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FROMACION DE PRODUCTOS,

METABOLISMO E INGENEIRIA
METABOLICA
I.- FORMACION DE PRODUCTOS
La velocidad de formacin de producto en un proceso
microniano puede expresarse por:

Donde, qp es la velocidad especfica de formacin de


producto.
La productividad, puede ser mejorada entonces
aumentando X, qp o ambos.

Los productos segn su funcin metabolica, pueden ser:


I. Productos finales del metabolismo primario.
II. Productos intermedios de metabolismo primario.
III. Productos de metabolismo secundario (OEA, 2006)
1.1. Productos finales del metabolismo
primario.
Como el etanol, cido lctico, actico, butrico, butanol, y
otros compuestos asociados a procesos anaerobios.
La estrategia para la obtencin de estos productos consiste
en lograr primero una concentracin celular elevada, y luego
limitar el contenido de nitrgeno, para impedir la duplicacin
al no poder sintetizar ms componentes estructurales, y de
modo que la fuente de carbono se use para mantenimiento,
y formacin de producto.
Ejemplo. La obtencin del etanol por levadura puede
dividirse en dos etapas: la primera es aerobia, con una
relacin C/N apropiada para el crecimiento del
microorganismo. La segunda etapa anaerobia, en un medio
con baja concentracin de nitrgeno y elevada
concentracin de glucosa, la cual es convertida en un 90%
en etanol y CO2 .
1.2. Productos intermedios de
metabolismo primario.
Como aminocidos, nucletidos, vitaminas, y enzimas.
Se pretende lograr una regulacin anormal del metabolismo, de
modo que la fuente de carbono y energa se derive hacia la
formacin de un metabolito intermedio.
Regulacion del metabolismo. Por Ingeniera de vas metablicas
(IVM). Es la modificacin racional de las reacciones que
constituyen el metabolismo de un organismo (Jimnez y Gosset).
La regulacin se realiza por: la actividad enzimtica y la sntesis
de las enzimas.
Regulacin de la actividad enzimtica, se produce
generalmente por: inhibicin de enzimas alostricas.
Ejemplo: en clulas anaerobias facultativas la fermentacin es
bloqueada en presencia de O2, asegurando una respiracin, que
es mas eficiente.
La clula posee mecanismos para coordinar las protenas que
son necesarias dependiendo de las condiciones externas.
Regulacin de la sntesis de enzimas, como el opern
lactosa. Hay tres enzimas que participan en la utilizacin
de la lactosa (-galactosidasa, galactsido permeasa y
galactsido transacetilasa), las cuales tienen un promotor
nico.
En ausencia de lactosa, la transcripcin para estas
enzimas est bloqueada por un represor que se une al
promotor inhibiendo la accin de la ARN polimerasa.
Cuando se agrega lactosa al medio, sta se une al
represor, bloqueando de este modo su accion y
permitiendo la accin de la ARN polimerasa y la sntesis de
las tres enzimas anteriormente mencionadas.
1.3. Productos de metabolismo secundario.

Pertenecen a este grupo los antibiticos, las toxinas, los


alcaloides y las giberelinas.
Frecuentemente los precursores especficos para la
biosntesis de estos productos son obtenidos por
modificacin de metabolitos primarios.
Por otra parte, estos precursores suelen ser limitantes de
la biosntesis.
La mayora de los productos de este grupo comparten la
propiedad de formarse cuando los microorganismos se
encuentran en fase estacionaria. (OEA,2006)
II.- METABOLISMO PRIMARIO
Fases del metabolismo primario.
Se divide en dos procesos conjugados: catabolismo y
anabolismo.
Las reacciones catablicas; como la gliclisis, liberan
energa.
Las reacciones anablicas, utilizan la energa liberada para
construir enlaces qumicos y los componentes celulares como
protenas y cidos nucleicos.

En los procesos
catablicos se produce
energa en forma de ATP
y poder reductor como
NADH, la misma que se
utiliza para la biosntesis
durante el anabolismo .
2.1.- Catabolismos
Los organismos tienen un catabolismo que se clasifica
segun:
1. La forma como obtiene el carbono para la construccin
de la masa celular:
Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono.
Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos
(glucosa).
2. La naturaleza del donador de electrones:
Litotrofo. Los equivalentes reductores son compuestos
inorgnicos.
Organotrofo. Los equivalentes reductores son compuestos
orgnicos.
3. La forma en la que el organismo obtiene energa:
Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos
qumicos.
Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.
2.1.1.- Quimiorganohetertrofo
Oxidan los compuestos orgnicos para producir energa
(catabolismo) y usan su carbono para sintetizar material
celular (anabolismo).
Estos microorganismos son responsables de la
degradacin de los polmeros orgnicos naturales como
celulosa, quitina, etc.

El catabolismo hetertrofo puede ocurrir por fermentacin


o por respiracin.
2.1.1.1.- Fermentacin
Es un proceso catablico que sucede en ausencia de un aceptor
externo de electrones, con oxidacin incompleta del sustrato.
Los compuestos orgnicos producidos son generalmente cidos
orgnicos cortos y alcoholes (etanol, acetato, lactato, butirato, etc).
Los organismos que fermentan, oxidan el NADH a NAD+
reduciendo un compuesto orgnico intermedio como el piruvato, y
no utilizan la cadena de transporte de electrones.

