UN ENFOQUE PRCTICO SOBRE SDS PAGE PARA LA

SEPARACIN DE PROTENA

RESUMEN:

electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), se describe una tcnica ampliamente utilizada en

bioqumica, medicina forense, gentica, molecular Biologa y biotecnologa para separar las
macromolculas biolgicas, usualmente protenas o cidos nucleicos, de acuerdo a sus
caractersticas electroforticas movilidad. La movilidad es una funcin de la longitud, la
conformacin y la carga de la molcula. Al igual que con todas las formas de electroforesis en
gel, Las molculas se pueden ejecutar en su estado nativo, preservando la estructura de orden
superior de las molculas o un desnaturalizante qumico puede aadirse a Eliminar esta
estructura y convertir la molcula en una cadena lineal no estructurada cuya movilidad depende
slo de su longitud y masa-carga proporcin. Para los cidos nucleicos, la urea es el
desnaturalizante ms comnmente utilizado. Para las protenas, dodecil sulfato de sodio (SDS)
es un tensioactivo aninico detergente aplicado a muestra de protena para linealizar las
protenas y para impartir una carga negativa a las protenas linealizados. Este procedimiento se
llama SDS-PAGE. En la mayora de las protenas, la unin de SDS a la cadena polipeptdica
imparte una distribucin uniforme de la carga por unidad de masa, con lo que resulta en un
fraccionamiento por tamao aproximado durante la electroforesis. Las protenas que tienen un
mayor contenido hidrfobo, por ejemplo muchas protenas de membrana, y las que interactan
con los tensioactivos en su ambiente natural, son intrnsecamente ms difcil de tratar con
precisin Utilizando este mtodo, debido a la mayor variabilidad en la relacin de SDS unida.

Palabras clave: SDS-PAGE, biologa molecular, biotecnologa, movilidad electrofortica

1. Introduccin
Electroforesis en gel de poliacrilamida de dodecil sulfato sdico (SDS-PAGE) es una tcnica para
separar protenas basadas en Sobre su capacidad de moverse dentro de una corriente
elctricaEs una funcin de la longitud de sus cadenas de polipptidos o de su peso molecular.
Esto se consigue aadiendo SDS Detergente para eliminar la protena secundaria y terciaria Y
mantener las protenas como polipptido cadenas. El SDS recubre las protenas, principalmente
proporcionales a Su peso molecular, y confiere el mismo valor Carga elctrica a travs de todas
las protenas de la muestra.

Las protenas glicosiladas pueden no emigrar a sus esperadas Peso molecular ya que su
migracin se basa ms en La masa de sus cadenas polipeptdicas, no los azcares que son
Adjunto [1].

El sistema de gel ms utilizado para Separar una amplia gama de protenas por SDS-PAGE es la
Laemmli sistema [2] que utiliza tris-glicina geles Compuesto de un componente de gel de
apilamiento (que se utiliza para Ayudar a enfocar las protenas en bandas afiladas al principio de
El recorrido electrofortico) y el gel de resolucin donde Se usan distintos porcentajes de gel de
acrilamida para separar Las protenas basadas en su peso de masa. este clsico Sistema
discontinuo en el que el pH Y la fuerza inica del tampn utilizado para hacer funcionar el gel
(Tris pH 8,3) es diferente de los tampones utilizados en la (Tris, pH 6,8) y gel de resolucin (Tris,
pH 8,8).

2. SDS
El dodecil sulfato sdico (SDS o NaDS), sodio Laurilsulfato o laurilsulfato de sodio (SLS) es un
Compuesto con la frmula CH _ {3} (CH _ {2}) _ {11} SO3Na. Es un Tensioactivo aninico utilizado
en muchas actividades de limpieza e higiene productos. SDS es un detergente (jabn) que puede
disolverse Molculas hidrofbicas, pero tambin tiene una carga negativa (Sulfato) unido a l.
Por lo tanto, si una clula es incubada Con SDS, las membranas se disolvern, todas las Las
protenas sern solubilizadas por el detergente, ms todos los Las protenas sern cubiertas con
muchas cargas negativas. As que una Protena que comenz como la que se muestra en la parte
superior de La figura 1 se convertir en la que se muestra en la La parte inferior de la figura 1. El
resultado final tiene dos Caractersticas:

1) todas las protenas slo retener su estructura primaria

2) todas las protenas tienen una carga negativa grande que Significa que todos migrarn hacia
el polo positivo cuando Colocado en un campo elctrico. La parte superior de la figura muestra
una protena con valores negativos Y las cargas positivas debidas a los grupos R cargados en la
protena. El H grande representa dominios hidrfobos Donde los grupos R no polares se han
reunido en un intento de Alejarse del agua polar que rodea a la protena.

