Alternativas de Manejo del Moko

(Ralstonia solanacearum)
en pltano

Elizabeth Alvarez

IV Curso Nacional MIC de Pltano

Armenia, Colombia
Septiembre 18, 2008
 Temas

Introduccin
Enfermedad del Moko
Deteccin e identificacin
Caracterizacin del patgeno
Alternativas de manejo
 Importancia del Cultivo
de Pltano

450,000 ha en Colombia. 3,6

millones ton
1,1 millones de empleos directos e
indirectos en pltano
Primer exportador
Fuente de carbohidratos
Producto alimenticio bsico

Fuente: FAO, 2008

 rea Cosechada

Pas Ha Familias
Colombia 450.000 57.000
Costa Rica 11.500 1.335
Ecuador 105.000 14.440
Bolivia 42.500 9.010
Per 160.000 18.000
Venezuela 48.000 6.300
Total 817.000 106.085

Fuente: FAO, 2008

Enfermedad del Moko
(Ralstonia solanacearum)

Marchitez,
amarillamiento
Necrosis vascular
Pudricin de Frutos
 Importancia de la
enfermedad
Prdidas en rendimiento y calidad
Semilla infectada es fuente de inculo
Presente en todas las zonas edafo-
climticas
Infeccin sistmica
Afecta plantas de cualquier edad
Deteccin e Identificacin

Diagnstico:

ELISA
Inmuno Strips
Bio-PCR
PCR en Tiempo Real (TaqMan)
 BIO-PCR

1 2 3 4 5 6

Suelo

SMSA

OLI1/Y2
(288 pb)
Tejido
Inmuno Strips

Tejido afectado
Lavado (20 min)
Maceracin
 PCR en Tiempo Real
Diseo de la sonda TaqMan
Regin
especfica
para cepas
(351 pb)
Sequevar 4
(Fegan & Prior 2005)

Mus 20F Mus 20P (TaqMan) Mus 20RP

CGGGTGGCTGAGACGAATATCGTCGAATGCCTTGGAACGCGCATGATTATCGTGGTAAAT 60
CTCGGCAATCACGGAGTGCCCCAGTTCGGCGCGGATCAGTGCGTCAAGTTCGTTCATCCA 120
GCGGTGAAACACCGCATTGTTCTGATAAAGCTCCCGGCCCATCTGATAGAACTGACAGCC 180
TTGACCCGGAAACATAAAGACAACGGAGGATTTCTGTCCTTGAGAGAGATAGGGCATCTG 240
TTTCGTCCTGAATGTGGAATGCGCGGGGAGTCCGTATTCTAGTCACAACAAATAGAGGCT 300
GCGAATCGCCTCCCGGCTCCCGATTGAACCCATTCGGATTCTGGACAAGGC 351
 Ventajas del PCR en
Tiempo Real
PCR: Vs PCR en Tiempo Real:
Baja sensibilidad Alta sensibilidad
Baja resolucin Menor riesgo de
No es automatizada contaminacin
Los resultados no son Registro en tiempo real
expresados como nmeros y cuantificable de la
cintica de la reaccin
La tincin con bromuro
no puede ser cuantificada de amplificacin
Demora en proceso post Mayor rapidez por
PCR automatizacin del
proceso de amplificacin
 Especificidad
Mus 20P, amplificacin (+) de 48
cepas patognicas en pltano,
valores de Ct entre 21.613
23.487; 7 de suelo, 12 de
banano y tres de heliconia.

(+) 1 tomate (E.U), 1 heliconia

(Costa Rica), 1 papa (Australia),
3 tabaco (Colombia, Japan y
EU).

