UNIVERSIDAD SAN PEDRO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUMICA
FITOQUMICA
LABORATORIO DE FITOQUMICA 2017
RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS SECUNDARIOS

OBJETIVO
Distinguir y clasificar los diferentes metabolitos secundarios presentes en el
tejido vegetal por medio de pruebas qumicas de coloracin y precipitacin.
Consultar:

MARCO TERICO
Metabolitos Primarios:
Son los productos qumicos necesarios para la vida, resultantes del
metabolismo vital de todo ser vivo, son: los carbohidratos, los lpidos, las
protenas y los cidos nucleicos.
Metabolitos Secundarios:
Otros compuestos llamados metabolitos secundarios son subproductos de rutas
metablicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo particulares
dentro de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido presentando una
distribucin restringida dentro del Reino Vegetal dando origen a la
quimiotaxonoma. Su ocurrencia depende de condiciones externas tales como
ataques de patgenos, predadores, cambios trmicos o lumnicos, deficiencias
nutricionales o presencia de otros organismos intra o interespecficos.
El metabolismo secundario es una caracterstica fundamental de la
especializacin, es decir que el compuesto resultante, puede no ser importante
para la clula, pero s para el organismo como un todo. Los metabolitos
secundarios pueden ser bioactivos, pero no jugar un papel esencial en los
procesos fisiolgicos del organismo.
Algunos metabolitos secundarios son residuos bioqumicos, es decir, productos
de actividad enzimtica de substratos no apropiados o productos de
destoxificacin o desecho de importancia para la supervivencia y la buena
condicin de los organismos. Con pocas excepciones, los metabolitos
secundarios pueden clasificados dentro de cinco grupos, de acuerdo con su base
biosinttica: fenilpropanos, Acetogeninas, terpenoides, esteroides y alcaloides.
Reconocimientos de Metabolitos:
El reconocimiento de metabolitos secundarios se realiza por medio de pruebas
fitoqumicas preliminares, las cuales son una prueba qumica de
caracterizacin consistente en una reaccin qumica que produce alteracin
rpida en la estructura molecular de un compuesto, por ejemplo, la
modificacin de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la
formacin de un aducto o un complejo, lo cual da por resultado una
manifestacin sensible como el cambio de un color, la formacin de un
precipitado o el desprendimiento de un gas, dndonos indicios de la presencia
o ausencia de un metabolito secundario en particular.

N 01 Alcaloides. -
MARCO TERICO
Los alcaloides son sustancias bsicas que contienen nitrgeno en un anillo
heterocclico, son derivados de aminocidos, presentan distribucin taxonmica
limitada y se encuentran en plantas superiores como sales de un cido
orgnicos.

Nicotina
Atendiendo a su solubilidad. Propiedades empleado para extraerlos y
purificarlos, la base del alcaloide es soluble en solventes orgnico, y pueden
formar gases solubles en solventes polares cuando se encuentran en cidos
minerales diluidos.

Procedimiento Experimental Ensayo.

Desmenuzar finamente en un mortero, unos 10 g. de muestra fresca y colocarlos
en un erlenmeyer. Aadir un volumen suficiente de HCl al 5% para que toda la
muestra est en contacto con la solucin cida. Calentar con agitacin al bao
mara durante unos 5 minutos. Enfriar. Filtrar.
Colocar en 4 tubos de ensayo 2 ml de filtrado cido fro. Aadir a cada uno 2
gotas de los reactivos de Dragendorff, Mayer, Valser y Reineckato de amonio. Si
se observa turbidez o precipitados en por lo menos 3 tubos, se considera que la
muestra contiene alcaloides.
Nota: antes de realizar el ensayo con la muestra biolgica, ensayar con un
estndar de quinina en solucin cida.
 Identificacin de metabolitos secundarios
- Plantas con alcaloides
- Plantas con flavonoides
- Plantas con saponinas
- Plantas con taninos
- Plantas con esteroides
- Plantas con cardiofnicos
- Plantas con antocianinas
- Plantas con quinonas
Datura sp. (borrachero), hojas y flores,
Catharantus roseus (cortejo), hojas.
Hojas de tabaco, t
Ptalos de rosas rojas y amarillas.
Ptalos de lirio africano.
Hojas de Agave sp. (penca sbila).
Fruto de Solanum quitoense (lulo).
Cscara de Dioscorea ssp. (ame).
Hojas de plantago (llantn). Hojas de
guayaba, T (thea sinensis), hojas. Uva (vitis
vinfera). Pltano o guineo (Musa ssp.).
agallas de Alepo (Querquis ssp.). corteza de
casco de vaca (Bahuina picta).
Semillas de Glicine max (soya).
Aceite de oliva (olea europeae).
Azuceno de la habna, hojas
Repollo morado. Hojas de guardaparque.
Moras. Uvas sin hollejo.
Ruibarbo (rizomas)