El diagrama inferior muestra que el SDS puede interrumpir reas hidrofbicas y protenas de
recubrimiento con muchas Que sobrepasan cualquier carga positiva de la protena Debido a
grupos R cargados positivamente. La resultante Protena ha sido desnaturalizada por SDS
(reducida a su Estructura) y como resultado se ha linealizado.

Figura 1: Esta caricatura representa lo que sucede con una protena (Lnea rosa) cuando se
incuba con la desnaturalizacin Detergente SDS.
3. PAGE

Si las protenas se desnaturalizan y se ponen en un campo elctrico,Todos se movern

hacia el polo positivo al mismo tiempo , Sin separacin por tamao. As que tenemos
que poner el Protenas en un ambiente que permita que las diferentes Protenas a
moverse a diferentes velocidades. El entorno de Eleccin es poliacrilamida, que es un
polmero de Acrilamida. Cuando se forma este polmero, Se convierte en un gel y vamos
a utilizar la electricidad para tirar de la Protenas a travs del gel para que todo el proceso
se llama Electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). UN El gel de poliacrilamida no es
slido sino que est hecho de un laberinto De tneles a travs de una malla de fibras
(figura 2 y figura 3)

Figura 2: Este dibujo muestra una losa de poliacrilamida (Gris oscuro) con tneles (anillos rojos de
diferente tamao con Sombreado para representar la profundidad) expuesto en el borde Observe que
hay muchos tamaos diferentes de tneles Dispersos aleatoriamente en todo el gel.

Figura 3: Esta es una vista superior de dos tneles seleccionados (slo Dos se muestran para mayor
claridad del diagrama).

Estos tneles se extienden todo el camino a travs del gel, pero Serpentea a travs del gel y no vaya en
lneas rectas. Observe la diferencia de dimetro de los dos tneles. Ahora estamos listos para aplicar la
mezcla de desnaturalizado Protenas al gel y aplicar la corriente (figura 4).

Debido a su pequeo tamao, se mueven ms rpido Tienen acceso a ms de los caminos en la

poliacrilamida Que de molculas de protenas de mayor tamao.
Figura 4: Dibujo que muestra una mezcla de Protenas (lneas rosadas de diferentes longitudes) que
comienzan Viaje a travs de un gel de poliacrilamida (placa gris con Tneles).

Un archivo elctrico se establece con el polo positivo (rojo Ms) en el extremo lejano y el polo
negativo (negativo negro) en El extremo ms cercano. Dado que todas las protenas tienen una
fuerte negativa Todos se movern en la direccin en que la flecha Apuntar (correr a rojo).

La electroforesis en gel de poliacrilamida es indudablemente la Mtodo ms comn utilizado

para caracterizar las protenas.

El procedimiento es relativamente rpido y sensible (requiere Slo g de la cantidad de protena)

y el mtodo de deteccin son Conveniente y sensible. Adems, el uso de gel de placas Permite
el anlisis simultneo de 20 muestras en una sola Unidad electrofortica. Durante el ao, una
serie de Modificaciones en la tcnica electrofortica bsica Se forman gel de cristal por
polimerizacin Acrilamida con un reticulante (bis acrilamida) en el Presencia de catalizador
(TEMED) y un iniciador (APS) con La presencia de tampn de gel adecuado (tris). Las soluciones
son Normalmente desgaseado antes de la polimerizacin. Oxgeno Las molculas inhiben la
polimerizacin. La velocidad a la que gel Polimerizar se puede controlar variando la
concentracin De TEMED y APS. La proporcin relativa de Monmero de acrilamida y reticulante
(bis acrilamida) Controlar la porosidad del gel. Las molculas pueden separarse Por
electroforesis en base a carga, tamao y forma. El sistema ms utilizado es el gel discontinuo
Electroforesis, donde el gel se compone 3/4 separar Gel y 1/4 de gel de apilamiento con dos
sistemas de amortiguacin. En Normal de la muestra se cargan directamente en la parte superior
gel. En este caso, la nitidez de la protena producida en El gel ser lo ms amplio posible. Este
problema puede ser superado mediante la polimerizacin de un gel de apilamiento corto en la
parte superior del gel de separacin.

