CURSO QUIMICA DE PRODUCTOS NATURALES

CAPITULO I: CONCEPTOS BASICOS

Los productos naturales se han dividido con cierta arbitrariedad en 02

grupos: metabolitos primarios y metabolitos secundarios:

METABOLITOS PRIMARIOS

El metabolismo primario compromete aquellos procesos qumicos que cada

planta debe llevar a cabo cada da para sobrevivir y reproducir su
actuacin, como son: fotosntesis, glicolisis, ciclo del cido ctrico, sntesis
de aminocidos, transaminacin, sntesis de protenas, enzimas y
coenzimas, sntesis de materiales estructurales, duplicacin del material
gentico, reproduccin de clulas (crecimiento), absorcin de nutrientes,
etc.
Los metabolitos primarios se caracterizan por:
- Ser compuestos esenciales intermedios en las vas catablicas y
anablicas.
- Encontrarse en todas las plantas.
- Producto del metabolismo general
- Ampliamente distribuidos en plantas y microorganismos
(aminocidos de protenas comunes, monosacridos, nucletidos,
cidos carboxlicos, lpidos, vitaminas, clorofila.)

METABOLITOS SECUNDARIOS

Se denominan as al conjunto de reacciones qumicas que son nicos para

una planta dada, y no son universales.
Las plantas destinan una cantidad significativa del carbono asimilado y de
la energa a la sntesis de una amplia variedad de molculas orgnicas que
no parecen tener una funcin directa en procesos fotosintticos,
respiratorios, sntesis de protenas, carbohidratos o lpidos, es este proceso
qumico que conduce a la formacin de un producto natural o producto
secundario. Algunas porciones de esta qumica son comunes para un
nmero de plantas diferentes o familias de plantas, pero actualmente la
qumica de productos naturales es usualmente diferente de una planta a
otra.
Los metabolitos secundarios (en la mayora de los casos) no parecen ser
necesarios para la supervivencia de las plantas, pero pueden suponer una
ventaja competitiva considerable
Producto del metabolismo especial.
Biosintetizados a partir de los metabolismos primarios.
Distribucin restringida a ciertas plantas y microorganismos (a veces
es caracterstico de un gnero dado de una especie).Ejemplo:
Flavonoides, Cumarinas, Saponinas, Terpenoides, Taninos,
Alcaloides, etc.)
Son compuestos qumicos de estructura relativamente compleja.

Los metabolitos secundarios es propio de una especie y se le conoce

tambin como Producto qumico o Compuesto del qumico, hasta hoy
se considera que los metabolitos secundarios no tienen una funcin
definida en la especie, o un significado bioqumico, no se ha descubierto
an una funcin metablica en la cual ellos intervienen, no tienen una
utilidad aparente para la especie, que lo sintetiza, es decir no participan en
su crecimiento y reproduccin, por esos son considerados como artculos
de lujo para la planta.

Los metabolitos primarios, son comunes a todos los seres vivos y

participan en la actividad celular y se encuentran en todos los organismos
vivos; por lo tanto son metablicamente esenciales, en algunos casos los
metabolitos primarios sirven como precursores de los metabolitos
secundarios.
A estos metabolitos se les conoce como productos bioqumicos es decir
compuestos del bioqumico.

Es necesario indicar en este punto que hasta la actualidad por ejemplo; que
compuestos como el escualeno un triterpeno no comn obtenido del aceite
del hgado de tiburn considerado como metabolito secundario, y conocido
como uno de los productos universalmente distribuido, es un participante
fundamental en el metabolismo de los seres vivos, es decir que
probablemente que muchos de los compuestos orgnicos que hoy en da se
califican de metabolitos secundarios lleguen a ser reconocidos como
actores principales de importantes funciones biolgicas.

COOH
N
N COOH
L- prolina (amijnoacido de proteinas)
metabolito primario
L- pipeclico
metabolitos secundarios
solo se encuentra en ciertas plantas
BIOSINTESIS

Todos los compuestos orgnicos, estn constituidos por carbono e

hidrogeno a menudo contienen oxigeno y nitrgeno y menos
frecuentemente, azufre, fsforo, y halgenos.
La formacin de los productos naturales comienza con la fotosntesis que
tienen lugar en plantas superiores, algas y algunas bacterias. Es un proceso
endotrmico que requiere de la luz solar.
Aquellos organismos incapaces de absorber la luz obtienen su energa de la
degradacin de carbohidratos de modo que la fuente principal de obtencin
de carbono es la inversa en la indicada en el esquema general. Los
metabolitos secundarios se forman por distintas vas, y como siguiendo su
ruta biogentica una misma clase de compuestos, por ejemplo los
alcaloides pueden tener varios orgenes.
 Esquema general de biosntesis

CO 2 + H2O ACIDOS NUCLEICOS

pirimidas
fotosntesis H3PO 4 purinas

Hexosas CARBOHIDRATOS POLISACARIDOS

glicsidos Ac.piruvico (C 3) Ac.ctrico

Pentosas

Aminoacidos
alifticos

PORFIRINAS

Ac. actico Ac. shikmicos (C

6-C)
CH3CO2H
HO

x3 HO CO 2H
condensacin (C2)n
HO
Ac. mevalnico Ac. prefnicos (C6-C3-C)
OH
CO 2H
HO
HO HO O CH2 CH2CO2 H

TERPENOS (C 5n) Fenilalina (C 6-C 3)

AC. GRASOS POLICETIDOS
SATURADOS (COMP. FENOLICOS)
Mono- (c 10)
Ac. cinmico
Sesqui- (C15) Amino cidos
Di- (C 20) aromticos
AC. GRASOS
Sester- (C25)
INSATURADOS AROMATICOS
Tri- (C 30)
Tetra- (C 40)
(Carotenoides) ALCALOIDES
POLIACETILENOS LIGNANOS
+ +
ESTEROIDES
Azcares
PROSTAGLANDINAS LIGNINAS +
+ PROTEINAS
SAPONINAS FLAVONOIDES
PAUTAS PARA EL ESTUDIO FITOQUMICO
Seleccionar el material dependiendo del inters del estudio

a) Inters particular por la referencia etnobotnica

La etnobotnica comprende la informacin sobre el uso

de las especies como: colorantes, plantas medicinales, aceites
esenciales, floculantes naturales, biocidas, etc.
Se ubica la especie a estudiar, se realiza la revisin
bibliogrfica sobre la especie (familia, gnero, especie), tipos de
compuestos presentes en la especie, que nos permitirn orientar el
fraccionamiento, la purificacin y las pruebas de actividad biolgica
de extractos y compuestos puros.

b) Inters dirigido a un tipo de compuesto qumico

Por ejemplo se quiere estudiar especies que sintetizan Quinonas, se

ubica la especie, se realiza la revisin bibliogrfica, se realiza las
pruebas de laboratorio (screening fitoqumico) de las diferentes
partes de la planta y tambin es necesario tener en cuenta las edades.
Se procede a la extraccin, fraccionamiento, purificacin y pruebas
de actividad biolgica.

c) Inters por un determinado tipo de actividad biolgica.

