PROCEDIMIENTO CARNE

1) CLCULOS
CALDO NUTRITIVO

13g 1000ml

X 117ml

X = 1,521g
Para 117 ml se utiliza 1,521g de caldo nutritivo

CALDO VERDE BRILLA

40.01g 1000ml

X 81ml

X = 3,24g
Para 81 ml se utiliza 3,24g de caldo brilla

AGAR MAC CONKEY

50 g 1000ml

X 45 ml

X = 2,25 g
Para 45 ml se utiliza 2,25 g de agar Mac Conkey

2) DILUCIN DE LA MUESTRA
PARA PREPARAR CALDO NUTRITIVO.

Pesar 1,521g de caldo nutritivo para 117 ml de agua esterilizada. (90 ml para la
muestra problema y 27 ml para los tubos de ensayo)
 Preparar la dilucin del caldo nutritivo con agua destilada (117 ml)

Una vez disuelta y homogenizada la muestra, la llevamos a esterilizar por

15 min o 20 min segn lo requiera

En movimientos en forma de 8 vamos enfriando la muestra hasta poder

trabajar con ella.

Tenemos prendido el mechero para empezar el traslado de la dilucin a

los tubos de ensayo 9 ml a cada uno
 Sacar 1 ml de mi muestra problema (jugo de manzana) y pasar al tubo
debidamente rotulado al primer tubo10-1, luego sacar 1 ml del tubo10-1, y
pasar a 10-2, sucesivamente hasta 10-3,(en cada paso realizar con
pipetas esterilizadas)

1ml 1ml

PARA PREPARAR AGAR VERDE BRILLA (PRUEBA BIOQUIMICA)

Pesar 3,24g de caldo brilla para 81ml de agua esterilizada.

Una vez disuelta y homogenizada la muestra, la llevamos a esterilizar
por 15 min o 20 min segn lo requiera
En movimientos en forma de 8 vamos enfriando la muestra hasta poder
trabajar con ella.
 Tenemos prendido el mechero para empezar el traslado de la dilucin
desde la botella de caldo nutritivo con carne molida hasta los tubos de
ensayo con 9 ml cada uno.(9 tubos)

Agregar 9ml del medio en 6 tubos de 10-1, 10-2, 10-3 con 3 repeticiones
cada una de las diluciones (3 tubos con 10-1, 3 tubos con 10-2, 3 tubos
con 10-3).

Posteriormente colocar campanas de durhan a cada tubo e incubar por 24

horas y 48 horas
 PARA PREPARAR AGAR MAC CONKEY

Pesar 2,25 g de agar Mac Conkey para 45 ml de agua esterilizada.

Una vez disuelta y homogenizada la muestra, la llevamos a esterilizar
por 15 min o 20 min segn lo requiera
En movimientos en forma de 8 vamos enfriando la muestra hasta poder
trabajar con ella.

Con ayuda de la pipeta, y con los mecheros encendidos, colocar 15 ml

del agar en cada una de las placas (3 placas), dejar que solidifique.

Con la aguja de siembra (previamente quemada al rojo vivo) tomar un

inoculo del tubo con caldo nutritivo 10 -1.
Con la aguja de siembra (previamente quemada al rojo vivo) tomar un
inoculo del tubo con caldo nutritivo 10 -2.
Con la aguja de siembra (previamente quemada al rojo vivo) tomar un
inoculo del tubo con caldo nutritivo 10 -4.
 Y realizar siembra por estras escocesas. (4 cuadrantes).

Incubar por 48 horas a 37C.

 RESULTADOS
1) CALDO NUTRITIVO

TUBO INTERPRETACION

Lectura a 24 horas.

TUBO 10-1 Presencia de mayor precipitado color

blancuzco en la parte inferior.

Formacin de anillo

El medio vira a color blanquesino,

presenta turbiedad en todo el tubo.

TUBO 10-2 Presencia de precipitados en la parte

inferior.

