de resultados: permite ejecutar cambios en los ajustes de las funciones del XE-2100,
tales como los rangos de referencia de pacientes, criterio para los mensajes de error y ms.
7. Lista de pacientes: utilizado para desplegar, grabar, borrar o cambiar la informacin de pacientes, hasta
un mximo de 5,000, guardados en el disco duro.
8. Lista de doctores: utilizado para desplegar, grabar, borrar o cambiar los nombres de doctores, hasta un
mximo de 99, guardados en el disco duro.

Impresiones
Existen varios formatos que pueden usarse segun su preferencia para imprimir los resultados de pacientes en
una impresora grfica (con la adicin del software XE-PRO). A continuacin se describen el formato
estndar y el de otras impresiones posibles (con o sin el XE-PRO), incluyendo ejemplos en las pginas
siguientes.

Impresin estndar
Incluye: Informacin del paciente
Resultados de parmetros: 37, 30 26 parmetros (de acuerdo al modelo del instrumento)
Dispersogramas: 4DIFF, WBC/BASO, IMI, NRBC, RET y PLT-O (de acuerdo al modelo del
instrumento)
2 histogramas: RBC y PLT (los histogramas RBC y PLT desplegados en altura relativo)
Mensajes interpretativos: hemates (RBCs), leucocitos (WBCs) o plaquetas (PLTs)

Impresiones de pantalla
Algunas pantallas en el despliegue UPI pueden ser impresas usando la tecla impresin de pantalla (Print
Screen) en el teclado o el icono copia (Hard Copy)

Impresin de leucocitos (WBCs)


Incluye: Informacin del paciente
Resultados numricos de leucocitos (WBCs) con barra grfica de desviaciones estndar
Resultados de parmetro del diferencial (DIFF)
4 dispersogramas: DIFF, WBC/BASO, IMI* y NRBC* (no presentes en el XE-2100D)
Mensajes interpretativos de leucocitos (WBCs)
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Figura No. 14: ejemplo de impresin estndar XE-2100

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Figura No. 15: ejemplo de una impresin de pantalla (avisos Q)

Figura No. 16: ejemplo de una impresin de pantalla de una impresin de leucocitos (WBCs)
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IV. Flujo de muestras y principios de medicin
Principio de deteccin
Este instrumento lleva a cabo anlisis de hematologa de acuerdo al mtodo de deteccin radio frecuencia/
corriente directa (RF/CD), enfoque hidrodinmico (deteccin CD), mtodo de citometra de flujo (usando un
lser semiconductor) y mtodo de hemoglobina SLS.

Mtodo de deteccin radio frecuencia/ corriente directa (RF/CD)


El mtodo de deteccin radio frecuencia/ corriente directa (RF/CD) detecta el tamao de las clulas
sanguneas por cambios en la resistencia a la corriente directa, y la densidad del interior de las clulas
sanguneas por medio de cambios en la resistencia de radio frecuencia. Una muestra de sangre es aspirada
y medida, diluda en la proporcin especificada y enviada a la cmara aplicable del detector. Dentro de la
cmara del detector, hay un pequeo agujero llamado una apertura, en ambos lados de la cual hay
electrodos. Entre los electrodos fluye corriente directa y corriente de frecuencia de radio. Las clulas
sanguneas suspendidas en la muestra diluda pasan a travs de la apertura, cambiando la resistencia a la
corriente directa y la resistencia a la corriente de frecuencia de radio entre los electrodos. El tamao de las
clulas sanguneas es detectado por medio de cambios en la resistencia a la corriente directa, y la densidad
del interior de las clulas sanguneas (tamao del ncleo y otras informaciones), se detecta por medio de
cambios en la resistencia a la frecuencia de radio, con tal deteccin viniendo en forma de pulsos elctricos.

Basndose en el tamao de estos pulsos, puede dibujarse una distribucin bi-dimensional (dispersograma)
del tamao de las clulas sanguneas y de la densidad interna. Los resultados de varias mediciones pueden
obtenerse analizando tales distribuciones.

Figura No. 17: mtodo de deteccin radio frecuencia/ corriente directa (RF/CD)

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Enfoque hidrodinmico (deteccin CD)
Dentro del detector, la pipeta de muestras est frente a la apertura y en lnea con el centro. Despus que la
muestra diluida es forzada a travs de la pipeta de muestras hacia adentro de la celda de flujo, es rodeada
por el reactivo Cellsheath y pasa a travs del centro de la apertura.

Luego de pasar por la apertura, la muestra diluda es rodeada por reactivo Cellsheath y es enviada al tubo de
recuperacin. Esto previene que las clulas sanguneas que se encuentran en esta rea regresen y previene
la generacin de pulsos falsos de plaquetas. El mtodo de enfoque hidrodinmico mejora la exactitud y la
reproducibilidad del conteo de clulas sanguneas. Y como las clulas sanguneas pasan a travs de la
apertura en lnea recta, tambin previene la generacin de pulsos anormales de clulas sanguneas.

Figura No. 18: mtodo de enfoque hidrodinmico que utiliza una celda de flujo

Mtodo de citometra de flujo utilizando lser semiconductor


La citometra se usa para analizar las caractersticas fisiolgicas y qumicas de las clulas y de otras
partculas biolgicas. La citometra de flujo se usa para analizar aquellas clulas y partculas que pasan a
travs de flujos extremadamente pequeos.

Figura No. 19: mecanismo del enfoque hidrodinmico

Una muestra de sangre es aspirada, diluda y teida. Luego, la muestra es alimentada a la celda de flujo.
Este mecanismo de enfoque hidrodinmico mejora la exactitud y reproducibilidad del conteo de clulas
sanguneas. Como las partculas de clulas sanguneas pasan en una lnea a travs del centro de la celda de
flujo, se previene la generacin de pulsos sanguneos anormales y se reduce la contaminacin de la celda de
flujo. Un rayo producido por un lser semiconductor es emitido hacia las clulas sanguneas que pasan a
travs de la celda de flujo. La luz dispersada frontal es recibida por el fotodiodo, y la luz dispersada lateral y
luz fluorescente lateral son recibidas por el tubo fotomultiplicador. Esta luz es convertida a pulsos elctricos,
haciendo posible obtener informacin sobre las clulas sanguneas.
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Figura No. 20: mtodo de citometra de flujo

(1) Luz dispersada frontal y luz dispersada lateral

Cuando existen obstculos, tales como partculas en el camino de la luz, el rayo de luz se dispersa de cada
obstculo en varias direcciones. Este fenmeno se llama dispersin de la luz. Detectando la luz que
dispersada, es posible obtener informacin sobre el tamao y propiedades materiales de una clula.
Asimismo, cuando un rayo lser es emitido hacia las clulas sanguneas, ocurre dispersin de la luz. La
intensidad de la luz dispersada depende de factores tales como el dimetro de la partcula y el ngulo de
visin. Este instrumento detecta la luz dispersada frontal, que suministra informacin sobre el tamao de las
clulas sanguneas; y tambin detecta luz dispersada lateral, que suministra informacin sobre el interior de
las clulas (tal como el tamao del ncleo).

(2) Luz fluorescente lateral

Cuando se emite luz hacia un material fluorescente, tal como clulas de la sangre teidas, se produce luz de
longitud de onda ms larga que la luz original. La intensidad de la luz fluorescente aumenta cuando la
concentracin de la tincin se vuelve mayor. Midiendo la intensidad de la fluorescencia emitida, es posible
obtener informacin sobre el grado de tincin de las clulas sanguneas. La luz fluorescente es emitida en
todas direcciones; el XE-2100 detecta la luz fluorescente que es emitida lateralmente.

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Reticulocitos: principios de medicin y flujo de muestra
El XE-2100 es un sistema completo de hematologa para llevar a cabo anlisis de conteos completos de
sangre, diferencial de leucocitos (WBCs), hemates nucleados (NRBCs) y reticulocitos. Usa la combinacin
de colorante fluorescente, enfoque hidrodinmico y lser semiconductor para el anlisis de reticulocitos. Esta
tecnologa fue desarrollada originalmente por Sysmex, y tiene una confiabilidad probada mundialmente. Una
muestra de sangre completa es enfocada automaticamente y pasada a travs de una celda de flujo, donde
cada clula previamente marcada con fluorescencia por una tincin es irradiada con un rayo lser. La
intensidad de la luz dispersada frontal as como la de la luz fluorescente lateral de cada clula son indicadores
del tamao celular relativo y de su contenido de ARN respectivamente. Analizando el dispersograma en dos
dimensiones de la dispersin frontal (eje-Y) versus la fluorescencia lateral (eje-X), el XE-2100 fracciona los
hemates, reticulocitos y plaquetas de acuerdo con el algoritmo propiedad de Sysmex y determina el conteo
de reticulocitos (RET#), relacin de reticulocitos (RET%), conteo de hemates (RBC#) y conteo de plaquetas
pticas (PLT-O). Esta tecnologa acoplada con la automatizacin, hace del XE-2100 un instrumento equipado
para producir resultados rpidos y exactos.

Tincin fluorescente
El XE-2100 usa un colorante polimetino, un colorante fluorescente, que est agrupado con colorantes
similares usados en muchos sistemas de citometra de flujo. Lo que hace nico al colorante polimetino, y tan
bien adecuado para conteo de reticulocitos, es su habilidad para penetrar y unirse a las clulas rapidamente,
eliminando la necesidad de un fijativo o de tiempos prolongados de incubacin. El colorante polimetino
tambin es compatible con el lser, rindiendo suficiente fluorescencia para la deteccin y separacin de
poblaciones celulares.

