PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

COD. GL-PL-19

Cambio de logo Celina Obregn Loida Zamora Loida Zamora

2 29-02-2016
institucional Apoyo a Procesos Directora SILAB Directora SILAB
Cambio de logo Celina Obregn Loida Zamora Loida Zamora
1 09-11-2015
institucional Apoyo a Procesos Directora SILAB Directora SILAB

Documento Carlos Doria

Martha Garca Leanis Pitre
0 Coordinador lab. de 17-06-2013
inicial Ing. Qumica
calidad ambiental
Dir.SILAB

REV. No. DESCRIPCION ELABOR REVIS APROB FECHA

APROBADO: _______________________

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 1 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

CONTENIDO

1. OBJETO .............................................................................................................. 3
2. APLICACIN ....................................................................................................... 3
3. DEFINICIONES ................................................................................................... 3
4. FUNDAMENTO DEL MTODO ........................................................................... 3
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES ................................................................ 3
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN...................... 3
7. MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................. 4
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES ............................................................................ 4
9. PROCEDIMIENTO .............................................................................................. 5
10. CLCULOS ....................................................................................................... 6
11. AUTORIDAD ..................................................................................................... 6
12. FORMATOS ...................................................................................................... 6
13. REFERENCIAS ................................................................................................. 7

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 2 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

1. OBJETO

Describir la metodologa a seguir para determinar Amonio en aguas.

2. APLICACIN

El mtodo del Fenato (SM 4500 NH3 F), conocido tambin como la tcnica colorimtrica
de cuantificacin del Azul de Indofenol, es aplicable tanto para agua dulce como para
agua de mar y es lineal para 0.6 mg NH3-N/L.

3. DEFINICIONES

Amonio: Es un catin poliatmico cargado positivamente de frmula qumica NH4+. Se

produce por la reaccin del amonaco, que es una base dbil con cidos de Bronsted
(donantes de protones).

4. FUNDAMENTO DEL MTODO

El in amonio resulta de la reduccin de nitratos u oxidacin de materia orgnica, sin

embargo, dependiendo del pH del medio, sus concentraciones pueden variar
transformndose en amonaco, lo cual quiere decir, que a pH superiores a 9.2, el
amoniaco (NH3) tiende a incrementar pero el amonio (NH4) disminuye, mientras que a pH
menores, el amonio (NH4+) se aumenta y el amonaco disminuye.

El mtodo de Fenato conocido tambin como la tcnica colorimtrica de amonio (azul de

indofenol), se basa en que un compuesto de color azul intenso, indofenol, se forma por la
reaccin del amonio, con el fenol favorecido por el in hipoclorito en condiciones alcalinas,
catalizada por el nitroprusiato de sodio el cual favorece la intensidad del color en la
reaccin, y puede ser leda a 640 nm.

5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES

Complejos de Mg++ y Ca++ con citrato de sodio eliminan interferencias producidas por la
precipitacin de estos iones a un pH alto, ya que el citrato sirve como quelante. El
nitrgeno trivalente no produce interferencias.

Las interferencias producidas por turbidez se remueven con destilacin o filtracin.

Si el sulfuro de hidrgeno est presente, eliminar por acidificacin de la muestra a pH 3

con HCl diludo y airear vigorosamente hasta que el olor de sulfuro ya no se pueda
detectar.

Otras interferencias las causan durezas mayores a 400 mg CaCO3 MgCO3/L; al igual
que alcalinidad mayor a 500 mg CaCO3/L.

6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN

Las muestras se recolectan en botellas Niskin, Nansen u otras adecuadas, y de stas, se

transfieren a una botella plstica de 500 ml, previamente lavada y purgada.

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 3 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

Generalmente, la cantidad colectada en la ltima botella, sirve para efectuar todos los
anlisis de nutrientes.

