VOL 78 - N 2

Mayo-Agosto de 2014
Ciudad de Bs. As. Argentina
ISSN 1515-6761 Ed. Impresa
ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM

Bioqumica y
Patologa Clnica

Revista de la Asociacin Bioqumica Argentina - Volumen 78 - N2 - Mayo-Agosto de 2014

Bioqumica y Patologa Clnica

Personalidades destacadas:
Dra. Rebeca Gerschman

Revista de la Asociacin Bioqumica Argentina.

Publicacin cuatrimestral.
 VOL 78 - N 2
Mayo-Agosto de 2014
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Bioqumica y
Patologa Clnica
Revista de la Asociacin Bioqumica Argentina

SUMARIO
Pg. 8 Editorial: La ABA y la educacin a distancia
Dra. Silvia B. Gonzlez

Pg. 10 Puede un tiempo de protrombina normal enmascarar la deficiencia aislada de un factor

de la coagulacin?
Grinspon, A.; Herrera, L. ; Pons, S.; Scazziota, A.

Pg. 16 Funcin tiroidea en pacientes con la enfermedad de Alzheimer

Marcel, R.; Junco, J.E.; Prez, A.; Gonzlez, V.

Pg. 24 Alta prevalencia de anticuerpos antitiroideos positivos, baja concentracin de hormonas

tiroideas y alta concentracin de tirotrofina (TSH) asociado a una baja concentracin de
vitamina D (VitD) en pacientes peditricos
Zaidman, V.E.; Maceiras, M.; Lazzati, J.M.; Kutasz, E.P.; DIsa, G.; Chilleli, C.; Tau, C.; Viterbo,
G.; Rivarola, M.; Belgorosky, A.; Chaler, E.A.

Pg. 29 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la

poblacin del Gran Mendoza
Kordys, M.E.; Gallego, F.; Collino, C.J.

Pg. 40 MicroARNs en Inmunologa

Snchez, M. L.

Pg. 64 CURSOS ABA 2014

ByPC 2014;78(2)
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Suplente 1a: Dra. Claudia Ayuso Dra. Liliana Maggi
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Dra. Leticia Yamamoto

ByPC 2014;78(2)
 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza 29

ARTCULO ORIGINAL
Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores
de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran
Mendoza
Kordys, M.E.1*; Gallego, F.2; Collino, C.J.2
1 Servicio de Hematologa Clnica, Hospital El Carmen, Godoy Cruz, Mendoza, Argentina.
2 Servicio de Laboratorio, Hospital Rawson, Ministerio de Salud de la Provincia de Crdoba, Crdoba, Argentina.

Contacto: Mara Eugenia Kordys. E-mail: eugenia_mek@hotmail.com

RESUMEN La evaluacin de mtodos es un conjunto de procesos necesarios que el laboratorio bioqumico

debe realizar de manera previa a la implementacin metodolgica de sistemas de medicin. Esta for-
ma de trabajo permite evaluar el desempeo del mtodo a partir de la discusin de diferentes parme-
tros estadsticos, los cuales se obtienen al aplicar protocolos estipulados de validacin, verificacin
y demostracin de mtodos. En este sentido, y priorizando siempre la confiabilidad analtica y clnica
del resultado, esta primera etapa se complementa con una estrategia de control de calidad interno
que nos permitir evidenciar la estabilidad analtica del mtodo evaluado; adems, la participacin en
programas de evaluacin externa de la calidad nos brindar informacin del mtodo principalmente
en trminos de veracidad. Los objetivos del presente estudio fueron aplicar protocolos establecidos
de evaluacin de mtodos para evaluar el desempeo del sistema de medicin, y establecer valores
de referencia - intervalos de referencia de los parmetros hematolgicos: hemoglobina, hematcrito,
volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, concentracin de hemoglobina corpus-
cular media, ndice de amplitud de distribucin eritrocitaria, recuento de glbulos blancos, recuento
de glbulos rojos y recuento de plaquetas, en individuos adultos sanos de la poblacin de Mendoza
(edad: 18-65 aos). Se analizaron un total de 241 muestras, y las determinaciones fueron realiza-
das en dos autoanalizadores hematolgicos: Cell Dyn 3700 SL y Cell Dyn 3500 (Abbott, n de serie
20557AK y n de serie 31095P, respectivamente). Se aplic el criterio de particin, y se hall que los
siguientes analitos particionaron por sexo: glbulos rojos, hematcrito, hemoglobina, concentracin
de hemoglobina corpuscular media; mientras que los analitos que no particionaron por sexo, fueron:
glbulos blancos, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, ndice de amplitud de
distribucin eritrocitaria y plaquetas. A travs de la aplicacin de protocolos de evaluacin de mto-
dos, se obtuvieron resultados satisfactorios respecto al desempeo del mtodo. Se establecieron los
valores de referencia - intervalos de referencia tanto para los analitos que particionaron, como para
los que no particionaron en cuanto al sexo de los individuos. Realizamos previamente la evaluacin del
mtodo de medicin aplicado, por lo tanto los valores de referencia - intervalos de referencia obtenidos
brindaran un marco de confiabilidad mayor sobre los resultados obtenidos.
PALABRAS CLAVE: validacin, verificacin, valores de referencia, control de calidad interno, parmetros
hematolgicos