Menor concentracin

Formacin de anillo

Color amarillo, presenta turbiedad

(blanquecina) de la mitad del tubo
hacia la superficie.

TUBO 10-3

Muestra color mbar claro

Muestra poca turbidez (de la tercera
parte hacia la superficie).
No hay presencia de precipitados en
la parte inferior.
 Caldo Intensidad de Precipitado
nutritivo color

Tubo 10-1 ++++ +++

Tubo 10-2 +++ ++

Tubo 10-3 + -

2) PRUEBAS BIOQUIMICAS

CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE

OBSERVACIONES A 24 BURBUJAS EN LA OBSERVACIONES

HORAS CAMPANA

10-1
El medio se torna verde
oscuro.
Hay presencia mnima de
gas en la campana de
++ Durham.
Fondo amarillento

10-2
El medio se torna verde
oscuro.
No hay presencia de gas en
la campana de Durham.

---

10-3
El medio se torna verde
--- oscuro.
No hay presencia de gas en
la campana de Durham
OBSERVACIONES A 72 HORAS repeticin

10-1
Ligera coloracin amarillo.
hay mnima cantidad de gas
por que hubo mayor
fermentacin de lactosa, lo
cual indica que hay
presencia de
++ microorganismos el cual da
un prueba positiva

10-2

Ligera coloracin, no se
--- observa gases en el tubo de
Durham,

10-3
No hay coloracin en el tubo
de ensayo.
No podemos observar gases
--- en tubo de Durham el cual
indica que no hay actividad
de microorganismos
OBSERVACIONES A 72 HORAS repeticin

10-1
Ligera coloracin amarillo
hay mnima cantidad de gas
por que hubo mayor
fermentacin de lactosa, lo
cual indica que hay
presencia de
++ microorganismos el cual da
un prueba positiva

10-2

Ligera coloracin, no se
--- observa gases en el tubo de
Durham,

10-3
No hay coloracin en el tubo
de ensayo.
No podemos observar gases
--- en tubo de Durham el cual
indica que no hay actividad
de microorganismos
3) PLACAS CON MAC CONKEY

McConkey OBSERVACIONES A 24 H
10-1
Viraje del medio a color rosado
rojizo.
Las colonias an no se pueden
distinguir con claridad ya que
estn muy juntas, Solo se
observan algunas colonias
aisladas.
Fermentacin de lactosa (color
rojizo)

10-2
Concentracin de bacteria Gram
negativos o aerobios facultativos
por el viraje del color rosado
rojizo.
Las colonias an no se pueden
distinguir.
Fermentacin de lactosa.
El medio vira a un color mbar-
rosado rojizo.

10-3
Caractersticas de rosado rojizo
Se puede apreciar presencia de
microorganismos por el viraje.
McConkey OBSERVACIONES A 72 H
10-1
Mayor concentracin de bacteria
Gram negativos o aerobios
facultativos por el viraje del color
rosado rojizo
Las colonias an no se pueden
distinguir
La fermentacin de lactosa (color
rojizo)

10-2
concentracin de bacteria Gram
negativos o aerobios facultativos
por el viraje del color rosado
rojizo
las colonias an se pueden
distinguir con dificultad
La fermentacin de lactosa

10-3
concentracin de bacteria Gram
negativos o aerobios facultativos
por el viraje del color rosado
rojizo
las colonias se pueden distinguir
CONCLUSIONES
MaConkey

En las placas de McConkey podemos observar virajes de color rosado rojizo debido a
la fermentacin de la lactosa, lo cual baja el pH (neutro) que tiene como consecuencia
la aparicin de colonias rosas o rojas por el cual se concluye que hay presencia de
Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella pneumoniae (aislamiento de bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.

