FIXAO BIOLGICA DO NITROGNIO

N2 - 78% na atmosfera

Utilizado apenas por um pequeno grupo de bactrias - complexo

enzimtico necessrio para reduo do N2, atravs do processo conhecido
como FBN

N total na ecosfera:
0.04% - forma combinante, destes
43% N orgnico
57% N inorgnico

N orgnico - 4 % nos seres vivos

94% plantas
2% animais
4% bactrias

Estimativas da FBN - imprecisas,

Fixao industrial (produo de fertilizantes) parcela pequena do total de
N fixado

N2 entra no solo:
Fixao biolgica
Fixao qumica
Processos eletroqumicos

Nitrognio sai do solo:

colheitas
eroso
lixiviao
desnitrificao
 FBN em arroz irrigado

Cianobactrias de vida livre

Em simbiose com Azolla
2 nichos: aerbio - superfcie
Menor disponibilidade de O2 (at anaerbio)

Raiz - aernquima - sistema de aerao interna - mantm a rizosfera em

condies aerbias

Rizosfera: secreo de substncias orgnicas

Camadas mucilaginosas
Substratos para crescimento de diasotrficos aerbios em razes
submersas:

Cianobactrias:
1. Vida livre
Sistema regulador - em profundidade - tima luz, temperatura, tenso de
O2 - fotossntese e N2 fixado em parte liberado na gua

Nicho anaerbio - Bacillus, Clostridium, Desulfovibrio

Nicho intermedirio - Pseudomonas

2. Em simbiose - Azolla
N2 - fixado nas folhas
Parte do N2 fixado liberado na gua ou solo, pode ser absorvido
pelas razes
Incorporao - 25 a 146 kg N/ano

Desvantagem:
1. Manuseio de grande quantidade para inculo
2. Manuteno (entre-safra)
 BACTRIAS FIXADORAS DE N2

1. Vivem em vida livre (gua ou solo)

Heterotrficas (C limitante) ou autotrficas

Beijerinckia, Azospirillum, Derxia, Azotobacter, cianobactrias,

etc.

2. Cianobactrias - em vida livre ou em simbiose (Azolla - Anabaena)

3. Em associao com plantas:

a. Rizosfera - Ex. Azotobacter paspali Paspalum notatum

b. Infeco da planta hospedeira - as associaes podem ser

ENDOFTICAS FACULTATIVAS - sem estrutura. especializada

Ex. Azospirillum, (FBN, IAA, giberelinas, densidade e nos

plos radiculares)

ENDOFTICAS OBRIGATRIAS - sobrevivem mal no solo

Ex. Herbaspirillum seropedicae (arroz, milho, cana-de-

acar)
- razes, colmos e folhas

Acetobacter diazotrophicus - (cana-de-acar, batata e

outras)

No ocorre no solo (pH 3.0, sacarose)

- razes, colmos e folhas

- superfcie radicular, dentro da epiderme, xilema, caule e

folhas
COMPORTAMENTO DE ESTIRPES DE B. japonicum, EM SOLO DE
CERRADO

Soja - auto-suficiente em nitrognio (melhoramento)

Introduo de uma estirpe nas sementes

Eficiente e efetiva
Competitiva
Persistir no solo (?)
Baixa especificidade hospedeira

Cerrado de 10 ano - difcil estabelecimento da nodulao - actinomicetos

Inoculante comercial 29W, 587 (alta % nos ndulos)

 Fixao Biolgica do Nitrognio

Feijo - R. tropici, R. etli, R. leguminosarum bv. phaseoli

Ainda no auto- suficiente para fixao biolgica do nitrognio

Alta populao de estirpes nativas competitivas e baixa capacidade de
fixar N2
Seleo de estirpes eficientes e competitivas
Senescncia precoce dos ndulos - alta sensibilidade ao estresse
hdrico (reflexo na nodulao)
reas irrigadas: inoculao com estirpes selecionadas induz aa
produtividades iguais ou maiores que o tratamento com 100 kg N/ha
Produtividade mdia no Brasil - 505 kg/ha
Distrito Federal 1362 kg/ha (regio - 538kg/ha)

FBN limitada por:

Caractersticas da planta
Baixa capacidade de FBN com algumas cultivares
Alta susceptibilidade a estresses ambientais
Ataque de pragas e doenas

Caractersticas do Rhizobium
Baixa capacidade competitiva
Baixa eficincia em fixar nitrognio

N via fixao em diversos pases - 40%

Produtividade de 2500 kg/ha em solo com baixo N

Assimilao do N2 fixado

glutamina sintetase e glutamato sintase

sintese de uredos

Melhoramento para fixao de N2

Ciat e EUA - fatores fisiolgicos da planta, fatores de solo, etc. limitam o
desempenho simbitico.