PREPARACIN DEL EXTRACTO ETANOLICO

La planta seca se separa en tallo y hojas.
Tomar las hojas (kg) y colocaras en un matraz con Lt. De Etanol durante 3 das
ya que los metabolitos existentes en la hoja son aplastados por este disolvente
polar. (10gr muestra hojas) 40 ml de alcohol.
PRUEBAS QUMICAS PRELIMINARES
ALCALOIDES.
Una porcin de extracto Etanolito se disuelve en cido clorhdrico diluido, se agita
y se filtra hasta que el filtrador sea completamente transparente. El filtrado se
ensaya con los reactivos para alcaloides:
MAYER, DRAGRENDORFF, WAGNER, Y HAGER. Se considera como
positivos, las pruebas en los que aparece un precipitado.
Materiales:
Mortero.
10 gr. De muestra fresca.
Acido frio.
Erlenmeyer
4 tubos de ensayo
Agua.
Reactivos:
Dragendorff
Valser
Mayer
Reineckato de amonio
un volumen suficiente de HCl al 5%
N2 Flavonoides. -
MARCO TERICO
Los flavonoides son compuestos polifenlicos con quince tomos de carbono,
cuya estructura consta de 2 anillos de benceno unidos por una cadena lineal de
tres carbonos.
El esqueleto de los flavonoides se representa por el sistema C6-C3-C6.
(+) Catequina.

Reconocimiento de Flavonoides
En un erlenmeyer colocar unos 10 g. de muestra fresca finamente desmenuzada.
Aadir un volumen suficiente de alcohol etlico que cubra toda la muestra y le
confiera fluidez. Calentar al bao mara durante unos 5 minutos, con agitacin.
Enfriar. Filtrar. Si hay presencia de clorofilas, al filtrado aadirle un volumen igual
de solucin de acetato de plomo al 4% que contenga cido actico al 0.5 %,
agitar, dejar reposar 15 minutos y filtrar. Con el filtrado realizar ensayos de
reconocimiento de flavonoides, leucoantocianidinas y Cardiotnicos.
Materiales:
Erlenmeyer
10 g. de muestra fresca
Tubo de ensayo
alcohol etlico
herramientas de filtracin
 TANINOS
se disuelve en una porcin del residuo etanolito. Se filtra y se toma (alcuotas)
de 1 ml para la prueba con cloruro frrico (2 gotas).
Se considera positivo la aparicin de una pp precipitado.
Los taninos hidrolizables y condesados se diferencian segn el color o
precipitacin con sales fenicas.
Los taninos hidrolizables dan color y precipitados paredes verdosas (trase 1986
y barba 1997).
FLAVONOIDES
a) A un tubo de extracto diluido se le agrega unas gotas de hidrxido de
sodio diluido la aparicin de color amarilla o naranja se considera
indicativo de la presencia de flavonoide.
b) Pewis
a un tubo con el extracto diluido se le agrega (polvo de zinc) o unas gotas
de cido clorhdrico 5 N, solo los hidroflavonoides reaccionan para dos
colores que van del rojo purpura al rojo cereza.
Flavononas, dihidrochalconas y otros flavonoides dan coloracin rosa o
caf.

SAPONINAS
Desmenuzar con ayuda de un mortero unos 10 g de muestra fresca, con ayuda
de unos pocos ml de agua. Filtrar. Agitar en un tubo de ensayo tapado, unos 4
ml de filtrado acuoso, vigorosamente durante 1 minuto.
La formacin de una espuma abundante y estable es prueba presuntiva de la
presencia de saponinas en la muestra.
MATERIALES.
Mortero
Tubo de ensayo
10 g de muestra fresca
Embudo
H2O
Papel filtro
Ejemplo:
Papel filtro blanco
Agua
Reactivos:
Solucin del Acetato de plomo al 4%
Solucin de cido actico al 0.5%
Ensayo para flavonoides
Colocar varias limaduras de magnesio en un tubo de ensayo. Aadir unos 2 ml
del filtrado y por la pared del tubo, gota a gota dejar caer varias gotas de HCl
concentrado. La aparicin de colores naranja, rosado, rojo o violeta es prueba
positiva para la existencia de flavonoides en la muestra.
Nota: antes de realizar el ensayo con la muestra biolgica, ensayar con un
estndar de rutina o quercetina en solucin acuo -alcohlica.

N3 Cardiotnicos.