Se realiza la revisin bibliogrfica para identificar la familia, gnero

y especie que tengan esta actividad, se preparan los extractos, se
realizan los ensayos de actividad biolgica al extracto activo, se
realiza el fraccionamiento cromatogrfico bioguiado con la finalidad
de aislar e identificar los compuestos y comprobar su actividad.

La recoleccin del material a estudiar debe hacerse por un

botnico y una muestra debe ser depositada codificada en los
Herbarium.
MARCHA FITOQUIMICA PRELIMINAR (SCREENING
FITOQUMICO)

EXTRACTO HEXNICO

Determinacin cualitativa de de Flavonoides

Disolver el residuo desgrasado obtenido de la filtracin de la
maceracin para obtener el extracto hexnico 2 g. en 10 mL. de etanol
y filtrar. Colocar de 1-2 mL. del filtrado en tres tubos de ensayo. El
tubo N 1 sirve de control.

Ensayo de cianidina
-Al tubo N 2 aadir 0.5 mL de HCl concentrado y una tirita de
magnesio. Observar la formacin de color (de verde a rojo) al cabo
de 10 minutos.
-De haber cambio de color con respecto al tubo de control, enfriar y
diluir con volmenes iguales de agua y aada 1 mL. de alcohol
amlico, agite y espere que se separe.
-El desarrollo de tonalidades rojizas en la capa del alcohol amlico es
indicativo de flavonoides.

Ensayo de leucoantocinina
-Al tubo N 3 aadir 0.5 mL de HCl concentrado y calentar en bao
de mara por 5 minutos
-El desarrollo de un color rojo-violeta es indicativo de la presencia de
leucoantocianinas.
-En caso de no aparecer inmediatamente el color, deje reposar a
temperatura ambiente por una hora antes de anotarlo como negativo.
La formacin de color se da en forma lenta.

Ensayo para alcaloides

A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 4 mL. de cido
clorhdrico al 1 % se filtra en cuatro tubos de ensayo donde al tubo N
1 se adiciona de 2 a 3 gotas del reactivo de Dragendorff. La presencia
de turbidez, floculacin o precipitado rojo ladrillo es indicativa de
alcaloides. Al tubo N2 reactivo de Wagner. La presencia de turbidez,
floculacin o precipitado es indicativa de alcaloides. Al tubo N 3
reactivo de Mayer. La presencia de turbidez, floculacin o precipitado
crema es indicativa de alcaloides. El tubo N 4, nos sirve de control.
Ensayo para triterpenos y esteroides
A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 4 mL. de
cloroformo, filtrar y dividir en tres tubo. El tubo N 1 es el control.
Al tubo N 2 se realiza la Reaccin de Liebermann-Burchard. A un 1
mL. de muestra se aade igual volumen de anhdrido actico. Por la
pared del tubo de ensayo se dejan caer de 3-4 gotas de cido sulfrico
concentrado.
La aparicin de una coloracin verde-azul indica la presencia de
estructuras esteroidales y una coloracin rojo-pardo indica la
presencia de estructuras triterpnicas.
Al tubo N 3 aadir 3-4 gotas de cido sulfrico concentrado
dejndolo caer por las paredes del tubo hasta el fondo. La formacin
de un anillo de color rojo en la interfase es indicativa de esteroles
insaturados.

Ensayo para derivados Antracnicos (Quinonas) (Borntrager)

A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 3 mL. de
cloroformo. Posteriormente se filtra y se distribuye en 3 tubos de
ensayo, el tubo N 1 para control, al tubo N 2 se agita con 1 mL de
hidrxido de sodio al 5 % en agua. Coloracin rosa- rojo en la fase
acuosa, indica presencia de quinonas .
En el tubo N 3, adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio
al 0.5 % en metanol. Coloracin roja indica presencia de
antraquinonas libres.

Ensayo para Lactonas y Cumarinas (Baljet)

A una fraccin de extracto hexnico, se disuelve en 2 mL. de etanol se
distribuye en dos tubos de ensayo un tubo para control, al otro tubo se
le aade una mezcla recin preparada de de 1 mL de cido pcrico al 1
% en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.
Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de
agrupamientos lactnicos (cumarinas).

Ensayo para Lpidos y/o aceites esenciales (Sudn III)

A una fraccin del extracto hexnico 2 mL se evapora hasta sequedad
en presencia de la disolucin de Sudan III.
La aparicin de gotas oleosas de color rojo oscuro, indica la presencia
de lpidos y/o aceites esenciales.

Ensayo para Carotenos (Carr-Price)

A una fraccin del extracto, hexnico 1 mL. se le adiciona igual
volumen del reactivo de Carr-Price.
La aparicin de una coloracin verde azulada indica la presencia de
carotenos.

EXTRACTO DICLOROMETANO Y METANOLICO

Ensayo para Alcaloides

Pesamos 400 mg. de extracto seco se le adiciona 15 ml de cido
clorhdrico al 10 % se calienta hasta disolver y filtramos. De esta
forma se obtiene un residuo y una disolucin cida (lavados cidos).
Se mide 1 mL de los lavados cidos en cuatro (4) tubos de ensayo un
tubo es para muestra patrn y adicionamos unas gotas de los reactivos
de reconocimiento de Dragendroff (la presencia de turbidez,
floculacin o precipitado rojo- naranja), de Mayer (precipitado
crema), de Wagner (precipitado marrn).Pruebas directas para
alcaloides.
Al lavado cido sobrante lo colocamos en un pera de separacin y
extraemos con cloroformo, donde se obtiene dos fases: clorofrmica y
acuosa. La fase clorofrmica lo pasamos a un baln y lo llevamos a
sequedad en un rotavapor , hacemos una CCF, la presencia de
manchas de color naranja indica la presencia de alcaloides .