Hay 3 vas de fermentacin de la glucosa:


Embden-Meyerhof.
Va Heterolctica, o de la fosfocetolasa
Entner-Doudoroff
a.- Va Embden-Meyerhof-Parnas
Estas fermentaciones pueden llevar a un amplio espectro
de productos dependiendo de los pasos de reduccin del
piruvato y oxidacin del NADH.H.
a.1.- Fermentacin alcohlica.
Puede producirse por la via EMP y la via Entner-Duodoroff. La via
ED es capaz de lograr mayor cantidad de producto,
Levaduras Zymomonas mobilis
Fermentacin gliceropiruvica
En la fermentacin alcohlica
siempre se produce glicerina.
Normalmente la DHAP se
isomeriza en GAP, sin embargo
pequeas cantidades de DHAP
no pasan a GAP y se degradan
oxidando al NADH2, para formar
NAD y glicerina.
El NADH2 entonces, puede
reducir al acetaldehido o a la
DHAP.
El acetaldehdo es ms fcil de
reducir y fija preferentemente
los hidrgenos del NADH2
cuando los dos compuestos
estn en concentraciones
equivalentes.
Si no hay acetaldehdo disponible (como ocurre al
inicio de la fermentacin), la DHAP actua como
aceptor de hidrgeno.
En vino, aproximadamente el 8% de la glucosa,
sigue la va de la fermentacin gliceropirvica y el
92% la de fermentacin alcohlica.
Por eso la glicerina es el segundo componente
ms abundante del vino despus del etanol.
Aadiendo sulfito se fija al acetaldehdo, que ya no puede ser
utilizado como aceptor de hidrogeno, y la reoxidacin del
NADH se hace a partir de la DHAP, formando un mol de
glicerina por cada mol de glucosa fermentada.
Usos de la glicerina.
En la elaboracin de resinas alqudicas.
Para la tinta de los tampones de sellar.
Por su alta viscosidad y no toxicidad, como lubricante en
mquinas procesadoras de alimentos.
La elaboracin de cosmticos como jabones de tocador,
crema hidratante, lquidos para la piel o cabello.
En medicina, como excipiente para elaboracin
de medicamentos.
Anticongelante (baja el punto de fusin del agua).
Produccin de nitroglicerina. Explosivo. Se obtiene
industrialmente por adicin de glicerina sobre una mezcla de
cido ntrico y sulfrico concentrado, a muy baja temperatura
(entre 10 20 C).
a.2.- Fermentaciones lcticas
Las bacterias acido lcticas
(BAL) producen cido lctico.
Esto sucede en dos formas:
Homofermentativa.
Propia de los gneros
Lactococcus, Streptococcus,
Enterococcus, Pediococcus y
algunas especies de
Lactobacillus.
Metabolizan la glucosa a
piruvato por la ruta Embden-
Meyerhof-Parnas,
obtenindose cido lctico
por fermentacin de lactosa
(glucosa y galactosa).
Heterofermentativa,
propia del gnero
Leuconostoc y de algunas
especies de
Lactobacillus.
La fermentacin de la
glucosa tiene lugar por la
ruta de la fosfocetolasa.
Los productos de esta
va son cido lctico, CO2
y cantidades variables de
acido actico y etanol.
Este metabolismo se ve
favorecido en aerobiosis,
lo que permite desviar el
acetil-CoA hacia la
sntesis de acido actico y
generar una molcula
extra de ATP. (Snchez,
2005)
Otros productos de las fermentaciones lcticas.
Produccin de aromas
La produccin de diacetilo y acetona
sucede cuando hay exceso de
piruvato en la clula
homofermentativa en relacin con las
necesidades de regeneracin de
NAD+.
Esto puede ocurrir por existencia en
el medio de una fuente de piruvato
adicional al carbohidrato fermentado
o que otro compuesto acte como
aceptor de los electrones del NADH.
En leche hay citrato (~1.5 mg/mL),
que las BAL pueden transformar en
piruvato, va oxalacetato, y producir
diacetilo y acetona.
El diacetilo es el responsable del
aroma tpico a mantequilla y participa
en las caractersticas organolpticas
del yogur junto al acetaldehdo y el
lactato.
El citrato sigue rutas variables, asi en Leuconostoc:
El citrato se transporta al interior de la clula mediante la
enzima citrato permeasa, que se activa a pH menor a 6,
por lo que la actividad acidificante que ejercen los
lactococos en un cultivo mixto es esencial para que se
produzca la funcin aromatizante de los leuconostocs.
Una vez en el citoplasma, el citrato es degradado a
oxalacetato y cido actico mediante la citrato liasa, de
sntesis inducible.
El actico se excreta al exterior, mientras que el oxalacetato
se decarboxila originando piruvato y CO2.
Este aporte adicional de piruvato no origina la reduccin del
NAD+, y puede desviarse hacia la sntesis de diacetilo,
acetona, 2,3-butanodiol, acetaldehdo, o hacia la formacin
de actico, con sntesis de una molcula de ATP (Sanchez,
2005)
Produccin de exopolisacridos
Algunas bacterias lcticas pueden sintetizar polisacridos
extracelulares (EPSs). Se trata de polmeros de cadena
larga y que se disuelven o dispersan en agua y que
contribuyen a mejorar la textura y viscosidad del producto
fermentado.
La sntesis de dextrano ocurre por accin del enzima
dextransacarasa, de expresin inducible por sacarosa.
Este enzima utiliza la energa del enlace de la sacarosa
para catalizar la transferencia de una molcula de glucosa a
la cadena del polmero, liberndose una molcula de
fructosa.
Otra posibilidad es que la molcula de glucosa se una a
otro receptor diferente, como la maltosa, originndose en
este caso oligosacridos no digeribles con propiedades
prebiticas interesantes, algunos de los cuales se
comercializan para nutricin humana y dermocosmtica
(Sanchez, 2005).
b.- Respiracin
Es la oxidacin de los sustratos, que ocurre con transporte
de electrones hasta un aceptor final externo.
Puede ser de dos tipos:
Aerobia: el aceptor final de electrones es O2 (se reduce y
se forma H2O).
Anaerobia: el aceptor final de electrones no es O2.