4. Principio

La electroforesis en gel de SDS - poliacrilamida (SDS - PAGE) es Probablemente el bioqumico

ms utilizado del mundo Mtodo. A principios de los aos 60, los cientficos apreciaron La
utilidad de los geles de poliacrilamida como una solucin Alternativa a los geles de almidn [3,
4], desarrollando as Electroforesis en gel de poliacrilamida o PAGE. Los Inclusin de detergente
inico Sulfato de dodecilo sdico (SDS) al gel y la muestra fue una adicin importante a este
trabajo. Shapiro et al. Fueron uno de los primeros en Uso de este enfoque [5]. Laemmli mostr
que las protenas Puede ser fiablemente fraccionado por SDS-PAGE, que Descrito en una leyenda
de la figura en un papel de la naturaleza [2].

La electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida implica la Separacin de protenas basadas en su

tamao. Calentando el Muestra bajo condicin desnaturalizante y reductora, protena Se
desdoblan y se recubren con detergente SDS Molculas, adquiriendo una alta carga negativa
que Proporcional a la longitud de la cadena polipeptdica. Cuando Cargado sobre una matriz de
gel y colocado en un campo elctrico, Molculas de protenas de carga negativa migran hacia
Electrodos de carga positiva y estn separados por Efecto de tamizado molecular. Despus de la
visualizacin por una protena Tcnica de tincin especfica, el tamao de la protena puede b,
Estimado por comparacin de su distancia de migracin, con El de un patrn de peso molecular
conocido. Es Posible eliminar la protena separada en una Carga de membrana y para sondar
con protenas especficas Anticuerpos en un procedimiento denominado western blotting.

Western blot es una tcnica mediante la cual la protena puede ser Transferido de un gel de
poliacrilamida a una lmina de Nitrocelulosa de tal manera que una rplica fiel de la Se obtiene
el patrn de gel original. Una amplia variedad de Procedimiento analtico puede aplicarse a
Protenas, lo que hace que el Western Blotting sea una poderosa Diagnosticando varias
condiciones patolgicas. En esto Tcnica se coloca una lmina de nitrocelulosa contra la
Superficie de un gel de fraccionamiento de protenas SDS-PAGE y un Corriente aplicada a
travs del gel y dentro de la nitrocelulosa Donde finalmente se unen por fuerzas no covalentes.
Los Tcnica implic tres pasos; Separacin de protenas por SDSPAGE, Blotting y ensayo
inmunolgico.

MATERIALES REQUERIDOS

1. Acrilamida (30% de stock): - disuelto 29,2 g Acrilamida y 0,8 bis-acrilamida en agua destilada
Y hacer hasta 100 ml. Guardar bajo oscuro en mbar Botella de color a 4 c (puede usar hasta
3 meses).

2. Solucin de gel / tampn de gel de separacin pH 8,8, 1,5 M Tris - HCl: - se disolvieron 18,17
g de tris en 75 ml destilados agua. Ajustar a pH 8,8 con HCl 6 N. Ajuste el total Volumen a 100
ml con agua destilada y almacenar a 4 c.

3. Tampn de gel de apilamiento, pH-6,8, y 1,0 Mtris-HCl: - Se disolvieron 3 g de tris en 40 ml

de agua destilada, se ajustaron a Ph 6,8 con HCl 6N. Ajuste el volumen total a 50 ml con agua
destilada. Almacenar a 4 C.

4. Tampn de electroforesis pH 8,3: - disuelto 3 g tris, 14,4 g de glicina y 1 g de SDS en 100 ml

de agua destilada. Almacenar a 4 C.

5. Amonio por sulfato-iniciador 10%: - disuelto 0,1 g de APS en 1 ml de agua destilada.

6. TEMED (NNN'N 'Tetrametilendiamina): - catalizador.

7. Tampn de muestra: - 7,25 ml de agua destilada + 1,25 ml Tampn de gel de apilado + 1 ml

de glicerol + 0,5 ml de - Mercaptoetanol + 150 mg de SDS y una pizca de Bromofenol azul.
8. Solucin de tincin: 200mgcoomassie disuelta Brillante azul R 250 en 50 ml de metanol /
etanol, 7 ml cido actico y 43 ml de agua destilada y filtrarlo.