ABSTRACT The evaluation of methods is a set of necessary processes that the biochemical laboratory should
be performed prior to the methodology implementation of measuring systems. This kind of work al-
lows to evaluate the performance of the method from the discussion of different statistical parame-
ters, which are obtained by applying stipulated protocols of validation, verification and demonstration
of methods. In this sense, and always giving priority to the analytical and clinical confidence in the
outcome, this first stage is complemented by a strategy of Internal Quality Control that will allow us
to demonstrate the analytical stability of the evaluated method. In addition, participation in External
Evaluation of Quality Programs provides us method information mainly in terms of trueness. The aims
of the present study were to apply established protocols of methods evaluation to evaluate the per-
formance of the measuring system, and establishment of references values reference intervals of
hematological parameters: Hemoglobin, Hematocrit, Mean Corpuscular Volume, Mean Corpuscular
ByPC 2014;78(1):34-37.
30 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza

ISSN 1515-6761 Ed. Impresa
ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM
Cdigo Bibliogrfico: RByPC
Fecha de Recepcin: vide a framework of confidence on the results obtained.
18/12/2013.
Fecha de Aceptacin:
18/02/2014.
Hemoglobin, Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration, Red Distribution Wide, White Blood Cells,
Red Blood Cells and Platelet Count, in clinically healthy adults of the town of Mendoza (age: 18-65
years). A total of 241samples were analyzed, and determinations were carried out on two hemato-
logical analyzers: Cell Dyn 3700 SL and Cell Dyn 3500 (Abbott, no. 20557AK and no. 31095P, respec-
tively). We applied the partition criterion, and we found that the following analytes partitionated by
sex: Red Blood Cells, Hemoglobin, Hematocrit, Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration; while the
following analytes are not partitionated by sex, were: White Blood Cells, Red Distribution Wide, Mean
Corpuscular Volume, Mean Corpuscular Hemoglobin and Platelet Count. Through the application of
evaluation methods protocols, were obtained satisfactory results with respect to the performance of
the method. We established the references values reference intervals of the analytes which parti-
tionated, and those analytes which are not partitionated by sex. Previously, we applied measuring
method evaluation; in addition we obtained references values reference intervals which would pro-
KEY WORDS: validation, verification, values of reference, internal quality control, hematological param-
eters.

