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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN TARAPOTO

FACULTAD DE ECOLOGA

ESCUELA ACADMICO DE INGENIERA AMBIENTAL

ACTIVIDADES ENZIMTICAS: ESPECIFICIDAD Y


DESNATURALIZACIN POR CAMBIOS DE pH Y
TEMPERATURA

ASIGNATURA : BIOQUMICA

DOCENTE : BLGO. M. SC. ALFREDO DAZ VISITACIN

ALUMNOS :

BACALLA TAFUR, JOSELYN KANDY


LUNA ARRASCUE, BIANCA
VELA RAMREZ, GIAN ARNOLD
PORRAS TELLO, INGRID
RAFAEL SALDAA, FIORELA
VSQUEZ GUEVARA, PATRICIA IVON

SAN MARTN- 2015


I. INTRODUCCIN:

El presente informe, trata sobre la prctica de laboratorio desarrollado el da viernes


16 de octubre de 2015, la cual tiene como tema las: ACTIVIDADES ENZIMTICAS:
ESPECIFICIDAD Y DESNATURALIZACIN POR CAMBIOS DE pH Y
TEMPERATURA.

El presente trabajo consiste en demostrar que la enzima se desnaturaliza a un pH


cido y al cambio de temperatura; ya que las enzimas cumplen con su actividad
enzimtica cuando se encuentran a pH y/o temperatura ptima.

Las enzimas en el cuerpo ayudan a llevar a cabo varias reacciones qumicas, como
por ejemplo la digestin, la amilasa es la enzima encargada de cumplir dicha reaccin,
buscando fraccionar el alimento ingerido en pequeas partes hidrolizando enlaces 1-
4 entre molculas de -glucosa; encontrndose a lo largo de todo el tracto digestivo
de los mamferos y las encargadas de producirla son las glndulas salivales. Para
poder comprobar su desnaturalizacin, la amilasa reaccionara con agua ( 2 O) y
cido clorhdrico (HCL).

Otra enzima presente en nuestras clulas es la catalasa cuya funcin es proteger a


las clulas del efecto txico del perxido de hidrgeno (agua oxigenada) producido
en distintas reacciones redox. Es una de las enzimas ms eficientes con una
velocidad de aproximadamente 200,000 transformaciones/segundo/subunidad. La
catalasa se encuentra en todos los tejidos vivos, donde descompone al perxido
(2 2 ) en agua (2 O) y oxigeno (2 ) que al ser gas se desprende en forma de
burbujas. La catalasa indica su actividad cuando se aade agua oxigenada a un tejido
vivo, desprendiendo oxigeno gas. Para poder comprobar su desnaturalizacin, el
tejido vivo reacciona con el calor donde alcanza un punto mnimo de coccin.

Los resultados indicaran si las enzimas son capaces de continuar con su actividad
enzimtica despus de haber reaccionado con cidos, como tambin despus de
haber sido sometido al calor.

II. OBJETIVO.

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Objetivos Generales.

- Reconocer la actividad enzimtica.


- Demostrar que las enzimas cumplen con su actividad enzimtica de
acuerdo a un ptimo pH y temperatura.

Objetivos Especficos.

- Demostrar que la amilasa al reaccionar con el acido clorhdrico se


desnaturaliza.
- Demostrar que la catalasa al ser sometido al calor se desnaturaliza.
- Reconocer la importancia de cada una de las dos enzimas
estudiadas amilasa y catalasa

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III. MARCO TERICO
II.1. ESTUDIO DE LOS ENZIMAS.
Gran parte de la historia de la Bioqumica discurre pareja a la historia de la
investigacin de los enzimas. Citaremos algunos hitos importantes:

- La existencia de catalizadores biolgicos fue descrita por primera vez a


comienzos del S. XIX en estudios acerca de la digestin de la carne por
secreciones del estmago y la conversin del almidn en azcar por la
saliva.
- En 1835 la primera teora general sobre la catlisis qumica publicada por
J.J. Berzelius inclua un ejemplo de lo que hoy conocemos como un enzima:
la diastasa de la malta, sealando que la hidrlisis del almidn se catalizaba
ms eficazmente por sta que por el cido sulfrico.
- En 1860 Louis Pasteur propuso que la fermentacin del azcar para
transformarse en alcohol era inducida por ciertos catalizadores biolgicos,
razn por la cual los enzimas fueron llamados inicialmente "fermentos".
Pasteur supuso que dichos catalizadores se hallaban unidos de modo
indisoluble a la estructura de las clulas de la levadura por lo que no podan
actuar fuera de estas.
- En 1877 se utiliza por primera vez la denominacin "enzima"
(etimolgicamente "en la levadura").
- En 1897 E. Bchner consigui extraer de las clulas de la levadura los
enzimas que catalizan la fermentacin alcohlica, demostrando que stos
pueden actuar independientemente de la estructura celular. Este hecho
permiti estudiar "in vitro" la actividad y propiedades de los enzimas,
aislarlos en estado puro y analizar su composicin.
- En 1926 J.B. Sumner aisl un enzima, la ureasa, en forma cristalina pura y
demostr que los cristales estaban formados por protenas.
- Entre 1930 y 1936 se aislaron en forma cristalina pura diversos enzimas
quedando establecida de modo definitivo la naturaleza proteica de estos
catalizadores biolgicos. Desde entonces se han identificado varios miles
de enzimas diferentes, habindose aislado muchos de ellos en forma
cristalina.

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- En el mismo perodo J.B.S. Haldane expuso la idea de que los enzimas
establecen interacciones dbiles con el sustrato para distorsionarlo y
catalizar as su transformacin; esta idea result capital para el moderno
conocimiento de la accin enzimtica.
- En 1981 se descubri que determinados tipos de RNA pueden catalizar su
propia sntesis, hecho este que oblig a revisar algunas de las ideas
preexistentes acerca de la naturaleza de los biocatalizadores.

En la actualidad se considera que, con la excepcin de un reducido grupo de


molculas de RNA con propiedades catalticas, los enzimas son protenas, y
como tales, exhiben todas las propiedades inherentes a este grupo de
biomolculas. Los pesos moleculares de las protenas enzimticas oscilan
desde unos 12.000 daltons hasta ms de un milln.

En muchos casos, las cadenas polipeptdicas de la protena enzimtica son


suficientes para que sta desarrolle su actividad cataltica. En otros, se hace
necesaria la participacin de un compuesto qumico adicional, de naturaleza no
proteica, denominado cofactor.

II.2. Concepto:
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que actan como
catalizadores en todas las reacciones de metabolismo. Para que ocurran estas
reacciones es generalmente necesaria la presencia de un catalizador
(substancia que facilita la reaccin y de modo aumenta la velocidad a la que
esta se desarrolla, catalizador que, adems, ha de ser especfico para
determinada reaccin pues de lo contrario podran ocurrir reacciones no
deseables). Las enzimas por tanto, adems de ser catalizadores, han de ser
capaces de reconocer sobre qu sustancia o sustancias han de actuar
(substrato o substratos de la enzima) y tambin han de ser capaces de provocar
una transformacin y solo es de las muchas seran posibles.

Todas estas condiciones, las enzimas pueden cumplir por ser molculas de
protena de estructura terciaria globular. Eso hace que tengan en su superficie
entrantes con una forma y una distribucin de cargas determinadas.

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Catalizadores de las reacciones biolgicas. La mayora son protenas aunque
hay molculas de RNA con actividad cataltica (ribosomas) Gran poder
cataltico. Alto grado de especificidad. Actan en soluciones acuosas a 37C y
pH neutro. Su actividad puede regularse. El 25% de los genes humanos
codifican enzimas que catalizan reacciones metablicas.

Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones


qumicas que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya
que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho
ms que cualquier catalizador artificial conocido, y adems son altamente
especficos ya que cada uno de ellos induce la transformacin de un slo tipo
de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el medio de reaccin.