El colorante polimetino es un colorante bsico que se une a los componente acdicos de la sangre; el ADN en
el ncleo celular y el ARN encontrado en el citoplasma de la clula. La cantidad de colorante que es unido
por cada tipo de clula depende del contenido de cido nucleico de la clula. Los leucocitos unirn ms
colorante, por la gran cantidad de ADN contenido en el ncleo, mientras que las plaquetas unirn mucho
menos colorante debido a la pequea cantidad de ARN presente y a su pequeo tamao fsico. Los hemates
unirn trazas de colorante y los reticulocitos unirn cantidades variables de colorante, dependiendo de la
cantidad de ARN que contengan.

Figura No. 21: clulas teidas con colorante polimetino


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Mtodo de hemoglobina SLS
En el pasado, los principales mtodos para medir automaticamente hemoglobina eran el mtodo de la
cianometahemoglobina y el mtodo de la oxihemoglobina. Pero estos mtodos tienen tanto ventajas como
desventajas cuando se usan con un instrumento grande, completamente automatizado, tal como el XE-2100.

El mtodo de la cianometahemoglobina fue recomendado por el Comit Internacional para la Estandarizacin


en Hematologa (International Committee for Standardization in Hematology, ICSH por sus siglas en ingls) en
1966 como un mtodo internacional estndar. Pero como su velocidad de conversin de hemoglobina es
lenta y se asume como requerimiento un procesamiento de mltiples muestras, este mtodo realmente no es
apropiado para medicin automtica. Ms an, como usa compuestos de cianuro, que son reactivos
venenosos, el desecho lquido debe ser tratado, haciendo al mtodo indeseable desde una perspectiva del
medio ambiente.

Actualmente, este no es un mtodo de anlisis apropiado, particularmente con un instrumento grande


completamente automatizado, que descarga grandes cantidades de desecho lquido.

En contraste, la velocidad de conversin de hemoglobina del mtodo de la oxihemoglobina es rpida, pues la


hemoglobina es convertida instantaneamente a oxihemoglobina. Y como no usa sustancias venenosas como
cianuro, es un mtodo adecuado para efectuar anlisis automatizados. Sin embargo, no puede convertir la
metahemoglobina en oxihemoglobina lo cual no es un problema para la sangre normal, pero va a resultar en
valores que son ms bajos que los valores verdaderos para muestras que contienen grandes cantidades de
metahemoglobina, tales como muestras de sangre control.

El mtodo de hemoglobina SLS es un mtodo de anlisis que hace uso de las ventajas de los mtodos
antes mencionados.

Como con el mtodo de la oxihemoglobina, la velocidad de conversin del mtodo de hemoglobina SLS es
rpida y el mtodo no usa sustancias venenosas, hacindolo un mtodo adecuado para automatizacin.

Y como puede usarse para medir cianohemoglobina, tambin puede medir con exactamente sangre que
contiene metahemoglobina, tal como es la sangre control.

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Anlisis de hemates/ plaquetas (RBC/PLT) y hemoglobina (HGB)
Procedimiento del anlisis de hemates/ plaquetas

Durante los anlisis de hemates y plaquetas, se analizan en el mismo canal y simultaneamente los hemates
y plaquetas de la sangre. El procedimiento para analizar hemates/ plaquetas se explica aqu.

Figura No. 22: procedimiento del anlisis de hemates/ plaquetas (RBC/PLT)

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 4.0 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 1.9960 mL de
Cellpack a una relacin 1:500, y luego enviados a la cmara de muestra de hemates como la
muestra diluda.

(3) El pistn inyector enva lentamente 11.7 L de muestra diluida al detector de hemates/plaquetas.

(4) El detector de hemates cuenta los hemates y plaquetas por medio del enfoque hidrodinmico
(deteccin CD). Al mismo tiempo, se calcula el hematocrito (HCT) por medio del mtodo de deteccin
de altura de pulso.

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Procedimiento del anlisis de hemoglobina (HGB)

Durante un anlisis de hemoglobina, se mide la cantidad de hemoglobina en sangre. El procedimiento para


analizar la hemoglobina se explica aqu.

Figura No. 23: procedimiento del anlisis de hemoglobina (HGB)

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 3.0 L de muestra, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.9970 mL de
Cellpack a una relacin de 1:333 y luego enviados a la celda de flujo como la muestra diluda. Al
mismo tiempo, 0.5 mL de Sulfolyser son aadidos para hemolizar los hemates, y la hemoglobina es
convertida a hemoglobina SLS.

(3) Luz (de 555 nm de longitud de onda), emitida por el diodo emisor de luz, pasa a travs del lente y
dentro de la muestra en la celda hemoglobina. La concentracin de hemoglobina SLS es medida
como absorbancia de luz y es calculada por comparacin con la absorbancia del diluyente, medida
antes de que la muestra fuera aadida.

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Clasificacin de leucocitos (WBC)
Los leucocitos pueden ser ampliamente clasificados ya sea como linfocitos, monocitos o granulocitos. Los
granulocitos pueden ser clasificados mas all como neutrfilos, basfilos o eosinfilos, dependiendo de la
afinidad de los grnulos por el colorante. El procedimiento del anlisis aplicado se explica aqu.

Procedimiento del anlisis 4DIFF

Un anlisis 4DIFF se usa para identificar y analizar los siguientes grupos de leucocitos: linfocitos, monocitos,
eosinfilos, neutrfilos y basfilos. El procedimiento del anlisis 4DIFF se explica aqu.

Figura No. 24: procedimiento del anlisis 4DIFF

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 18 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.882 mL de
Stromatolyser-4DL, y luego enviados a la cmara de reaccin como la muestra diluda.
Al mismo tiempo, 18 L de Stromatolyser-4DS son aadidos para diluir la muestra en una relacin
1:51. Despus de reaccionar por aproximadamente 22 segundos en esta condicin, los hemates son
hemolizados y los leucocitos son teidos.

(3) El pistn inyector enva 40 L de muestra diluida al bloque detector ptico.

(4) En el bloque detector ptico, la muestra es analizada por medio del mtodo de citometra de flujo
utilizando un lser semiconductor.
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Procedimiento del anlisis de leucocitos/ basfilos (WBC/BASO)

Un anlisis de leucocitos/ basfilos se utiliza para medir el nmero de leucocitos en la sangre, as como el
nmero de basfilos en los leucocitos. El procedimiento del anlisis de leucocitos/ basfilos se explica aqu.

Figura No. 25: procedimiento del anlisis de leucocitos/ basfilos (WBC/BASO)

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 18 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.882 mL de
Stromatolyser-FB a una relacin de 1:50, y luego enviados a la cmara de reaccin como la muestra
diluda.
Despus de reaccionar por alrededor de 14 segundos en esta condicin, los hemates son
hemolizados.

(3) El pistn inyector de cubierta enva 40 L de muestra diluda al bloque detector ptico.

(4) En el bloque detector ptico, la muestra es analizada por medio del mtodo de citometra de flujo,
utilizando un lser semiconductor.

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Procedimiento del anlisis del canal IMI

El canal IMI indica informacin sobre las clulas inmaduras (granulocitos). El procedimiento para analizar IMI
se explica aqu.

Figura No. 26: procedimiento del anlisis del canal IMI

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 2.4 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.5976 mL de
Stromatolyser-IM a una relacin de 1:250, y luego enviados al detector IMI como la muestra diluda.
Despus de reaccionar por aproximadamente 13 segundos en esta condicin, los hemates son
hemolizados y el citoplasma de los leucocitos distintos a los granulocitos inmaduros es liberado/
disuelto y son reducidos en tamao.

(3) La muestra diluda es aspirada, a travs de la apertura, y 250 L son medidos exactamente por el
manmetro tipo flotador.
La deteccin es llevada a cabo por medio del mtodo de deteccin radio frecuencia/ corriente directa
(RF/CD).

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Procedimiento del anlisis de hemates nucleados (NRBC)

Un anlisis de hemates nucleados se utiliza para clasificar y analizar grupos de hemates nucleados en la
sangre. El procedimiento de anlisis de hemates nucleados se explica aqu.

Figura No. 27: procedimiento del anlisis de hemates nucleados (NRBC)

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 18 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.882 mL de
reactivo lisante Stromatolyser-NR, y luego enviados a la cmara de reaccin como la muestra diluda.
Al mismo tiempo, 18 L de solucin de colorante Stromatolyser-NR son aadidos para dilur la
muestra a una relacin de 1:51. Despus de reaccionar por alrededor de 7 segundos en estas
condiciones, los hemates son hemolizados y los leucocitos y hemates nucleados son teidos.

(3) El pistn inyector enva 40 L de muestra diluda al bloque del detector ptico.

(4) En el bloque del detector ptico, la muestra es analizada por medio del mtodo de citometra de flujo
utilizando un lser semiconductor.

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Procedimiento del anlisis de reticulocitos (RET)

Un anlisis de reticulocitos se utiliza para clasificar y analizar grupos de reticulocitos y plaquetas en la sangre.
El procedimiento del anlisis de reticulocitos se explica aqu.

Figura No. 28: procedimiento del anlisis de reticulocitos (RET)

(1) La sangre es aspirada de la pipeta de aspiracin manual a la vlvula de dosificacin de muestra.

(2) 4.5 L de sangre, medidos por la vlvula de dosificacin de muestra, son diludos con 0.8955 mL de
diluyente RET SEARCH (II), y luego enviados a la cmara de reaccin como la muestra diluda.
Al mismo tiempo, 18 L de solucin colorante RET SEARCH (II) son aadidos para diluir la muestra a
una relacin de 1:204. Luego de reaccionar por aproximadamente 31 segundos en estas
condiciones, la muestra diluda es teida, convirtindose en la muestra para el anlisis.