9. Solucin de tincin: - aadir 7 ml de cido actico a 30 ml Metanol / etanol y 63 ml de agua

destilada

10. Equipo de electroforesis en gel de placas verticales.

11. Mezcla de acrilamida (10%) para 25 ml de solucin Gel: -9,9 ml, agua destilada + 8,3 ml, 0%
de acrilamida + 6,3 ml, tris-HCl 0,5 M + 0,25 ml, SDS al 10% + 0,25 ml, 10% de APS + 1,0 ml,
TEMED.

12. 5% de gel de apilamiento para 5 ml: - 3,04 ml, agua destilada + 0,83 ml, 30% de acrilamida
+ 0,63 ml, 0,5 M de Tris - HCl (pH 6,8) + 0,05 ml, SDS al 1% + 0,05 ml, APS + 0,005 ml, TEMED.

Consejo: tampn de gel y acrilamida / bis acrilamida auto-preparada

La solucin madre debe ser filtrada, desgaseada Y se almacen a 4 C.

Preparacin de la muestra

Las muestras pueden ser cualquier material que contenga cidos nucleicos. stos
pueden ser derivados biolgicamente, Ejemplo de clulas procariotas o eucariotas,
tejidos, Virus, muestras ambientales o protenas purificadas. En el Caso de los tejidos o
clulas slidos, a menudo se rompen primero Mecnicamente usando una licuadora
(para una muestra Volmenes), utilizando un homogeneizador (volmenes ms
Sonicador o utilizando ciclos de alta presin, y un Combinacin de tcnicas bioqumicas
y mecnicas - Incluyendo varios tipos de filtracin y centrifugacin - Pueden utilizarse
para separar diferentes compartimentos celulares y Orgnulos antes de la
electroforesis. Biomolculas sintticas Tales como oligonucletidos tambin se pueden
usar como analitos.

La muestra a analizar se mezcla opcionalmente con un producto qumico

Desnaturalizante si se desea, usualmente SDS para protenas o urea Para cidos
nucleicos. SDS es un detergente aninico que Desnaturaliza los terciarios secundarios y
no disulfuro Estructuras y, adicionalmente, aplica una carga negativa Cada protena en
proporcin a su masa. Urea rompe el Enlaces de hidrgeno entre los pares de bases del
cido nucleico, Haciendo que los hilos constituyentes se separen. el calentamiento de la
Muestras a por lo menos 60 C promueve adems la desnaturalizacin [6,
7, 8, 9].

Adems de SDS, las protenas pueden ser opcionalmente brevemente Calentado hasta
casi ebullicin en presencia de un agente reductor, Tal como ditiotreitol (DTT) o 2-
mercaptoetanol (betamercaptoetanol / BME), Que desnaturaliza an ms la Protenas
mediante la reduccin de enlaces disulfuro, superando as Algunas formas de
plegamiento de protenas terciarias, y la ruptura Estructura de protena cuaternaria
(subunidades oligomricas). Esto es Conocido como SDS-PAGE reductor. Un colorante
de seguimiento puede ser Aadido a la solucin. Esto suele tener un Movilidad
electrofortica que los analitos para permitir la Experimentador para seguir el progreso
de la solucin a travs El gel durante el recorrido electrofortico.

1. Tomar 1 ml de solucin de cultivo de la cepa DH5 de E. coli, en 1,5 ml de tubo de

eppendorf.
2. Luego centrifugar a 12000 rpm durante 5 min.
3. Luego deseche el sobrenadante.
4. A continuacin, aadir 500 l de TE en el tubo y disolver el Tubo agitando suavemente.
5. A continuacin, agregue el mismo volumen de buffer de muestra.
6. Finalmente calentar la muestra en un bao hirviendo durante 5 minutos Y luego
mantener inmediatamente en el hielo.

Preparacin de geles de acrilamida

Los geles tpicamente consisten en acrilamida, bisacrilamida, El desnaturalizante
opcional (SDS o urea), y un tampn con un PH ajustado. La solucin se puede desgasificar
bajo una Vaco para evitar la formacin de burbujas de aire polimerizacin.
Alternativamente, se puede aadir butanol al Gel de resolucin (para protenas) despus
de que se vierte, como butanol Elimina las burbujas y hace la superficie suave [10]. la
Fuente de radicales libres y un estabilizador, tal como amonio Persulfato y TEMED se
aaden para iniciar Polimerizacin [11]. La reaccin de polimerizacin crea una Gel
debido a la bisacrilamida aadida, que puede formar Reticulaciones entre dos molculas
de poliacrilamida. Los Relacin entre bisacrilamida y acrilamida puede variar Propsitos
especiales, pero generalmente es alrededor de 1 parte en 35. Acrilamida del gel tambin
se puede variar, Generalmente en el intervalo de 5% a 25%. Menor porcentaje Geles son
mejores para la resolucin de peso molecular muy alto Molculas, mientras que se
necesitan porcentajes mucho ms Resolver las protenas ms pequeas.