Ensayo para Triterpenos y Esteroides (Reaccin de Liebermann

Burchard)

A una fraccin de extracto disolver en cloroformo (CHCL 3),

adicionamos 1 ml. de anhdrido actico y 3 a 4 gotas de cido
sulfrico concentrado. Observamos la aparicin de una coloracin
rojo-pardo nos indica la presencia de estructuras Triterpnicas
La aparicin de una coloracin azul-verde indica la presencia de
estructuras Esteroidales.
El residuo seco obtenido a partir de la fraccin para realizar el ensayo
de alcaloides se redisuelve en 4 mL. de cloroformo, de estos se toma 1
mL en un tubo N 1 y se le aade el mismo volumen de anhdrido
actico. Por la pared del tubo se deja caer de 3-4 gotas de cido
sulfrico concentrado.
Al tubo N 2 aadir 3-4 gotas de cido sulfrico concentrado
dejndolo caer por las paredes del tubo hasta el fondo. La formacin
de un anillo de color rojo en la interfase es indicativa de esteroles
insaturados. El tubo N 3 es de control y no se agrega reactivo.
Ensayo para Quinonas (Borntrager)

Tomar un tubo de ensayo con la muestra ya disuelta en. Cloroformo

(CHCl3), se adiciona 1 mL. de (NaOH) hidrxido de sodio al 5 %,
agitamos y dejamos en reposo, se forman dos fases la clorofrmica y
alcalina . Una coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la
presencia de quinonas.
De la disolucin clorofrmica obtenida a partir de la fraccin para el
ensayo de triterpenos y esteroides. Tubo N2 se utiliza 1 mL. la cual
se le adiciona la misma cantidad de hidrxido de sodio al 5 % Una
coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la presencia de
quinonas.
En el tubo N 3 adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio al
0.5 % en metanol. Coloracin roja indica presencia de antraquinonas
libres.

Ensayo para Flavonoides (Mtodo de Shinoda)

Colocar en un tubo de ensayo con la muestra ya diluida en etanol,

adicionar un trocito de cinta de magnesio y 5 a 6 gotas de HCl
concentrado. Observndose la reaccin del Mg con el HCl donde se
realiza un cambio de color en la parte superior del lquido de nuestra
dando:
Resultados Positivos:
Amarillo-rojo = Flavonas, chalconas, auronas
Rojo-magenta = Flavanonoles
Rojo, magenta, violeta,azul = Antociancidos
Amarillo claros, incoloros = Flavonoles, Flavonas y Isoflavonas.
Los lavados cidos, obtenidos a partir de los ensayos para alcaloides,
se ajustan a pH 9.
Se realiza una extraccin con cloroformo. De esta forma se obtienen
dos fases, acuosa y clorofrmica. A la fase acuosa lo colocamos en un
tubo de ensayo para realizar el ensayo de Flavonoides donde
adicionamos una trocito de cinta de magnesio metlico y 5 gotas de
HCl concentrado dejar reaccionar y luego aadir 1 mL. de alcohol
amlico y agitamos.
Si el alcohol amlico se colorea intensamente de amarillo, naranja,
rojo o carmelita, el ensayo indica presencia de flavonoides.

Ensayo para Glicsidos Cardiotnicos

A 5 mL del extracto en evaluacin se adicionar 5 mL de acetato de
plomo al 10 % y 2 mL y de agua destila.
Calentar la mezcla a bao Mara durante 10 min.
Filtrar. Agitar el filtrado con 10 mL. de cloroformo en tres tubos de
ensayo.
Al tubo N 1 se agrega el reactivo de Baljet. (Coloracin roja, naranja-
rojiza o violeta son cardenlidos)
Al tubo N 2 realizar la reaccin de Keller-Kiliani (cido actico
glacial, 1 gota de cloruro frrico al 5 % en metanol y cido sulfrico
concentrado) Coloraciones intensas.
Al tubo N 3 se realiza la reaccin de Salkowaki (ncleo esferoidal).
Coloracin amarilla-rojo sangre.

Ensayos para Lactonas y Cumarinas (Baljet)

A una fraccin de extracto se disuelve en 2 mL. de etanol se
distribuye en dos tubos de ensayo un tubo para control, al otro tubo se
le aade una mezcla recin preparada de de 1 mL. de cido pcrico al
1 % en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.
Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de
agrupamientos lactnico (cumarinas).

Tomar dos tubos de ensayo de la muestra ya disuelta en etanol.

Para el ensayo de Cumarinas voltiles; En un papel filtro sembrar
unas gotitas de KOH , envolver en el tubo donde est la muestra
amarrarlo y llevar a bao Mara por 5 minutos y sacar el papel filtro,
llevar al UV el anillo de color amarillo verdoso fluorescente nos
indica positivo (+)
Para el ensayo de Cumarinas fijas, se siembra en un papel filtro dos
punto de muestra y a uno de los puntos agregamos una gotita de KOH
y se lleva al UV, si uno de los puntos presenta fluorescencia amarillo
verdoso el resultado es positivo (+).
Ensayo para Fenoles y Taninos
A una fraccin del extracto ya disuelto en etanol se toma 1 mL,
adicionamos de 3 a 5 gotas de cloruro ferrico (FeCl 3), lentamente,
fijndonos la variacin y aparicin de un color o precipitado verde.
Rojo, azul o negro indica la presencia de Fenoles y/o Taninos. La
coloracin azul indica posible presencia de Taninos hidrolizables, y
coloracin verde de taninos condensados. Si el color o precipitado es
Prpura o rojo-pardo indican presencia de Fenoles.

Ensayo para Saponinas.

A una fraccin del extracto diluida en etanol se le adiciona 4 mL de
agua y se agita la mezcla fuertemente durante 2 minutos, dejar reposar
5 minutos.
Si aparece una espuma jabonosa de ms de 2 mm de altura en la
superficie del lquido y persiste esto indica la presencia de
saponinas.

Ensayo para aminocidos y aminas (Ninhidrina)

A una fraccin el extracto diluido en etanol se le adiciona 1 mL de
disolucin de ninhidrina al 5 % en etanol. Se calienta en bao de agua
de 5 10 minutos.
La aparicin de una coloracin azul violcea indica la presencia de
aminas.

MATERIAL FRESCO

Determinacin de glicsidos cianognicos (glicocianos)

Es la nica prueba que se realiza, sin someter a extraccin con
solvente el material utilizando material fresco, debido a la
inestabilidad de estos compuestos, para esto se hace lo siguiente:
Una cierta cantidad (aproximadamente 10 g.) de material fresco se
extrae con cido diluido (H 2SO4, HCl) en un matraz con tapa
esmerilada, del cual se cuelga una tira de papel picrato previamente
preparada, todo el conjunto se coloca a la estufa a 60 C,
observndose la coloracin del papel a 30, 60, 120, minutos, un
cambio de amarillo (inicial), a pardo es prueba positiva (Matos 1988)
Preparacin del papel de picrato. Se mezclan volmenes iguales de
solucin de carbonato de sodio al 10% con solucin de cido pcrico
al 10%, en la mezcla se sumerge tiras de papel filtro, se deja secar al
aire y quedan listos para usarse.