(3) El pistn inyector enva 2.8 L de la muestra diluda teida al bloque del detector ptico.

(4) En el bloque del detector ptico, la muestra es analizada por medio del mtodo de citometra de flujo
utilizando un lser semiconductor.

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Distribucin del tamao de la partcula de hemates (RBC)

El conteo de hemates es un conteo de las partculas encontradas entre dos discriminadores, un discriminador
ms bajo (LD) y un discriminador ms alto (UD), que son automaticamente establecidos entre 25 - 75 fL y 200
- 250 fL, respectivamente.

Las distribuciones del tamao de partculas son revisadas para encontrar anormalidades, incluyendo
frecuencias relativamente anormales a los diferentes niveles de discriminador, existencia de dos o ms picos,
y anchos de distribucin anormales.

El XE-2100 expresa el ancho de la distribucin de hemates (RDW) de acuerdo a los dos mtodos mostrados
a continuacin.

1. RDW-SD

Asumiendo que la altura mxima de la curva sea 100%, el ancho de la distribucin al nivel de altura del 20%
es el RDW-SD. Las unidades se expresan en fL (femtolitros), con 1 fL igual a 10-15 L.

Figura No. 29: RDW-SD distribucin del tamao de la partcula

2. RDW-CV

Con los puntos L1 y L2 encontrados a una frecuencia de 68.26% del rea de distribucin total, RDW-CV se
calcula a partir de la siguiente ecuacin:

RDW-CV (%) = L2 - L1 x 1000


L2 + L1

Figura No. 30: RDW-CV distribucin del tamao de la partcula

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Distribucin del tamao de la partcula de plaquetas (PLT)

Las distribuciones del tamao de la partcula de las plaquetas son analizadas usando tres discriminadores: un
discriminador mas bajo (LD) y un discriminador mas alto (UD), que son automticamente establecidos entre 2
- 6 fL y 12 - 30 fL, respectivamente; y un discriminador fijo, que se establece a 12 fL.

Las distribuciones del tamao de la partcula de las plaquetas son revisadas para encontrar anormalidades,
incluyendo frecuencias relativas anormales en el discriminador bajo, anchos anormales de distribucin y la
existencia de mas de un pico.

1. PDW (ancho de la distribucin de plaquetas)

Asumiendo que la altura mxima de la curva es 100%, el ancho de la distribucin al nivel de altura del 20% es
el PDW. Las unidades se expresan en fL (femtolitros), con 1 fL igual a 10-15 L.

2. P-LCR (porcentaje de clulas grandes de plaquetas)

P-LCR es el porcentaje de plaquetas grandes mayores a 12 fL. Se calcula como una relacin que compara el
nmero de partculas entre el discriminador fijo y discriminador alto y el nmero de partculas entre
discriminador bajo y discriminador alto.

Figura No. 31: P-LCR distribucin del tamao de la partcula

3. MPV (volumen plaquetario medio)

El volumen plaquetario medio (MPV) es calculado a partir de la siguiente ecuacin:

MPV (fL) = PCT (%)____ x 1000


PLT (x103/L)

PCT: PCT se llama al hematocrito de plaquetas o porcentaje de volumen de plaquetas, y su peso est
hacia la frecuencia de plaquetas.
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Sistema adaptivo del anlisis de grupos
Principio del anlisis del dispersograma del XE-2100

El XE-2100 emplea el mtodo de citometra de flujo usando lser semiconductor para identificar y enumerar
los leucocitos (WBC), DIFF, hemates nucleados (NRBC) y reticulocitos (RET). Cuando un rayo lser es
emitido hacia partculas de clulas sanguneas, ocurre dispersin de la luz.

Este instrumento detecta la luz dispersada frontal para obtener informacin sobre el tamao de las clulas
sanguneas, la luz dispersada lateral para obtener informacin intracelular y dispersin de la luz lateral
fluorescente para obtener la intensidad de clulas sanguneas teidas con fluorescencia.

El XE-2100 utiliza una bitcora de estadstica matemtica para identificar apropiadamente seales de cada
clula en el bloque detector de flujo.

Principio del anlisis del dispersograma de la CITOMETRA DE FLUJO


Aqu explicaremos este mtodo de discriminacin (anlisis de grupos), usando el canal del diferencial (DIFF)
como ejemplo.

Determinacin del centroide inicial

El centro de cada grupo es establecido tentativamente como centroide inicial de cada grupo de clulas.

Figura No. 32: anlisis adaptivo de grupos del XE-2100

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El centroide inicial se determina en el XE-2100 por el fabricante analizando miles de muestras y es
almacenado en la memoria del instrumento. Estas son establecidas como fantasmas, linfocitos, monocitos,
granulocitos y eosinfilos respectivamente (ver figura No. 32).

Anlisis de seales

Si una seal de clulas aparece en el dispersograma, el computador del XE-2100 calcula inmediatamente a
cual rea pertenece esta seal (ver figura No. 33). La distancia entre la seal y cada centroide inicial de los
fantasmas, linfocitos, monocitos, granulocitos y eosinfilos es calculada. No es la distancia matemtica entre
dos puntos del espacio de Euclides, sino la distancia que es determinada por el coeficiente de correlacin
con su seal y la posicin de cada centroide inicial. Esta distancia especial se llama matematicamente
distancia MAHALANOBIS.

SFI

Distancia Mahalanobis

Seal detectada

Centroide secundario de linfocitos


SSC

Figura No. 33: clculo de la distancia MAHALANOBIS

Identificacin de seales
Despus de calcular esta distancia MAHALANOBIS, el XE calcula cual centroide inicial est cerca de la
seal. En el caso de la figura No. 33, como la seal est posicionada mas cerca del centroide inicial de los
linfocitos, la seal se identifica como linfocito.

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Anlisis del centroide secundario

La distancia entre el centroide inicial de los linfocitos y la seal identificada como un linfocito es analizada
para determinar el centroide secundario (ver figura No. 34). Se examina la siguiente seal celular, se
categoriza y se refiere a este centroide secundario para clasificacin celular. Se determina un nuevo
centroide con cada nueva seal para asistir con una identificacin exacta.

Figura No. 34: identificacin de seal y determinacin del centroide secundario

Luego de que las primeras 500 clulas son detectadas, se mantiene la posicin del centroide de cada
poblacin para la clasificacin de las siguientes 500 clulas. Todo el proceso se repite hasta 5 veces para
una identificacin ptima de clulas y para la colocacin estable del centroide final. El XE-2100 analiza e
identifica miles de seales detectadas. Su algoritmo de cmputo aprende el diferencial para cada muestra
de paciente por medio de la identificacin individual de las clulas para una separacin ptima de las clulas.

Revisin del anlisis de grupos del dispersograma

1. Anlisis de 500 clulas con centroides mviles


2. Colocacin de las subsiguientes 500 clulas para colocacin ptima del centroide
3. Repeticin de las etapas 1 y 2, hasta 5 veces
4. Determinacin final de la colocacin de los grupos
5. Anlisis y discriminacin de aproximadamente 32,000 clulas

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V. Concepto de la identificacin positiva/ negativa y
mensajes interpretativos
Revisin de mensajes interpretativos
o Mensajes anormales
- Resultados numricos fuera de lmites
- Histogramas o dispersogramas anormales

o Mensajes de sospecha
- Anormalidades generadas por algoritmos de dispersogramas e histogramas

Los mensajes interpretativos consisten de dos tipos, mensajes anormales y de sospecha.

Los mensajes anormales consisten de resultados numricos que exceden lmites definibles por el usuario.
Los histogramas y dispersogramas anormales tambin dan mensajes anormales, pero no pueden ser
ajustados por el laboratorio.

Los mensajes de sospecha son generados por algoritmos de histogramas/ dispersogramas que no pueden
ser ajustados por el laboratorio. Los mensajes de sospecha finalizan con un signo de interrogaccin (?) para
indicar el potencial de encontrar esa anormalidad.

Cada laboratorio debe establecer su propio plan de accin para tratar con estos mensajes.

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LISTA DE MENSAJES INTERPRETATIVOS (IP) DEL SYSMEX XE-2100
INDICACIN SIGNIFICADO FRMULA/ VALORACIN CANAL DE ANLISIS PARMETROS CLAVES
WBC Abn Scg Dispersograma WBC Dispersograma WBC/ BASO, WBC, BASO Dispersograma
anormal dispersograma DIFF
NRBC Abn Scg Dispersograma NRBC Dispersograma NRBC NRBC Dispersograma
anormal
Neutro- Bajo nmero de neutrfilos NEUT# < 1.00 x 103/L* NEUT# y NEUT%
Neutro+ Elevado nmero de NEUT# > 11.00 x 103/L* NEUT# y NEUT%
neutrfilos
Linfo- Bajo nmero de linfocitos LYMPH# < 0.80 x 103/L* LYMPH# y LYMPH%
Linfo+ Elevado nmero de LYMPH# > 4.0 x 103/L* LYMPH# y LYMPH%
ANORMAL

linfocitos
Mono+ Elevado nmero de MONO# > 1.00 x 103/L* MONO# y MONO%
monocitos
Eo+ Elevado nmero de EO# > 0.70 x 103/L* EO# y EO%
eosinfilos
Baso+ Elevado nmero de BASO# > 0.20 x 103/L* BASO# y BASO%
basfilos
Leuco- Bajo nmero de leucocitos WBC < 2.50 x 103/L* WBC
Leuco+ Elevado nmero de WBC > 18.00 x 103/L* WBC
leucocitos
WBC