FBN em leguminosas arbreas

Cerrado- contribuem para 70% volume anual de carvo no Brasil

38% da flora (5000 a 7000 sps) - no foi estudada

Leguminosas perenes (essncias arbreas) - reflorestamento de solos

empobrecidos
Protegem o solo
Ciclagem de nutrientes

Espcies pioneiras - colonizam clareiras e reas de desmatamento -

proteo para regenerao de florestas secundrias.
Espcies - fornecimento de lenha e madeira

Fixam N2 - 150 - 580 kg N/ha/ano

Crescem independentes do N do solo - retorno de massa vegetal ao
solo, rica em N, lignina, celulose - restaura fertilidade

Leguminosas arbreas de cerrado:

Mimosoideae - Dimorphandra, Mimosa, Strryphnodendron

Papilonoideae - Bowdichia, Pterodon, Machaerium

Grupo de inoculao cruzada: grupos de plantas onde os rizbios so

intertrocveis
Conceito de grupo cowpea de inoculao - em culturas tropicais -
rizobios de crescimento lento nodulavam Vigna ssinensis.
spp. Arbreas tropicais classificadas em 1936 por Allen e Allen
como grupo de inoculao cruzada - tipo cowpea
Taxonomia baseada em grupos de inoculao cruzada
Taxonomia numrica (caracts. Bioqumicas, fisiolgicas, sorolgicas e
moleculares)
Separadas: bactrias de crescimento lento - Bradyrhizobium
bactrias de crescimento rpido Rhizobium

A partir de 1988:
 Sinorhizobium (crescimento rpido que nodula soja)
Azorhizobium (ndulos caulinares)
Mesorhizobium (Lotus, tremoo)

Leguminosas arbreas:
Estirpes de Rhizobium e Bradyrhizobium

1. Rhizobium (grupo I)
2. Rhizobium e Bradyrhizobium (grupo II)
3.Bradyrhizobium (grupo III)

Modos de infeco

1. Infeco entre as clulas epidrmicas - no associadas a razes laterais

2. Penetrao do Rhizobium intercelularmente - na emergncia de razes

laterais - Arachis hypogeae, Acacia mangium

3. Tipo mais primitivo - cordo de infeco persistente, no havendo

liberao bacteriana intracelularmente - Mimosa scabrella

Especificidade hospedeira

Especificidade - alta variabilidade entre espcies arbreas e

Rhizobium
Acacia seyal - promscuas
Sesbania marginata - altamente especfica
Grupos intermedirios

Efetividade - estirpes que so efetivas em um hospedeiro e ineficientes

em outros grupos.

Mecanismos envolvidos na simbiose

Flavonides e outros - exsudatos das razes que inibem ou ativam

genes bacterianos de nodulao (alelos dos genes nodD)
Genes envolvidos na sntese de N-acetilglucosamina (variam de
espcie para espcie) - sinais de formao do ndulo no hospedeiro
Quimiotaxia
Aderncia
Ligao entre polissacardeos bacterianos e lectina da planta
Infeco e formao do ndulo
Fixao de N2

nodulam com Rhizobium e Bradyrhizobium - espcies promscuas e pouco

eficientes em fixar N2
Tb. Espcies com alto grau de especificidade hospedeira e com simbiose
efetiva

exs.
-Acacia albida - 20 - 30 kgN/ha/ano
-Leucena leucocephala 200 - 300 kg N/ha/ano
-Gliricidia sepium

Espcie e gentipo da planta

Microsimbionte
Manejo de fatores florestais

Nodulao das arbreas no cerrado

72 gneros, 527 espcies

Nodulao - varia de acordo com as cond. Ambientais

Deficincia de nodulao:
Baixa populao de rizbios - (<50/g solo)
Fatores fisico-qumicos e biolgicos no solo
Latossolos - predominam solos bem drenados, baixa reteno de gua,
lixiviados, elevada acidez e alto teor de Al trocvel
Solos arenosos - favorecem a nodulao (no de ndulos) e no de espcies
arbreas
Alto grau de lixiviao - perdas de N
30 - 50 kg N/ha - inibe a nodulao em sps. Arbreas
pH em geral - no limitante - correo de pH - no favorece a nodulao
Al - Rhizobium tolera at 100 mM de Al
Baixa fertilidade - compromete a nodulao de sps. Arbreas