(-) no amplifican cepas de:

Xanthomonas axonopodis pv.
manihotis, X-disease group of
phytoplasmas (16SrIIIL
subgroup), Colletotrichum spp.,
Pseudomonas spp.,
Burkholderia cepacia, and
Xanthomonas spp.
Sonda TaqMan RsP-I Vs Mus 20P
 Sensibilidad I
(Concentracin ADN)

32 ng 8,1x10-5 ng

2x10-4= 1,024x10-2 ng

[Ct 18.020 35.111] [32 ng 4,8x10-4ng]

 Sensibilidad II
Dilucin: 10 -3, 31
Tejido afectado cells 10 -3 cfu ml 1

Deteccin de 1 10 3 cfu ml Diluciones seriadas de

1
a partir de muestras Ralstonia a partir de
frescas de tejido muestra de tejido fresco
Caracterizacin del
Patgeno
Zonas de muestreo
Quindo
Valle
Magdalena
Antioquia
Meta
Caquet
Tolima
 Patogenicidad

Plntulas in vitro: frica Musa AAB

Cepas evaluadas: 72
Patogenicidad

Identificacin de
cepas patognicas
Seleccin de
variedades
resistentes
 Variacin Patognica
80
DMS 5%=28.3
70

60
ABCPE

50

40

30

20

10

Suelo
Tol
Met
Ant

Val
Mag
Caq

Qui

Procedencia
 Diversidad Gentica
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 M

Pltano. Cebador AG
Cebador CGA

(r. 3, b. 2)
3)

Berenjena Kenya
.
3,b
(r
.
i a ia 1) 1)
n mb mb (r. (r.
p lo lo A A
A/quia Magd. Valle Ja Co Co US US

Banano Heliconia Tabaco

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
M
Arbol Fenolgico de Secuencias 0.05

de R. solanacearum I
Pltano Quindo 1
Banano Urab 4

Aislada de Pltano 98
Pltano Caquet 34

II 100 Pltano Quindo 3

Banano Urab 6
Suelo Pltano 38 Quindo
U28221 Banano Indonesia
U28232 Banano Indonesia
U28233 Banano Indonesia
U28224 Banano Indonesia
PCR: Oli-1/Y-2 Pltano Valle 4R

(288 pb) III 95

Suelo Pltano Valle
U28229 Banano Indonesia
U28230 Banano Indonesia
CIAT1008 Pltano Tolima

Anlisis: UPGMA/ U28231 Banano Indonesia

R. pickettii AY2681
Bootstrap 1000 reps 93
R. pickettii AY7413
R syzygii
R syzygii 28237
Suelo Pltano 41 Quindo
Pltano Meta 43
IV R. pickettii S55004
Suelo Pltano 16A Quindo
Suelo Pltano 15 Quindo

V Suelo AY 267499
Arbol de Similitud RAMs
de R. solanacearum Antioquia
rizoma
seudotallo
Caquet-raquis
Meta-seudotallo

Aislada de Pltano Meta-seudotallo

Meta-seudotallo
Meta-seudotallo
Meta-seudotallo Llanos
Meta-seudotallo
Meta-seudotallo Orientales

Anlisis: Indice Dice Meta-seudotallo

Meta-seudotallo
Meta-seudotallo
rizoma
raquis
seudotallo
raquis
rizoma
raquis
pecolo
fruto
Quindo
seudotallo
seudotallo
colino
fruto
fruto
seudotallo
Meta-seudotallo
Meta-seudotallo
Quindo-suelo
Quindo-suelo
Quindo-rizoma Llanos,
Meta-seudotallo
Caquet-seudotallo Quindo, Valle
Tolima-CIAT 1008 Tolima
Quindo-fruto
Meta-pecolo
Caquet-seudotallo
Valle-colino
Quindo suelo
Valle-suelo Suelo, Quindo
Quindo-suelo
Quindo-suelo y Valle
Quindo-suelo
seudotallo Suelo, Quindo
Antioquia
0.55 0.61 0.68 0.74 0.81 0.87 0.94 1.00
Coeficiente
Movimiento del Patgeno
 PCR - Multiplex
Phylotype II
Phylotype I:
Berenjena (Kenya), Tabaco
(Japn), Capsicum (Asia)

Phylotype II
Phylotype I Phylotype III:
Heliconia (Kenya)

Phylotype II:
Pltano (Colombia)
Banano (Colombia)
Tabaco (Colombia, Quency-
FL) Achira (Colombia)
Phylotype II
Phylotype III Tomate y tabaco (North Carol)
Heliconia
(Colombia)
 Phylotype II, Seqvar4
NP NP
Banano (Urab-Ant) 31,83 -
38,75
Pltano (Urab-Ant)
Banano A-U Pltano A-U 10,75 21,25
Heliconia (Valle)
33,63 40,50
N.A, Berenjena, Tabaco
(Japn), Capsicum (Asia),
CIAT Papa (Aus), Tabaco (E.U),
B Magd Helic 1008
(65,13) Tomate (E.U)
Se seleccion la regin de
351 pb de los cebadores
Mus 20-P/ Mus 20-R

