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Se define esterilidad a la condicin de ausencia de cualquier

microorganismo. Significa destruccin de toda forma de vida microbiana


incluyendo esporas. Los mtodos de esterilizacin ms usados en el
laboratorio son calor seco, calor hmedo, flameado, utilizacin de
soluciones qumicas.

La desinfeccin se refiere a la reduccin de los organismos patgenos


(organismos que ocasionan enfermedades). Los desinfectantes de
acuerdo a su composicin qumica se clasifican en: Fenoles, Hipocloritos
(cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario,
Formaldehdos, Perxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel,
de nivel intermedio o de alto nivel.

Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden


destruir la mayor parte de las formas vegetativas bacterianas, tanto
grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus con envoltura
lpidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacterium spp, ni las
esporas bacterianas.

Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las


formas bacterianas vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis,
la mayora de los virus (virus con y sin envoltura) y hongos
filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas
bacterianas.

En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehdos, perxidos,


hipocloritos) consiguen destruir todos los microorganismos, excepto
algunas esporas bacterianas.

Calor seco que se efecta en estufas de aire seco u hornos Pasteur y


se manejan temperaturas entre 160 180C, por un espacio de dos
horas aproximadamente.Este mtodo se utiliza para esterilizar
el material de vidrio generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y
erlenmeyers. No se debe emplear para esterilizar medios de cultivo o
agua pues se evaporan hasta secarse. Previo al horneado el material de
vidrio se recubre con papel Kraft y se sella con cinta indicadora de
esterilidad, una vez realizado el proceso de esterilizacin se revisa la
cinta la cual debe tornarse de color caf oscuro lo que indica una
correcta esterilizacin. El calor seco tambin se utiliza para secar
material de vidrio como tubos y pipetas, este material se deja en el
horno por dos horas a 60C. Las lminas y laminillas se secan con un
trapo suave. Los dems materiales se secan a temperatura ambiente.
Calor hmedo en autoclave se utiliza para esterilizar medios de
cultivo preparados, escobillones, gasas entre otros. Adicionalmente se
tiene otra autoclave para descontaminar cultivos antes de ser
desechados. El autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer
el material a esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullicin del
agua, gracias al aumento de la presin. El autoclave se opera a presin
de 15 lb. y a 121C. El tiempo de exposicin depende del material y
volumen que se esterilice, pero en general esta comprendido entre 15 y
30 minutos.

Manejo de la autoclave

o Verificar que la autoclave este apagada (off). Retirar la olla de


aluminio y la rejilla del recipiente de esterilizacin.

o Llenar el tanque de agua hasta el nivel indicado (aproximadamente


hasta una altura de 2 pulgadas) cubriendo la resistencia. Usar agua
destilada para evitar que los sistemas de abastecimiento de agua se
obstruyan.

o Llenar la olla de aluminio con el material a esterilizar de tal manera


que el aire pueda circular durante el proceso de esterilizacin. Cubrir los
elementos con toalla de papel para absorban la humedad que pueda
caer de la cubierta.

o Colocar la rejilla, luego la olla de aluminio con el material a esterilizar


en el interior de la autoclave.

o Colocar la tapa sobre el contenedor de la autoclave de manera que la


flecha de la cubierta y el contenedor coincidan, luego insertar el tubo
flexible de salida de aire en el canal que est situado en el interior de
olla de aluminio.

o Ajustar y cerrar los pernos para evitar desajustes. Nota: siempre que
se cierre un perno debe cerrarse luego el opuesto al cerrada.

o Colocar el botn de control del termostato en alto y el interruptor en


encendido (on).
o Abrir la vlvula de control por 5 minutos para que el vapor que se
genere en el fondo del recipiente sea expulsado y la presin aumente.
Verificar en el manmetro

o Cuando la presin este en 18 a 20 lb/pulg2 (p.s.i) controle la


temperatura con el botn del termostato mantenindolo en la posicin
bajo (low)

o Encender la autoclave (on).

o Mantener el tiempo de esterilizacin requerido) mnimo 15


minutos). Cuando el reloj llegue a cero el ciclo de esterilizacin habr
finalizado. Apagar la autoclave y finalmente abrir la vlvula para igualar
presiones.

El desecho de material de cultivo se realiza diariamente previo al lavado


del material, autoclavando todos los desechos biolgicos y los
recipientes que los contengan a 121C por una hora. Posteriormente el
contenido lquido de estos recipientes se descarta en la tubera, dejando
caer abundante agua. El contenido slido se coloca en bolsa roja la cual
debe ser sitio de almacenamiento temporal por un mximo de 5 das.

Flameado usado principalmente para asas, es otro mtodo de


esterilizacin comn usado en el laboratorio. Consiste en poner el asa
con la cual se va a hacer el cultivo, durante unos minutos en la llama del
mechero.

Empleo de soluciones qumicas: para superficies, equipos, mesas y


lavamanos se debe preparar hipoclorito de sodio al 5% a 500 ppm. Para
obtener esta solucin se mezclan 10 ml de hipoclorito con 990 ml de
agua y se obtiene un total de 1 litro de dilucin.

El lavado del material de laboratorio se debe realizar a diario, utilizando


hipoclorito de sodio a 5.000 ppm y extran alcalino o neutro dependiendo
de la clase de material. El material se debe dejar en esta solucin
durante 2 o 3 horas. Posteriormente se procede al lavado por separado
y en diferentes condiciones de acuerdo al material, todo realizado con
los elementos de aseo y proteccin personal requeridos. Lminas y
laminillas se limpian con un cepillo. Tubos y pipetas se deben limpiar
con churrusco. Cada elemento se enjuaga con agua fra. El material
lavado se sumerge en un recipiente con agua destilada y posteriormente
se pone a escurrir.
Despus de lavado el material se realiza la prueba de Azul de
Bromotimol. Esta prueba consiste en seleccionar al azar diferentes
elementos lavados y agregar 3 gotas de azul de Bromotimol 0.1% y
observar si se desarrolla un cambio de color. El viraje a color azul indica
la presencia de detergente residual, en cuyo caso se vuelve a lavar el
material y se realiza nuevamente la prueba. El no desarrollo de color
indica que el material ha sido lavado correctamente.