FBN em espcies arbreas

As mais estudadas - Accia
Acacia mangium- crescimento comparvel ao Eucalyptus
(14 anos - 30 m de altura, dimetro de 40 cm)
Inoculao de A. mangium - recomendada (maior crescimento da planta,
maior teor de N)
FBN - conhecimento limitado -
Inoculao Rhizobium - micorriza - FBN, prod. biomassa, estabelecimento a
campo
Sucesso: compatibilidade entre o Rhizobium e o fungo
Poucas informaes - contribuio das espcies arbreas nativas do cerrado
para o ecossistema - N e biomassa incorporada

Accia - 30 - 40 kg N/ha/ano
Inoculao com estirpes selecionadas - 190 - 493 kg/ha/ano

Leguminosas - FBN - auxiliam o crescimento de outras espcies no

fixadoras:
sub-bosque
Incorporao ao solo (restos de poda)
Elevada produo de biomassa, (rica em N) - reas degradadas
Anadeenanthera falcata, etc

Fatores ambientais
FATORES LIMITANTES FBN

Capacidade de fixar N2 - vantagens planta - N limitante

FBN - expresso do potencial gentico da planta e do microsimbionte

Fatores biticos

FBN - 28 moles de ATP/ mol de N2 reduzido

-2.5% da fotossntese geral do planeta vem via FBN

-Cerrado e Amaznia - adaptao de estirpes - tolerantes a antibiticos
-Calagem - aumenta populao de actinomicetos no solo (as sensveis no se
-estabelecem) - tolerncia estreptomicina - 80 mg/ml
-Cerotoma - larvas se alimentam de ndulos
-Adulto - importante praga do feijo
-Protozorios
-Bdelovibrio

Fatores climticos

-Estresse hdrico
-Em geral plantas fixando nitrognio - mais sensveis que com N mineral
-h plantas que adquirem mecanismos para evitar o estresse
-Afeta o desenvolvimento de pelos radiculares (anormalidade)
-Ndulos formados - alteraes morfolgicas e fisiolgicas
-Clulas do crtex tornam-se mais compactas
-Menor atividade da nitrogenase

N mineral

-S h FBN quando h deficincia de N mineral no solo

-H necessidade de disponibilidade de N combinado para o crescimento do
rizbio at incio da FBN
-Simbiose com N mineral:
-Processo de infeco
-Nmero de ndulos formados
-Taxa de fixao de nitrognio
-Crescimento dos ndulos - mais sensvel ao excesso de N que a atividade da
enzima
-Infeco da bactria nos ndulos - a mais sensvel
-Excesso de nitrato - aumenta a barreira de difuso de O2
- forma-se nitrosil - leghemoglobina (inibe a sntese de leghemoglobina)
-Diminui a deformao dos pelos radiculares
-Adeso do Rhizobium parede do plo
-Nmero de cordes de infeco
-Aumento de abortos dos eventos iniciais da infeco
-Principal efeito - diminui o tamanho das clulas dos ndulos

AIA - (necessrio para a infeco) - destrudo por nitrito (1 produto da

reduo do nitrato para assimilao do N)

-Excesso de NH3+ - reprime a atividade da nitrogenase

-Complementao com adubo nitrogenado
-Importante identificar o perodo de maior contribuio da FBN - aplicar o N
antes ou depois

-Feijo - maior atividade de FBN at o incio do crescimento das vagens

-Complementao com N - 25 a 30 dias aps o plantio

Temperatura

-Simbiose leguminosa - Rizbios - mais sensvel aos extremos de temp. que

adubao com N mineral
-Plantas sensveis - ndulos pouco eficientes
-Leguminosas tropicais - 25 a 320C - diurnas (variam entre sps)

ex. Algaroba - timo a 350C

Feijo - no fixa a 340C

-Temperatura no solo 0 - 5 cm - 450C

-Uso de cobertura morta - minimizar os efeitos
-Obteno de bactrias mais tolerantes

Fertilidade do solo

-Solos tropicais:
-75% eroso
-45% estresse hdrico
-25% compactao
-7% salinidade / alcalinidade
-35% acidez
-80% deficincia de P
-Calagem - < disponibilidade de Zn
-S e Mo - aps alguns anos de cultivo