EXTRACTOS
ENSAYO O PRUEBA
Hx CH2Cl2 MeOH
D
Alcaloides W
M
Triterpenos y
Esteroides
Quinonas
Flavonoides
Glicsidos
Cardiotnicos
Lactosas y Cumarinas
Fenoles y Taninos
Saponinas
 Aminocidos y Aminas
Lpidos y/o Aceites
Esenciales
Carotenos

Leyenda:
Ensayo positivo (+), contenido: (+) Poco; (++) Medio; (+++) Abundante
Ensayo negativo (-)
No s realiza el ensayo para este tipo de extracto (No).
 CAPITULO II: METODOLOGA DEL ANALISIS
FITOQUIMICO

El anlisis fitoqumico comprende las siguientes etapas .

a) Recoleccin y clasificacin botnica de la especie en estudio
b) Extraccin, separacin, purificacin de los constituyentes
qumicos
c) Determinacin estructural
d) Ensayos biolgicos y farmacolgicos
e) Ensayos preclnicos y clnicos
f) Ensayos de solubilidad
g) Ensayos toxiclogicos

A) Recoleccin de la especie en estudio.

Debe hacerlo un botnico, las plantas herbceas son generalmente

utilizadas en su totalidad.
Plantas leosas, se seleccionan las partes a estudiar (hojas,
corteza, raz, frutos, flores, semillas, madera.
Una muestra o excicata debe depositarse codificado en un
HERBARIUM
B) Mtodos de extraccin

Depende del objetivo del estudio.

Si se pretende estudiar compuestos sensibles al calor la
extraccin debe hacerse a temperatura ambiente.
Si el estudio va dirigido a comprobar la actividad biolgica
la extraccin es preferible hacerlo en agua con solucin
isotnica (0,9% NaCl), o preparar un extracto
hidroalcohlico etanol/H2O (70:30), evitando cualquier
incremento de temperatura.
 Los mtodos de extraccin ms usuales son:

Extraccin mecnica: es una tcnica que permite obtener los principios

activos disueltos en los fluidos propios de la planta, los cuales una vez
extrados se denominan jugo.

Destilacin: es una tcnica que se basa en la diferente volatilidad de los

componentes, de la droga, lo cual permite la separacin de componentes
voltiles de otros que son menos o nada voltiles. Se suelen hacer
destilaciones por arrastre de vapor o hidrodestilaciones que facilitan la
extraccin de principios activos voltiles. La destilacin permite obtener,
por ejemplo, las esencias de las drogas. Es un mtodo en el que se utiliza
una fuente de calor, por lo que slo es aplicable a principios activos
termoestables.

Extraccin con gases en condiciones supercrticas: se trabaja con

dispositivos especiales donde es posible controlar la presin y la
temperatura y se trabaja a presin (P) y temperaturas (T) superiores a la P y
T crticas. Los gases ms utilizados son dixido de carbono y el butano, si
bien la extraccin con butano es bastante peligrosa, ya que es un gas muy
inflamable. La extraccin con gases suele ser muy selectiva y
posteriormente relativamente sencillo eliminar el gas extractor, pero resulta
muy cara y es difcil encontrar las condiciones ptimas de presin y
temperatura.

Extraccin con disolventes: consiste en poner en contacto la droga con un

disolvente capaz de solubilizar los principios activos. Los principios
activos deben pasar de la droga al disolvente de manera que se obtenga un
extracto lquido. Posteriormente dicho extracto se puede concentrar
eliminando mayor o menor cantidad de disolvente. La extraccin con
disolventes es uno de los mtodos que se emplea con ms frecuencia para
la obtencin de principios activos.
 diferentes tipos de extracciones se pueden englobar en dos grupos: las
extracciones discontinuas y las extracciones continuas.

A. Extraccin discontinua o simultnea: se sumerge el material vegetal

en el disolvente, por lo que la totalidad de la droga contacta con el
disolvente utilizado para la extraccin y la difusin de los principios
activos se producir en todas direcciones hasta alcanzar el equilibrio.

La extraccin discontinua incluye varios procedimientos de extraccin:

A.1. Maceracin: consiste en poner en contacto la planta seca triturada con

el disolvente utilizado para la extraccin a temperatura ambiente,
mantenindolo todo en agitacin durante un tiempo determinado que
depende de las caractersticas de la droga y de la naturaleza de los
principios activos (normalmente das). Se utiliza generalmente agua,
glicerina o mezclas hidroalcohlicas. A continuacin se decanta el conjunto
obtenindose por una parte el extracto lquido con los principios activos y
por otra un residuo de la droga denominado marco. Para mejorar el
rendimiento de la extraccin es habitual volver a realizar otra maceracin
con el marco.

La maceracin se utiliza cuando los principios activos son muy solubles y

la estructura de la droga es muy permeable al disolvente (hojas, flores poco
compactas). Es til principalmente para la extraccin de principios activos
termolbiles, ya que se trabaja a temperatura ambiente.

A.2. Digestin: es un mtodo extractivo similar a la maceracin pero en el

que se trabaja a temperaturas muy elevadas generalmente.

A.3. Infusin: se trabaja con un disolvente (agua) a temperatura prxima a

la ebullicin, en el que se introduce la droga que se quiere extraer a
continuacin se deja enfriar el conjunto hasta temperatura ambiente.

A.4. Decoccin o cocimiento: se pone en contacto la droga con el

disolvente (agua) y el conjunto se lleva hasta la temperatura de ebullicin,
manteniendo dicha ebullicin durante 15-30 minutos. Una vez enfriado, se
filtra y se exprime el residuo. El tiempo de decoccin depende de las
caractersticas de la droga; es menor para drogas vegetales blandas (hojas,
flores, etc.) y mayor para drogas vegetales duras (corteza, semillas, etc.). El
tiempo de decoccin tambin depende de los principios activos que se
desee extraer. La decoccin se aplica sobre todo a drogas vegetales duras
en las que resulta difcil el contacto entre los principios activos y el
disolvente debido a sus caractersticas histolgicas y a drogas vegetales con
principios activos difciles de disolver que precisan una temperatura
elevada y un tiempo prolongado para su disolucin.

Tanto en las infusiones como en las decocciones se utiliza como disolvente

siempre el agua, por lo que no resultarn mtodos adecuados para extraer
principios activos hidrolizables. Por otra parte se ha de tener en cuenta la
poca estabilidad en el tiempo de Los extractos acuosos obtenidos, de ah la
conveniencia de preparar las infusiones y las decocciones en el momento
en que se van a utilizar.

B. Extraccin continua o progresiva: el disolvente utilizado para la

extraccin se va renovando y acta en una sola direccin. Son mtodos que
consisten en poner en contacto la droga con el disolvente adecuado y
mantener en todo momento el desequilibrio entre la concentracin de
principio activo en la droga y en el disolvente para que se produzca la
difusin celular. Mediante estos procedimientos se puede llegar a la
extraccin prcticamente completa de los principios activos de las drogas.