Previo al anlisis es necesario filtrar la muestra para evitar las interferencias por el
material suspendido. Si las muestras van a ser analizadas dentro de las 24 horas de
colectadas se debe refrigerar a 4C sin acidificar. Si esto no es posible se deben
almacenar por un tiempo mximo de 28 das en un sitio oscuro y congeladas a 20C sin
acidificacin, o acidifique a pH menor a 2 y refrigere a 4C. Si preserva acidificando,
neutralice la muestra con NaOH o KOH inmediatamente antes de realizar la
determinacin. Es preferible el uso de congelacin instantnea con CO2.

Nota: Aunque la acidificacin es adecuada para ciertos tipos de muestras, produce

interferencias cuando amonio intercambiable est presente en slidos sin filtrar.

7. MATERIALES Y EQUIPOS

- Espectrofotmetro VIS con un rango de 400 900 nm

- Celdas de vidrio con 10 1 cm de paso ptico
- Dosificadores o pipetas de 1 mL
- Dosificadores o pipetas de 2 mL
- Pipetas aforadas de 25, 10, 5, 2 y 1 mL
- Probetas de 100 y 50 mL
- Matraces aforados de diferentes capacidades
- Vasos de precipitado (beaker o erlenmeyer) de 100 o 250 mL
- Bomba de vaco
- Filtro de nitrocelulosa con dimetro de poro de 0.45 m
- Papel aluminio o pelcula plstica transparente (envoplast)

8. REACTIVOS Y SOLUCIONES

- Agua desionizada: Debe utilizarse agua recientemente desionizada para la preparacin

de reactivos, estndares y blancos, la cual se debe almacenar en recipiente de vidrio
bien tapado. El incumplimiento de esta precaucin conduce invariablemente a una
cuantificacin deficiente del amonio.

- Solucin de fenol: Disolver 25 g de fenol (C6H5OH) R.A. en 250 ml de etanol (C2H5OH)

al 95%. Almacenar la solucin refrigerada a 4C en frasco mbar

- Solucin de nitropruciato de sodio [Na2Fe (CN)5 NO.2H2O](0.5% p/v): Disolver 0.5 g de

Nitropruciato de sodio en 100 ml de agua desionizada. Almacenar refrigerada en botella
de color mbar por un tiempo mximo de Un (1) mes.

- Reactivo alcalino: Disolver 100 g de citrato de sodio (C6H5Na3O7.2H2O) R.A. y 5 g de

hidrxido de sodio (NaOH) en agua desionizada. Diluya hasta 500 ml. Almacenar en
recipiente de vidrio (La solucin es estable durante varios meses).

- Hipoclorito de sodio (NaClO): Solucin comercial cercana al 5%. Esta solucin de

descompone lentamente una vez destapado la botella. Reemplazar cada 2 meses.

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 4 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

- Solucin oxidante: Mezclar 60 ml del reactivo alcalino y 15 ml de hipoclorito de sodio al

5%.. Es preciso mantener la solucin tapada mientras no est en uso. Debe prepararse
esta mezcla nicamente el da que se va a utilizar, los sobrantes deben descartarse.

- Solucin estndar de amonio: Disolver 0.0535 g de cloruro de amonio (NH4Cl) grado

analtico (previamente seco a 104 C durante dos horas), en 100 mL de agua
desionizada. Adicionar 50 L de cloroformo como preservante y almacenar refrigerada;
la solucin bien sellada es estable por varios meses. La concentracin de esta solucin
es de 10000 g-at N./L.

9. PROCEDIMIENTO

9.1 CALIBRACIN

- Stock secundario: Medir 1 mL de la solucin patrn y diluir hasta 100 mL con agua
desionizada; la concentracin de esta solucin es de 100 mol/L

- Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 mL del stock secundario y completar a 25 mL con
agua desionizada. Las concentraciones de estas soluciones son: 1.0; 2.0; 3.0; 4.0 y 5.0
g-at N/L respectivamente; o seleccionar concentraciones que estn en el rango de
trabajo de las muestras.

- Aplicar el proceso descrito para la muestra y el blanco.

- Aplicar regresin lineal a los resultados y calcular la concentracin de la siguiente forma.