Acidez

-Maioria das bactrias - pouco tolerantes acidez me meio de cultura

Excees - Azotobacter paspali - pH <5.0

Azospirillum - pH < 4.5
 Acetobacter diazotrophicus - pH < 3.0

-Adaptao de bactrias a baixo pH - seleo de mutantes

-Em leguminosas sensveis - pH e tolerncia a toxidez de Al e baixa

disponibilidade de Ca - menor infeco e incio da formao dos ndulos
-Rhizobium dentro da raiz - protegido - estresses sentidos indiretamente
-Faixa crtica de nodulao - de espcie para espcie ou cultivares
-Maioria das espcies - toleram pH 4.5 - 4.8

exs. Caupi, estilosantes, bracatinga

-Plantas que fixam N2 - absorvem mais ctions (Ca+2, Mg+2, K+, Na+), do que
nions (Cl-, H2PO4-, SO4-) - abaixam o pH da rizosfera
-So necessrios - 250 kg/h de calcreo em solo com baixo poder tampo -
com FBN de 70 kg de N
-Adubo verde - quando no h remoo dos gros ou parte area - bases
retornam ao solo

Fsforo

-Deficincia de P - imobilizao por adsoro de ons fosfato nos colides

-FBN - demanda altas quantidades de P - sistema radicular restrito -
dependentes de micorrizas
-Fosfatos naturais (solubilidade aumentada em solos cidos) - alternativa para
manejo
-Aproveitamento de P nos anos subseqentes - plantas perenes - acidificao
da rizosfera.

Molibdnio

-Elemento chave da nitrogenase

-Tambm adsorvido em colides
-Disponibilidade aumentada com a calagem
-Solos: baixos teores e baixa disponibilidade - micronutriente com maior
--resposta adubao
-Nveis de Mo - ndulos ou sementes

Ex. feijo - ndulos na florao (<3.6 ppm de Mo - deficincia)

 Sementes - > 10 ppm - auto-suficientes em Mo

Outros elementos

-Ca- efeito especfico no crescimento da bactria e formao da leg-

hemoglobina
-Fe e Mg - importantes no funcionamento da nitrogenase

FBN em forrageiras

-Gn. Stylosanthes, Centrosema, Arachis, Galactia, etc

-Introduzidas: Pueraria phaseoloides
Leucaena leucocephala
-Associa-se a Rhizobium ou Bradyrhizobium (reduzem ou dispensam
adubao nitrogenada)
- uso de leguminosas - mtodo mais econmico de adicionar n ao sistema
solo-planta-animal
-Consrcio leguminosa-gramnea - maior teor protico da forragem
-Desenvolvimento contnuo do animal - perodo seco
-Introduo da forrageira - elevar a fertilidade do solo
-Recuperao de pastagens degradadas
-Calopogonium mucunoides, Stylosahtes
-Introduo de leguminosas
-Revolvimento do solo
-Adubao
-Leguminosas - aumento suficientes em N - tambm transferem N para as
gramneas: sustentabilidade do consrcio

Especificidade hospedeira

-Leguminosas. Forrageiras - normalmente noduladas

-Rhizobium e Bradyrhizobium - solos de cerrado - alta populao
-Poucas informaes - eficincia em fixar N2 e especificade hospedeira
-Maioria das leguminosas so promscuas
-Pequena parcela fixa N2
Leguminosas forrageiras

-Promscuas efetivas - Calopogonium, Vigna

-Nodulam eficientemente com inmeras estirpes de Rhizobium
-Promscuas inefetivas - Stylosanthes, Desmodium, Centrosema, Arachis
-Especficas - Leucaena, Centrosema, Stylosanthes
Stylosanthes grandifolia - 35% efetivas
Stylosanthes guianensis - 30% efetivas
-Baixa nodulao - alta sensibilidade ao n mineral
-Estirpes nativas
-Identificao: resistncia a antibiticos, tcnicas sorolgicas (limitadas),
-Anlise dos componentes celulares (protenas e cidos nuclicos)
-Estudos de competitividade e estabelecimento no solo
-Resposta adubao nitrogenada

Necessidade de inoculao depende de:

-Ocorrncia anterior da forrageira ou outras leguminosas

-Presena de populao nativa
-Competio da estirpe introduzida

Ausncia de resposta ao N adicionado:

-Rhizobium nativo efetivo

-N no o fator limitante
-Leguminosas especficas - boa resposta inoculao
Leucena - biomassa com inoculao - adubao com 150 kg N/ha
Centrosema - especfica - resposta inoculao
Stylosanthes - em geral, sem resposta inoculao
(alta variabilidade gentica - Rhizobium/Bradyrhizobium)
Arachis - nodula com estirpes de vrias espcies de plantas hospedeiras
-Poucas fixam altos nveis de N
-Leguminosas promscuas - no respondem inoculao
Galactia striata
Macroptilium atropurpuerum

- inoculao de estirpes eficientes - sem resposta inoculao