INTRODUCCIN mico para realizar la verificacin son en esencia las mis-

La medicin de un analito hematolgico de inters clnico
en un fluido biolgico humano complejo, como la sangre pe-
rifrica, involucra tres etapas fundamentales: a) preanalti-
ca, b) analtica, y c) posanaltica. Dentro de cada una de es-
tas etapas podemos identificar y sectorizar tanto requisitos
tcnicos inherentes al desempeo analtico metodolgico,
como tambin requisitos de gestin propios del laboratorio
que pugnan por el aseguramiento de la calidad del servicio
que se brinda1,2,3.
La etapa analtica involucra el proceso de medicin del
analito a travs de la ejecucin de un mtodo, el cual debe
necesariamente haber sido evaluado antes del comienzo
de su aplicacin en la rutina del laboratorio. Adems, este
mtodo debe seguir un procedimiento operativo de realiza-
cin estipulado y una estrategia de control de calidad inter-
na establecida, la cual se desprende del mencionado proce-
so de evaluacin del mtodo4,5,6,7.
La seguridad y la confiabilidad analtica de un mtodo
estn sujetas a aspectos que estn relacionados entre s,
a saber: 1) requerimientos de calidad, entendiendo que son
estndares de calidad para parmetros analticos, princi-
palmente definidos en trminos de precisin y exactitud,
y que el principal requerimiento de calidad que poseemos
en la qumica clnica el error total permitido, cuya magni-
tud es dependiente del nivel de decisin mdica (decisin
diagnstica, pronstica y teraputica); 2) La evaluacin de
mtodos, obtenida a travs de la aplicacin de protocolos
de validacin y/o verificacin de mtodos, los cuales son
ensayos que permiten obtener la magnitud de los parme-
tros analticos de un mtodo, y a travs de ellos evaluar el
desempeo (performance) del mtodo en estudio. En este
sentido la verificacin de mtodos es realizada por el labora-
torio bioqumico con el propsito de demostrar que el reac-
tivo o equipo adquirido reproduce los parmetros analticos
informados por el fabricante; no obstante, las estrategias
experimentales que aplica el fabricante de un equipamiento
para validarlo como aquella que aplica el laboratorio bioqu-
ByPC 2014;78(1):34-37.
mas; 3) control de calidad interno y externo, la estrategia
del diseo de estos sistemas de control permiten demostrar
que la calidad analtica obtenida a partir de la aplicacin de
protocolos de evaluacin de mtodos mantiene en el tiem-
po valores de imprecisin e inexactitud aceptables, es decir
que el mtodo se ejecuta de manera estable. La finalidad de
la aplicacin de estos esquemas de trabajo es bsicamente
obtener resultados confiables, tanto en lo analtico como en
lo clnico, y reproducibles7,8,9.
El establecimiento de valores de referencia - intervalos
de referencia es un componente indispensable de la confia-
bilidad de un sistema de medicin, principalmente para po-
der interpretar la significancia del resultado obtenido sobre
el analito valorado. Este marco analtico referencial debe
ser desarrollado para todos los analitos valorados en un la-
boratorio bioqumico, ya que por un lado el desplazamiento
poblacional (globalizacin), as como diferencias en edad y
sexo de los individuos, terminan por conformar sociedades
con distintas etnias sobre las cuales se aplican los siste-
mas de medicin utilizados en el laboratorio bioqumico. En
este sentido, es necesario contextualizar el valor obtenido
del analito cuantificado en un marco de referencia correcta-
mente establecido para la poblacin estudiada10.
Por lo tanto, los objetivos de este trabajo fueron aplicar
protocolos de evaluacin de mtodos para establecer y evi-
denciar el correcto desempeo de los sistemas de medicin
empleados, y finalmente establecer valores de referencia -
intervalos de referencia para analitos hematolgicos en la
poblacin del Gran Mendoza.
MATERIALES Y MTODOS
Equipamiento utilizado. Para realizar la totalidad de
las determinaciones se utilizaron dos autoanalizadores
hematolgicos, un Cell Dyn 3700 SL (Abbott, n de serie
20557AK) que combina las tecnologas de dispersin de
luz ptica y de impedancia, proveyendo informacin de 24
parmetros hematolgicos; y otro equipo de similares ca-
 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza
ractersticas Cell Dyn 3500 (Abbott, n de serie 31095P). Se
utilizaron fracciones de ensayos de muestras de pacientes
que tuvieron solicitud de la determinacin de Hemograma
en nuestro laboratorio.
Ensayos de evaluacin de mtodos. Para realizar la eva-
luacin de desempeo de la metodologa aplicada se utili-
zaron muestras de sangre entera de pacientes voluntarios
sanos obtenidas por venopuncin, y recolectadas en tubos
marca Tecnon con EDTA 3K como anticoagulante. Se siguie-
ron los lineamientos de las siguientes guas de validacin/
verificacin del CLSI (Clinical Laboratory Standar Institute):
EP15-A2 para la evaluacin de la precisin, EP9-A2 para
evaluacin de la veracidad, EP6-A para evaluacin de la li-
nealidad4,5,6,7. Estos protocolos de trabajo fueron aplicados