Se utilizan varios mtodos de extraccin continua:

B.1. Percolacin: es un procedimiento que se realiza a temperatura

ambiente. La droga se coloca en una columna y est en contacto
permanente con el disolvente que gotea por la parte inferior de la columna,
atraviesa toda la zona donde se encuentra la droga con los principios
activos, los va extrayendo y. por la parte inferior, se recogen los lquidos
extractivos que contienen los principios activos. La percolacin puede
llegar a conseguir extracciones prcticamente completas de la droga pero
con un elevado consumo de disolvente.

B.2. Soxhlet: es un sistema de extraccin slido-lquido en el que la

extraccin se realiza en un aparato que consta de un matraz de fondo plano,
un cuerpo extractor y un refrigerante. En el cuerpo extractor se coloca el
disolvente orgnico y la droga, generalmente envuelta en un material
poroso que permita el contacto con el disolvente. En el matraz de fondo
plano se coloca el disolvente orgnico, se lleva a ebullicin y los vapores
del disolvente ascienden por el tubo lateral y llegan al refrigerante donde
condensan y caen sobre la droga situada en el cuerpo extractor. Cuando el
cuerpo extractor se llena de lquido extractivo, ste se vaca por el sifn
lateral interno y desemboca en el matraz inferior. El disolvente orgnico se
va reciclando
 . Destilacin por arrastre de vapor, utilizado principalmente
para la extraccin de aceites esenciales.
Los solventes para las extracciones pueden ser soluciones
diluidas de cidos de bases, cuando se quiere aprovechar la
acidez o basicidad de las molculas como por ejemplo, en el
caso de los alcaloides.
Frecuente se utiliza solventes orgnicos de bajo punto de
ebullicin y de baja reactividad (alcohol, metanol, acetato de
etilo)
Preferentemente se desgrasa el material vegetal con
Hexano a ter de petrleo.
Utilizar alcohol o metanol es importante para extraer todos
los metabolitos secundarios de la especie en estudio, pero se
obtiene un crudo muy complejo y su fraccionamiento por
consiguiente es un problema.
Se recomienda lo siguiente para la extraccin Hexano ter
de petrleo-Acetato de etilo-Etanol Metanol-Etanol/H2O

Los extractos son evaporados a presin reducida en rotavapor liofilizados

si se trata de extractos acuosos.
TECNICAS DE SEPARACION Y PURIFICACION DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

CROMATOGRAFIA

La cromatografa agrupa un importante y diverso conjunto de mtodos, que

permiten separar componentes estrechamente relacionados en mezclas
complejas.

En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra que se desea separar

se disuelve en la denominada fase mvil que, normalmente, est formada
por un gas o un lquido.

Durante el proceso cromatogrfico, se hace pasar la fase mvil a travs de

una fase estacionaria, inmiscible, la cual se mantiene fija en una columna
o en una superficie slida que acta como soporte.

Las dos fases mvil y estacionaria- se eligen de tal forma que los
componentes de la muestra se distribuyen en forma distinta entre ambas.
Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase
estacionaria, se mueven lentamente con el flujo debido a la fase mvil. En
cambio, aquellos componentes de la muestra que tienen una reducida
afinidad por la fase estacionaria, se desplazan con una mayor rapidez al ser
arrastrados por la fase mvil.
Como consecuencia de estas diferencias en la movilidad, las distintas
sustancias que componen la muestra sometida a la cromatografa se separan
en una serie de bandas que, en ltima instancia, pueden ser analizadas tanto
cualitativa como cuantitativamente.

Las tcnicas cromatogrficas aplicadas fueron cromatografa plana y

cromatografa en columna.

Cromatografa plana

Los mtodos de cromatografa plana incluyen la cromatografa en capa fina

(TLC) y la cromatografa en papel (PC). En todos los casos se emplea una
capa plana y relativamente delgada de un material que a su vez es el
soporte, o bien que recubre una superficie de vidrio, plstico o metlica. La
fase mvil se mueve a travs de la estacionaria por capilaridad, a veces
ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la
actualidad, la cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina,
que es ms rpida, tiene mejor resolucin, y es ms sensible que su
alternativa en papel.

Las separaciones en capa fina se realizan en placas de vidrio o plstico que

se recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente
dividas; esta es la capa estacionaria. Las partculas son semejantes a las
descritas en cromatografa en columna de adsorcin, de reparto en fase
normal y en fase inversa, y las fases mviles tambin son similares las
utilizadas en cromatografa de lquidos de alta eficacia en columna.

Las placas de capa fina se obtienen de forma comercial. Los tamaos son
varios 5X20, 10X20, y 20X20. Estas placas comerciales se presentan en
dos formatos. El convencional, donde las placas tienen un espesor de 200 a
250 m un tamao de partcula de 20 m o ms. Presentan por lo comn
unos 2000 platos tericos en 12 cm. y con un tiempo de desarrollo de 25
min. El segundo tipo de placas comerciales es el de alta eficacia, que tienen
pelculas de unos 100 m de espesor, y un dimetro de partcula de 5 m o
menos. El nmero de platos tericos es mayor unos 4000 en 3cm y con 10
min. de desarrollo. Las placas de alta eficacia permiten mejores
separaciones y en menos tiempo, pero tienen la desventaja de tener una
menor capacidad de carga.

La aplicacin de la muestra es el aspecto mas critico de la cromatografa en

capa fina. Por lo general, se aplica una disolucin de la muestra del 0,001 al
0,1 %, como una mancha, a 1 o 2 cm. del extremo de la placa. Pero para
una separacin de mayor eficacia, la mancha debera tener un dimetro
mnimo aproximadamente 5nm para una aplicacin cualitativa y menor
para el anlisis cuantitativo, y en el caso de las disoluciones diluidas se
realiza tres o cuatro aplicaciones superpuestas secando la zona entre
aplicacin. La aplicacin puede ser manual o por aplicadores mecnicos. Si
es manual es por contacto entre la placa y un capilar que contiene la
muestra, o utilizando una jeringa hipodrmica. En el caso de que sea
mecnico, se mejorara la precisin y exactitud de la aplicacin.

El desarrollo de la placa es un proceso anlogo a la elucin en la

cromatografa de lquidos, en el que la muestra es transportada por la fase
mvil a travs de la fase
estacionaria. La forma ms
comn de desarrollar la placa
consiste en depositar una gota
de la muestra cerca de unos
de los extremos de la placa, y
marcar su posicin con un
lpiz. Tras la evaporacin del
disolvente en el que estaba
disuelta la muestra, se coloca
la placa en un recipiente
cerrado y saturado con los
vapores del disolvente con el
que se efectuara el desarrollo.
Uno de los extremos de la
placa se introduce en el
eluyente procurando evitar el
contacto directo de este con la
muestra.

