You are on page 1of 5

DISEO DE BIOREACTORES CON CATALISIS ENZIMATICA POR EFECTO DE LA TEMPERATURA

Resumen

En este trabajo se describe el diseo de un reactor batch con catlisis enzimtica observando como
la temperatura afecta a la velocidad de la reaccin. En esta ocasin utilizaremos el Polymath para
facilitar los clculos. Emplearemos el modelo cintico de Michaeilis-Menten que menciona que la
reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas una que es el complejo enzima
sustrato y la otra el complejo se convierte en producto, liberando la enzima. Al estudiar el efecto de
la temperatura se puede observar que al principio se incrementa la velocidad de reaccin, alcanzado
un valor mximo a una temperatura optima. Para temperaturas bajas influye la ecuacin de
Arrhenius dependiendo solamente de la temperatura, cuando se supera la temperatura optima
disminuir la velocidad de reaccion determinado por la existencia de enzimas.

Cintica enzimtica

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por las reacciones de las
enzimas. La velocidad en las condiciones de pH,T,presencia de cofactor y la concentracin del
sustrato saturante en la denominada velocidad mxima. Esta velocidad puede determinarse
midiendo la velocidad de aparicin del producto o de la desaparicin de reactivos.

Reactivo dA/dt

Producto dB/dt

Curva de avance de reaccin

A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo


porque se va consumiendo el sustrato de la reaccion. Porque se va consumiendo el sustrato de la
reaccin. Para evitar esta complicacin se precede a medir la velocidad inicial de la reaccin, V0,
que es igual a la pendiente de la curve de avance a tempo cero. De este forma, la medida de VD se
realice antes de que se consume el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse es
concentracin de sustrato, [S], como esencialmente constante. Adems, en estas condiciones no
es necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto as tan pequea que la
reaccin inversa apenas ocurre.
De esta forma se logra simplificar las ecuaciones de velocidad.

Leonor Michaelis y Maud Menten propusieron una ecuacin de velocidad que rige la
accin enzimtica. En el modelo cintico de Michaelis-Menten se propone que las
reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: en la primera se forma el complejo
enzima sustrato y en la segunda el complejo se convierte en producto, liberando la enzima.
3
+ +
1,2

K1, k2 y k3 son constantes cinticas individuales de cada etapa.

Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado cuasi estacionario, segn la cual la velocidad
de formacin del complejo encima sustrato, k1 es la velocidad de disociacin, k2 + k3. En estas
condiciones, la concentracin del complejo enzima sustrato, [ES], es pequeo y constante a lo
largo de la reaccin, lo que matemticamente significa:
[]
=0

Como [ES] es constante, la velocidad de transformacin de los productos, V3, es uniforme:

= 0 = 3 = 3 [] =
Adems, se cumple que la velocidad con que se forma ES es igual a Ia velocidad con que se
destruye.

1 = 2 + 3
Siendo:

1 = 1 [][]
2 = 2 [][]
3 = 3 [][]

Por lo tanto:

1 [][] = (2 + 3)[]
La concentracin de enzima inicial, [E0], es igual a la suma de la concentracin de enzima libre, [E],
y la concentracin de enzima acomplejada, [ES].

[E3] =[E] + [ES]

Reemplazando en k1[E][S] = (k2 + k3)[ES], queda:

k1([E0] - [ES]) [S] = (k2 + k3)[ES]


k1[E0][S] k1[S][ES] = (k2 + k3)[ES]
k1[E0][S] = (k2 + k3)[ES] + k1[S][ES]

k1[E0][S] = {(k2 + k3 + k1)[S]} [ES]


1 [0][]
[] =
2 + 3 + 1[]
3 . 1 . [0][]
3 = 3[] =
2 + 3 + 1[]
3 . 1 . [0][]
3 =
2 + 3 + 1[]
En el llamado estado cuasi estacionario la velocidad de formacin de producto es:
3 [0][]
0 = 3 = 3[] =
2 + 3
+ []
1
La expresin (k2 + k3)/k1 se conoce como KM, La constante de Michaelis Menten, siendo Vmax =
k3[E0], de forma que la ecuacin V0 queda:
[]
0 =
+ []

Efecto de la temperatura en la catlisis enzimtica:

Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser protenas que actan come catalizadores,
con una conformacin natural ms estable que las demos conformaciones posibles. As,
cambies en Ia conformacin suelen ir acompaados en cambios en la actividad cataltica.
En general, los aumentos de Ia temperatura aceleran las reacciones qumicas: al
aumentar la temperatura, la velocidad de reaccin se incrementa. Sin embargo, al ser
protenas, a partir de cierta temperatura empiezan a desnaturalizarse per calor. La temperatura a
la cual la actividad del catalizador es mxima se conoce como temperatura optima, Por encima de
esta temperatura, el aumento de la velocidad de la reaccin debido a la temperatura es
contrarrestada por la prdida de actividad cataltica debido a la desnaturalizacin trmica: la
actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

La velocidad de una reaccin enzimtica vara al aumentar Ia temperatura. En la Figura 2 se


representa una tpica curva de actividad enzimtica versus temperatura, donde se refleja Ia
variacin de la velocidad con el aumento de la temperatura.
FIG 2: Velocidad de reaccin vs temperatura

En dicha figura se observe un doble efecto de la temperatura: positivo a bajos valores, debido al
incremento general que experimenta la velocidad de cualquier reaccin qumica al hacerlo la
temperatura, y negativo a valores altos, debido a la desnaturalizacin trmica de la enzima. Esto
es, la velocidad de una reaccin enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura dentro de
un determinado rango, alcanzando un valor mximo a la denominada temperatura ptima. A
valores superiores la actividad disminuye debido a que la enzima, come cualquier protena, sufre
procesos de desnaturalizacin y, por lo tanto de inactivacin. Dentro de la fase de incremento de
la velocidad, la relacin entre esta y la temperatura viene determinada par la ecuacin de
Arrhenius:

= /
Ea, es la energa de activacin, R es la constante de los gases (1,987 cal K-1 mol -1; 8,312 J K-1 mol-1) y
T es la temperatura absoluta (K). A, es el factor pre exponencial; representa la frecuencia de las
colisiones eficaces entre las molculas de los reactantes.

Esta influencia de la ecuacin de Arrhenius se refleja en k3 dentro de la definicin de Vmax.

Por otro lado, en la fase de disminucin de la velocidad, la relacin entre esta y la temperatura
este determinada per la variacin de la [E0] que no solo depende de la temperatura sino del
tiempo. La velocidad de desnaturalizacin debido a la temperatura kd que se define por la
siguiente ecuacin:

= /
Ad es un factor de frecuencia de desnaturalizacin y Ed es la energa de activacin
La variacin de [E0] debido a la temperatura y al tiempo de exposicin a esa temperatura viene
dada por:

0 (, ) = [0 ]
Por la tanto, Si la temperatura es muy alta, Kd es muy alta y Vmax tiende a cero. Si la temperatura
es muy baja, Kd es muy baja y Vmax, depende de la ecuacion de Arrhenius.

Resumiendo, la ecuacion de Michaelis-Menten se ha modificado teniendo en cuenta el efecto de


la temperatura:
max [] 3 [0 ][] /0 (, )[] /[0 ] []
0 = = = =
+ [] + [] + [] + []


( ( ))

/ [0 ] []
0 =
+ []