b.1. Respiracin aerobia.

Si el sustrato es glucosa,
se tiene:
Gluclisis + Ciclo (TCA)
En el ciclo TCA, se
produce la formacin de
NADH2 reducido, que
entrega sus electrones y
protones a la cadena
transportadora
Produccion de acido citrico
Seproduce con
Aspergillus niger en
cultivo sumergido.
El acido ctrico es un
producto intermedio
del TCA, producido a
partir de glucosa segn
la va EMP, que en
ambiente aerbico da
como resultado acetil-
coA.
Acetil-CoA entra en el
ciclo de Krebs, donde
reacciona con el cido
oxalactico para
formar acido ctrico por
accin de la citrato
sintasa
Se debe bloquear la enzima aconitasa que cataliza la reaccin
sucesiva, que transforma citrato en isocitrato. Para eso se agrega
EDTA que secuestra el Fe (cofactor de la aconitasa), o se agrega
Cu que se enlaza con la aconitasa, desplazando al Fe.
Proceso:
Como materia prima, se puede utilizar la melaza de caa, o
residuos amilceos del maz.
Filtracin y tratamiento de la melaza con resinas de intercambio
inico. (para eliminar iones como Mg, Zn, Fe y sobretodo el Mn
que favorece la produccin de acido oxlico)
Fermentacion a pH entre 2,8 y 1,5 y temperatura entre 28oC y
33oC por 6 a 15 das (segn la materia prima utilizada), con
eficiencia de 70 80% del carbohidrato inicial.
Filtracin (para remover clulas y otros residuos solidos)
Agregado de Ca(OH)2 para precipitar citrato de calcio
Filtracin del precipitado que luego se disuelve con cido sulfrico
formando acido ctrico y sulfato de calcio, seguido de filtracin.
Purificacin en columnas con carbn activado y columnas con
resinas de intercambio inico.
Concentracin, cristalizacin, centrifugacin, secado
b.2.- Respiracin anaerobia
Los organismos anaerobios utilizan aceptores de electrones,
como: el sulfato, el nitrato, CO2, Fe3+, etc., en lugar del O2

En este proceso tambin hay una cadena transportadora


de electrones similar a la de aerobios en la que se reoxida
NADH.H.
Respiracin anaerobia.
b.2.1.- Denitrificacin
Desnitrificacion.
Es la reduccin del nitrato a nitrito y, despus a N2 en presencia de
fuente de carbono orgnico.
El nitrato y el nitrito reemplazan al oxgeno como aceptores de
electrones en la respiracin microbiana, por lo que la
desnitrificacin se produce en ambientes anxicos.
Desnitrificacin con metanol como fuente de carbono orgnico
6O3 + 5H3OH 32 + 5O2 + 7H2O + 6OH
Desnitrificacin hetertrofa. En condiciones anxicas por
Pseudomonas, Paraccocus, Alcaligenes, Thiobacillus, Bacillus,
ocurre usando un sustrato orgnico como fuente de carbono y
energa (metanol, etanol, cido actico, glucosa, etc.).
La oxidacin del cido actico:
1.25 CH3COOH + 2NO3- ---- 2.5CO2 + N2 + 2OH- + 1.5 H2O.
b.2.2.- Reduccin de sulfatos
En algunos sistemas anaerbicos, el sulfato, es el aceptor
de electrones, y se reduce a sulfuro (H2S).
Otros pueden utilizar compuestos oxidados, como sulfito,
tiosulfato o azufre elemental, y producen (H2S).
SO4 ----- H2S
Las bacterias reductoras de azufre obtienen su energa
reduciendo azufre a sulfuro de hidrgeno. Acoplan esta
reaccin a la oxidacin de acetato, succinato, hidrocarburos
tales como benceno, tolueno, etilbenceno y xileno, y se
utilizan para limpiar suelos contaminados.
Otros son auttrofos, y usan hidrgeno como donador de
electrones.
El sulfato se reduce a sulfuro
en varias etapas.
Primero. Como el sulfato es
una sustancia estable ste
debe activarse con ATP por
medio de la enzima ATP
sulfurilasa la cual une el sulfato
a un fosfato del ATP para
formar adenosina fosfosulfato
(APS), el APS puede reducirse
a sulfito (SO3-2 + AMP) por la
actividad de la enzima APS
reductasa y por ltimo el sulfito
se reduce al sulfuro (H2S) por
la accin de la sulfito
reductasa (Espinoza et al
2010)
Control de la sulfatoreduccion.
El molibdato de sodio tiene la capacidad de inhibir la
sulfato reduccin.
Esto se debe a que el molibdato posee una estructura muy
parecida a la del sulfato, de esta manera, es un inhibidor
competitivo de la ATP sulfurilasa, que convierte el sulfato
en APS y pirofosfato; por lo que, la cantidad requerida para
inhibir la sulfato reduccin ser dependiente de la
concentracin de sulfato en el medio.
El molibdato inhibe la sulfato reduccin, pero no el
metabolismo fermentativo de este grupo de las BSR.
b.3.- Reduccin de CO2
Utilizan al CO2 como aceptor
terminal de e-. El donador es
H2.
A pesar que el poder reductor
del CO2 es muy bajo, pero este
anin es uno de los ms
comunes en la naturaleza.
Lo usan las metangenas y
arqueas para producir metano.
CO2 + 4 H2 CH4 + 2H2O
Tambin existe
metanognesis de otros
sustratos como: de formato
(HCOO -), de monxido de
carbono (CO), de piruvato
(CH3COOCOH), de metanol
(CH3OH), de acetato
(CH3COO-), entre otros.
Hidrlisis
Las protenas son hidrolizadas en pptidos y aminocidos.
La degradacin de lpidos produce cidos grasos de cadena larga
y glicerol.
La velocidad de degradacin de los materiales lignocelulsicos
compuestos principalmente por lignina, celulosa y hemicelulosa, es
lenta, y suele ser la etapa limitante de la hidrlisis. La hidrlisis de
celulosa da celobiasa y glucosa, y la hemicelulosa produce
pentosas, hexosas y cidos urnicos.