MARCO TERICO
Una aglicona cardiotnica, estructuralmente est construida por el sistema
anular esteroidal (ciclo pentano perhidrofenantreno) con los grupos metilos C - 1
8 y C -19, un grupo hidroxilo en el carbono 3 y un anillo lactnico -
insaturado de cuatro carbonos unidos al carbono 17 del ncleo esteroidal.
Estas agliconas toman el nombre de cardenlidas por prestar actividad
estimulante sobre el msculo cardiaco, cuando estn en forma de glicsidos.
Reconocimiento de Cardiotmicos
En un erlenmeyer colocar unos 10 g. de muestra fresca finamente desmenuzada.
Aadir un volumen suficiente de alcohol etlico que cubra toda la muestra y le
confiera fluidez. Calentar al bao mara durante unos 5 minutos, con agitacin.
Enfriar. Filtrar. Si hay presencia de clorofilas, al filtrado aadirle un volumen igual
de solucin de acetato de plomo al 4% que contenga cido actico al 0.5 %,
agitar, dejar reposar 15 minutos y filtrar. Con el filtrado realizar ensayos de
reconocimiento de flavonoides, leucoantocianidinas y Cardiotnicos .
Material:
Erlenmeyer
10 g de muestra fresca
Tubo de ensayo
Alcohol etlico
Herramienta de filtracin
 N5 cumarinas.
MARCO TERICO.
Las cumarinas son un grupo muy amplio de principios activos fenficos y tienen
en comn la estructura qumica de 1 - benzapiran -2-ona. Se caracterizan
porque presentan fluorescencia bajo la luz ultravioleta a 365 nm.
Ensayo de cumarinas
En un tubo de ensayo grande colocar 1 g de material vegetal fresco y macerado
y agregar cantidad suficiente de etanol comercial que cubra el material vegetal.
Cubrir la boca del tubo de ensayo con un papel filtro blanco y sujetarlo con unas
pinzas para tubo de ensayo o con una banda elstica.
Agregarle unas gotas de NaOH diluido en el papel filtro que cubre la boca del
tubo de ensayo. alentar hasta ebullicin el tubo de ensayo por 5 minutos, enfriar
y retirar el papel filtro.
Observar bajo luz ultravioleta a 365 nm la aparicin de una coloracin
fluorescente que puede ser: verde, amarilla, roja en el papel filtro.
Nota: El papel filtro normalmente se observa azul fluorescente bajo la luz
ultravioleta de 365 nm.
Materiales:
1 g de material vegetal fresco y macerado
Tubos de ensayo
Etanol comercial
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
Agua
Reactivos:
Gotas de NAOH

N 6 taninos. -
MARCO TERICO
Los taninos son productos de excrecin de muchas plantas involucrados en
mecanismo de defensa de las misma, contra organismo parsitos. Se
encuentran ms comnmente en hojas, ramas y debajo de la corteza.
Qumicamente los taninos son polmeros de polifenoles, sustancias con alto peso
molecular (comprendido entre 500 a 3000), se clasifican en: Taninos
Hidrosolubles o Piroglicos: son general steres fcilmente hidrolizables
formados por una molcula de azcar (en general glucosa) unida a un nmero
variable de molcula de cido fenlicos (cido glico o su dmero, el cido
algico). Son comunes de observar en plantas dicotiledneas.
Taninos no Hidrosolubles o condensados: tienen una estructura qumica similar
a la de los flavonoides. Por hidrlisis dan azcar y cido algico. Algunos taninos
condesadores son conocidos com pro-antocianidinas porque por hidrlisis cida
producen antocinidinas y leuceantocinidinas.
Ensayo para taninos
Desmenuzar con ayuda de un mortero unos 10 g de muestra fresca, con ayuda
de unos pocos ml de agua. Filtrar. Tomar 1 mL de filtrado acuoso en un tubo de
ensayo. aadir 1 ml del Reactivo Gelatina -Sal. Si se forma un precipitado,
centrifugar a 2000 RPM durante 5 minutos. Des echar el sobrenadante.
Redisolver el precipitado en 2 mL de Urea 10M. Aadir 2 -3 gotas de solucin de
cloruro frrico al 10%.
La formacin de precipitado al agregar el reactivo de gelatina, y la aparicin de
colores o precipitados verdes, azules o negros e s prueba positiva de la
presencia de taninos en la muestra.
Materiales:
10 g de material vegetal fresco y macerado
Tubos de ensayo
Mortero
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
H2O
Reactivo:
1 ml del Reactivo Gelatina
Sal
2 mL de Urea
gotas de solucin de cloruro frrico al 10%.