sobre todos los analitos que se valoran en el hemograma.
Para establecer los Valores de Referencia - Intervalos de
Referencia de los diferentes analitos, se utiliz la gua
C28-A3 del CLSI 10.
Establecimiento de valores de referencia - intervalos
de referencia. En este caso la seleccin de la poblacin de
estudio se realiz siguiendo la gua C28-A3 del CLSI 10. Para
ello se recolectaron 241 muestras de individuos sanos (121
hombres y 120 mujeres), entre 18 y 65 aos, que asistieron
a determinados laboratorios del Gran Mendoza; esto incluye
los departamentos de Capital, Guaymalln, Godoy Cruz, Las
Heras, Lujn de Cuyo y Maip. All se les realiz una encuesta
informativa sobre este trabajo, se los invit a participar de l,
y se les hizo firmar un consentimiento. El criterio de divisin
fue el sexo y los criterios de exclusin fueron: enfermeda-
des crnicas o infecciosas, consumo de medicamentos en
forma regular, haber donado sangre o haber recibido trans-
fusin de sangre en los ltimos 4 meses, hospitalizacin
reciente, antecedentes personales o familiares de anemia,
embarazo, lactancia y si eran fumadores o no. Las muestras
fueron enviadas posteriormente al laboratorio Meganalizar,
de la firma Analizar SA, donde se procesaron dentro de las 4
horas subsiguientes a su recoleccin. Los parmetros ana-
lizados fueron: hemoglobina (Hb), hematcrito (Hto), vo-
lumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular
media (HCM), concentracin de hemoglobina corpuscular
media (CHCM), ndice de amplitud de distribucin eritrocita-
ria (RDW), recuento de glbulos blancos (GB), recuento de
glbulos rojos (GR) y recuento de plaquetas (Plaq.)
Anlisis estadsticos empleados. Para el procesamiento
estadstico de los datos se utilizaron planillas de clculo de
Excell (Microsoft Office Excell Versin 2007), las cuales con-
tienen formulas matemticas necesarias para desarrollar el
diseo estadstico aplicado. Se utiliz tambin el programa
Infostat (Versin 2011p) para el estudio de validacin de la
linealidad del sistema de medicin, y adems se emple el
programa MedCalc (Versin 12.7.0.0) para aplicar los tests
estadsticos Dagostino-Pearson como test de evaluacin
ByPC 2014;78(1):34-37.
31
de la normalidad, Mann-Whitney como test no paramtrico,
y los mtodos de Tukey y Reed/Dixon para la bsqueda de
valores anmalos11,12,14.
Control de calidad interno. El diseo del control de cali-
dad interno (CCI) emplea las recomendaciones del fabrican-
te de los equipos mencionados, que consisten en el anlisis
diario de muestras controles estabilizadas en tres niveles
de concentracin para cada uno de los analitos evaluados.
Adems, tambin obtuvimos y diseamos un esquema pro-
pio que incluye el desempeo del mtodo, y que contempla
el mencionado desempeo a partir del establecimiento del
punto operativo y de la valoracin del error sistemtico cr-
tico del mtodo8,13.
Control de calidad externo. El laboratorio participa en un
programa de evaluacin externa de la calidad (CCE), donde
realiza la valoracin de los distintos analitos en una mues-
tra de sangre perifrica estabilizada; y esto se efecta con
una periodicidad mensual. La participacin en un CCE per-
mite que el laboratorio obtenga ndices de rendimiento en
trminos de veracidad, principalmente. Es de una relevan-
cia mayor en la eleccin del proveedor del CCE el hecho de
que cumplimente los lineamientos de la norma ISO 17043
15; en este sentido la participacin del laboratorio en un CCE
contribuye a la demostracin de su competencia tcnica16.
RESULTADOS
Evaluacin de mtodos - precisin
Se realiz una verificacin de la precisin siguiendo los
lineamientos de la gua EP15-A2 del CLSI. Los analitos eva-
luados fueron: GB, GR, Hb, Hto, VCM y Plaq; sin embargo, se
valoraron la totalidad de los parmetros obtenidos por los
equipos de medicin.
Se realizaron mediciones por triplicado durante cinco
corridas analticas de una misma muestra. Dicha muestra
se obtuvo a partir de un individuo adulto clnicamente sano.
Las determinaciones fueron realizadas en los equipos Cell
Dyn 3700 (CD3700) y Cell Dyn 3500 (CD3500), tanto en
modo abierto(A) como en modo cerrado(C) de trabajo de los
equipos, durante un perodo de tiempo inferior a 4 h desde
el momento de la toma de muestra para garantizar su inte-
gridad.
Para analizar los resultados se compararon los datos ob-
tenidos con las especificaciones del fabricante (Tabla I), y
con las de las especificaciones internacionales de calidad
brindadas por CLIA88 (Clinical Laboratory Improvement
Amendments of 1988, Tabla II) utilizando un presupuesto de
error del 25%; y adems se realiz la comparacin con las es-
pecificaciones internacionales de calidad de EQAs (European
Quality Assurance), para condiciones mnimas, deseables y
optimas de desempeo. La comparacin de los resultados
obtenidos con las especificaciones del fabricante y la compa-
racin con las especificaciones internacionales de calidad, se
muestran en las tablas I y II, respectivamente.
32 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza

Tabla I. Comparacin con especificaciones de precisin (Repetibilidad) del fabricante

CD3500A: Equipo CellDyn 3500 en modo abierto; CD3500C: Equipo CellDyn 3500 en modo cerrado; CD3700A: Equipo
CellDyn 3700 en modo abierto; CD3700C: Equipo CellDyn 3700 en modo cerrado; GB: Recuento de glbulos blancos; GR:
Recuento de glbulos rojos; Hb: Hemoglobina; VCM: Volumen Corpuscular Medio; Plaq: Recuento de Plaquetas; CV% calc.:
Coeficiente de variacin porcentual obtenido a partir de la precisin en trminos de repetibilidad en la verificacin de
Mtodos; CV% Fabr.: Coeficiente de variacin porcentual informado por el fabricante a partir de la precisin en trminos
de repetibilidad; Sr calc.: Precisin en trminos de repetibilidad obtenidos en la verificacin de mtodos ; Sr Verif.: Valor de
verificacin para la precisin en trminos de repetibilidad.

Los resultados obtenidos para todos los analitos evalua-
dos cumplieron con los requisitos de calidad especificados
por el fabricante en trminos de repetibilidad. En este sen-
tido, la totalidad de los analitos valorados cumplieron con
los requerimientos de calidad especificados por CLIA88
aplicando un presupuesto de error del 25%; adems cumpli-
mentaron con los niveles de condiciones mnimas y desea-
bles de EQAs, verificando de esta manera el desempeo del
mtodo en trminos de precisin intermedia. Cabe destacar
que los analitos Hb y VCM cumplieron con los niveles de con-
diciones ptimas de especificaciones de EQAs.
Evaluacin de mtodos linealidad
Se demostr el comportamiento lineal de los distintos
analitos valorados por los dos equipos automatizados utili-
zados, tanto en el modo abierto de trabajo, como en el modo
cerrado, siguiendo los lineamientos de la gua EP6-A del
ByPC 2014;78(1):34-37.
CLSI 5. La evaluacin polinomial se realiz con el programa
Infostat V. 201114. Para cada uno de los analitos evaluados
se valoraron ocho niveles de concentracin. Para realizar
este ensayo se siguieron los lineamientos de la gua H26-A2
del CLSI3; brevemente: se parti de una muestra de sangre
perifrica con niveles elevados para los analitos estudiados,
se la coloc en posicin vertical, y se la dej en reposo en
esa posicin durante 2 horas de manera que sedimenten
los elementos formes celulares. Luego, utilizando plasma
de esa misma muestra se realizaron las correspondientes
diluciones utilizando una micropipeta automtica de volu-
men variable de 10100l (Labklass), para obtener los 8
puntos de concentracin evaluados. En ese estudio, los ran-
gos reportables de concentracin estudiados para todos los
analitos, abarcaron los rangos de concentracin informados
por el fabricante. En este punto, y para evaluar este aspec-
to en el analito VCM, se parti de 2 muestras con distinto
 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza 33

valor de VCM (una cercana al lmite superior del rango repor-

Figura 1. Regresin lineal
table, y otra al inferior), y se realizaron mezclas de ambas
Regresin Lineal Plaquetas CD3700A muestras en diferentes proporciones obtenidas a travs de
564 los clculos tericos realizados para obtener cada uno de
los valores de VCM deseados.
470 En la tabla III y la figura 1 se muestran los resultados ob-
tenidos a modo de ejemplo para el analito plaquetas en el
376 equipo CellDyn 3700 modo abierto.
Conc. Medida

En los casos donde el comportamiento del sistema de me-

282 dicin fue no lineal y fue explicado mejor por un polinomio de
segundo o tercer orden, se calcul el factor de desviacin de
188
la linealidad (DL); para ello se estableci como requerimien-
to de calidad que la DL no supere el 5% entre todos los valores
94
obtenidos por el polinomio que mejor ajusta el comporta-
miento del sistema de medicin y los obtenidos por el polino-
0
0 94 188 282 376 470 564 mio de primer orden (lineal). Para la totalidad de los niveles
Conc. Teorica de concentracin evaluados en todos los analitos valorados,
CD3700A: Equipo CellDyn 3700 modo abierto. se obtuvo un comportamiento aceptable acorde con el reque-
En la figura se muestra la regresin lineal: En el eje Y se grafi- rimiento establecido (datos no mostrados).
caron las concentraciones medidas, y en el X las tericas (cal-
culadas). Ambas concentraciones se expresan en 103 cel./L. Evaluacin de mtodos veracidad
Rango de linealidad evaluado: 13,44 - 537,5 Plaq.x103/ L. Ambos equipos se encuentran participando en un programa

Tabla II. Comparacin con especificaciones de precisin (Intermedia) de entidades internacionales

CD3500A: Equipo CellDyn 3500 en modo abierto; CD3500C: Equipo CellDyn 3500 en modo cerrado; CD3700A: Equipo CellDyn
3700 en modo abierto; CD3700C: Equipo CellDyn 3700 en modo cerrado; GB: Recuento de glbulos blancos; GR: Recuento
de glbulos rojos; Hb: Hemoglobina; VCM: Volumen Corpuscular Medio; Plaq: Recuento de Plaquetas; CV% calc.: Coeficiente
de variacin porcentual obtenido a partir de la precisin intermedia en la verificacin de Mtodos; CLIA y EQA: Requerimientos
internacionales de calidad.
ByPC 2014;78(1):34-37.
34 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza

CCE desde 2012 y, hasta la fecha, se procesaron 18 muestras
control por el equipo CellDyn 3700, y 16 por el CellDyn 3500.
Los resultados obtenidos fueron aceptados para todos los ana-
litos estudiados, y los errores (en trminos de BIAS %) prome-
dio para cada analito y equipo se muestran en la tabla IV.
Comparacin entre equipos/modos de trabajo
Para realizar las comparaciones de mtodos se siguieron
los lineamientos de la gua EP9-A2 del CLSI6. Las mismas
muestras fueron procesadas por ambos equipos por duplica-
do, tanto en modo abierto como en modo cerrado. Se evalu
la presencia de valores aberrantes de concentracin de los
diferentes analitos, Outliers (OL), dentro de cada mtodo y
entre los mtodos, acorde con las especificaciones de la gua
mencionada. Para cada analito evaluado se aplic regresin
de Deming (MedCalc V. 12.7.0.0), y se realizaron las compa-
raciones mencionadas a continuacin:
- CellDyn 3500 modo abierto vs CellDyn 3500 modo cerrado.
- CellDyn 3700 modo abierto vs CellDyn 3700 modo cerrado.
- CellDyn 3500 modo abierto vs CellDyn 3700 modo abierto.
- CellDyn 3500 modo cerrado vs CellDyn 3700 modo cerrado.
En la tabla V se muestra, modo de ejemplo, los resulta-
dos obtenidos de una de las comparaciones realizadas:
CellDyn 3500 modo cerrado vs CellDyn 3700 a modo cerra-
do, para todos los analitos evaluados.
En la figura 2 se muestra, a modo de ejemplo, los resul-
tados obtenidos en representaciones grficas de una de las
comparaciones realizadas: CellDyn 3500 modo cerrado vs
CellDyn 3700 modo cerrado, para todos los analitos evalua-
dos. En todos los niveles de decisin mdica (NDM) analiza-
dos para los siguientes analitos: GB, GR, Hb y Plaq.; el BIAS%
obtenido no super el requerimiento de calidad estipulado
por CLIA88 con base en un presupuesto de error del 25%.

Tabla III: Resultados de la regresin (CD3700A), analito: PLAQUETAS.

Coef.: Coeficiente del polinomio; E.E.: Error Estndar; t: Valor obtenido del test-t; p-valor: valor p asociado al resultado del
test-t; G.L.: Grados de Libertad; Des. Est. Residual: Desviacin Estndar Residual de la regresin; Valores O.L.: Valores anmalos.

Tabla IV: Estimacin del BIAS% a partir del CCE

CD3500: Equipo CellDyn 3500; CD3700: Equipo CellDyn 3700; GB: Recuento de Glbulos Blancos; GR: Recuento de Glbulos
Rojos; Hb: Hemoglobina; VCM: Volumen Corpuscular Medio; Plaq: Recuento de Plaquetas.

Tabla V: Comparacin de equipos. Resultados obtenidos para la regresin de Deming.

GB: Recuento de Globulos Blancos; Hb: Hemoglobina; O.L.: Valores anmalos; r: coeficiente de correlacin; O. Origen:
Ordenada al origen; Syx: Desviacin estndar de la regresin.
ByPC 2014;78(1):34-37.
 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza 35

Figura 2. Ensayo de comparacin de equipos

Figura 2.A Figura 2.B
Mean of GB 3500 r1 and GB_3500_r2

12 1,5
11

GB 3500 C - GB 3700 C
10 1,0 +1.96 SD
9 0,85
0,5
8
Mean
7
0,0 0,12
6
5 -0,5 -1.96 SD
4 -0,60
3 -1,0
2 4 6 8 10 12 2 4 6 8 10 12 14
Mean of GB 3700 r1 and GB 3700 r2 Mean of GB 3500 C and GB 3700 C

Figura 2.C Figura 2.D

(GB 3500 C - GB 3700 C) / Average %

15
Mean of Hb 3500 r1 and Hb 3500 r2
18
+1.96 SD
10 16
10,7
14
5
Mean 12
0 1,7
10
-5 8
-1.96 SD
-7,4
-10 6
2 4 6 8 10 12 14 6 8 10 12 14 16 18
Mean of GB 3500 C and GB 3700 C Mean of Hb 3700 r1 and Hb 3700 r2

