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INTRODUCCIN

Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares
simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de
carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra
formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido
donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos
ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una
colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la
original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer
como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es


imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas
sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un
producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero
no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente.

Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que


slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores
de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es
fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de
producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el
cultivo se realiza en un tubo cerrado.

Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas


enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas
hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios
apreciables macroscpicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes
medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de
un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias
MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS

DEFINICION DE CULTIVO:

En biologa, y e s p e c f i c a m e n t e e n microbiologa, unc u l t i v o e s


u n m t o d o p a r a l a m u l t i p l i c a c i n d e microorganismos,
tales como bacterias y virus, e n e l q u e s e p r e p a r a u n medio ptimo
para favorecer el proceso d e s e a d o .

Un cultivo es empleado como un


mtodo f u n d a m e n t a l p a r a e l estudio d e l a s bacterias y o t r o s
microorganismos que causan enfermedades. Se entiende por medio de
cultivo la mezcla de
sustancias,n a t u r a l e s , s i n t t i c a s o a m b a s , q u e p e r m i t e e l
crecimiento y la reproduccin de microorganismos o bien que permite mantener su
viabilidad.
Una forma til de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos es
mediante el uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como
ya sabemos se considera el padre de la micobiologia) quien se dio cuenta que los
microorganismos podan crecer en soluciones que tuvieran azcar y una fuente de
nitrgeno.

Actualmente existen medios muy especializados para microorganismo muy


exigentes. La forma ms sencilla de clasificar los medios de cultivo es por su
consistencia entonces aparecen los medios de cultivo slidos y los medios de cultivo
lquidos o tambin llamados caldos.

CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO LQUIDO

Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos las clulas


que se producen en cada divisin continan su vida independientemente
formndose una suspensin de clulas libres.

Fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptacin durante la que los microorganismos adaptan su


metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y
condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.

2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es


mxima y el tiempo de generacin es mnimo.

Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad mxima los nutrientes del
medio.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la


masa u otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan
un metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener
importancia industrial

4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables
del cultivo.
CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO SLIDO

Se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formacin de colonias sobre la


superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfologa de las colonias, lo
que no permiten los medios lquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia
de sostn, que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Comn, Agar SS, Agar
Cerebro Corazn, Agar Saboureaud, etc.

Los medios slidos tienen generalmente agaragar como agente solidificante,


espesante o gelificante.
El agar-agar es una sustancia hidroflica de carcter coloidal procedente de
diversas especies de algas marinas, especialmente del gnero Gelidium, que tiene
la propiedad de formar un gel. Qumicamente el agar-agar es un polisacrido de
cadena larga, dependiendo de su tamao el poder gelificante.
El agar-agar se expende en forma granulada o en polvo, es insoluble en agua fra,
se disuelve solamente a temperatura de ebullicin, se mantiene en forma viscosa
a 6080 C y solidifica en forma de un gel estable a 4045 C. Resiste
perfectamente la esterilizacin a 121 C y por su capacidad de retener agua no se
deshidrata fcilmente, lo que permite almacenar los medios por un largo perodo
de tiempo a 5 C.

Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los


cultivos lquidos se presentan tambin en cultivos slidos. La cintica de
crecimiento, en este caso, se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de
clulas viables por unidad de superficie o por unidad de masa. Cuando una clula
aislada e inmvil comienza a crecer sobre un substrato slido, el resultado del
crecimiento al cabo del tiempo es una colonia.

Por consiguiente, se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula


bacteriana viva y aislada que si se encuentra en condiciones de substrato y
ambientales adecuadas da lugar a la produccin de una colonia en un breve lapso
de tiempo.

Si el nmero inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la


confluencia de las colonias da lugar a lo que se llama un csped cuando se
realizan los cultivos en placas de laboratorio.

En el caso de microorganismos mviles (deslizantes) o en el de los hongos


filamentosos que tienen un crecimiento trfico no se producen colonias aisladas
sino formaciones ms difusas o miceliares.
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve


afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,


como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que
tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de


carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida
de los factores nutritivos lbiles.

Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es


utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.

Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como


indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo


productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y


comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de


oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas
parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es


imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as
que se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en


presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.

6- pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los


microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe
olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metablicos normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y


43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C,
y los saproftos tienen rangos ms amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)