Deteccin y Diversidad

Multiplex

PCR
Patogenico Oli1 RT-
Cepa Region Cultivo Tejido ABCPE RAMS Filotipo Seqvar /Y2 PCR
71aR Antioquia Pltano Rizoma 21.25 1 II 4 + +
72b Antioquia Pltano Seudotallo 10.75 1 II 4 + +
32 Caquet Pltano Seudotallo 33.88 3 II 4 + +
CIAT 1008 Tolima Pltano Col CIAT 65.13 3 II 4 + +
43 Meta Pltano Seudotallo 20.75 3 II 4 + +
54a Meta Pltano Seudotallo 36.25 2 II 4 + +
58-1R Meta Pltano Peciolo 56.63 3 II 4 + +
3 Quindo Pltano Peciolo 69.38 2 II 4 + +
16b1 Quindo Suelo Mucuna 0.00 5 II n.d + +
1 S.A Quindo Pltano Raquis 18.00 2 II 4 + +
15 Quindo Suelo 37.63 3 II 4 + +
 Deteccin y Diversidad
(cont.)

Multiplex
Patogeni PCR RT-
co RAMS Oli1
Cepa Region Cultivo Tejido ABCPE Filotipo Seqvar /Y2 PCR

18 Valle Pltano Colino 42.50 3 II 4 + +

Sunisa Antioquia Banano Rizoma 38.75 3 II 4 + +
110 Magdalena Banano Seudotallo 63.25 12 II 6 +
111 Magdalena Banano Rizoma 34.38 12 II 6 +
G175 Kenya Berenjena Col CIAT n.d 11 I n.d +
G216 Japan Tabaco Col CIAT n.d 8 I n.d +
CIAT Florida Tabaco Col CIAT n.d 10 II n.d +
1007 (Quency)
G 177 Australia Papa Col CIAT n.d n.d II n.d +
Alternativas de Manejo del
Moko
 Alternativas de Manejo
Desinfestacin de herramientas
Desinfeccin del agua despues de
lavado de frutos en poscosecha
Prcticas ecolgicas:

Roca fosfrica
Flor de muerto
Lixiviado de pltano

Inductores de resistencia
(fosfitos de potasio)
Cmaras trmicas Colinos
Capacitacin
Reduccin de la Bacteria
en Suelo

Sembrar fuera
de la platanera

Tratamiento Dosis/m2 Reduccin

Flor de muerto 1 Kg 85%
Fulvan 20 L 58%
Calfos 0.5 Kg 50%
Lixiviado 2.7 L 32%
Lixiviado de Raquis de Pltano

Inhibe la bacteria in vitro y en suelo

Anlisis Qumico de Lixiviados
pH N P K Ca Mg S B Fe Mn Zn

Descripcin mg/L
111,
Amricas raquis 8,67 420 157 18.185 82 38,7 5 0,83 2,7 1,25 0,29
197, 294 10,3
Amricas frutas 3,91 1.781 375 11.343 5.137 824,7 4 6,61 9 23,32 3
149,
La Diana 8,38 278 317 16.332 74 51,7 9 0,86 2,9 1,39 0,31
183,
Santa Elena 9,28 249 212 20.937 41 34,8 8 0,67 1,8 1,01 0,53
398, 23,3
Ariari (Meta) 9,36 466 311 26.680 51 51,6 5 2,38 3,8 4,12 6
206,
Guadualito 9,34 893 404 28.838 69 31,3 5 0,56 3,1 1,91 0,6
Guaira 8,58 205 187 15.588 64 43,4 55,7 0,12 0,5 0,51 0,06
La Manigua 8,54 45 11 324 5 2,0 0,0 0 1,6 0,41 0,27
Mezcla de roca
fosfrica, flor de
muerto y lixiviado de 8,89 283 367 18.391 379 59,8 86,8 2,19 40,1 0 0,82
raquis
Seudotallo 8,43 70 66 4.458 44 22,7 21,5 0,98 0,9 0 0,01
La Yalta 8,97 217 161 12.749 46 24,5 87,6 1,16 0,7 1,11 0,28

pH, K (r=-0.77) y Mn (r=-0.75) tienen efecto sobre la bacteria

Efecto del Lixiviado Sobre
Hongos

Sin Lixiviado

Con Lixiviado
 Efecto del lixiviado
Aplicacin de lixiviado 3, 7 y 15 das antes de
inocular R. Solanacearum. En plantas de 1 mes de
edad