Caldo lactosado bilis verde brillante

El los tubos10-1 con repeticin y 10-2 que se presentan como verdosas, fondo amarillo
y se observan la formacin de gases por la actividad microbiana hacia la
lactosa, el cual se concluye y son caractersticas de presencia de E.coli.
 PROCEDIMIENTO FRUTA
1) CLCULOS
CALDO NUTRITIVO

13g 1000ml

X 117ml

X = 1,521g
Para 117 ml se utiliza 1,521g de caldo nutritivo

AGAR SABUROND

65g 1000ml

X 45 ml

X = 2,92 g
Para 45 ml se utiliza 2,92 g de Agar Saburond

PLATE COUNT

23.5 g 1000ml

X 45ml

X = 1,0575g
Para 45 ml se utiliza 1,0575g de plate count

2) DILUCIN DE LA MUESTRA
PARA PREPARAR CALDO NUTRITIVO.

Pesar 1,521g de caldo nutritivo para 117 ml de agua esterilizada. (90 ml para la
muestra problema y 27 ml para los tubos de ensayo)
 Preparar la dilucin del caldo nutritivo con agua destilada (117 ml)

Una vez disuelta y homogenizada la muestra, la llevamos a esterilizar por

15 min o 20 min segn lo requiera

En movimientos en forma de 8 vamos enfriando la muestra hasta poder

trabajar con ella.

Tenemos prendido el mechero para empezar el traslado de la dilucin a

los tubos de ensayo 9 ml a cada uno
 Sacar 1 ml de mi muestra problema ( pecana triturada) y pasar al tubo
debidamente rotulado al primer tubo10-1, luego sacar 1 ml del tubo10-1, y
pasar a 10-2, sucesivamente hasta 10-3,(en cada paso realizar con
pipetas esterilizadas)

1ml 1ml

PARA PREPARAR AGAR SABUROND

Pesar 2,92 g del medio.

Medir 45 ml de agua destilada
Combinar el medio con el agua destilada y agitar
Esterilizar el medio durante 20 a 30 min aprox. Luego dejarlo enfriar
Sembraremos con el mtodo de placa invertida. Con ayuda de una
pipeta estril trapazar 1 ml del tubo10-1 con caldo nutritivo a una placa.
 Trapazar 1 ml del tubo10-2 con caldo nutritivo a una placa. Trapazar 1
ml del tubo10-3 con caldo nutritivo a una placa.
Agregar 15 ml del medio en las 3 placas (10-1, 10-2, 10-3).

PARA PREPARAR AGAR PLATE COUNT

Pesar 1,0575g del medio.

Medir 45 ml de agua destilada
Combinar el medio con el agua destilada y agitar
Esterilizar el medio durante 20 a 30 min aprox. Luego dejarlo enfriar
Sembraremos con el mtodo de placa invertida. Con ayuda de una
pipeta estril trapazar 1 ml del tubo10-1 con caldo nutritivo a una placa.
Trapazar 1 ml del tubo10-2 con caldo nutritivo a una placa. Trapazar 1
ml del tubo10-3 con caldo nutritivo a una placa.
Agregar 15 ml del medio en las 3 placas (10-1, 10-2, 10-3).
 RESULTADOS

CALDO NUTRITIVO
TUBO INTERPRETACION

10-2 10-1 10-3

Lectura a 24 horas.

TUBO 10-1 Presencia de mayor precipitado color

blancuzco en la parte inferior.

Formacin de anillo color amarillo,

muy notorio en la superficie.

El medio vira a color blanquesino,

presenta turbiedad en todo el tubo.
TUBO 10-2 Presencia de precipitados en la parte
inferior.Menor concentracin

Formacin de anillo color amarillo en

la parte superior, pero delgado,

Presenta turbiedad (blanquecina) de

la mitad del tubo hacia la superficie.
TUBO 10-3

Muestra poca turbidez (de la tercera

parte hacia la superficie).
No hay presencia de precipitados en
la parte inferior.
No hay presencia de anillo en la
parte superior.
 AGAR SABUROND
TUBO INTERPRETACION
TUBO 10-1

TUBO 10-2

TUBO 10-3