6. Procedimientos
Bandeja de fundicin de gel

1. Ensamble el aparato de gel de la losa vertical usando un espaciador de 1 mm.

Sugerencia: -La placa debe limpiarse y secarse a fondo antes de usar.
2. Sellar las placas de vidrio en 3 lados con 1% de agarosa.
3. Vierta el gel de separacin / mezcla de gel de resolucin a un nivel De
aproximadamente 2,5 cm por debajo de las placas de vidrio, Capa 250 \ mu l de TDW
sobre la superficie del gel. Permitir polimerizar.
Consejos: preparar la solucin recin cada vez que se necesario. Tan pronto como se
aade persulfato de amonio, El gel debe ser vertido rpidamente antes de que la
acrilamida Polimeriza.
4. Despus de la polimerizacin eliminar el agua de la parte superior.
5. Vierta el gel de apilamiento preparado al 5% sobre la solucin
Gel / gel de separacin.
6.Inmediatamente inserte un peine y permita polimerizar el gel.

Carga de muestra

1. Se prepar el volumen de muestra requerido (100 mg de protena Por carril) +

volumen igual de tampn de muestra.
2. Caliente la muestra en un bao de agua hirviendo durante 5 min. Desnaturalizar la
protena. Inmediatamente mantenerlos en hielo para Retener la etapa de
desnaturalizacin.
3.Retire el peine del molde; Lavar el pozo con agua destilada. Consejo: con un rotulador
marque el nmero o Posicin de los pocillos antes de retirar el peine. Este Facilita la
carga de la muestra.
4. Montar el gel en aberturas electroforticas.
5. Aadir tampn de electroforesis a la parte superior e inferior Depsito del aparato
electrofortico.
6. Cargue la muestra junto con la protena del marcador en la Pocillos (20 \ mu l)

Electroforesis
Varios sistemas tampn se utilizan en PAGE dependiendo de La naturaleza de la muestra
y el objetivo experimental. Los tampones utilizados en el nodo y el ctodo pueden ser
los Iguales o diferentes [12, 13, 14]. Se aplica un campo elctrico A travs del gel,
causando la carga negativa de protenas o cidos nucleicos a migrar a travs del gel
desde el negativo Electrodo (el ctodo) hacia el electrodo positivo (el nodo).
Dependiendo de su tamao, cada biomolcula se mueve Diferente a travs de la matriz
de gel: molculas pequeas ms Fcilmente a travs de los poros en el gel, mientras que
los ms grandes Tienen ms dificultad. El gel se ejecuta normalmente por unos pocos
Horas, aunque esto depende de la tensin aplicada a travs El gel; La migracin ocurre
ms rpidamente a voltajes ms altos, Pero estos resultados son tpicamente menos
precisos que los de Bajos voltajes. Despus de la cantidad de tiempo Las biomolculas
han migrado diferentes distancias su tamao. Las biomolculas ms pequeas viajan
Gel, mientras que los ms grandes se mantienen ms cerca del punto de origen.
Por lo tanto, las biomolculas pueden separarse Segn el tamao, que depende
principalmente de la Bajo condiciones desnaturalizantes, sino que tambin depende
Conformacin de orden superior en condiciones nativas. Sin embargo, ciertas
glicoprotenas se comportan de manera anmala SDS.
1. Conecte el aparato a la fuente de alimentacin y aplique 8 V / Cm para el gel de
almacenamiento (70V) y 15 V / Cm para Gel de resolucin (150-200V)
2. La electroforesis se contina hasta que el azul de bromofenol Llega al fondo del gel.
3. Desmonta el aparato y retira el gel de entre Y colocar en una bandeja que contenga
agua destilada Pequea esquina del gel para indicar la direccin de cargando.

Tincin de Coomassie
1.Immersethe el gel en 5volume de solucin de la mancha y la mancha Durante 4 hrs.
A temperatura ambiente con un ligero shacking. Coomassie brillante azul R reacciona
de forma no especfica con protenas.
2. Agitar suavemente el gel teido en la solucin destinada hasta El fondo queda claro.
3. Conservar en cido actico al 7%. Visualice la banda en una iluminador.