El eluyente asciende por la placa gracias el efecto de capilaridad ejercido

entre las finas partculas. A medida que el eluyente se desplaza pasa por el
punto de aplicacin de la muestra, la disuelve y la arrastra por la placa
distribuyndose entre el disolvente que se desplaza y
la fase estacionaria.
Despus que el disolvente
ha pasado a travs de la
mitad o las dos terceras
partes de la longitud de la
placa, se retira esta del
recipiente y se seca. Las
posiciones de la muestra
se pueden determinar por
distintos procedimientos. Dos de ellos se usan con la mayora de las
mezclas de sustancias orgnicas. Consisten en nebulizar sobre la placa una
disolucin de yodo o de cido sulfrico, ya que ambos reaccionan con los
compuestos orgnicos para dar productos oscuros. Tambin se utilizan
reactivos especficos (como dragendorff especfico para alcaloides) para
localizar las especies separadas. Otro mtodo de deteccin se basa en
incorporar un material fluorescente a la fase estacionaria. Una vez ha
finalizado el desarrollo, se examina la placa bajo luz ultravioleta. Los
componentes de la muestra amortiguan la fluorescencia del material de tal
forma que, toda la placa exhibe fluorescencia menos los lugares donde
estn los componentes de la muestra, no fluorescentes.
Cromatografa en columna

Es preciso conocer el concepto

de elucin en columna. La
figura muestra como dos
sustancias A y B se separan en
una columna por cromatografa
de elusin con una fase mvil.
La elucin implica el transporte
de una especie a travs de una
columna por la adicin
continuada de nueva fase
mvil. El proceso empieza
cuando una nica porcin de la
muestra se introduce en la parte
superior de la columna (tiempo
t0) despus de lo cual los
componente de la muestra se
distribuyen entre las dos fases,
La introduccin de fase mvil
adicional, el eluyente, hace que la fase mvil que contiene una parte de la
muestra avance por la columna, donde tienen lugar una posterior reparto
entre la fase mvil y las porciones frescas de la fase estacionaria a las que
accede (tiempo t1). Al mismo tiempo, tiene lugar una distribucin entre el
disolvente nuevo y la fase estacionaria en el lugar en el que inicialmente se
ubicaba la muestra.

Las sucesivas adiciones de la fase mvil hacen avanzar las molculas de

soluto (analitos) por la columna en una serie de continuas transferencias
entre las fases estacionaria y mvil. Sin embargo, debido a que el
movimiento de los solutos solo puede ocurrir en la fase mvil, la velocidad
media a la que una zona de soluto migra en la columna depende de la
fraccin de tiempo que reside en esta fase. Esta fraccin de tiempo es
pequea para las sustancias que son retenidas fuertemente por la fase
estacionaria (compuesto B) y es grande cuando es ms probable la
retencin en la fase mvil (componente A). Las diferencias de velocidad
que resultan hacen que se separen los componentes de la mezcla en bandas
o zonas, que se localizan a lo largo de la columna (tiempo t2). El
aislamiento de las especies separadas se realiza haciendo pasar suficiente
cantidad de fase mvil a travs de la columna hasta que las bandas
individuales salen de ella, pudiendo as detectarse o reconocerse (tiempos
t3 y t4).

TECNICAS CROMATOGRAFICAS PARA LA SEPARACION DE

COMPUESTOS

A. CROMATOGRAFIA DE ADSORCION
Consiste en pasar la muestra sobre un adsorbente slido (fase
estacionaria) y un eluyente lquido (fase mvil) para el caso de
cromatografa lquida; o un adsorbente slido y un eluyente gaseoso
para el caso de cromatografa de gases.

ADSORBENTES

Deben tener alta capacidad de adsorcin, ser insolubles en el

eluyente, e inertes a las sustancias a ser separadas por cromatografa
La estructura porosa y la granulacin dependern si se usa columna
gravitacional o HPLC.
Los adsorbentes ms usados son:
Almina (xido de aluminio) se utiliza para compuestos poco
polares, tiene mayor poder de adsorcin, permite a veces
separar ismeros, la proporcin que se utiliza es (1:20), es
muy utilizada para la separacin de alcaloides.
Silica gel (xido de silicio) se utiliza para separar la mayora
de compuestos; se emplea generalmente en proporcin
(1:40) .Peso de la muestra a peso de slice
Silicato de magnesio (Florisil) tiene una Adsorbancia
intermedia, se utiliza para separar lpidos, glicsidos, azcares.
Poliamida, se utiliza para separar compuestos que pueden
formar puentes de hidrgeno tales como aminocidos,
polihidroxicompuestos (compuestos con muchos grupos OH)
 B. CROMATOGRAFIA DE PARTICION

La fase estacionaria y la fase mvil son lquidos inmiscibles.

En general se emplea un sistema de dos fases, una rica en solvente
orgnico con que se eluye el cromatograma y la otra rica en agua que
constituye la fase estacionaria anclada al soporte. El conjunto fase
mvil-fase estacionaria puede estar integrado por ms de dos
componentes.
Un ejemplo tpico: butanol-cido actico-agua (4:1:5) para separar
alcaloides.

Los prototipos de cromatografa de particin lo constituye la: cromatografa

de papel y la cromatografa gas-lquido que son empleados como mtodos
analticos.

CROMATOGRAFA DE PAPEL

En la cromatografa de papel la muestra a separar es adsorbida sobre el

punto de aplicaciones del soporte: papel, el cual retiene el agua (fase
estacionaria), pero se puede saturar con otra fase estacionaria, por ejemplo
dejndole equilibrar con esta en una cmara cerrada, cmara
cromatogrfica, antes de permitir el flujo del eluyente (fase mvil).
Cuando la muestra se disuelve mejor en solventes no polares el papel se
impregna con este solvente y el cromatograma se desarrolla en la fase
acuosa. Esta tcnica se conoce como cromatografa en fase reverse. En este
caso los primeros a fluir son compuestos ms polares. Esto se puede aplicar
a cualquier tcnica cromatografica de papel.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA (CCF)

Es una variante de la CC o en papel. La fase fija o estacionaria esta

formada por una capa delgada uniforme de adsorbente (cromatografa de
adsorcin) y que sirve como soporte de la fase mvil (cromatografa de
particin), tiene la ventaja y la rapidez del desarrollo, y la versatilidad de
las operaciones que se pueden hacer sobre el sustrato: se abrevia TLC. La
CCF se puede preparar en los laboratorios comprarse en las casas
comerciales llamados cromatofolios de 20cmx 20 cm, que se cortan de
acuerdo a las necesidades, en este caso el soporte puede ser de aluminio,
plstico y el adsorbente de 1mm de espesor muy uniforme. Una de las
variantes de la cromatografa de capa fina es la cromatografa preparativa
donde el soporte es de vidrio de 1 mm. de espesor.