Lixiviado 100%: 30 mL/Kg de suelo

Diferentes fuentes (raquis, pseudotallo y fruto)

Testigos: Agua y Gentamicina (10.7% + Tetraciclina

32.3%) 8 g/L al tallo y al suelo

Parcelas divididas, 4 rep:
P. ppal: Epoca de aplicacin
Subparcela: Fuente
 Efecto de lixiviados

1 2 3 4 1 2 3 4 5

Lixiviados: 1. Agua
1. Guaira 2. Antibitico
2. Amricas 3. Fosfito de potasio
3. Manigua 4. Lixiviado
4. Agua 5. Sin inocular
 Efecto de Fuentes de
Lixiviados
Aplicados 15 Das Antes de Inocular

a
6
a Agua
Mezcla flor de muerto,
5
a lixiviado de raquis de pltano y
roca fosfrica de la finca La Diana
Escala sev
ab ab
4
a ab Lixiviado de raquis de la finca
Las Amricas
a
3 Lixiviado de raquis - La Guaira
a
2 b Lixiviado de raquis - La Manigua
b b
a Lixiviado de seudotallo La Diana
1
Tetraciclina y Gentamicina

0
0 7 14 21 28 35 42 49 DMS-Tukey 5%
Tiempo (das)
Tratamiento al Suelo en Focos
Finca Santa Helena, Armenia, Quindo.

Manejo de Focos: Encerrar el rea. Se arrancaron y se

picaron en el sitio, las plantas afectadas en cada foco.

Desinfeccin de herramienta con hipoclorito de sodio al

2,5%.

Seleccin de Tratamientos: 16 focos seleccionados al

azar. 3 repeticiones
 Tratamiento en Focos
Aplicaciones mensuales: 1 y 3

Flor de muerto (1 Kg/sitio)

Roca fosfrica (20 Kg/sitio)
E.M : Microorganismos Eficientes (bacterias,
levaduras hongos) (500 cc/20 Lt de lixiviado)
Lixiviado de raquis de pltano (20 Lt/sitio).

Plantas Indicadoras en las Parcelas

Se sembraron tres plantas de pltano por sitio afectado

despus de la ltima aplicacin de lixiviado.

Cada mes se tomaron muestras de suelo y tejido

de las plantas erradicadas
Tratamiento al Suelo en Focos

Lixiviado, R.F, T. patula Formol (Reinfeccin)

Tratamiento con Lixiviados
en Focos

Tratamiento Deteccin
en suelo*

Lixiviado Amricas 0%
Lixiviado Guaira 0%
Lixiviado Sta Elena 5%

* (5 meses despus)

14 focos, con 3 plantas indicadoras cada uno,

no mostraron sntomas
Concentracin Mnima para
Inhibir la Bacteria (CMI)
Producto CMI (%) $US/L
Acido fosforoso 0.5 0.12
Fosfito de potasio 9.4 0.82
Lixiviado 2 a 25*
Flor de muerto 9.4
Ecoswing 0.5 0.11
* Segn la fuente
 Clulas Vivas/Muertas de
R. solanacearum

Kit: Bacterias vivas (verdes),

bacterias muertas (rojas)

Los lixiviados eliminan bacteria en

menos de 30 das
Muertas
Vivas
Lixiviado de raquis de pltano +
roca fosfrica + flor de muerto (20:10:1)

Sulfato de Gentamicina 10.7%

y Clorhidrato de Oxitetraciclina
32.3%
 Clulas Vivas/Muertas de
R. solanacearum
Muertas
Vivas
Deteccin de Clulas Vivas
y Muertas