Figura 2.E Figura 2.F

(Hb 3500 C - Hb 3700 C) / Average %

0,4 3 +1.96 SD
+1.96 SD
2 2,4
0,2 0,29
Hb 3500 C - Hb 3700 C

1
0,0 0
Mean Mean
-1
-0,11 -0,9
-0,2 -2
-3
-0,4 -4 -1.96 SD
-1.96 SD
-5 -4,2
-0,6 -0,50
-6
-0,8 -7
6 8 10 12 14 16 18 6 8 10 12 14 16 18
Mean of Hb 3500 C and Hb 3700 C Mean of Hb 3500 C and Hb 3700 C

Figura 2.A. Grfico de regresin de Deming para comparacin de mtodos (unidades de expresin de 103 cel./L) para el
analito GB (3500: CellDyn 3500; 3700: CellDyn 3700). Figura 2.B. Grfico de Bland Altman de las diferencias expresadas
en valores absolutos para GB entre CD3500 y CD3700. Figura 2.C. Grfico de Bland Altman de las diferencias expresadas
en trminos relativos para GB entre CD3500 y CD3700. Figura 2.D. Grfico de regresin de Deming para comparacin de
mtodos (unidades de expresin en gr/dl) para el analito Hb (CD3500 vs CD3700). Figura 2.E. Grfico de Bland Altman de
las diferencias expresadas en valores absolutos para Hb entre CD3500 y CD3700. Figura 2.F. Grfico de Bland Altman de
las diferencias expresadas en trminos relativos para Hb entre CD3500 y CD3700.
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36 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza

Este criterio no se cumpli para los analitos HTO y VCM (NDM
= 14% y NDM = 80fl, respectivamente); sin embargo, esta
situacin no modific la interpretacin clnica del resultado.
En este sentido, las comparaciones de mtodos realiza-
das fueron satisfactorias, y se evalu el coeficiente de co-
rrelacin r, la ecuacin de la recta obtenida por regresin
de Deming (con los intervalos de confianza, IC, de cada pa-
rmetro evaluado) tabla VI.
Establecimiento de valores de referencia - intervalos de
referencia
Como se mencion anteriormente, para establecer la
poblacin de estudio y los valores de referencia - intervalos
de referencia para los diferentes analitos hematolgicos, se
sigui el protocolo estipulado en el documento C28-A3 del
CLSI10.
En una primera instancia se analizaron los datos por se-
parado segn sexo. La normalidad de los datos se evalu a
travs del test estadstico Dagostino-Pearson11. En los ca-
sos donde los datos no ajustaron a una distribucin normal,
se les aplic transformacin logartmica para que ajusten
a esa distribucin. Luego se evalu la presencia de OL apli-
cando el test de Tukey y Reed/Dixon12; los OL detectados
fueron eliminados una vez finalizado el anlisis. Despus se
evalu la normalidad de la distribucin para cada analito, y
para ambos sexos, debindose aplicar transformacin loga-
rtmica en algunos de los casos evaluados. En una siguiente
etapa, se aplic test-z (prueba paramtrica) para evaluar
diferencias entre las poblaciones de datos pertenecientes
al sexo masculino, y aquellas pertenecientes al sexo feme-
nino. Para aquellos analitos donde, luego de la transforma-
cin de datos, no se logr que ambos sexos ajusten a una
distribucin normal, se les aplic el test no paramtrico
Mann-Whitney11.
Para los analitos que particionaron por sexo se estable-
cieron los valores de referencia - intervalos de referencia, y
los respectivos intervalos de confianza de los lmites supe-
rior e inferior, segn las pautas descriptas10. En el caso de
los analitos que no particionaron por sexo, se realiz nueva-
mente sobre estos datos el anlisis previamente descripto
sin particionar, y posteriormente se establecieron los valo-
res de referencias - intervalos de referencia (Tabla VII).
Se establecieron los valores de referencia - intervalos de
referencia para los siguientes analitos: Hb, Hto, VCM, HCM,
CHCM, RDW, GB, GR y Plaq. Los resultados obtenidos de los
valores de referencia - intervalos de referencia de los distin-
tos analitos se presentan en las tablas VIII y IX.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES
El proceso de evaluacin de mtodos es un requisito
mandatorio que todo laboratorio bioqumico debe cumpli-
mentar a los fines de establecer y evidenciar el desempeo

Tabla VI: Estudio de Veracidad a distintos Niveles de Decisin Mdica.