Para la preparacin de las placas, se utiliza el mtodo de inmersin en una

suspensin del adsorbente en agua en CHCl3/ MeOH, 4es recomendable
utilizar un esparciador para asegurar una capa uniforme del espesor
deseado que va desde 0,25 hasta 1 mm.
Las placas se colocan sobre una bandeja fija, despus de lavadas y secadas,
se esparcen con una suspensin del adsorbente en agua destilada. Las
placas comerciales tienen aditivos (generalmente yeso) para aumentar la
fuerza de adicin al vidrio, indicadores de UV fluoresina de sodio que
fluorese cuando se expone a la luz de 254nm y el cido sulfnico de
hidroxipireno que fluirse a 366nm.

Hay una gran variedad de adsorbentes: Silicagel, alumina (neutra, bsica,

cida), celulosa, celita, poliamida. El adsorbente ms comn es la silicagel
con granulaciones de 20 a 1000 A , para compuestos no polares.
CROMATOGRAFIA DE COLUMNA (CC)

Es la ms usada en la separacin de productos naturales con tal finalidad se

emplean adsorbentes ya mencionados en la cromatografa de capa fina: gel
de slice, almina celulosa, florosil, poliamida, sephadex, celulosa,
intercambiadores de iones, y resinas de intercambio inico.
Actualmente se utilizan otros adsorbentes que permiten trabajar en fase
inversa para la separacin de compuestos polares.
CROMATOGRAFIA PREPARATIVA (CP)

Se utiliza cuando se tienen mezcla de sustancias que son difciles de separar por (CC).
El soporte o absorbente va adherido a una lmina de vidrio, el espesor del soporte es
ms menos de 1mm de espesor (30 g) de absorbente para una placa de 20x20 cm.
La muestra se siembra a 1,5 cm de uno de los extremos de la placa y en toda la placa,
previamente se elige el absorbente adecuado, es decir donde se observa mayor
separacin de los compuestos se introduce en cmaras o celdas cromatogrficas y se
procede a su elusin, en algunos casos dependiendo de la separacin de los compuestos
se pueden fluir varias veces, hasta lograr una buena separacin.
Se retira los compuestos de la placa y se extrae con solvente apropiado del adsorbente.
CROMATOGRAFIA GASEOSA (CG.)
Posee como fase mvil un gas inerte que generalmente es nitrgeno, la fase
estacionaria puede ser un lquido (cromatografa gas-lquido) un slido
(cromatografa gas- slido)
As mismo puede usarse combinando con tcnicas espectroscpicas como
espectrometra de masa (CG-EM) en tal caso se necesita para adoptar las
condiciones del cromatgrafo gaseoso a los de vaco del espectrmetro de
masa, y eliminar el gas portador que en (CG-EM) es el Helio.
Esta tcnica es analtica y es necesario contar con los patrones para poder
comparar las sustancias que se estn analizando.

CROMATOGRAFIA DE ALTA RESOLUCION O PERFOMENCE (HPLC)

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Un intercambiador de iones es un material insoluble en H 2O que tiene

grupos funcionales capaces de intercambiar iones de carga similar de la
solucin circundante. Hay materiales sintticos y naturales orgnicos o
inorgnicos, entre estos se encuentran las zeolitas, xidos, fosfatos de
metales del grupo IV. Entre los orgnicos naturales tenemos algodn, papel,
que son sulfonados o fosfatados.
Las resinas generalmente tienen una matriz de derivados de poli estireno,
celulosa, agarosa, y se les puede clasificar de acuerdo a los grupos inicos.
Las resinas generalmente tienen una matriz de derivados de poli estireno,
celulosa, agarosa, y se les puede clasificar de acuerdo a los grupos inicos.
1. Resinas aninicas ( intercambian cationes)
a) R-SO3- fuertemente cida Dowex 50
b) R-OPO3= fuertemente cida Doulite C-63
c) R-CH2-CO2- fuertemente cida Amberlite CG-50
2. Resinas cationicas ( Intercambian aniones)
a) R-CH2NMe3+ fuertemente bsica Dowex 1-A6
b) R-NHMe2+ fuertemente bsica Doulite A-30
c) R-C2H4NH3 fuertemente bsica Amberlite 45
Las resinas se empacan en columnas generalmente, para lo cual es
necesario acondicionarles primero, pues comercialmente se vende secas, se
deben dejar en reposo con agua (el intercambio inico tiene lugar en el H 2O
por lo tanto se realiza en medio acuoso. Esto provoca un aumento de las
resinas. El sobrenadante se decanta y el proceso se repite varias veces.
Las resinas hinchadas se ponen en contacto con la solucin del contra in
que ser desplazado de la muestra, se lava hasta la neutralidad para
asegurar que toda la resina ha intercambiado el contrain y se equilibra con
la mezcla de solvente donde se disuelve la muestra. Posteriormente se lava
la columna con la mezcla del solvente hasta asegurar que no salgan iones
de la columna y se eluyan los compuestos de la muestra introducida con
una base o un cido segn sea el caso.
El orden de elusin depender de la naturaleza inica, los ms dbiles sern
desplazados primero. Los ms fuertes son adsorbidos aumentando la
concentracin de los iones en el eluyente.

PREPARACION DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS

COLUMNA SECA.- Se elige la columna cromatografica, dependiendo de

la cantidad de muestra a cromatografiar, luego se llena la columna con una
lluvia uniforme del adsorbente previamente seleccionado, tiene el
inconveniente que el inchamiento del absorbente con el eluyente puede
causar obstrucciones y disminuir la velocidad de flujo de solvente,
generalmente la altura del relleno es de 12 cm, pero tambin depende del
dimetro de la columna y la muestra a cromatografiar. La muestra se coloca
pre-adsorbida en una pequea cantidad de solvente.
Es necesario tener en cuenta que la muestra no puede permanecer mucho
tiempo en la columna en contacto con el adsorbente y el solvente, ya que se
puede descomponer, o la difusin de las bandas donde concentran los
compuestos inicialmente, con la prdida consecuente de la resolucin.
Este sistema puede modificarse, cuando se empaqueta el adsorbente muy
apretado y el flujo del eluyente es forzado a pasar por la columna con la
ayuda de presin en el eluyente y vaco a la salida de la columna.

COLUMNA HUMEDA.- Tiene 02 variantes: a).-se coloca el solvente

previamente seleccionado y luego se deja caer lentamente el adsorbente, se
golpea para ayudar la compactacin sea uniforme. B).- La segunda se
prepara una suspensin uniforme del adsorbente de la fase mvil y se deja
caer sobre una capa de la fase mvil contenida en el tubo de vidrio. Esta
tiene la ventaja de una composicin ms uniforme y el inchamiento del
adsorbente ocurre antes de poner en la columna y evita las obstrucciones.
La muestra se introduce en solucin concentrada, preferentemente disuelta
en el mismo solvente sobre la superficie del adsorbente, tambin la muestra
se puede colocar pre-adsorbida con el mismo solvente que se compact la
columna.
La elusin se comienza con el solvente menos polar y su polaridad se
incrementa dependiendo de los resultados de la separacin.
ELUCIDACION (DETERMINACIN DE LA ESTUCTURA QUIMICA) DE
COMPUESTOS ORGANICOS

La elucidacin determinacin de la estructura qumica de compuestos orgnicos,

puede constituir una meta en s o ser una etapa clave para trabajos posteriores.
Los mtodos espectroscpicos especialmente RMN; IR, UV- espectromtricos de masa
de alta y baja resolucin, son de uso cotidiano para este tipo de trabajo.