II.3. IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS


Cada paso de una va metablica est catalizado por un enzima.
La medida de la actividad enzimtica en fluidos biolgicos o tejidos es
importante para el diagnstico de muchas enfermedades.
Muchos frmacos son inhibidores de la actividad enzimtica.
Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.

II.4. CATLISIS QUMICA.


Antes de comenzar a analizar la naturaleza y funcin de los enzimas, resulta
conveniente enunciar algunos conceptos bsicos acerca de la velocidad de las
reacciones qumicas y el fenmeno de la catlisis.

La teora cintica qumica establece que las reacciones qumicas transcurren


molcula a molcula de modo que una reaccin tal como

R (reactivos) P (productos)

tiene lugar porque una determinada fraccin de la poblacin de molculas R, en


un instante dado, posee energa suficiente como para alcanzar un estado
activado llamado estado de transicin, en el que es muy fcil que se rompan o
se formen uno o ms enlaces qumicos para formar los productos P. Es
frecuente confundir el estado de transicin con un intermediario de reaccin; sin
embargo este estado no es ninguna especie qumica concreta, sino que podra
definirse con ms exactitud como un "momentomolecular fugaz", altamente

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inestable, en el que uno o ms enlaces qumicos estn muy prximos a
romperse o a formarse.

2.5.- Regulacin de la actividad enzimtica: temperatura, pH,


inhibidores.
Las enzimas, como sustancias proteicas que son, van a ver condicionada su
actuacin por determinados factores fsicos y qumicos. Algunos de estos
factores son:

La temperatura. Como toda reaccin qumica, las reacciones catalizadas


enzimticamente siguen la regla de Vant Hoff. Segn la cual, por cada 10C
de aumento de temperatura, la velocidad de la reaccin se duplica. No
obstante, las enzimas tienen una temperatura ptima en la que su actividad
es mxima. En los animales homeotermos como el hombre, esta temperatura
ptima coincide con la temperatura normal del organismo.

Las temperaturas inferiores al valor ptimo dan lugar a una disminucin de


la vibracin molecular que hace ms lente el proceso, mientras que
temperaturas superiores a la ptima pueden provocar la desnaturalizacin y
prdida de su funcionalidad

El pH, que al influir sobre las cargas elctricas, podr alterar la estructura centro
activo y, por lo tanto, tambin influir sobre la actividad enzimtica. Cada
enzima tiene un pH ptimo de actuacin. Los valores por encima o por debajo
de este valor ptimo provocarn un descenso de la velocidad enzimtica,
debido a cambios elctricos en los radicales de los aminocidos que
configuran el centro activo. Por debajo y por arriba del pH ptimo se produce
la desnaturalizacin de la enzima anulndose su actividad. Algunos enzimas
presentan variaciones peculiares. La pepsina del estmago, presenta un
ptimo a pH = 2, y la fosfatasa alcalina del intestino un pH = 12.

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III. PRCTICA DESNATURALIZACIN A PH CIDO DE LA
AMILASA.
Las enzimas tienen un pH ptimo de actuacin. Cambios de pH desnaturalizan la
protena y, por tanto, inhiben la actividad enzimtica. La amilasa es una de las
enzimas encargadas de la digestin del almidn, concretamente hidroliza enlaces 1-
4 entre molculas de -glucosa. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo
el tracto digestivo de los mamferos, y que tambin la producen las glndulas
salivales.

3.1- PROCEDIMIENTO:

1. Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos:

TUBO 1 TUBO 2

Amilasa (escupir un poco de Amilasa (escupir un poco de saliva)


saliva) 2 gotas de HCL 1N
2 gotas de H2O

2. Agitar los tubos y esperar 5 min.


3. Aadir 1 ml de solucin de almidn a cada tubo.
4. Agitar los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reaccin
enzimtica.
5. Realizar la prueba del lugol a cada tubo.

3.2.- RESULTADOS:
Tubos de ensayo Resultados
Amilasa salivar (2 gotas de h2o) Se degrada el sustrato mas no la enzima
Amilasa salivar (2 gotas de HCL 1N) Se degrada la enzima mas no el sustrato.