ACIDOS
GRASOS AZUCARES
LIPIDOS LARGOS + SIMPLES

PROTEINAS AMINOACIDOS

AZUCARES
POLISACARIDOS
SIMPLES
Etapa fermentativa.

Se sucede en dos pasos: acidogenesis, y acetogenesis


Fermentan las molculas orgnicas solubles formando:
acidos propinico, butrico, valrico, lctico y etanol,
adems actico, frmico, H2.
Estas bacterias (facultativas y anaerbicas obligadas,
denominadas bacterias formadoras de cidos), adems
eliminan todo el oxgeno disuelto del sistema.

La mayora de microorganismos acidognicos tambin


participan de la hidrlisis. El gnero Clostridium,
Paenibacillus y Ruminococcus estn presentes en todas las
fases del proceso de fermentacin, pero son dominantes en
la fase acidognica.
Fermentacin 2 Acetogenesis

Las bacterias acetognicas (Syntrophomonas wolfei y


Syntrophobacter wolini), convierten etanol, cidos grasos
voltiles y algunos compuestos aromticos, en acetato
(CH3COO-) e hidrgeno (H2), a travs de
CH3-CH2-CH2-COOH +H2O --- CH3COOH + 2H2
Acido butrico + agua --- ac. Actico + H2
Todos los microorganismos acetognicos tienen un tiempo
de generacin de hasta 84 h.
Un grupo especial, los homoacetognicos (Acetobacterium
woodii o Clostridium aceticum) degradan azcares o
compuestos monocarbonados (como mezcla H2/CO2)
produciendo acetato, y consumen hidrogeno.
Etapa metanognica
Los microorganismos metanognicos forman metano a partir de
sustratos monocarbonados o con dos tomos de carbono unidos
por un enlace covalente: acetato, H2/CO2, formiato, metanol y
algunas metilaminas.
Las principales especies son: Methanobacterium,
Methanospirillum hungatii , y Methanosarcina.
Se pueden establecer dos grandes grupos de microorganismos,
en funcin del sustrato principal que metabolizan:
hidrogenotrficos, que consumen H2/CO2.
acetoclsticos, que consumen acetato, metanol y algunas
aminas.

H2, CO2 cido actico


(Acetato)

Bacterias
metanognicas CO 2 CO 2
Bacterias
oxidantes de H metanognicas
acetoclasticas
CH
4
Fase metanogenica
Un 70% del metano
producido, se forma a
partir de la
descarboxilacin de
cido actico, a pesar
que casi todos los
organismos
metanognicos son
capaces de utilizar el
H2 como aceptor de
electrones, y slo dos
gneros pueden utilizar
acetato.
Productos finales de la digestin anaerobia

No todos los compuestos presentes se degradan hasta


metano (biogs), tambin hay degradaciones parciales
que producen bioabono.
Biogs. Es una mezcla gaseosa formada principalmente
de metano y dixido de carbono.
Cuando el biogs tiene un contenido de metano superior
al 45% es inflamable.
El biosol constituye el lodo extrado del digestor y que
despus de ser tratado y oreado se emplea como abono
orgnico enriquecido (mezcla de molculas no difcilmente
degradables como lignina y otros, con clulas muertas).
El biol es una fuente de fitoreguladores producto de la
descomposicin anaerbica de los desechos orgnicos,
que se encuentran en solucin acuosa.
Accin conjunta de metanogenos y BSR.
El acetato, propionato, metanol e H2 puede ser utilizados por
bacterias sulfatoreductoras y metanogenicas como fuente de e-.

Cuando el sulfato se adiciona en exceso, el propionato y el butirato


son degradados ms rpido por bacterias sulfatoreductoras.
Reduccin de colorantes azo por m.o.
Anaerobios.
La decoloracin anaerobia es una reaccin de reduccin que
rompe los enlaces azo; dando aminas aromticas incoloras.
La ruptura del enlace azo involucra la transferencia de cuatro
electrones en 2 etapas sucesivas, en cada etapa se transfieren
dos electrones hacia el colorante azo, que acta como aceptor
final de electrones.

