Antecedentes

Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Biofsica de canales ionicos:

Optimizacion de registros automatizados de corrientes ionicas
bajo fijacion de voltaje

Carlos Mauricio Matus Nunez

Universidad Nacional Autonoma de Mexico.

Laboratorio Nacional de Canalopatas

Dirigio: Dr.Arturo Picones Medina

June 9, 2017

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

El mundo es todo lo que acaece

Probar compuestos qumicos con fines farmacologicos usando la

tecnica de Patch-Clamp?

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Patch Clamp Automatizado (APC) en Cultivo primario

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Patch-Clamp
Por que tendra tanta gloria?

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Cell-Attached
Uno va hacia la celula

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Configuraciones de Patch-Clamp
De cuantas maneras puedo hacer un sello?

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Fijacion del Voltaje

Supongamos que es un circuito electrico

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Circuito de Patch-Clamp

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Planar Patch Clamp

Si la pipeta va a la celula(Patch Manual), ahora la celula va a la pipeta

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Qplate
MicroCircuito

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 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Sistema Qpatch 16x

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

Cultivo primario

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Patch-Clamp vs. APC?
Hipotesis
Entendiendo la tecnica Patch Clamp
Sistema de Registro
Instrumentacion Patch-Clamp Automatizada (APC)
Resultados
Cultivo celular
Conclusion

CelulaCromafn

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Hipotesis y Objetivo

Hipotesis:
Si fuere viable el registro electrofisiologico
de un cultivo primario por medio de la
instrumentacion automatizada. Se
facilitara la busqueda de compuestos
qumicos con fines medicinales.
Objetivo:
Optimizar y estandarizar el registro
de corrientes ionicas
transmembranales en cultivos
primarios de celulas cromafines,
mediante instrumentacion de patch
clamp automatizado y su validacion,
comparandolas con registros
obtenidos mediante tecnicas de
Patch-Clamp manual en las mismas
condiciones experimentales.

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Porque es importante el tratado previo de las celulas?

Viabilidad de las celulas

Despegar las celulas
3 millones por mililitro de celulas

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Pulsos de Voltaje

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Set-up

Amplificador Diferencial Axopach200B

Convertidor Analogo Digital Axondigidta 1550
Software p-clamp
Microscopio invertido Nikon Eclipse Ti

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Condicion Previa
Hipotesis
Protocolo de Registro
Sistema de Registro
Patch-Clamp Manual
Resultados
Qpatch 16x
Conclusion

Protocolo en Qpatch

Pruebas de presion al sistema de pipetas

Parametros
Se agregan 200l en las placas de microtitulacion
Ingresan soluciones interna y externa
Se inicializa el robot
Se muestran el numero de celulas posicionadas
Aplica el protocolo
Termina experimento

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Corriente saliente BK

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 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Densidad de Corriente pA/pF vs V BK

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 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Ajuste Boltzmann

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 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Corriente Saliente SK

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 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Densidad de Corriente pA/pF vs V SK

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Corriente Entrante Na

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Densidad de Corriente pA/pF vs V Na

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Tabla estadstica
Dime que tan eficiente eres

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis Registros de Corrientes entrantes
Sistema de Registro Registros de corrente saliente Na
Resultados Estadstica
Conclusion

Estadistica Comparada

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Indice

1 Antecedentes Protocolo de Registro

Patch-Clamp vs. APC? Patch-Clamp Manual
Entendiendo la tecnica Patch Qpatch 16x
Clamp 4 Resultados
Instrumentacion Patch-Clamp Registros de Corrientes
Automatizada (APC) entrantes
Cultivo celular Registros de corrente saliente
2 Hipotesis Na
3 Sistema de Registro Estadstica
Condicion Previa 5 Conclusion

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA

 Antecedentes
Hipotesis
Sistema de Registro
Resultados
Conclusion

Conclusion

Paridad en los resultados

52% de exito
Optimizacion de registros en
cultivo primario
Pioneros en el Tamizaje
(Screening) en cultivo
primario

Carlos Mauricio Matus Nunez LANCA