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3.3.- CUESTIONES
1. En qu tubos da positiva la prueba del lugol? En cul es negativa? Por qu?

IV.-PRCTICA DESNATURALIZACIN DE LA CATALASA POR


CALOR.
Las enzimas tienen una temperatura ptima de actuacin. La catalasa se encuentra en
todos los tejidos vivos, donde descompone el H2O2 en H2O y O2, que al ser gas, en
solucin acuosa se desprende en forma de burbujas. Por tanto, al aadir agua
oxigenada a un tejido vivo, la deteccin de desprendimiento de oxgeno gas, indicar
actividad catalasa. En la mesa hay dos cajas Petri con trozos de patatas. En uno de
ellos, la patata ha sido previamente cocida.

4.1.-MTODO
1. Introducir en sendos tubos de ensayo un trozo de patata de cada plato.
2. Anadir 1 ml de H2O2.

4.2.-RESULTADOS:

TUBOS DE ENSAYO RESULTADO


Papa sin cocinar Se observ que la muestra , libera oxgeno
al encontrada unida a el agua oxigenada a
travs de burbujas
papa cocinada Por el cambio de la temperatura a la hora
de ser cocinada se desnaturaliza sin
cambio alguno de estado, al momento del
contacto con el agua oxigenada.

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4.3. - CUESTIONES
1. Qu indica la falta de desprendimiento de O2 al aadir H2O2 a dicha patada?

V.-ACCIN DE LA CATALASA DEL HGADO DE POLLO CON EL


PERXIDO DE HIDRGENO.

En esta prctica vamos a demostrar la existencia de la catalasa en cada una de las


muestras.

1. Colocar en un tubo de ensayo uno trocitos de hgado.


2. Aadir 5 mililitros de agua oxigenada.

3. Se observar un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxgeno.

5.1.-RESULTADOS:
Tubos de ensayo Resultados
Muestra de hgado de pollo cocinado La muestra no reacciona al contacto con el
agua oxigenada.
Muestra de hgado de pollo sin cocinar La muestra reacciona al instante con el
agua oxigenada, al llenarse de burbujas de
manera inmediata.

9
CONCLUSIONES

10
BIBLIOGRAFA

http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioqumica/material-de-clase-
1/Tema6_Enzimas.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/1.4.ENZIMAS_24470.pdf
http://www.juntadeandalucia.es/averroes/ies_francisco_pacheco/Departam/Depabio
/BM/ENZ.pdf
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf

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ANEXOS

12
IMAGEN 2 practica uno amilasa salival

IMAGEN 1 reactivo con lugol

13
NDICE:
I.- INTRODUCCIN: ........................................... 1

II.- MARCO TERICO ....................................................................................................... 1

2.1.- ESTUDIO DE LOS ENZIMAS. ................................................................................... 3

2.2.-CONCEPTO: .............................................................................................................. 4

2.3.- IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS .......................................................................... 5

2.4.- CATLISIS QUMICA. ............................................................................................... 5

III.-PRCTICA DESNATURALIZACIN A PH CIDO DE LA AMILASA. .......................... 7

3.1- PROCEDIMIENTO: .................................................................................................... 7

3.2.- RESULTADOS: ......................................................................................................... 7

3.3.- CUESTIONES ........................................................................................................... 8

14
IV.-PRCTICA DESNATURALIZACIN DE LA CATALASA POR CALOR. ....................... 8

4.1.-MTODO .................................................................................................................... 8

4.2.-RESULTADOS: .......................................................................................................... 8

TUBOS DE ENSAYO......................................................................................................... 8

RESULTADO ..................................................................................................................... 8

4.3. - CUESTIONES .......................................................................................................... 9

V.-ACCIN DE LA CATALASA DEL HGADO DE POLLO CON EL PERXIDO DE


HIDRGENO..................................................................................................................... 9

5.1.-RESULTADOS: .......................................................................................................... 9

CONCLUSIONES ............................................................................................................ 10

BIBLIOGRAFA ................................................................................................................ 11

ANEXOS.......................................................................................................................... 12

15