ESPECTROSCOPIA DE IR: Las que se observan en los espectros de IR van de 4000

a 200cm-1 y estn relacionados con los cambios y estados vibracionales y rotacionales
que presentan las molculas. La posicin e intensidad de las bandas corresponden a un
grupo funcional que se encuentran distribuidas en varias zonas ms menos constantes
del espectro. El anlisis del espectro ofrece informacin sobre grupos funcionales
presentes en la molcula tales como la presencia de: Grupos OH, NH, CO, CHO
COOOH, as como el carcter aliftico y aromtico del compuesto.
La regin comprendida entre 1300 y 900 cm -1, representan las huellas dactilares de las
molculas, pues las bandas de esa regin corresponden a las vibraciones y rotaciones del
esqueleto carbonado y por lo tanto son muy sensibles a los diferentes arreglos
moleculares, an para sustancias muy similares, por eso se debe considerar
cuidadosamente esta zona al establecer la identidad de dos muestras por comparacin de
sus IR

43. 8 20. 9
3 14

15 32. 8
N
48. 8 5
101. 8 39. 7
21 20
6 34. 5
19
99. 3 35. 9

H3C O 9 134. 2
7
O 17 26. 4
18
57. 9 65. 5
56. 2 152. 7 10 8 69. 2 16
2
24. 9
11 13
137. 8 122. 6

H3C O
12
N H
141. 8
60. 6
OH 171. 6
22
23
24

CH3
O 28. 1
9. 8
 Fig. . Espectro de IR de Aspidoalbina.
GRUPOS FUNCIONALES:
OH (3438.56 cm-1), 1200 cm-1, C-H ( 3000- 2840 cm-1), 2937.50 cm-1
C=C (1,690-1,630 cm-1) 1,623 cm-1
C-O-C (1300-1000 cm-1) 1150 cm-1
C=O (1,690-1,630 cm-1) 1,623 cm-1 (amidas y Lactonas),
C-O 1250- 1000 cm-1

ULTRA VIOLETA (UV/VIS).-Se correlaciona con las transiciones electrnicas, es decir la

transicin de un electrn desde un estado fundamental a un estado excitado. La absorcin de la
energa requerida para esta transicin se registra en la regin UV (190nm-380nm) y en la regin
visible (380nm-70nm).- las seales del UV son muy anchos a diferencia de las seales del RMN
e IR debido a los mltiples cambios de estados vibracionales y rotacionales que acompaan a
las transiciones electrnicas. Para que se observe una absorcin mxima debe existir en la
molcula un cromforo generalmente conjugado, por un sistema de instauraciones mltiples, tal
como dienos, enona, aromtico etc.

ESPECTROMETRIA DE MASAS (EM). Un compuesto orgnico que se expone a una

corriente de electrones de alta energa (frecuencia de 70 ev) se degrada en fragmentos de las
cuales las especies con cargas positivas se registra en el espectro de masa; segn la unidad de
masa por el nmero de cargos positivas (m/e donde e=1). Un aparato de EM de alta resolucin
registra la unidad de masa del in molecular (la masa que pierde un solo in sin degradarse),
con hasta 04 mas cifras decimales el cual permite establecer la formula molecular
correspondiente.
La fragmentacin es una caracterstica de los diferentes compuestos y esto es aprovechado para
la ubicacin de ciertos grupos funcionales en entornos particulares de la molcula.
 6 5

21
N
9 19
8 20 18
10 7

11
CH3
13 2
12 3
15
H3C O N 14 16

H O 22
O CH
3
23

Fig. . Espectro de masa de 11-metoxytubotiwina

RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR (RMN).- mtodo basado en la absorcin de la

energa, por el cambio del espin molecular de tomos sometidos a un campo magntico externo.
El anlisis del espectro de RMN ofrece evidencias especficas sobre las caractersticas de los
ncleos que forman una dada molcula, y los ms frecuentes analizados son 1H, 13C, 15N, 19F y
31
P. Siendo los dos primeros utilizados en anlisis de rutina.
Los desplazamientos qumicos de las seales de RMN de 1H (0-20ppm) y de 13C (0-220ppm)
dan informacin a cerca de la naturaleza de hidrgenos (alifticos, aromticos, olefnicos,
geminales y heteroatomos) y de 13C.

Por la integracin de las seales y la magnitud de la contaste de acoplamiento, multiplicidad de

la seal que se observa en el espectro de 1H se deduce el # de hidrgenos y el modo de
distribucin en la molcula.
Mientras que el nmero de seales presentes en el espectro de carbn, indica el nmero de
carbn presentes en la estructura, la multiplicidad muestra el # de tomos de Hidrgeno unidos
al C responsable de la seal.
Las tcnicas de dos y tres dimensiones ofrecen informacin mucho ms directa y presentan
ventajas enormes cuando se trata de esqueletos nuevos.
 9.0
8.795

8.5
8.0
7.5
7.250
7.022
7.005

7.0
24

H3C

6.5
6.401
6.387

6.0
11
10
9

12
13
8

5.5
N
H

5.0
7

2
6

O 22
14
21

ppm
4.5
20

15

23
19
3.863

4.0
16

O CH3
3.775
3.763

18
3.754

CH3
3
N

3.5
3.114
3.099
3.072
3.053
2.881

3.0
2.867
2.859
2.846
2.820
2.518

2.5
2.507
2.029
2.007
1.850

2.0
1.843
1.830
1.818
1.810
1.805

1.5
1.792
1.243
0.858
0.843
0.828

1.0
0.824
0.810
0.795
0.710

0.5
0.696
0.680
 Fig. . Espectro de 1H de 11-metoxytubotiwina

105.574
170.404
168.770

159.778

144.772

128.856

120.044

97.338
95.952

77.310
76.996
76.674

65.278

55.455
54.183
53.553
51.143

45.170
43.556
40.898

30.532
28.102

23.703

11.503
6 5

21
N
9 19
8 20 18
10 7

11
CH3
13 2
24 12 3
15
H3C O N 14
16

H O 22
O CH3
23

168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56 48 40 32 24 16 8

ppm

Fig. . Espectro de 1C de 11-metoxytubotiwina