NRBC Present Elevado nmero de NRBC% > 2.0%* NRBC NRBC%


hemates nucleados
*o generados por el valor programado por el usuario en el men de ajustes de la unidad principal (alarmas DIFF)
Blasts? Posibilidad de presencia Grupo de puntos en el rea de blastos encontradas DIFF, IMI Dispersograma
de blastos en el dispersograma IMI y DIFF
Imm Gran? Posibilidad de presencia de Grupo de puntos en el rea de granulocitos DIFF, IMI Dispersograma
granulocitos inmaduros inmaduros en el dispersograma IMI y DIFF
Left Shift? Posibilidad de desviacin a Posible desplazamiento de GRAN hacia arriba a la DIFF, IMI Dispersograma
la izquierda (presencia de derecha en el dispersograma DIFF; posible
bandas) desplazamiento a la izquierda en el dispersograma
SOSPECHA

IMI
Abn Ly/L_BI? Posibilidad de presencia de Posible desplazamiento de Linf hacia arriba a la DIFF Dispersograma
linfocitos anormales o derecha en el disperso. DIFF. Grupo de puntos en
blastos el rea de blastos encontrados en el disperso. IMI
NRBC? Posibilidad de presencia de Posible distribucin parcial entre el rea de DIFF Dispersograma
hemates nucleados fantasmas y linfocitos en el dispersograma DIFF
RBC Lyse Posibles problemas en la Clculos matemticos y comparaciones detalladas DIFF Dispersograma
Res? lisis de RBC de algoritmos definidos
Atypical Ly? Posibilidad de presencia de Posible existencia de clulas arriba a la derecha en WBC DIFF, WBC
linfocitos atpicos el dispersograma DIFF
RBC Abn Dst Distribucin RBC anormal Clculos matemticos y comparaciones detalladas RBC Mensaje RL, RU, MP, DW
de los parmetros de anlisis
Dimorph Pop Doble poblacin RBC Vaco entre puntos elevados y bajos; la forma del RBC Mensaje MP (histograma)
(distribucin de prioridad) pico de distribucin es importante
RET Abn Scg Dispersograma RET Dispersograma RET RET Dispersograma
anormal
ANORMAL

Aniso Anisocitosis RDW-SD > 65* fl o RDW-CV > 0.20* RDW-SD y RDW-CV
Micro Microcitos MCV < 70 fl* MCV
Macro Macrocitos MCV > 110 fl* MCV
Hypocroma Hipocroma MCHC < 29.0 g/dL* MCV
Anemia Anemia HGB < 10.0 g/dL (Indicacin1)* MCHC
RBC/ RET

Eritro+ Eritrocitosis RBC# > 6.5 x 106/L* HGB


Reticulo Reticulocitosis RET% > 5 % o RET# > 0.2000 x 106L* RET#, RET%
*o generados por el valor programado por el usuario en el men de ajustes de la unidad principal (alarmas RBC)
RBC Agglut? Posibilidad de una Clculo aritmtico y comparacin numrica para un RBC MCHC, MCH, RBC, RU%
aglutinacin de RBC grupo de parmetros de anlisis determinado
Turb/ HGB? Posibilidad de un error HGB Clculo aritmtico y comparacin numrica para un MCHC
por interferencia o lisis parmetro de anlisis determinado MCHC > 36.5
SOSPECHA

Iron Def? Posibilidad de una anemia Clculo aritmtico y comparacin numrica para un MCHC, MCV, RDW-CV
por falta de hierro grupo de parmetros de anlisis determinado
HGB Defect? Posibilidad de una anomala Clculo aritmtico y comparacin numrica para un RDW-CV, MCV
HGB grupo de parmetros de anlisis determinado
Fragments? Posibilidad de que existan Clculo aritmtico y comparacin numrica para un RET, RBC Dispersograma, RDW-SD,
eritrocitos fragmentados grupo de parmetros de anlisis determinado PU, PU%, MCV, RL,
MCHC

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LISTA DE MENSAJES INTERPRETATIVOS (IP) DEL SYSMEX XE-2100
PLT Abn Scg Dispersograma PLT anormal Dispersograma PLT RET Dispersograma
Clculos matemticos y comparaciones detalladas PLT PDW, PL%, PU%, PMFV,
ANORMAL

PLT Abn Dst Distribucin PLT anormal de un parmetro de anlisis PLT, PLCR, MPV, PU
Trombo- Trombocitopenia PLT# < 60 x 103L* PLT
Trombo+ Trombocitosis PLT# > 600 x 103/L* PLT
*o generados por el valor programado por el usuario en el men de ajustes de la unidad principal (alarmas PLT)
PLT

Posibilidad de presencia de Mancha continua hacia arriba a la derecha en el DIFF, IMI, NRBC Dispersograma
PLT Clumps? agregados de PLT rea de fantasmas en el dispersograma DIFF y IMI
SOSPECHA

PLT C (S)? Posibilidad de agregados Clculo aritmtico y comparacin numrica para un PLT PDW, PL%, PU%, PMFV,
PLT parmetro de anlisis determinado PLT, PLCR, MPV, PU

Nota: las reglas y frmulas estn sujetas a cambios debido a mejoras

RL: Posicin del discriminador inferior de RBC


RU: Posicin del discriminador superior de RBC
PU: Posicin del discriminador superior de PLT
PL%: Porcentaje de interseccin entre el discriminador inferior de PLT y la curva del histograma
(considerando el pico del histograma como 100%)
PU%: Porcentaje de interseccin entre el discriminador superior de PLT y la curva del histograma
(considerando el pico del histograma como 100%)
MP: Mensaje cuando el histograma de RBC muestra mltiples picos
DW: Mensaje cuando RDW-SD no puede ser calculada

Mensajes positivos
Mensaje Explicacin Indicador Explorador
Diff. Anormalidad el diferencial de leucocitos D
Morfo. Anormalidad en la morfologa M
Cont. Anormalidad en el nmero de clulas C

Mensajes de accin
Mensaje Explicacin
Delta Check Error Revisar la muestra; cambio abrupto en los resultados cuya causa debe ser
investigada
Count NRBC-CH Posible presencia de NRBC; se sugiere utilizar el canal NRBC para confirmar y
cuantificar su presencia
Count RET-CH Posible interferencia en el conteo de PLT medidos por impedancia; se sugiere
utilizar el canal de reticulocitos para obtener el conteo de PLT de fluorescencia

Mensajes de error
Mensaje Explicacin
Func. Error de anlisis (excepto error de cdigo de barras, estos constituyen en su
mayora errores del instrumento)
Result Probablemente los resultados son errneos (estos constituyen en su mayora
errores de la muestra)
Delta Anormalidades del Delta Check

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WBC
RBC
PLT

Guia preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE V. Sistema de mensajes Pagina 42


VI. Control de calidad
El propsito de cualquier programa de control de calidad es detectar un error sistemtico que pueda causar
que un paciente normal parezca anormal, o que un paciente anormal permanezca no detectado. Para
mantener la confiabilidad de los datos analizados, se requiere un monitoreo peridico de la estabilidad del
instrumento. Cambios en la estabilidad que puedan afectar a los resultados de pacientes, slo pueden
detectarse por un operador familiarizado con las teoras y prcticas del control de calidad, y con las
herramientas que el instrumento suministra para ayudar en este proceso. Esta seccin da una perspectiva de
las consideraciones generales para establecer un programa de control de calidad, revisa los principios de
control de calidad y discute brevemente el programa de control de calidad del XE-2100. Detalles del
programa de control de calidad del XE-2100 sern cubiertos durante la sesin de entrenamiento.

Consideraciones generales
Existen tres tipos de controles que pueden usarse para monitorear la estabilidad de un instrumento. Estos
pueden ser productos preparados comercialmente, muestras de pacientes retenidas (controles de pacientes)
o un programa de media mvil. Cada laboratorio debe decidir cual(es) tipo(s) de control(es) ha de usar. Esta
eleccin se basa en regulaciones (CAP, JCAH, o el departamento de salud del pas, etc.), costo, carga de
trabajo del laboratorio y poblacin de pacientes. La pgina siguiente le ofrece la tabla No. 9 listando estos
tres tipos de controles con sus ventajas y limitaciones.

Despus que el laboratorio escoge el/los tipo(s) de control(es) que va(n) a cumplir con sus necesidades
individuales, el valor de la media y los rangos alrededor de dicho valor deben establecerse para cada
parmetro. Estos rangos deben ser lo suficientemente estrechos como para detectar un problema que pueda
afectar significativamente a los resultados de pacientes, pero no tan estrechos como para forzar al operador a
tratar de resolver un problema no existente, esto es, un problema que no va a afectar la exactitud de los
resultados. Algunos laboratorios establecen rangos de dos desviaciones estndar alrededor de la media,
otros usan tres desviaciones estndar basados en la relacin entre los parmetros especficos y la poblacin
de pacientes de su respectiva institucin. Se han publicado varios artculos y libros describiendo las ventajas
y desventajas de cada punto de vista. A causa de la estabilidad electrnica y la precisin excepcional de los
instrumentos actuales, la tendencia parece ser un aumento en el uso de rangos de tres desviaciones estndar
sin sacrificar la exactitud de los resultados (toda la informacin ulterior de esta seccin se basa en el uso de
rangos de tres desviaciones estndar).

Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE VI. Control de calidad


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Pgina 43
Tipo de control Por qu usarlo? Ventajas Limitaciones
Control comercial Verifica la calibracin 9 Conveniente Costoso

Detecta desviaciones o 9 Estable La estabilizacin y


tendencias a largo plazo purificacin
9 Puede usarse para la cambian las
Detecta error sistemtico y mayora de los propiedades de las
aleatorio parmetros clulas; sacrificio
de caractersticas
Verifica el control despus de sangre
del mantenimiento completa fresca
por la estabilidad
Sirve como medio para
controlar el diferencial
automtico

Muestra de Detecta tempranamente 9 Gratis; se analiza ms Baja estabilidad


paciente retenida cambios dentro de la frecuentemente que un
corrida control comercial No es control para
subpoblaciones de
Sirve como control de 9 Bueno como control de leucocitos (WBCs)
calidad para los modos corrida-a-corrida y de (diferencial)
abierto y de predilucin turno-a-turno

Ayuda a determinar si 9 Transferible de


existe un problema con el instrumento primario a
material del control respaldo o a
comercial o si el problema instrumento satlite
radica en el instrumento

Medias mviles Detecta problemas debidos 9 Gratis Dependiendo del


a la calidad del reactivo tipo y tamao de la
9 Ms sensible a poblacin de
Detecta problemas con la cambios sutiles en pacientes, puede
calidad y el manejo de la perodos largos de no detectar a
muestra tiempo, particularmente tiempo las
los ndices de desviaciones y
Detecta cambios dentro de hemates (RBCs) y tendencias en los
la corrida leucocitos (WBCs) parmetros
medidos
9 Monitoreo constante directamente, los
del instrumento con cuales tienden a
esfuerzos mnimos ser dependientes
de la poblacin

Tabla No. 9

Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE VI. Control de calidad


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Pgina 44
Principios del control de calidad
Si una muestra de control de calidad pudiera ser analizada bajo condiciones perfectas, se podra esperar
acertar a los valores medios o dianas cada vez que se analizara el control. Sin embargo, existen variables
en el medio real del laboratorio que prohiben estas condiciones perfectas. El calendario de mantenimiento del
instrumento y la estabilidad individual y manejo del material de control representan slo unas cuantas de las
variables de da a da que afectan la habilidad para acertar al blanco (diana) cuando se analiza un control.
Por tanto, la meta realista cuando se analizan controles es obtener resultados que caen dentro de rangos
establecidos alrededor de la diana. Cada rango explica la estabilidad del control y la precisin esperada del
instrumento para un parmetro individual, y se define por un lmite inferior y un lmite superior. Un resultado
que excede un lmite representa una variacin significativa en el desempeo del instrumento o en la
estabilidad del control, y empuja al operador a tomar una accin apropiada.

Los procedimientos comnmente utilizados en un laboratorio para establecer nuevas dianas y lmites para los
materiales de control pueden basarse en mtodos desarrollados en su laboratorio en el pasado, o dependen
de los requerimientos del analizador de hematologa que se use. Estos procedimientos dictan que cada vez
que se reciba un nuevo lote de control comercial, o se escoja un control fresco de paciente, nuevas dianas y
lmites deben establecerse, ya sea ingresando rangos de una hoja de valores ensayados de un control
comercial en el programa de control de calidad del instrumento, o del anlisis del control repetido varias
veces. Ambos mtodos continan usndose, pero ambos tienen limitaciones significativas.

Los valores en la hoja de ensayo se derivan tpicamente de los resultados recogidos de un nmero limitado de
laboratorios que analizan el control antes de que sea enviado a los clientes. Los valores de ensayo no
explican las variables esperadas de instrumento a instrumento tales como precisin, calibracin, reactivos y
mantenimiento. Para usar los valores de la hoja de ensayo, se tendra que asumir que todo instrumento es
exactamente el mismo en todos los aspectos.

Tambin es una prctica comn analizar un control nuevo varias veces para determinar los valores dianas y
desviaciones estndar, para luego calcular los nuevos lmites inferiores y superiores para cada parmetro.
Los lmites resultantes si reflejan variables individuales del instrumento. Sin embargo, pueden ser muy
ajustados porque reflejan el desempeo del control y del instrumento a lo largo de un perodo muy corto de
tiempo (quizs slo unos pocos das). Estos rangos no explican variables tales como la estabilidad del control
y la precisin del instrumento, que puedan afectar a los valores durante el perodo de tiempo en el que el
control realmente va a estar en uso (tpicamente un mes). Adicionalmente, el uso de desviaciones estndar
para calcular un nuevo rango para cada parmetro en cada lote de control nuevo o en cada control de
paciente nuevo es fcil, pero consume mucho tiempo.

Si se pudiera proponer un mtodo ideal para establecer un archivo de control, es lo ms probable que este
mtodo incluira ensayar el control varias veces durante un perodo de das para establecer una diana
especfico del instrumento y luego, determinar lmites histricos que tomen en cuenta las diferencias
esperadas en la precisin del instrumento y en la estabilidad del control durante un perodo prolongado de
tiempo. Por ejemplo, los lmites histricos para un control comercial pueden determinarse de resultados
colectados por el analizador durante varios meses, para proporcionar lmites especficos del instrumento, de
rango amplio.

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Los lmites pueden calcularse usando desviacin estndar (DE). Una forma simple, ms eficiente de
establecer los mismos lmites es usando el coeficiente de variacin (CV%). La desviacin estndar y el
coeficiente de variacin estn relacionados de cerca pero tienen diferencias significativas.

DE = CV% x Media CV% - DE _ x 100


100 Media

9 La desviacin estndar es una medida absoluta de la dispersin alrededor de una media especfica o
valor diana. La desviacin estndar se determina comparando con la media cada resultado usado para
calcularla. Dado que la desviacin estndar depende directamente del valor de la media, su valor va a
cambiar al cambiar la media.

9 El coeficiente de variacin tambin es una medida de variabilidad debida a la precisin del instrumento y
a la estabilidad del control, pero la variacin se expresa como porcentaje en lugar de cmo un valor
absoluto, de forma que puede aplicarse a cualquier valor diana.

El siguiente ejemplo muestra la relacin entre la desviacin estndar y el coeficiente de variacin cuando se
calcula lmites:

EJEMPLO #1
LOTE A Hemoglobina Media = 13.0
Nivel normal DE = 0.2
CV% = 1.5%

Si se desea un grfico de tres desviaciones estndar:

DE CV%

0.2 x 3 = 0.6 (3DE) 1.5% x 3 = 4.5% (3CV%)

LS = 13.0 + 0.6 = 13.6 4.5% de la media resulta en lmites de 13.0 +/- 0.6
(Lmite superior)

LI = 13.0 - 0.6 = 12.4 (12.4 - 13.6)


(Lmite inferior)

Si se documentaran las estadsticas para cada nivel de varios lotes de controles comerciales, o para varios
controles de pacientes, notara que las medias y las desviaciones estndar tienden a fluctuar, pero los
coeficientes de variacin permanecen constantes. Los coeficientes de variacin son constantes porque
reflejan la precisin total del instrumento y el desempeo del control para cada parmetro,
independientemente de los valores dianas especficos. Como los coeficientes de variacin son constantes,
los lmites historicamente determinados pueden ser ingresados una vez en el archivo de control para cada
nivel de control, y luego ser usados por el instrumento para recalcular automaticamente los lmites superiores
e inferiores cuando se establece una nueva diana.
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El siguiente ejemplo muestra la aplicacin de los lmites histricos, el uso de la desviacin estndar para
determinar un nuevo rango cuando cambia el valor diana:

EJEMPLO #2
LOTE B Hemoglobina Media = 13.4
Nivel normal DE = 0.2
CV% = 1.5%

Si se desea un grfico de tres desviaciones estndar:

DE Lmites % histricos

0.2 x 3 = 0.6 4.5% = (CV% x 3)


previamente ingresado al archivo de control de calidad

LS = 13.4 + 0.6 = 14.0


(Lmite superior)

LI = 13.4 - 0.6 = 12.8 4.5% de la nueva media automaticamente resulta en lmites de 13.4 +/- 0.6
(Lmite inferior)

Control de calidad del XE-2100


Al analizar los controles en el XE-2100, los puntos de los resultados son colectados en un archivo de control
de calidad. Una vez que se ha colectado un suficiente nmero de puntos, el operador programa el
instrumento para establecer las dianas. Si los lmites histricos para un grfico de tres desviaciones estndar
(tres coeficientes de variacin) ya han sido programados en el archivo, el instrumento va a recalcular y a
establecer automaticamente los lmites superiores e inferiores para las dianas.

El siguiente ejemplo ilustra el clculo del XE-2100 de los lmites inferiores y superiores para los leucocitos
(WBCs) en dos nmeros de lote de control comercial. Este ejemplo se basa en un coeficiente de variacin
histrico para leucocitos de 1.3.

Nota: los procedimientos recomendados para establecer nuevos valores dianas, coeficiente de variacin y
lmites histricos se discutirn durante la sesin de entrenamiento.