La azo reduccin qumica puede


efectuarse por agentes reductores
como el sulfuro
Se emplea molibdato de sodio como inhibidor de la sulfato-
reduccin y cido 2-bromoetano sulfnico (BES) para inhibir
la metanognesis

Los efluentes textiles generalmente contienen sulfato, que es


aditivo en el proceso de teido, o formado por oxidacin
sulfuro, hidrosulfuro o ditionita; tambin puede generarse
como resultado de la neutralizacin de efluentes alcalinos
con cido sulfrico.

La reduccin anaerbica de colorantes azo comprende


mecanismos diferentes, pueden distinguirse entre
azoreduccin directa e indirecta. La azoreduccin directa
implica la transferencia enzimtica de equivalentes reducidos
originados de la oxidacin de sustratos orgnicos hacia los
colorantes azo.
b.4. Reduccin del Fe3+
El Fe3+ es un aceptor de electrones utilizado por organismos
anaerobios auttrofos y heterotrfos.
En los organismos reductores de hierro III, la enzima final es la
hierro-frrico reductasa.
Los organismos que usan la va incluyen Shewanella
putrifaciens y Geobacter metallireducens.
Algunas
como G.
metallireducens,
son hetertrofas
y pueden utilizar
incluso
hidrocarburos
como tolueno
como fuente de
carbono
Aplicacin: Generacin de electricidad con
microorganismos
La electricidad, se manifiesta a travs de un flujo de
electrones.
La transferencia de electrones desde una clula es un
proceso, en el que la oxidacin de compuestos orgnicos
cede electrones a un aceptor terminal externo, (oxigeno en
aerobios, nitratos, Fe3+, SO4, CO2 en anaerobios) .
Este proceso puede usarse en la construccin de Pilas de
Combustible Microbianas (PCM).
Las PCM son un dispositivo que utilizan microorganismos
para convertir la energa qumica presente en un sustrato
en energa elctrica, lo cual es posible si los
microorganismos transfieren los electrones producto de su
actividad metablica a un electrodo (nodo) en lugar de a
un aceptor natural de electrones (como oxgeno). (Revelo et
al., 2013)
2.2.2.- Quimiolitotrofa
Uso de un compuesto inorgnico como fuente de energa.
(donadores de electrones)
Littrofos aerobios: remueven electrones del substrato
inorgnico y los ponen en un sistema de transporte de
electrones hasta el O2, que producir ATP.
Fuentes de donadores inorgnicos de electrones: S, N y
Fe.
Son tiles en agricultura, minera.

Los littrofos anaerobios reducen: nitrgeno (NO2, NH3,


N2), azufre (H2S), etc. a sus estados oxidados NO3 y SO4
respectivamente; para producir energa.
Ejemplos: bacterias del hidrogeno, nitrificantes, sulfuro
oxidantes, bacterias del hierro
La mayora de los organismos quimiolitotrofos son tambin
auttrofos
a.- Oxidacin de hidrogeno
El hidrgeno se puede utilizar como fuente de energa aerobia.
H2 + O2 H2O Go = -237 kJ
En estos organismos, el hidrgeno es oxidado por una
hidrogenasa ligada a la membrana, realizando el desplazamiento
del protn va una transferencia de electrones a varias quinonas y
citocromos.

Ralstonia eutropha puede fijar CO2 como fuente de carbono,


utilizar la urea de la orina como fuente de nitrgeno y utilizar
el hidrgeno como fuente de energa para crecer formando
biomasa que puede servir como fuente de protenas. se estudia
como un organismo capaz de sostener la vida en el espacio.
b.- Oxidacin de compuestos reducidos de
azufre
Algunas bacterias oxidan
compuestos reducidos de azufre,
como H2S, S0 y S2O32-, para formar
cido sulfrico (H2SO4).
Reacciones:
H2S + 2O2 SO42- + 2H+
HS- + O2 + H+ S0 + H2O
S0 + H2O + 102 + H+ SO42-+
2H+
S2O32- + H20 + 202 2SO42- + 2H+
La oxidacin del azufre se realiza
generalmente en dos etapas. Los
compuestos de azufre reducidos se
convierten en sulfito (SO32- ) que se
transforma a sulfato por la enzima
sulfito oxidasa.
Otros organismos, realizan la
misma oxidacin usando un
sistema inverso de APS reductasa
(Adenosin fosfato reductasa),
invirtiendo el usado por las
bacterias reductoras del sulfato.
Bacterias oxidantes de azufre

Microorganismos que crecen en medios de cultivo orgnicos.