Determine la pendiente (m) y el intercepto (b) de la curva de calibracin (Y= mX + b)

Abs = C * m + b

Y= Abs = valor de la absorbancia del estndar

X = C = Concentracin estndar ( g-at N/L)
b = intercepto

Nota: La curva de calibracin se realiza una vez, y cuando se presente un cambio

significativo en el ensayo. Se recomienda renovar cada 2 meses

9.2 ANALISIS

- Homogenizar la muestra y filtrarla antes de proceder al anlisis, si hay presencia de

material en suspensin

- Tomar 25 mL de muestra y verterla en un beaker o erlenmeyer

- Adicionar 1 mL de solucin de fenol, agitar y mezclar completamente.

- Agregar 1 mL de nitroprusiato de sodio, agitar y mezclar completamente.

- Adicionar 2.5 mL de solucin oxidante, agitar y mezclar completamente.

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 5 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

- Mantener el recipiente que contiene la muestra tapado con papel aluminio o pelcula
plstica y en la oscuridad, en una habitacin entre 20 y 27C durante 1 hora.

- La muestra tornar azul y la intensidad del color es proporcional a la concentracin de

amonio en la muestra. El color es estable por 24 horas.

- Leer la absorbancia a 640 nm para todas las muestras. En caso que la lectura de
absorbancia en la muestra exceda el rango espectrofotomtrico, diluirla con agua
destilada y procesar nuevamente.

- Siga el mtodo descrito para la muestra usando 25 mL de agua desionizada.

Nota: Se deben usar guantes y gafas protectoras cuando manipule fenol; ya que es un
veneno protoplasmtico (provoca la destruccin generalizada de clulas, seguida de falla
de los rganos) y es extremadamente corrosivo en su forma lquida o polvillo. Ingresa al
organismo por la piel o por ingestin. El contacto con los ojos puede provocar incluso la
ceguera y la ingestin de 1g puede ser fatal. Es irritante al tracto respiratorio, sin
embargo, su baja volatilidad hace que la inhalacin sea un riesgo menor. Aplique
ventilacin adecuada para minimizar la exposicin del personal a estas sustancias txicas
voltiles.

10. CLCULOS

De la curva de calibracin se obtiene directamente la concentracin de la muestra, as:

Abs b
C
m
C = Concentracin de la muestra en g-at.N/L (microgramo-tomo de N/L)
Abs = Absorbancia de la muestra corregida (menos la absorbancia del blanco)
b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de regresin

Nota: Si realiz dilucin debe tener en cuenta el factor de correccin, por el cual se
multiplicar el resultado obtenido al sustituir valores en la ecuacin.

11. AUTORIDAD

Director tcnico: Posee autoridad para decidir acerca del uso de equipos y la realizacin,
suspensin, reanudacin o reprogramacin de una prueba.

Responsable de calidad: Decide sobre la repeticin de una prueba.

Tcnico Analista titular o suplente y/o Auxiliares: Autoridad para decidir el encendido
de equipos, si se requiere, tomar las muestras, realizar las lecturas pertinentes y repetir
las pruebas cuando sea necesario.

12. FORMATOS

Datos de Anlisis Espectrofotomtricos GL F 23

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 6 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16
 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

13. REFERENCIAS

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Phenate Method
4500 NH3 F. American Public Health Association, American Water Works Association,
Water Pollution Control Federation. 21st ed., New York, 2005.pp 4-114.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS-INVEMAR. Manual de

tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes
marinos (Aguas, Sedimentos y Organismos). Santa Marta, 2003. p.40. Disponible en:
<http://www.invemar.org.co/redcostera1/invemar/docs/7010manualTecnicasanaliticas.pdf
>

ORDUZ, Sergio y ERAZO Edna. Anlisis de las caractersticas Fsicoqumicas de aguas

y suelos de cultivos acucolas intensivos y superintensivos. CENIAGUA -COLCIENCIAS.
Bogot, 2009. p.29 Disponible
en:<http://www.ceniacua.org/archivos/CARTILLA_FORTALECIMIENTO_2009.pdf>

GL-PL-19 Celina M. Obregn R. Loida P. Zamora C Loida P. Zamora C. GL-I-04

Pgina 7 de 7
ELABOR REVIS APROB REV.2/ FEB / 16