EJEMPLO #3
Mes: Enero
Control: Lote A
Valor diana: 7.30 (establecido promediando 10 anlisis)
Lmite histrico: CV% x DE = (1.3% x 3) = 3.9
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Nuevo rango (calculado por el analizador):

Lmite inferior (LI) = Diana - (Lmite% x Diana)


= 7.30 - (3.9% x 7.30)
= 7.30 - 0.28
= 7.02

Lmite superior (LS) = Diana + (Lmite% x Diana)


= 7.30 + (3.9% x 7.30)
= 7.30 + 0.28
= 7.58

Rango para el lote A leucocitos (WBCs) es 7.02 - 7.58

Mes: Febrero
Control: Lote B
Valor diana: 5.69 (establecido promediando 10 anlisis)
Lmite histrico: CV% x DE = (1.3% x 3) = 3.9

Nuevo rango LI = Diana - (Lmite% x Diana)


= 5.69 - (3.9% x 5.69)
= 5.69 - 0.22
= 5.47

LS = Diana + (Lmite% x Diana)


= 5.69 + (3.9% x 5.69)
= 5.69 + 0.22
= 5.91

Rango para el lote B leucocitos (WBCs) es 5.47 - 5.91

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VIII. Reticulocitos
Maduracin de los hemates (RBC)
El papel mas importante de los hemates es llevar oxgeno a, y dixido de carbono desde, todas las clulas
que componen el cuerpo. Sin suficientes hemates para proveer un abastecimiento adecuado de oxgeno, las
clulas no pueden funcionar adecuadamente y eventualmente mueren. La falta de hemates es simplemente
llamada una anemia, pero la anemia est muy lejos de ser simple. Una vez se identifica una condicin
anmica, se necesita mas informacin para diagnosticar la causa subyacente e iniciar un tratamiento efectivo.

En la mdula sea, la lnea de hemates principia como una clula madre nucleada. El ncleo es la
instruccin para la produccin de hemoglobina en la clula. El ARN lee la instruccin y ensambla la
protena de hemoglobina en la cual es llevado el oxgeno. Cuando se produce la mxima cantidad de
hemoglobina que la clula puede contener, el ncleo ya no es necesario y es arrojado de la clula. La clula
en maduracin que queda luego de la prdida del ncleo, se llama un reticulocito (ver figura No. 35).

Figura No. 35: maduracin de los hemates (RBC)

Por definicin, un reticulocito es un hemate inmaduro identificado por la red, o retculo de puntos y hebras de
ARN que aparecen cuando es teido con una tincin supervital. Los reticulocitos pasan tres de sus cuatro
das de vida en la mdula sea y son liberados para circular en la sangre perifrica por un da, mientras
continan madurando, lentamente metabolizando el ARN restante dentro de ellos.

En los primeros aos de la dcada de los 1930, Heilmeyer describi la morfologa de los reticulocitos en
cuatro etapas de maduracin, y determin las frecuencias relativas de estas etapas en la sangre perifrica.
Las etapas de los reticulocitos ha ayudado a formar nuestra definicin de las clulas contadas en los frotis
perifricos, y los cambios en las proporciones de cada etapa de los reticulocitos en la circulacin proporciona
informacin adicional sobre la forma de responder de la mdula sea.

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Figura No. 36: etapas de la maduracin de los reticulocitos de Heilmeyer y sus frecuencias relativas

O. Metarubricito con retculo denso


I. Clula no nucleada con grumo denso de retculo (Aprox. 0.1%)
II. Patrn en forma de guirnalda de retculo (Aprox. 7%)
III. Guirnalda de retculo desintegrada (Aprox. 32%)
IV. Algunos grnulos dispersos (Aprox. 61%)

En una persona sana normal, el tiempo de vida de los hemates es de aproximadamente 120 das y la mdula
sea produce nuevas clulas para reemplazar aquellas que se pierden cada da. El recambio constante de
clulas resulta en un porcentaje de reticulocitos de alrededor de 1% por da en adultos. Los infantes
despliegan un porcentaje ligeramente mayor al nacer, pero el conteo cae a valores normales de adulto en dos
semanas.

Rangos normales de reticulocitos manuales


Adultos: 0.5 - 2.0%
Recin nacidos: 2.5 - 6.0%

El monitoreo de los conteos de reticulocitos proporciona informacin importante sobre el estado funcional de
la mdula sea. Un conteo elevado de reticulocitos indica la habilidad de la mdula para responder a la
anemia; produciendo clulas en respuesta a destruccin aumentada o prdida de hemates. Un conteo bajo o
normal en presencia de anemia indica la inhabilidad de la mdula para responder a una condicin que daa a
la produccin de hemates. Tales condiciones incluyen supresin de la mdula por drogas o infecciones,
reemplazo de los precursores de los hemates por clulas leucmicas, tumores, etc. o eritropoyesis inefectiva
como resultado de deficiencias nutricionales o enfermedades crnicas.

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Aplicaciones para el conteo de reticulocitos
Aunque el conteo de reticulocitos es una prueba efectuada en todos los laboratorios de hematologa, pocos
de los conteos son ordenados por mdicos rutinariamente. Esta sub-utilizacin de la prueba se debe
principalmente a las limitaciones del mtodo manual para el conteo de reticulocitos, mas que a la falta de
aplicacin para la prueba. En los ltimos aos, con el advenimiento de pruebas automatizadas de
reticulocitos, el uso de los conteos de reticulocitos se ha expandido de una prueba usada solo para determinar
la causa de anemia, a un monitor sensible del tratamiento de muchos desrdenes.

Clasificacin/ tratamiento de anemia

El uso rutinario del conteo de reticulocitos puede ayudar a distinguir las posibles causas de la anemia,
haciendo el diagnstico y la seleccin del tratamiento mas fcil y eficiente. Por ejemplo, la anemia por
deficiencia de hierro, causada por la falta en la mdula de los materiales de construccin necesarios, hace
mas lenta la produccin de hemates, resultando en un conteo reducido de reticulocitos. Un conteo reducido,
en lugar de normal o aumentado de reticulocitos, hace ms fcil la bsqueda de la causa de la anemia y
apura el tratamiento. Una vez principiado, la eficacia del tratamiento puede detectarse por un aumento del
conteo de reticulocitos; es un indicador ms sensible del xito de la terapia, en lugar de estar esperando un
aumento significativo del conteo de hemates, del hematocrito o del nivel de hemoglobina.

Enfermedades de la mdula
Los pacientes que sufren de varias enfermedades de la mdula sea exhiben conteos disminuidos de
reticulocitos, primariamente debido a clulas eritropoyticas que estn siendo exprimidas por tumores, fibrosis
o clulas leucmicas. El tratamiento de las enfermedades de la mdula sea con quimioterapia y trasplante
de mdula puede monitorearse con conteos de reticulocitos. Antes del anlisis de alta sensibilidad de los
reticulocitos, proporcionado por la citometra de flujo, el injerto de mdula sea trasplantada era determinada
por aumentos en los conteos de leucocitos y de plaquetas. Sin embargo, la interpretacin de estos resultados
se complica por el cuidado de soporte de los pacientes de trasplante de mdula con infusiones de plaquetas,
as como el efecto de infecciones en los conteos de leucocitos. Con la citometra de flujo, los pacientes de
trasplante de mdula sea son monitoreados cuidadosa y exitosamente por el injerto de mdula, por medio de
la aparicin de reticulocitos en sangre perifrica. Ms an, las proporciones fluorescentes obtenidas de
anlisis citomtricos de flujo de reticulocitos, indican la edad relativa de los reticulocitos, lo cual puede
proporcionar un indicador an ms temprano de injerto de mdula sea.

Quimioterapia
Los pacientes bajo quimioterapia, representan una gran poblacin, cuyo tratamiento podra monitorearse
usando conteos de reticulocitos. La quimioterapia trabaja destruyendo clulas cancerosas cuando estn en
su estado ms vulnerable, durante la divisin. Desafortunadamente, el tratamiento es una espada de dos
filos. Las clulas en la mdula sea tambin estn en constante divisin, y por lo tanto, desprotegidas de la
destruccin por las drogas de quimioterapia, dejando al paciente anmico, susceptible a infecciones y con
desrdenes de sangrado. As como con el transplante de mdula sea, las medidas de soporte y los riesgos
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de infeccin, hacen a los indicadores de regeneracin de la mdula sea menos efectivos. Los efectos
txicos de la terapia, y la recuperacin de la funcin de la mdula sea despus de cada ronda de
tratamiento, pueden ser determinados de la cada y elevacin de los conteos de reticulocitos.

Efectos txicos de las drogas terapeuticas

Una variedad de razones pueden suprimir o destruir la mdula sea. Las compaas que producen estos
productos txicos son reguladas por la administracin de alimentos y drogas (FDA por sus siglas en ingls),
una agencia federal estadounidense cuyo propsito es proteger al pblico de productos dainos. La FDA
requiere de los fabricantes de drogas que lleven a cabo estudios de los efectos de las mismas, y de sus
efectos colaterales, antes de que la droga sea aprobada para uso humano. Por ejemplo, AZT, la droga
ampliamente usada para el tratamiento de pacientes con SIDA, es muy txica para la mdula sea. Extensas
pruebas de laboratorio, como con las drogas de la quimioterapia, incluyendo varios otros qumicos usados
para conteos de reticulocitos, fueron llevadas a cabo para investigar los efectos de AZT en la mdula sea en
modelos animales. Actualmente, los conteos de reticulocitos se usan como un medio para regular la terapia
con AZT de pacientes con SIDA.

Enfermedad renal/ terapia con eritropoyetina (EPO)


El proceso complejo de produccin de hemates es regulado en parte por los riones. Como los riones son
responsables de mantener el sensible balance cido/base en el cuerpo, deben responder a la tensin de
oxgeno en la sangre. Cuando la tensin de oxgeno se reduce, por ejemplo con la anemia, los riones
responden aumentando la produccin de eritropoyetina (EPO), una hormona que estimula a la mdula sea
para acelerar la produccin de hemates, aumentando la capacidad acarreadora de oxgeno de la sangre. Si
los riones estn daados, la produccin reducida de eritropoyetina (EPO) disminuye la habilidad para
estimular a la mdula sea en respuesta a una menor tensin de oxgeno.

