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cromatina
Los procesos nucleares clave en eucariotas, incluyendo la replicacin del ADN, la reparacin y
la regulacin de genes, requieren una remodelacin extensa de la cromatina catalizada por
enzimas que consumen energa. No est claro cmo se cumplen las demandas ATP de tales
procesos en respuesta a estmulos rpidos. Se analiz esta cuestin en el contexto de los
cambios de regulacin gentica masiva inducida por progestinas en clulas de cncer de mama
y encontr que la ATP se genera en el ncleo celular a travs de la hidrlisis de poli (ADP-
ribosa) a ADP-ribosa. En presencia de pirofosfato, la ADP-ribosa es utilizada por la
pirofosfatasa NUDIX5 para generar ATP nuclear. La fuente nuclear de ATP es esencial para la
remodelacin de la cromatina inducida por hormonas, la regulacin transcripcional y la
proliferacin celular.
Los procesos nucleares clave en eucariotas, incluyendo la replicacin del ADN, la reparacin y
la regulacin de genes, requieren una remodelacin extensa de la cromatina catalizada por
enzimas que consumen energa. No est claro cmo se cumplen las demandas ATP de tales
procesos en respuesta a estmulos rpidos. Se analiz esta cuestin en el contexto de los
cambios de regulacin gentica masiva inducida por progestinas en clulas de cncer de mama
y encontr que la ATP se genera en el ncleo celular a travs de la hidrlisis de poli (ADP-
ribosa) a ADP-ribosa. En presencia de pirofosfato, la ADP-ribosa es utilizada por la
pirofosfatasa NUDIX5 para generar ATP nuclear. La fuente nuclear de ATP es esencial para la
remodelacin de la cromatina inducida por hormonas, la regulacin transcripcional y la
proliferacin celular.
El ncleo de las clulas humanas requiere una cantidad sustancial de energa para replicar o
reparar el genoma y reprogramar la expresin gnica en respuesta a seales externas,
asegurando la accesibilidad del genoma para mediar los cambios extensos en la cromatina y la
organizacin de los nucleosomas. La suposicin es que las demandas energticas nucleares son
satisfechas por el trifosfato de adenosina (ATP) de las mitocondrias. Aunque esto puede ser el
caso en situaciones de estado estacionario, puede no ser suficiente para repentinos cambios
extensos en cromatina, y hace casi 60 aos se propuso que el ATP podra ser generado en
ncleos aislados (2, 3).
Para abordar este problema, se midieron los niveles de ATP en clulas vivas de cncer de
mama mediante detectores de la relacin ATP / ADP dirigidos al ncleo celular, mitocondrias o
citosol (4) (figs. S1, A aD). La exposicin a progestina (R5020) indujo un aumento de esta
relacin en algunos ncleos celulares (figura 1A y figura S1, E nd F), comportamiento que no se
observ en las clulas expuestas al disolvente (EtOH) (Figura 1B, panel derecho , Y la figura
S1G). Clulas que muestran un aumento de ATP nuclear tambin mostraron activado receptor
de progesterona (fosfo-PR), mientras que aquellos con niveles de ATP nuclear inalterado no
eran hormonas-sensible (Figura 1C).
PARP1 actividad depende de la NAD sintasa nuclear NMNAT1, que utiliza ATP de mitocondria
(11]. El agotamiento de NMNAT1 bloque el aumento de la ATP nuclear (Fig. 2, E y F, y Fig. S2,
H e I), explicando el efecto inhibidor de la oligomicina antes pero no despus de la exposicin
hormonal (Figura 1D y Figura S1N). La hiptesis de que despus de ~ 10 min de la exposicin
hormonal, suficiente NAD + se ha acumulado (Figura 2B) para mantener la generacin de ADPR
y ATP nuclear.
Por el contrario, la generacin de AMP por mutantes T45 slo fue afectada ligeramente por PPi
(valores de S5, F a J, Kd de tipo salvaje, 3,90 0,41 mM, T45A, 4,44 0,53 mM, T45D, 1,84
1,07 mM).
Nuestro trabajo describe un mecanismo para la generacin de energa en los ncleos de las
clulas de cncer de mama expuestas a la hormona. El alto costo energtico de la modificacin
global de la cromatina se cubre mediante la conversin de ADPR a ATP y ribosa-5-fosfato
talyzed por la forma desfosforilada de NUDIX5.
La va se enciende mediante ATP mitocondrial requerido para la sntesis de NAD + mediada por
NMNAT1, que se convierte en PAR por PARP1 activado e hidroliza a ADPR por PARG (Figura S7,
C y D). Los niveles de ATP nuclear aumentan despus de la exposicin hormonal
independientemente de las fuentes mitocondriales y citoplasmticas de ATP, pero dependen
de la ADPR y PPi nucleares. Este ATP nuclear es necesario para la remodelacin de la
cromatina, la regulacin transcripcional y, en ltima instancia, la proliferacin celular.
La correlacin con la alta expresin de PARP1 (figura S8C) puede sugerir que las clulas
cancerosas dependen de la generacin nuclear de ATP. Por lo tanto, NUDIX5 es un objetivo
prometedor para la terapia de frmacos combinatoria PARP1 (20).