NDM: Nivel de Decisin Mdica; GB: Recuento de Glbulos Blancos; Hb: Hemoglobina; CD3700C: Equipo CellDyn 3700
modo cerrado; CD3500C: Equipo CellDyn 3500 modo cerrado.
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 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza 37

del sistema de medicin que se implementar en la rutina
del laboratorio bioqumico. Esta estrategia de evaluacin de
mtodos, como desarrollo inicial sobre el sistema de me-
dicin, primeramente es clave en cuanto a la confiabilidad
analtico-clnica de los resultados, pero adems, permite
introducir el concepto de mejora continua en un punto crti-
co del proceso de medicin en los laboratorios bioqumicos.
Actualmente, a diferencia de aos anteriores, estn per-
fectamente establecidos los pasos que deben seguirse en
cuanto a responsabilidades y diseos de los ensayos para
realizar una correcta evaluacin de mtodos, tanto para los
fabricantes de un sistema de medicin como para los labo-
ratorios bioqumicos que adquieren e implementan estos
sistemas de medicin; sin embargo, en numerosas ocasio-
nes esto no se cumple, situacin que obliga al laboratorio
bioqumico a desarrollar protocolos exhaustivos de evalua-
cin de mtodos, para poder establecer concretamente los
ndices de desempeo de los sistemas de medicin desarro-
llados por los fabricantes, y poder de esta forma contrastar-
los con los requerimientos internacionales de calidad para
as emitir un juicio con evidencia objetiva sobre el desempe-
o del sistema de medicin evaluado.
Una vez finalizado exitosamente el proceso de evalua-
cin de mtodos, habiendo cuantificado los diferentes pa-
rmetros analticos y establecido los ndices de desempeo
del sistema de medicin, resulta imprescindible establecer
los valores de referencia - intervalos de referencia de los
analitos que se medirn. Estos parmetros de referencia
establecidos en una determinada poblacin (clnicamente
sana) como la que evaluamos en este trabajo, constituyen
parmetros de comparacin analtico, que el laboratorio bio-
qumico puede utilizar a modo de muestras controles, con
el propsito de establecer la trazabilidad analtica respecto
de los Valores de Referencia - Intervalos de Referencia es-
tablecidos.
Finalmente, consideramos relevante el realizar experien-
cias vinculadas a la evaluacin de mtodos en un laborato-
rio de Hematologa, rea de la Bioqumica donde la ausencia
de materiales de referencias certificados contribuye a la
dispersin de los resultados. En este sentido, el estableci-
miento de valores de referencia - intervalos de referencia,
contribuye fuertemente a establecer la trazabilidad analti-
ca en los analitos cuantificados.

Tabla VII: Anlisis de particin en funcin del sexo.

GB: Recuento de Glbulos Blancos; GR: Recuento de Glbulos Rojos; Hb: Hemoglobina; Hto: Hematocrito; VCM: Volumen
Corpuscular Medio; HCM: Hemoglobina Corpuscular Media; CHCM: Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media; RDW:
ndice de distribucin eritrocitaria; Plaq.: Recuento de Plaquetas; n: Nmero de muestras
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38 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza

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Verification of Performance for Precision and Trueness;
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Method Comparison and Bias Estimation Using Patient
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7- Gua de trabajos prcticos del Practicanato Preparatorio
Asignatura Practicanato Profesional, Departamento
de Bioqumica Clnica Facultad de Ciencias Qumicas

Tabla VIII: Valores de Referencia - Intervalos de Referencia de analitos que particionan segn sexo.

GR: Recuento de Glbulos Rojos; Hb: Hemoglobina; Hto: Hematocrito; CHCM: Concentracin de Hemoglobina Corpuscular
Media; n: Nmero de muestras; O.L.: Valores anmalos; VR-IR: Valores de Referencia-Intervalo de Referencia; I.C. Li. Inf.:
Intervalo de confianza del Lmite Inferior del Intervalo de Referencia; I.C. Lim. Sup.: Intervalo de confianza del Lmite
Superior del Intervalo de Referencia.
Tabla IX: Valores de Referencia - Intervalos de Referencia de analitos que no particionan segn sexo

GB: Recuento de Glbulos Blancos; VCM: Volumen Corpuscular Medio; HCM: Hemoglobina Corpuscular Media; RDW: ndie
de Distribucin Eritrocitario; Plaq.: Recuento de Plaquetas; n: Nmero de muestras; O.L.: Valores anmalos; VR-IR: Valores
de Referencia-Intervalo de Referencia; I.C. Li. Inf.: Intervalo de confianza del Lmite Inferior del Intervalo de Referencia; I.C.
Lim. Sup.: Intervalo de confianza del Lmite Superior del Intervalo de Referencia.

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 Evaluacin de mtodos y establecimiento de valores de referencia hematolgicos para la poblacin del Gran Mendoza 39

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16- CE-LE-01 Polticas y criterios para la participacin en
ensayos de aptitud / comparaciones interlaboratorios
del Organismo Argentino de Acreditacin (OAA) (v09,
21/02/2013).

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