El tratamiento con eritropoyetina (EPO) de ingeniera gentica ha mejorado la calidad de vida para pacientes
con dolencias renales. Los pacientes renales con tratamiento de eritropoyetina (EPO), no experimentan los
efectos de la anemia severa que a menudo acompaa a su enfermedad, y se reduce la necesidad de
transfusin. La terapia con eritropoyetina (EPO) es costosa, y la dosis depende de factores de salud
individuales. El nivel de eritropoyetina (EPO) puede determinarse quimicamente, pero el efecto del
tratamiento se evala mejor por el aumento de la produccin de la mdula sea que se refleja en el conteo de
reticulocitos.

Se estn explorando muchas ms aplicaciones para el tratamiento con eritropoyetina (EPO). Su uso para
aliviar la anemia en pacientes bajo quimioterapia, para facilitar donaciones autlogas de sangre y para
estimular la produccin de hemoglobina fetal en pacientes con anemia drepanoctica, son ejemplos de
algunas de estas aplicaciones.

La introduccin de la citometra de flujo ha abierto la puerta para muchas aplicaciones en el anlisis de


reticulocitos. Habiendo sido una vez usado moderadamente para obtener informacin adicional en el
diagnstico de anemias simples, el conteo de reticulocitos est hallando un nuevo nicho en la medicina como
un indicador de cambios diminutos en la actividad de la mdula sea.
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Conteos manuales de reticulocitos
El conteo manual de reticulocitos es probablemente el mejor indicador de la produccin de hemates, sin
embargo, tambin puede ser la prueba ms sub-utilizada en el laboratorio de hematologa. Si un conteo de
reticulocitos es tan valioso, y proporciona informacin diagnstica vital para muchas condiciones que causan
anemia, Por qu los mdicos no lo ordenan ms frecuentemente?. La respuesta a esta pregunta radica en
el mtodo con el cual la prueba ha sido tradicionalmente realizada. El conteo manual de reticulocitos es
propenso a varias fuentes de error que limitan el valor diagnstico del resultado, lo cual a su vez decrece la
frecuencia de las solicitudes de la prueba.

El procedimiento de conteo manual de reticulocitos, comprende la mezcla de partes iguales de sangre y de


una tincin supravital, e incubacin de la preparacin por diez minutos. La tincin penetra la membrana
celular y precipita el ARN presente. Se prepara un frotis y se cuentan 1000 hemates. Los reticulocitos
contienen mas ARN precipitado que los hemates maduros, de forma que las clulas son diferenciadas y
contadas basndose en sus caractersticas de tincin e informadas como porcentaje.

Diferentes variaciones en el procedimiento para el mtodo manual se usan en los laboratorios a lo largo del
pas. Se utilizan diferentes tinciones, abundan variaciones en el tiempo de incubacin y en la preparacin del
frotis. Las variaciones ms significativas que afectan el conteo manual de reticulocitos son la identificacin
subjetiva de los reticulocitos, el mtodo de conteo empleado y el mtodo de informe de resultados. Todas
estas variaciones contribuyen a la falta de precisin y exactitud observada en el mtodo del conteo manual
que se lleva a cabo hoy en da. El Comit Nacional para Estndares de Laboratorio Clnico (NCCLS por sus
siglas en ingls) ha propuesto un procedimiento estndar (Hl6-P) para mejorar la confiabilidad e interpretacin
del conteo manual de reticulocitos. Sin embargo, gran parte del error involucrado es inherente al mtodo, sin
importar cuan cuidadosamente se siga el estndar.

Dos tinciones supravitales, el azul de cresil brillante o el nuevo azul de metileno pueden utilizarse. La
seleccin de tincin, los mtodos de preparacin de la misma, la precipitacin o evaporacin del colorante
pueden afectar la apariencia de las clulas. El precipitado del colorante puede confundirse con agregados de
ARN. Los tiempos de incubacin acortados pueden llevar a tinciones incompletas y conteos falsamente
disminuidos. El documento del NCCLS describe la preparacin de la muestra y del colorante con nuevo azul
de metileno en un esfuerzo para estandarizar este aspecto del mtodo manual.

Las caractersticas intrnsecas de los reticulocitos pueden impedir la preparacin de una distribucin
homogenea de clulas en un frotis. Los reticulocitos son aproximadamente 20% ms grandes por volumen
que los hemates maduros y pueden exhibir el mismo fenmeno observado en los frotis diferenciales donde
las clulas ms grandes son empujadas hacia el borde del frotis. Adems, los reticulocitos muestran una
propiedad adhesiva que hace que las clulas se mantengan unas a otras unidas aun cuando estn
extendidas en una lmina. Se ha teorizado que esta propiedad adhesiva puede explicar la retencin de estas
clulas inmaduras en la mdula sea por tres de sus cuatro das de vida. Un frotis bien preparado no puede
eliminar el error asociado con una falta de distribucin homogenea de los reticulocitos en el frotis, que en
ltima instancia afecta a los conteos.

El nmero estndar de hemates evaluados en un conteo de reticulocitos es 1000, convirtiendo a esta prueba
en una muy tediosa de llevar a cabo. Contar mil clulas puede parecer un muestreo muy grande; sin
embargo, el coeficiente de variacin terico (CV) para un conteo de reticulocitos de 1% es 31%. Uno tendra
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que contar al menos 3000 clulas para lograr un coeficiente de variacin (CV) de 6% en el mismo conteo de
reticulocitos de 1%. Es improbable que un conteo de tres mil clulas para solicitudes rutinarias de
reticulocitos sea adoptado en la mayora de laboratorios, pero la precisin mejora con el nmero de hemates
contados. Para ayudar a mejorar la precisin, dispositivos que reducen el campo, tales como el disco de
Miller, se usan a veces para reducir el nmero de clulas contadas, mientras se permite a los tecnlogos
evaluar una proporcin grande de clulas. El disco de Miller es un dispositivo que se coloca en un ocular del
microscopio. Grabado en el disco hay un cuadrado con otro cuadrado ms pequeo adentro de l. El rea
del cuadrado pequeo comparada con la del grande representa una relacin de 1:9.

Figura No. 37: el disco de Miller

Los hemates son contados en el cuadrado pequeo, los reticulocitos son contados en el grande. Veinte
campos son evaluados y se calcula el porcentaje de leucocitos (NCCLS H-16P). Los dispositivos para reducir
el campo hacen a los conteos de reticulocitos menos tardados y tediosos, pero mejoran solo un poco la
precisin del conteo manual.

Finalmente, la precisin del conteo manual es reducida an ms porque el componente contado constituye
solo 1% de millones de hemates en una muestra normal. Los reticulocitos se consideran eventos raros, de
forma que la probabilidad de reproducir el conteo cuando sean encontrados tan pocos reticulocitos disminuye
grandemente.

La identificacin subjetiva de los reticulocitos es otra variable significativa que explica la pobre precisin del
conteo manual de reticulocitos. El documento del NCCLS afirma que un reticulocito es cualquier hemate
que contenga dos o ms partculas de material teido de azul despus de la tincin con nuevo azul de
metileno. Algunos laboratorios, as como tecnlogos dentro de esos laboratorios, pueden tener diferentes
criterios usados para clasificar a los reticulocitos. Un punto, dos puntos, o toda una red de ARN puede ser
clasificado como un reticulocito, dependiendo de quien lleva a cabo el conteo. Para complicar an ms el
asunto, otras inclusiones de hemates tales como cuerpos de Heinz con punteado basfilo, cuerpos de
Howell-Jolly y cuerpos de Pappenheimer pueden teirse con tinciones supravitales haciendo ms difcil la
identificacin de los reticulocitos. La tabla No. 10 hace un sumario de las inclusiones de hemates que
interfieren, y los estados de enfermedad cuando ocurren estas inclusiones.

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INCLUSIN DESCRIPCIN ENFERMEDAD
Punteado basfilo ARN de ribosomas precipitado, - Sntesis defectuosa o acelerada de heme
difuso o punteado - Intoxicacin por plomo
- Talasemias
Cuerpos de Heinz Hemoglobina desnaturalizada, - Hemoglobinas inestables
precipitada - Deficiencia de G-6-PD
- Talasemias
Cuerpos de Howell-Jolly Restos de ADN nuclear, - Eritropoiesis acelerada
nicos o dobles encontrados en - Despus de una esplenectoma
la periferia celular - Anemia hemoltica
- Talasemia
- Anemia megaloblstica
Cuerpos de Pappenheimer Grnulos que contienen hierro - Despus de una esplenectoma
o restos mitocondriales - Anemia sideroblstica
- Talasemia
- Alcoholismo
Tabla No. 10: posibles interferencias del conteo manual de reticulocitos

El conteo de reticulocitos se informa en una variedad de diferentes formas, siendo la ms comn el


porcentaje. El porcentaje de reticulocitos puede ser engaoso para el mdico cuando el conteo de hemates
disminuye, o cuando estn presente reticulocitos de estrs (tambin conocidos como reticulocitos de
desviacin o estimulados).
Correcciones del porcentaje de reticulocitos por anemia y/o reticulocitos de estrs deberan hacerse cuando
sea necesario, dependiendo de la muestra, para dar al mdico un verdadero cuadro del estado eritropoytico
del paciente. En la prctica, sin embargo, pueden hacerse correcciones por anemia y/o estrs en todas las
muestras, o en ninguna de las muestras, independientemente de la necesidad. Para una descripcin ms
detallada de las correcciones por anemia y estrs, refirase al artculo titulado Correcciones de los valores de
porcentaje de reticulocitos manuales que sigue a esta seccin.