Figura 5: Ilustracin de un aparato utilizado para SDS PAGE

7. Resultado
La muestra utilizada en el experimento es E. coli DH5.we separ con xito la protena En SDS-
PAGE y la protena se puede separar sobre la base de Su peso molecular por separado por la
transferencia en una Papel de nitrocelulosa.

Ingredientes qumicos y sus funciones

El gel de poliacrilamida (PAG) se conoca como un potencial Medio de empotramiento para
seccionar tejidos ya en 1964, Y dos grupos independientes emplearon PAG en Electroforesis en
1959 [15, 16]. Posee varias Caractersticas electroforticamente deseables que lo
Verstil. Se trata de un sinttico, termo-estable, Transparente, fuerte, qumicamente
relativamente inerte, y puede Se debe preparar con una amplia gama de tamaos de poro
promedio [17].
El tamao de poro de un gel se determina por dos factores, el Cantidad total de acrilamida
presente (% T) (T = Total Concentracin de acrilamida y monmero de bisacrilamida)
Y la cantidad de reticulante (% C) (C = bisacrilamida concentracin). El tamao del poro
disminuye con el aumento de% T; Con reticulacin, 5% C da el tamao de poro ms pequeo.
Alguna Aumento o disminucin en% C de 5% aumenta el poro Tamao, ya que el tamao de
poro con respecto a% C es un parablico Funcin con vrtice como 5% C. Esto parece ser porque
De agrupamiento no homogneo de hilos de polmero en el gel. Este material de gel tambin
puede soportar alta tensin Gradientes, es susceptible de varias tinciones y des-manchas
Procedimientos y pueden ser digeridos para extraer Fraccionadas o secadas para
autorradiografa y grabacin.

Ventaja de SDS PAGE

PAGE tiene una alta capacidad de carga; Hasta 10 microgramos de El ADN se puede cargar en
un solo pocillo (1 cm x 1 mm) Sin prdida significativa de resolucin. Poliacrilamida Contiene
pocos inhibidores de las reacciones enzimticas. PAGE es un Sistema de gel ideal desde el cual
aislar fragmentos de ADN Subclonacin y otras tcnicas de biologa molecular.

Desventaja de SDS PAGE

La movilidad de los fragmentos puede verse afectada por la La composicin hace que el
dimensionamiento exacto de las bandas sea un problema. La poliacrilamida quita la
fluorescencia, formando bandas Conteniendo menos de 25 ng difcil de visualizar con Tincin
con bromuro de etidio.

8. Conclusin

SDS - PAGE, gel de poliacrilamida de dodecil sulfato sdico Electroforesis, es una tcnica
ampliamente utilizada Bioqumica, forense, gentica y biologa molecular para Protenas
separadas de acuerdo con su electrofortico Movilidad (funcin de la longitud de la cadena
polipeptdica o Peso molecular, as como plegado de protenas de orden superior,
Modificaciones postraduccionales y otros factores).
Electroforesis en gel de muestras que tienen una carga idntica a Masa, resulta en el
fraccionamiento por tamao y probablemente El mtodo bioqumico ms utilizado en el mundo.

Las protenas son compuestos anfteros; Su cargo neto Por lo tanto, se determina por el pH del
medio en el que Estn suspendidos. En una solucin con un pH por encima de su Punto
isoelctrico, una protena tiene una carga negativa neta y Migra hacia el nodo en un campo
elctrico. Debajo de su Punto isoelctrico, la protena est cargada positivamente y
Migra hacia el ctodo. La carga neta Protena es adems independiente de su tamao, es decir,
la Carga transportada por unidad de masa (o longitud, protenas y cidos nucleicos son
macromolculas lineales) de la molcula Difiere de la protena a la protena. A un pH dado, por
tanto, Y en condiciones no desnaturalizantes, el electrofortico Separacin de protenas se
determina tanto por tamao como Carga de las molculas. Sin embargo, los cidos nucleicos
Negativo a cualquier pH utilizado para la electroforesis y adems Llevan una carga negativa fija
por unidad de longitud de la molcula, Proporcionado por el grupo PO4 de cada nucletido de
la cido nucleico. Separacin electrofortica de cidos nucleicos Por lo tanto es estrictamente
de acuerdo a su tamao.

Expresiones de gratitud
Los autores estn agradecidos a todas las (CIFRI) para una amplia ayuda y apoyo. Nosotros
tambin estn agradecidos a la biblioteca central del CIFRI por el mismo.