Gneros y especies Donador inorgnico Rango de pH
de electrones de crecimiento
Thiobacillus thioparus H2S, sulfuros, S, S2O3 2- 6-8
Thiobacillus denitrificans H2S, S, S2O3 2- 6-8
Halothiobacillus neapolitanus S, S2O3 2- 68
Acidithiobacillus thiooxidans S 2-4
Acidithiobacillus ferrooxidans* S, sulfuros metlicos, Fe2+ 2-4
Starkeya movella* S2O3 2- 6-8
Thiomomas intermedia* S2O3 2- 3-7

Acidithiobacillus thiooxidans
Oxida el S y produce cido sulfrico. Se le encuentra
en suelos con sulfuros, en la corrosin del concreto de
tubos de alcantarilla, transformando el sulfuro en cido
sulfrico en aguas residuales.
c.- Oxidacin de compuestos de nitrgeno:
nitrificacin
Proceso por el cual el amonaco (NH3) es convertido en
nitrato (NO3-).
En la nitrificacin toman lugar dos microorganismos:
Etapa 1: Bacterias nitrificantes o amoniooxidantes
(Nitrosomonas)
NH4 + 1.5O2 O2 + 2H+ + H2O
Etapa 2: Bacterias nitrito-oxidantes(Nitrobacter).
O2 + 0.5O2 O3
La fase 1 es mas rpida que la fase 2, que se convierte en
limitante.
Aplicacin: Eliminacin de nitrgeno de aguas
residuales
En aguas residuales interesa
eliminar todo el nitrgeno (NH4)
convirtindolo en N2.
La nitrificacin es una
oxidacin aerobia, donde el
nitrgeno orgnico es la fuente
de electrones, y transcurre
desde NH3 hasta NO2 y NO3.
La desnitrificacin, es la
reduccin del nitrato a nitrito y,
despus, a xido ntrico, xido
nitroso N2O y N2, y sucede en
presencia de una fuente de
carbono orgnica.
Ambos procesos no pueden
coexistir por ser uno aerobio y el
otro anaerobio estrictos.
Nitrificacin y desnitrificacin va nitrito. Proceso
SHARON

Este proceso es usado para tratar efluentes con altas


concentraciones de nitrgeno amoniacal siguiendo la ruta
del nitrito.
Se fundamenta en la mayor velocidad de crecimiento que
tienen las bacterias amonioxidantes (AOB) frente a las
bacterias nitritoxidantes (NOB) a temperaturas >25C, lo
que permite que operando el proceso con un tiempo de
retencin celular (TRC) relativamente bajo los organismos
NOB sean eliminados del sistema.
Proceso ANAMMOX
El ANAMMOX (Anaerobic Ammonia Oxidation) es un
proceso biolgico en el que bacterias bajo condiciones
anxicas convierten el amonio en nitrgeno gaseoso,
empleando el nitrito como aceptor de electrones.
5 NH4+ + 3NO3- 4N2 + 9 H2O + 2H+ G: 1.483 kJ/reacc.
La realizan Brocadia anammoxidans e implica el
acoplamiento de la oxidacin de NH4 con la reduccin de
NO3.
El proceso ANAMMOX requiere una nitritacin parcial previa,
que permite obtener una relacin entre el amonio y el nitrito
ligeramente inferior a 1.
El proceso tambin se puede conducir en un solo reactor con
tiempos aerobios y anaerobios secuenciales.
Su funcionamiento consiste en airear de manera continua el
reactor, asegurando concentraciones bajas de oxigeno
disuelto.
Sistema se eliminacin de nitrgeno en aguas
residuales. La Escalerilla- Arequipa.
2.2.3.- Fottrofos
Utilizan la luz como fuente de energa, convierten la
energa luminosa en energa qumica utilizable como ATP.
La fotosntesis puede ser: oxigenica o anoxigenica.
La fotosntesis oxigenica sucede en: Cianobacterias, algas
y plantas, que usan agua como donador de electrones y
protones para la sntesis de NADH.H, con formacin de ATP y
liberacin de oxigeno.
Se utilizan dos fotosistemas y el flujo de electrones genera
una fuerza protn motriz .
La fotosntesis anoxgena, se caracteriza por que utiliza un
slo fotosistema, tiene receptores de Bacterioclorofilas i/o
carotenos, y no produce oxgeno.
En este caso el flujo de electrones es cclico, de modo que los
electrones empleados en la fotosntesis, son reciclados al
nico centro de la reaccin.
Suelen usar como donador de electrones sulfuro de hidrgeno
(H2S), para producir sulfato.
No genera oxigeno y consume ATP para reciclar los
electrones.
2.4.- Rutas anabolicas
El anabolismo es el conjunto de reacciones de formacin de las
biomoleculas complejas a partir de otras mas sencillas (precursoras)
formadas en el catabolismo.
Las rutas anablicas emplean energa qumica en forma de ATP y
poder reductor del NADH o NADPH para sintetizar componentes
celulares a partir de molculas ms sencillas.
Principales rutas:
Biosntesis de carbohidratos (fotosntesis, gluconeognesis, etc)
Biosntesis de lpidos.
Biosntesis de aminocidos y protenas.
Biosntesis de purinas y pirimidinas
a. Autotrofa: fotosntesis.

La mayora de los
microorganismos
fotosintticos son
auttrofos, fijan CO2 por
el ciclo de Calvin.
Algunas bacterias
fotosintticas (por
ejemplo, Chloroflexus
aurantiacus) son
fotohetertrofos, es decir
que utilizan compuestos
orgnicos como fuente de
carbono para el
crecimiento.
b.- gluconeognesis.
Proceso inverso a la
va glicoltica
c.- Sntesis de cidos grasos
En la sintesis de Novo, inicialmente, se produce malonil-
CoA a partir de acetil-CoA.
El malonil-CoA, aporta dos de sus tres tomos de carbono
al esqueleto carbonado del cido graso en crecimiento.