Guaira
100 Amricas
Clulas vivas (%)

La Diana
80
R. Fosfrica
60 Tagetes
LP+RF+Tp
40
Antibitico
20 Etanol
Agua
0
1 2 5 7 14 21 24
Das
Desinfectantes de Herramienta
Inhibicin de bacteria

$/Lt
Ingrediente activo Producto Concentracin desinfectante
preparado
Amonio cuaternario Sani-T-10 30 ml/lt 523
Sani-T-10A 8 ml/lt 140
Hipoclorito de sodio Patojito 500 ml/lt 500
200 ml/lt 200
Complejo de poliethoxi
polipropoxi polietoxi etanol-
Agrodyne puro 26,000
iodine

Alcohol antisptico 500 ml/lt 13,000

Glutaraldehide ASAP 65 puro 2,243
Desinfectante TB-Cide 500 ml/lt 7,389
fenolaldehdico 100
Produccin de Colinos
Certificados
Plantas in Vitro

Virus
Multiplicacin de Colinos
Sanos y Certificados

Cmaras trmicas

Alternativa a in vitro

Induccin de yemas

Inductores de resistencia

60 70 C

Microaspersin

Automatizado sensores
Multiplicacin de Semilla
Sana y Certificada
85 colinos/m2 /mes

En comprobacin:

Limpieza de bacterias

Limpieza de virus

Control de nemtodos,
picudos
Zonificacin prcticas de
control
Zona Verde

Zona Amarilla 15-20 sitios

Zona Roja
xxxxxx x
x

xx Foco x x

10 sitios mnimoxx
 Zona Roja
OBLIGATORIO: RECOMENDADO:
Informar al ICA Incorporacin de flor de
Inyectar glifosato al 20% muerto (1 Kg/m2)
p.c., 1 mes despus Roca fosfrica (5-10
arrancar y picar la cepa Kg/m2)
Encerrar con alambre Lixiviado (12-20 L/sitio)
Zanja arriba
Bandejas-Hipoclorito 2.5%
Desinfestar herramienta
No sembrar ni ingresar
Herbicida
 Zona Amarilla
RECOMENDADO:
Controlar ingreso de personas y animales
Embolsado hermtico
Incorporacin de flor de muerto
Fosfito de potasio foliar (20 cc/L) cada mes
Acido fosforoso (20 cc/L), 250-500 cc/planta,
cada 3 meses
Desinfestar herramienta planta por planta
Control de malezas
Trampeo de picudo
 Zona Verde
OBLIGATORIO: RECOMENDADO:
Monitoreo Fertilizacin segn anlisis
Colinos certificados de suelo
(ICA) Trampeo de picudos
Desinfestar herramienta
No sembrar cerca de
quebradas (10 m)
Capacitar y conservar
trabajadores
Desinfestar vehculos
 del terreno
ZONA ROJA:

Pendiente
Foco en un sitio Zanja
donde NO hay
una quebrada con agua

Planta
con Moko

Eliminar
9 plantas
 del terreno
ZONA ROJA: Foco en un sitio donde hay

Pendiente
una quebrada con agua infectada

Quebrada con agua afectada

Zanja

del terreno
Pendiente
Planta
con Moko
 Conclusiones

Los lixiviados eliminan bacteria en

suspensin, en menos de 30 das

Roca fosfrica y Tagetes patula potenciaron

el efecto de los lixiviados

Los lixiviados redujeron la severidad de la

enfermedad en condiciones de invernadero

El hipoclorito de sodio fue el desinfectante

ms efectivo y econmico
 Perspectivas
Deteccin rpida con RT-PCR
Resistencia gentica
Identificacin de antagonistas en suelo
Estandarizacin de lixiviados
Identificacin metabolitos en lixiviados
Confirmar la limpieza de colinos en
cmaras trmicas (Fontagro, MADR)
 Agradecimientos
Silverio Gonzlez (Fedepltano)
U. Javeriana, U. Caldas, U. Quindo
ICA, Corpoica, Alcalda de Armenia
P. Prior y T. Lescot (CIRAD )
Ron Walcot (U. Georgia)
Agricultores: Over Naranjo, Marino

Montoya, Libia Mercedes Noriega