N7 esteroides y/o Triterpenoides. -

MARCO TERICO
Los esteroides son compuestos cuya estructura presenta el sistema anular del
ciclopentano perhidrofenantreo. Metilos en los carbonos 10 y 13 y un radical
lineal en el carbono 17.
Ensayo para triterpenoides y / o esteroides
Moler la muestra vegetal seca. Agregar un volumen suficiente de cloroformo o
diclorometano y extraer por agitacin. Filtrar. Si el filtrado es turbio contiene
humedad, secarlo agregando sulfato de sodio anhidro y filtrar. En un tubo de
ensayo limpio y completamente seco, colocar 1 ml de filtrado orgnico. Aadir 1
ml de anhdrido actico. Por la pared del tubo y con mucha precaucin, dejar
resbalar 1-2 gotas de cido sulfrico concentrado. La formacin de colores
azules, violetas, rojos o verdes es prueba positiva de que la muestra contiene
Esteroides y/o Triterpenoides.
Materiales:
Muestra vegetal seco
Tubo de ensayo
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
H2O
Reactivos:
sulfato de sodio anhidro
cloroformo o diclorometano
1 ml de filtrado orgnico
1 ml de anhdrido actico
1-2 gotas de cido sulfrico concentrado

N 8 Quinnonas.-
MARCO TERICO
Las quinonas son dicetonas cclicas insaturadas que por reduccin se convierten
en polifenoles, siendo reversibles esta reaccin. Las quinonas derivan su nombre
del miembro ms siempre de la serie: la p-benzoquinona obtenida en 1838 por
woskresensky, como producto da oxidacin del cido qunico.
Las quinonas. Por el sistema aromtico que dan a reducirse se puede clasificar
en Benzoquinonas, Naftoquinonas, Antraquinonas (las ms numerosas) y
Fenantroquinonas (las menos numerosas)
Ensayo para Quinonas:
Ensayo con una fraccin:
Colocar en un tubo de ensayo unos 5 ml de filtrado acuoso. Aadir 1 ml de
perxido de hidrgeno al 20% y 1 ml de cido sulfrico al 50%. Calentar la mezcla
en un bao de agua hirviendo durante 15 minutos. Enfriar. Aadir 5 ml de
tolueno. Agitar sin emulsionar. Recuperar la fase tolunica. Trasvasar 2 ml fase
tolunica a un tubo de ensayo. Aadirle 1 ml de una solucin de NaOH al 5%
con amoniaco al 2%. Agitar sin emulsionar. Si la capa acuosa toma una
coloracin rosada a roja intensa es prueba positiva de la presencia de quinonas
en la muestra.
Materiales:
5 ml de filtrado acuoso
Tubo de ensayo
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
H2O
Reactivos:
1 ml de perxido de hidrgeno al 20%
5 ml de tolueno
1 ml de una solucin de NaOH al 5%
1 ml de cido sulfrico al 50%
amoniaco al 2%
Ensayo directo:
Colocar 5 g de muestra fresca ( 1 g de muestra seca y molida), en un sistema
de reflujo, agregar 25 ml de HCl 5%. Reflujar 5 minutos. Dejar enfriar y filtrar.
Con el filtrado acuoso proceder como se describe para el ensayo con una
fraccin acuosa.
Materiales:
5 g de muestra fresca ( 1 g de muestra seca y molida)
Tubo de ensayo
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
H2O
Reactivos:
25 ml de HCl 5%.

N9 Antocianinas:
MARCO TERICO.
Las antocianinas son pigmentos flavonoides que se comparan como indicadores
cidos base debido al proceso.
Estos pigmentos suelen presentarse en forma de glucsidos lo que explica su
solubilidad en agua y la fcil extractabilidad por solventes acuosos. Se
encuentran en la savia de las plantas a menudo en forma de slidos amorfos o
cristalinos en las hojas de tejido leoso y frutos. Su color esta alguna vez
enmascarado por otros pigmentos como la clorofila.
Ensayo para Antocianinas.
En un erlenmeyer colocar unos 100 g. de muestra fresca finamente
desmenuzada. Aadir unos 200 ml de agua. Calentar a ebullicin durante unos
5 minutos. Filtrar.
Ensayo
En un tubo de ensayo colocar 2 ml de filtrado. Aadir 1 ml de NaOH diluido.
Observar el color formado. En otro tubo de ensayo colocar otros 2 ml de filtrado.
Aadir unas 6 gotas de un cido mineral diluido. Observar el color formado.
Las antocianinas se reconocen por producir diferentes colores a diferentes pH.
Materiales:
Erlenmeyer 100 g. de muestra fresca
200 ml de agua
Tubo de ensayo
Herramienta de filtracin
Ejemplo: Papel filtro blanco
Pinzas de tubo de ensayo
H2O
Reactivos:
1 ml de NaOH
6 gotas de un cido mineral