Por accin enzimtica se condensan un acetil-ACP y un


malonil-ACP (derivado del anterior), dando una molcula de
4 carbonos.
En los ciclos siguientes ya
solo se aadir un malonil-
ACP, aadiendo carbonos de
dos en dos.
El producto final del proceso
es siempre cido palmtico, un
cido graso saturado de 16
carbonos.
A partir de l, pueden
sintetizarse otros cidos
grasos.
8 Acetil-CoA + 14 (NADPH +
H+) + 7 ATP cido palmtico
(C16) + 8 CoA + 14 NADP+ + 7
(ADP + Pi) + 6 H2O
d.- Sntesis de aminocidos
Utilizan diferentes rutas como:
Derivados del alfa-
cetoglutarato
Derivados del oxalacetato.
Derivados del 3-
fosfoglicerato.
Derivados del
fosfoenolpiruvato.
Derivados de la ribosa-fosfato.
Son siempre metabolitos
primarios intermedios
Sntesis de aminocidos aromticos.

Ruta del siquimato.


Aplicacin: Produccin de glutamanto monosodico GMS
Al principio se extraa de alimentos ricos en protenas como
algas.
Hoy se fermenta con corinebacterias cultivadas con amonaco
y carbohidratos de melaza, que excretan aminocidos en el
caldo de cultivo desde donde se asla el L-glutamato.
Proceso:
La melaza es calentada por 5 minutos a 120C, para
esterilizar.
Luego, es mezclada con amoniaco para formar un caldo que
fermenta aerbicamente por 40 horas a 30C., donde las
bacterias convierten la glucosa en glutamato.
El caldo fermentado se concentra en un evaporador.
Al caldo concentrado se agrega cido clorhdrico para producir
cido glutmico en forma de cristales.
El cido glutmico es separado del caldo por decantacin.
El cido glutmico cristalizado, pasa a refinado, mientras que el
filtrado, es bombeado de vuelta al evaporador y reprocesado,
para mejorar la eficiencia.
El caldo de cido glutmico cristalizado es neutralizado
aadiendo NaOH, para producir MSG.
La solucin de MSG cruda, es alimentada en una columna de
resina de intercambio de iones para purificar y decolorar el MSG.
La solucin de MSG refinada es transferida a un evaporador
donde es concentrada.
El MSG concentrado es colocado en un tanque de inversin de
cristales donde ser cristalizado en su forma final.
Los cristales de MSG son colocados en una centrfuga para la
remocin total o completa de agua en los cristales. Luego los
cristales de MSG refinados son empaquetados.
e.- Fijacin de nitrgeno.

El nitrgeno es un elemento requerido para el


crecimiento por todos los sistemas biolgicos. Aunque es
abundante (80% por volumen) en la atmsfera en forma de
gas (N2) es generalmente inaccesible biolgicamente
debido a su alta energa de activacin.
Hay bacterias especializadas, capaces de fijar nitrgeno,
convirtindolo en amonaco (NH3) que es asimilado
fcilmente por todos los organismos.
La enzima nitrogenasa, responsable de la fijacin de
nitrgeno, es muy sensible al oxgeno que la inhibe
irreversiblemente, por lo que los organismos fijadores de
nitrgeno deben tener un mecanismo para mantener la
concentracin de oxgeno baja.
III. CADENA METABOLICA VITAL
La cadena metablica de montaje consta de cinco etapas
secuenciales: mecanismos de entrada para ingresar los
nutrientes del exterior. Reacciones catablicas que dan lugar a
los 12 metabolitos precursores, energa y poder reductor.
Biosntesis que produce los bloques bsicos de las
macromolculas. Polimerizacin que forma la macromolculas.
Ensamblaje que une las macromolculas para dar forma a las
estructuras celulares.
Reacciones catabolicas

Se produce ATP, NAD(P)H, y 12 metabolitos precursores.


Biosintesis

A partir de los 12 metabolitos, y parte del NAD(P)H y ATP, se


sintetizan: aminoacidos, acidos grasos, nucleotidos, azucares y
coenzimas.
Polimerizacion

Los monomeros de la biosintesis se polimerizan, para formar


ADN, ARN, proteinas, polisacaridos, lipidos, y otros, con el mayor
consumo de ATP.
Ensamblaje