Considerando las muchas limitaciones documentadas de la preparacin, identificacin, conteo e informe del
conteo manual de reticulocitos, puede parecer asombroso que los mdicos soliciten la prueba en absoluto!.
El anlisis automatizado de reticulocitos ha sobrepasado las limitaciones severas del mtodo manual,
resultando en una mayor confiabilidad, sensibilidad y valor diagnstico del conteo de reticulocitos.

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Correcciones de los valores de porcentaje de reticulocitos manuales
Reimpresin del artculo de Sysmex Specifics
Por: Nancy Nicolai, especialista superior de aplicaciones

Usted ha teido, incubado, contado y calculado el porcentaje de reticulocitos (Retic%), pero este resultado
puede no estar listo para ser informado al doctor hasta que se haya finalizado una ltima etapa - la correccin.

Los conteos de reticulocitos se usan para diagnosticar y evaluar:


Anemias
Recuperacin de la funcin de la mdula sea (transplante de mdula sea, quimioterapia)
Enfermedad renal/ terapia con eritropoyetina
Toxicidad de drogas

La anemia resultante o perodos de estmulo eritropoytico intenso que impulsa a un doctor a solicitar un
conteo de reticulocitos puede contribuir a un porcentaje de reticulocitos observado engaoso en estas
condiciones. La correccin del porcentaje de reticulocitos puede ser necesaria para proveer resultados
exactos. La correccin del porcentaje de reticulocitos para un hematocrito (HCT) anormal y la presencia de
reticulocitos de desviacin es importante para estandarizar el resultado, de forma que un porcentaje de
reticulocitos elevado o disminuido puede igualarse con la respuesta, o falta de respuesta, de la mdula sea a
un suministro inadecuado de hemates.

Correccin del hematocrito (HCT)

La lgica atrs de la correccin del hematocrito (HCT) en pacientes anmicos es que el nmero de
reticulocitos circulantes aumenta si la mdula sea responde a las condiciones anmicas. Si la mdula no
responde, no hay cambio en el nmero de reticulocitos, pero disminuye el conteo de hemates. Con menos
hemates maduros en pacientes anmicos, el porcentaje de reticulocitos puede solo parecer aumentado.
Aqu hay una muestra, un ejemplo no tcnico. En una habitacin con nueve hombres y una mujer, la mujer
representa 10% de la gente en la habitacin. Si solo el nmero total de personas en la habitacin es reducida
a ocho con siete hombres y una mujer, la mujer representa el 12.5%.

Los conteos manuales de reticulocitos son el nmero de reticulocitos encontrados en un conteo de 1000
clulas y son informados como porcentaje de reticulocitos. Este porcentaje de reticulocitos observado es
comnmente corregido cuando el paciente es considerado anmico:

Frmula del conteo corregido de reticulocitos:

Porcentaje de reticulocitos corregido = Retic% observado x hematocrito del paciente


45%

Gua preparatoria para entrenamiento Sysmex serie XE VIII. Reticulocitos


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Sysmex Amrica Latina (Miami, EUA, mayo del 2005)
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El porcentaje de reticulocitos corregido estima cual sera el porcentaje de reticulocitos del paciente si l o ella
tuviera un volumen normal de hemates, corrigiendo con un hematocrito (HCT) asumido normal de 45%.
Como el hematocrito (HCT) normal puede ir de 38 a 48% en hombres y de 34 a 44% en mujeres, la
correccin con un hematocrito (HCT) de 45% arbitrario (o cualquier otro hematocrito escogido), resultar en
un porcentaje de reticulocito arbitrario. Un mtodo alternativo para la correccin por hematocrito (HCT) del
porcentaje de reticulocito sera un conteo absoluto de reticulocitos.

Reticulocitos de desviacin (estrs)

Los reticulocitos de desviacin son reticulocitos que son liberados temprano de la mdula sea y circulan en
la sangre ms tiempo que lo usual de un da. Si la pregunta a responder por el conteo de reticulocitos es
Cuntos reticulocitos fueron producidos hoy?, los reticulocitos de desviacin no deberan ser incluidos en la
respuesta, pues el resultado estara incrementado por aquellos que fueron producidos ayer y continan
madurando en la sangre perifrica. La correccin menos usada del conteo de reticulocitos observado por
reticulocitos de desviacin estara justificado si un alto porcentaje de hemates ms grandes, azulados, fueran
vistos en un frotis de sangre perifrica teido con Wright.

Esta correccin se usa poco, probablemente a causa de que la observacin de desviacin de desplazamiento
es muy subjetiva, y la mayora de laboratorios no preparan y revisan un frotis teido con Wright con cada
peticin de conteo de reticulocitos. El porcentaje de reticulocitos es generalmente dividido por el tiempo
estimado de maduracin de los reticulocitos en das. El tiempo de maduracin en la sangre perifrica se
alargar con el aumento de la anemia, de forma que el factor usado depende de nuevo del hematocrito (HCT)
del paciente.

La gua propuesta del NCCLS (H16-P) recomienda el ndice de Produccin de Reticulocitos (IPR) para la
correccin por desviacin.

ndice de Produccin de Reticulocitos (IPR)

La ecuacin para calcular IPR es-


IPR = porcentage de reticulocitos x tiempo de maduracin

El tiempo de maduracin de los reticulocitos se determina del hematocrito (HCT).

Hematocrito (HCT) Tiempo de maduracin (das)


45% +/- 5% 1
35% +/- 5% 1.5
25% +/- 5% 2
15% +/- 5% 3

El rango normal para el IPR es el mismo que para un conteo no corregido. Este ndice puede se usado para
comparar la respuesta de la mdula del paciente con la respuesta normal, esperada de la mdula. Un IPR
mayor o igual a 3 se considera adecuado y menor o igual a 2 se considera una respuesta inadecuada a la
anemia.

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El analizador automatizado de reticulocitos R-1000 de Sysmex, que fue presentado en el nmero de junio
1990 de Sysmex Specifics, revolucion la forma como el laboratorio llevaba a cabo el conteo de
reticulocitos. No solo el R-1000 disminuy el tiempo requerido para el anlisis de reticulocitos, sino permiti al
laboratorio proporcionar resultados ms sensibles y exactos. Una de las muchas formas en que el R-1000
logra la velocidad y la exactitud es proporcionando el porcentage y nmero de reticulocitos libres de error,
debido a los reticulocitos de desviacin, as como la correccin por anemia proporcionada por el nmero
absoluto de reticulocitos. El R-1000 produce un porcentaje de reticulocitos observado de las 32000 clulas
que despliegan en el dispersograma y proporciona una alternativa a la correccin arbitraria del hematocrito
(HCT) por medio del informe del nmero de reticulocitos, que es un conteo absoluto.

Un conteo de reticulocitos observado que no est corregido por anemia o por la presencia de reticulocitos de
estrs o de desviacin resultar en un conteo falsamente elevado. Proporcionando al mdico un conteo
absoluto de reticulocitos, la interpretacin del resultado es fcil y evita el trabajo de adivinar con las
correcciones del hematocrito (HCT) manual y de reticulocitos de desviacin.

El R-1000 elimin la necesidad de correccin por reticulocitos de estrs o de desviacin con el discriminador
que separa al dispersograma desplegado de la regin UPP (upper particle plateau: region de partculas
grandes). La mayora de reticulocitos de desviacin parecen caer en la regin UPP y no sern incluidos en el
clculo de porcentage y nmero de reticulocitos a partir del dispersograma.

De los aos noventa hasta la fecha, Sysmex contina mejorando la tecnologa de anlisis de los reticulocitos
y expandiendo la capacidad de esta tecnologa. Los modelos de la serie R de Sysmex como el R-3000, R-
3500, R-500 y el SE-RAM-1 continuaron revolucionando la industria. Los instrumentos de la serie X de
Sysmex utilizan un canal de reticulocitos basado en tecnologa similar pero utilizan un reactivo polimetino para
el anlisis. Los nuevos instrumentos de Sysmex permitirn la medicin de nuevos parmetros que aumenten
la capacidad de expansin de los laboratorios.

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Mtodo actual de conteo de reticulocitos
Antes de implementar un nuevo analizador para generar resultados de pacientes, las caractersticas de
funcionamiento del analizador deben ser evaluadas y documentadas. Al comparar dos mtodos muy
diferentes, tambin debera efectuarse un anlisis completo del mtodo actual.

Complete la siguiente encuesta de su mtodo actual de conteo de reticulocitos para ayudar a identificar
similitudes y diferencias con el mtodo de la Serie-R.

1. Mtodo actual usado de conteo de reticulocitos (por favor circule uno).

Conteo manual visual Citometra de flujo Otro

2. Tincin usada: _____________________________________________________________________

3. Liste las etapas de preparacin de muestra para llevar a cabo el conteo.

a. Cantidad de sangre usada: ________________________________________________________


b. Cantidad de colorante usado: ______________________________________________________
c. Tiempo de incubacin: ____________________________________________________________
d. Nmero de muestras preparadas (nmero de lminas, muestra y blanco): ___________________
_________________________________________________________________________________

4. Conteo.

a. Nmero de clulas contadas: ______________________________________________________


b. Uso de dispositivo de reduccin de campo (usado/ no usado): ____________________________
c. Ms de una persona realiza los conteos? Si _____ No _____
d. Criterio usado para identificacin de los reticulocitos.

5. Informe de resultados (circule uno).

a. Porcentaje observado.
b. Porcentaje corregido.
1. Corregido por anemia? Si _____ No _____
2. Corregido por reticulocitos de desviacin o estimulados? Si _____ No _____
c. Conteo absoluto.
d. Otro (describa):
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