Cromatografia en Capa Fina

PRODUCCIN DE METABOLITOS
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
INTRODUCCIN
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar
molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza
frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos,
nucletidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de
polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste de
una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia de
inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase mvil,
viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la
fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un
gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una placa
de vidrio, aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida puede ser rgida o
flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento
depender del tipo de molculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas
placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un
solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla de ambos.
El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centmetro del
borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en
un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequea cantidad del
solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subir por
capilaridad e ir arrastrando las molculas, las cuales se movern segn la

afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que
se est analizando presenta color, se vern los distintos colores migrando a
distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algn
tratamiento con una sustancia desarrolladora para poder determinar la
presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador depender
del tipo de molculas que se analizan.
OBJETIVOS
Realizar la separacin de la mezclas de sustancias a travez de la
cromatografa en capa fina.
MARCO TEORICO
Concepto de cromatografa
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms
compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria
y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles,
dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slido-lquido (capa
fina, papel o columna), lquido-lquido y gases-liquido (fase vapor).
Todas las tcnicas cromatografas dependen de la distribucin de los
componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada
tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en
relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un
lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo
un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta
produciendo "manchas" de los componentes.
En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente
utilizado.
El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un
soporte rgido, que pueden ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los
tamaos de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 10 x20 y 5x2 cm.
Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la
identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son
coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado.
Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.
Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la
fase estacionaria.
La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o
agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala,
stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y
metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la
muestra.
Pureza de los disolventes.
Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
pueden revelarse mediante:
Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el
nmero que aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de
excitacin del indicador utilizado"
La introduccin de la placa en vapores de yodo
El roco con una solucin de (dentro de un compartimiento especialmente
protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar

intensamente, por ejemplo, con un mechero. Hasta carbonizar los
compuestos.
MATERIALES
Porta objeto
Vaso de precipitado
Mortero
Pipeta
Esptula
Tubos capilares
REACTIVOS
Silica gel
Alcohol
Agua
cido actico
Tetracloruro de carbono
PROCEDIMIENTO
Primeramente se moli la silica gel en el mortero por un periodo de 30
minutos aproximadamente.
Despus se mezcl con un solvente hasta que pueda quedar una mezcla
homognea.
Se coloc las muestras en los portaobjetos para luego puedan secarse,
se dej por una semana.

Una vez que la mezcla est seca se procede a aplicar las mezclas que en
este caso fueron hojas de una planta desconocida.
Se colocaron mnimas gotas en las mezcla seca sin daa las placas para
poder obtener un buen resultado
Una vez puestas las muestras en las placas se procede a realizar las
pruebas de solubilidad con los diferentes solventes.
RESULTADOS
Tetracloruro de carbono
Frente: 6 cm
Color naranja: 3.8 cm
distancia muestra
Rf
distancia frente
3.8 cm
Rf
6 cm
Rf 0.633
Etanol con agua 50% - 50%
Frente: 3.6 cm
Color verde: 0.9 cm
distancia muestra
Rf
distancia frente
0.9 cm
Rf
3.6 cm
R f 0.25
Color amarillo: 2.6 cm

distancia muestra
Rf
distancia frente
2.6 cm
Rf
3.6 cm
R f 0.722
Alcohol cido actico
Frente: 3.6 cm
Color naranja: 2.6 cm
distancia muestra
Rf
distancia frente
2.6 cm
Rf
3.6 cm
R f 0.7222
ANEXOS

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PRODUCCIN DE METABOLITOS

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar

molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza

frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos,

nucletidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de

polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste de

una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia de

inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase mvil,

viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la

La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un

flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento

placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un

El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centmetro del

borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en

un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequea cantidad del

solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subir por

capilaridad e ir arrastrando las molculas, las cuales se movern segn la

afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que

se est analizando presenta color, se vern los distintos colores migrando a

distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algn

tratamiento con una sustancia desarrolladora para poder determinar la

presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador depender

del tipo de molculas que se analizan.

Realizar la separacin de la mezclas de sustancias a travez de la

cromatografa en capa fina.

La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms

y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles,

dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slido-lquido (capa

fina, papel o columna), lquido-lquido y gases-liquido (fase vapor).

Todas las tcnicas cromatografas dependen de la distribucin de los

lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.

un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por

capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta

produciendo "manchas" de los componentes.

En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancias

depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente

El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un

Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la

identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son

coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado.

Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.

Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la

La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.

Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o

agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala,

stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y

metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la

Pureza de los disolventes.

Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina

pueden revelarse mediante:

estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el

nmero que aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de

excitacin del indicador utilizado"

La introduccin de la placa en vapores de yodo

El roco con una solucin de (dentro de un compartimiento especialmente

protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar

intensamente, por ejemplo, con un mechero. Hasta carbonizar los

Primeramente se moli la silica gel en el mortero por un periodo de 30

Se coloc las muestras en los portaobjetos para luego puedan secarse,

se dej por una semana.

este caso fueron hojas de una planta desconocida.

poder obtener un buen resultado