Consumiendo una pequea parte del ATP, a partir de los


polimeros se ensamblan las estructuras celulares.
V.- METABOLISMO SECUNDARIO
Los metabolitos secundarios son
compuestos sintetizados por el
organismo que no tienen un rol
directo en el crecimiento o
reproduccin del mismo.
Los metabolitos secundarios se
dividen en tres grupos:
compuestos terpnicos,
compuestos fenlicos y
compuestos con nitrgeno.
Puede distinguirse las siguientes
rutas:
Ruta del MEP
(metileritritolfosfato), ruta del MVA
(cido mevalnico), ruta del cido
malnico y la ruta del cido
siquimico (en ingles shikimico).
(Sauer U, Eikmanns BJ. 2005).
Cada una de estas vas est relacionada de la siguiente
manera con el metabolismo primario:
-La ruta del cido siquimico, es originada del
fosfoenolpiruvato y la eritrosa-4-fosfato, su vez este cido
es precursor de los aminocidos aromticos.
- La ruta MEP se origina del piruvato y del gliceraldehido-3-
fosfato.
- Los aminocidos alifticos son obtenidos a partir del ciclo
de krebs (ciclo del cido ctrico).
- Las rutas malnica y mevalnica, a partir de Acetil-CoA.
Las relaciones existentes entre estas rutas y los grupos de
metabolitos secundarios son las siguientes:
- Los compuestos terpenoides se biosintetizan por las rutas
MEP o MVA.
- Los compuestos fenlicos por la ruta del cido siquimico.
- Los compuestos de nitrgeno provienen de los
aminocidos aromticos y/o alifticos.
Uso industrial: Produccin de penicilina
La penicilina y la lisina
comparten la ruta biosinttica
del cido L-a-aminoadpico
ramificada.
La lisina inhibe la sntesis de
penicilina inhibiendo por
retroalimentacin a la
homocitratosintasa, un
enzima implicado en la
sntesis de L-a-AAA.
Si el L-a-AAA es deficiente,
no puede sintetizarse
penicilina.
La biosntesis de penicilina
se ve afectada por la
concentracin de fosfato y
tambin muestra represin
catablica por glucosa.
Desarrollo de cepas y tcnicas de cultivo
La produccin de penicilina por la cepa aislada por Fleming
era de unos 0,0012 g/l; los procesos actuales producen
hasta 50 g/l.
Los primeros procesos para la produccin de penicilina
usaban Penicillium notatum en cultivo lquido superficial, por
unos 6-12 das.
En 1943 se aisla una cepa de Penicillium chrysogenum
NRRL1951, que trabaja en cultivo sumergido empleando
lactosa como fuente de carbono y energa, y agua de
macerado de maz como fuente de nitrgeno.
Tambin han sido optimizados otros factores que tienen un
efecto sobre la fermentacin y la eficiencia de recuperacin
del producto
Mtodos de produccin
La fermentacin de penicilina es un proceso aerbico con una
absorcin de oxgeno de 0,4-0,8 mM/l min.
La velocidad de aireacin requerida est entre 0,5-1,0
volmenes de aire*(volumen de lquido)-1 *min-1.
La fase de crecimiento aerobio dura unas 40h con un tiempo de
duplicacin de 6h, durante la cual se forma la mayor parte de la
masa celular. Aqu, el suministro de oxgeno es crtico, pero el
aumento de la viscosidad dificulta la transferencia de oxgeno.
Despus de la fase de crecimiento, se produce penicilina,
ferementando hasta 120-160 h.
Cuando el cultivo esta limitado en nitrgeno cesa la produccin
de penicilina, la cual se restablece al ser la fuente de carbono
la limitante.
Para mejorar la produccin de penicilina, se debe dosificar un
precursor, fenilacetato sdico, 0.47 g g-1 para penicilina G, y de
fenoxiacetato de sodio, 0.50 g g-1 para penicilina V.
Se separa el micelio del medio de cultivo por filtracion.
El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en
intercambiador de calor a 0 - 4 C con el objeto de disminuir
la degradacin enzimtica y qumica posteriores.
Las penicilinas G y V son cidos fuertes (pKa entre 2.5 -
3.1), y son solubles en muchos solventes orgnicos y se
pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de amilo o
de butilo a pH 2.5 - 3.0.
Esquema de produccin de penicilina
Estrategias generales de IVM para incrementar una produccin

Existen estrategias generales de IVM que se pueden aplicar,


independientemente del metabolito que se desee producir:
1) Conociendo la va metablica que sintetiza al compuesto de
inters, se identifica a las enzimas que son sujetas a control por
inhibicin alostrica, es decir, enzimas cuya actividad es inhibida
por sus productos u otros metabolitos celulares.
2) Para incrementar el flujo de carbono hacia la va de inters,
identificar y eliminar los controles alostricos y transcripcionales
en las enzimas clave de esa va o en los genes que las codifican.
3) Lograr un alto nivel de expresin de los genes que codifican
para las enzimas clave a las que ya se les elimin el control
alostrico.
4) Identificar y eliminar posibles pasos limitantes dentro de la va
de inters.
5) Incrementar la disponibilidad metablica de los intermediarios
del metabolismo central que sean los precursores del metabolito
que se desea producir (Martinez y Gosset, 2007)
Sntesis de compuestos aromticos en E. coli,
mediante la introduccin de genes heterlogos
(caso melanina)
Utilizando la IVM, es posible desarrollar cepas bacterianas
con potencial para sintetizar esos compuestos aromticos, a
partir de fuentes de carbono.
Se han construido cepas de E. coli con la capacidad de
producir a partir de glucosa: cido qunico, catecol,
melanina e ndigo (LaDuca et al., 1999).
Entre los compuestos aromticos se encuentran las
melaninas. Existen varios tipos de melaninas, uno de ellos,
las eumelaninas, formadas a partir de la tirosina por medio de
la accin de la enzima tirosinasa (Cabrera-Valladares et al.,
2006).
Se sabe que la melanina puede actuar como fotoprotector,
intercambiador catinico, agente quelante, semiconductor
amorfo, y posee actividades antioxidantes y antivirales.
Hoy se busca lograr producciones comercialmente
rentables.
Figura . Compuestos aromticos sintetizados por Escherichia coli
mediante la introduccin de genes de otras especies microbianas. El
nombre de los genes introducidos y el organismo del que provienen
estn indicados en las flechas que dan lugar a cada compuesto
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