COLUMNA DE WINOGRADSKY

Los trabajos de Louis Pasteur y Robert Koch en la segunda mitad del siglo XIX se basaron
tcnicamente en la obtencin de cultivos bacterianos puros. Ms all de ser fundamentales
desde el punto de vista conceptual, esos trabajos posibilitaron grandes avances en las reas
de medicina e industria. En otra lnea de investigacin, Martinus Willen Beijerinck y Sergei
Winogradsky estudiaron las comunidades microbianas en sus ambientes naturales. Los
estudios ecolgicos permitieron comprender las caractersticas metablicas de esas
comunidades y esclarecer las etapas del ciclo de algunos elementos (carbono, nitrgeno,
azufre).

La construccin de una columna de Winogradsky es un mtodo simple de estudio de la

diversidad microbiana mediante la seleccin de microorganismos con determinadas
caractersticas metablicas. Consiste en enriquecer una muestra de suelo con nutrientes, de
modo de favorecer el crecimiento de algunas comunidades.

Existen numerosas variaciones y combinaciones posibles en la eleccin de las fuentes de

enriquecimiento:

Fuentes de carbono:

Materiales que liberan carbono rpidamente tales como carbonato de sodio, bicarbonato de
sodio o carbonato de calcio (tiza molida).
Materiales de origen vegetal que liberan carbono ms lentamente, tales como csped, heno,
agujas de pino, papel de peridico, papel higinico, almidn de maz, avena, aserrn, etc.

Una modificacin parcial o total del modo de enriquecimiento o del tratamiento permite
seleccionar microorganismos con caractersticas especficas: bacterias del hierro (hierro),
bacterias del ciclo del nitrgeno (fertilizante en exceso), bacterias termfilas (incubacin a
temperatura elevada), bacterias halfilas (sal), bacterias acidfilas (vinagre), bacterias
basfilas (fermento qumico), etc.

ACTIVIDAD PRCTICA

La columna de Winogradsky es una forma simple de seleccionar y estudiar los

microorganismos existentes en cualquier ambiente. La columna puede ser construida a partir
de lodo o suelo de cualquier origen, con agua proveniente de la misma fuente o de una fuente
diferente.

OBJETIVO

Construir una columna de Winogradsky para observar los microorganismos del ambiente
MATERIALES

1 vasija, botellas de plstico transparentes de 2 l, 1 embudo, 1 vaso de plstico, lodo o muestra

de tierra del lugar analizado, agua del mismo lugar, una fuente de celulosa (10 g de papel
higinico), una fuente de fsforo y potasio una fuente de azufre (5 g de yema de huevo cocido)
y, eventualmente, una fuente de hierro, trozos de tela para cubrir las botellas, elsticos.

PROCEDIMENTO

1. Colocar en un recipiente cinco vasos de lodo, arena o tierra; retirar todas las piedras, ramas
u hojas.

2. Diluir una cucharada tamao t de fertilizante en un volumen equivalente de agua del mismo
sitio.

3. Preparar con ambas partes una mezcla de consistencia cremosa, suficientemente fluida
para pasar por el embudo.

4. Colocar en el fondo de la garrafa 10 g de la fuente de celulosa, 5 g de la fuente de CO2, 5

g de la fuente de azufre y, eventualmente, la fuente de hierro.

5. Agregar un poco de la mezcla. Eliminar el aire, batiendo con fuerza para asentar la mezcla.

6. Colocar otras capas de lodo, asentndolas como antes, hasta que la botella est 90% llena.
Si fuera necesario, eliminar las burbujas existentes revolviendo con una varilla.

7. Esperar 30 minutos. La capa de agua en la parte superior deber medir por lo menos dos
cm de altura. Agregar agua, si fuera necesario. Considere que la proporcin de las capas
inferior de lodo y superior de agua pueden variar.

8. Cubrir la botella con un pao y cerrar con un elstico.

9. Incubar en un lugar donde reciba suficiente luz, pero no sol directo.

10. Observar semanalmente las variaciones, y agregar agua cuando sea necesario para que
la columna no se seque.

La seleccin de diferentes tipos de microorganismos se consigue mediante el agregado de

algunos compuestos (orgnicos e inorgnicos) y el ajuste del pH. La iluminacin estimula el
crecimiento de fottrofos (aerobios y anaerobios), que se desarrollan formando un biofilm,
entre la pared de la botella y el medio. Cerca del tope de la columna crecen los organismos
aerobios y microaerfilos, en el fondo se multiplican los anaerobios (Clostridium, bacterias
metanognicas).
Los materiales y el procedimiento descriptos en el protocolo permiten estudiar los organismos
involucrados en el ciclo del azufre (medio enriquecido con celulosa, azufre y calcio), como se
observa en la figura siguiente.

CMO MONTAR UN PROYECTO?

Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de una muestra en columnas

enriquecidas con diferentes cantidades de sulfato de calcio.

Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de varias muestras en columnas

enriquecidas del mismo modo.Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de una
muestra en columnas enriquecidas del mismo modo, incubadas en diferentes condiciones de
iluminacin (o de temperatura).

ANEXOS