DETERMINACION DE ALCALOIDES TOTALES EN HOJAS DE LLANTEN

Contenido

Objetivo ....................................................................................................................................... 2
Resumen ..................................................................................................................................... 2
Fundamento Terico ............................................................................................................... 3
Parte experimental ................................................................................................................... 6
Material y equipo ...................................................................................................................... 6
Reactivo ..................................................................................................................................... 6
Resultados ..................................................................................................................................... 9
Resultado de Cromatograma .................................................................................................... 9
Discusiones ............................................................................................................................. 10
Conclusiones........................................................................................................................... 12
Bibliografa ............................................................................................................................... 13
Anexo.............................................................................................Error! Bookmark not defined.
Ficha de seguridad del cloroformo ..............................................Error! Bookmark not defined.
Ficha de seguridad de la cafena .................................................Error! Bookmark not defined.

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Objetivo

Emplear los mtodos adecuados para la determinacin de alcaloides totales.

Determinar los alcaloides presentes en las hojas de llantn mediante

cromatografa de capa fina.

Resumen

En el presente informe trataremos de explicar el mtodo que utilizamos para

extraer los alcaloides que se encuentran en las hojas del llantn Plantago major
adems en el laboratorio otro grupo utilizo las hojas de cocana Erythroxylum
coca para determinar la presencia de alcaloides por el mismo mtodo
cromatografico con dos diferentes reveladores como el reactivo de Dragendorff
y la vainillina1 (Ros, 09 de junio de 2017) en un sistema de corrido de ter de
petrleo acetato de etilo (0.5-9.5).
En los primeros das de la qumica los nicos disolventes conocidos eran el
agua y los productos de fermentacin. Se conoca el etanol y el vinagre, as
como las disoluciones acidas y alcalinas. Estas ltimas eran de particular
utilidad, puesto que los compuestos naturales con propiedades acudas o
bsicas pueden extraerse en ellos y luego precipitarse de la disolucin por
ajuste del pH.
En aquellos primeros momentos se conoca ya un gran nmero de bases
orgnicas. Estos compuestos generalmente contienen un tomo de nitrgeno
bsico que puede pretinarse por tanto hacerse soluble en agua. Este grupo de
compuestos bsicos recibi en nombre general de ALCALOIDES. Despus de
un tratamiento de lcalis, el alcaloide sola separarse de la disolucin acuosa y
a menudo era posible recristalizarse para su purificacin2 (Durst, 9 de junio del
2017)

1
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1852-73292013000200002&lng=es&tlng=es.
2
H. Dupont Durst - Qumica orgnica experimental editorial Revert 1985 Barcelona - paginas
398-400.

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Fundamento Terico
El llantn o tambin llamada plantago major L (perteneciente de la familia
plantaginceas) es una planta perenne de unos 10cm a 60cm de altura. Hojas
de unos 15 cm de altura, en roseta basal, ovales y elpticas. Los llantenes se
caracterizan por tener nervios en las hojas paralelos y longitudinales. Los frutos
del llantn son pixidos, capsulas dehiscentes que se abren transversalmente,
liberando las semillas ovaladas que miden entre 0.5mm y 1mm

Ilustracin 1 Planta de llantn

COMPONENTES DEL LLANTEN:

1. Fibra (planta): mucilago (mucopolisacaridos), gomas,
plantaglucidos, glucomanano.
2. Flavonoides (planta): taninos, luteolina, apigenina, nepetita,
plantaginina, homoplantaginina, baicaleina, hispidulina,
scutellareina. La mayora de estos flavonoides tienen propiedades
antioxidantes.
3. Alcaloides: plantagonina, indicaina
4. Glucosidos iridoides: aucubina (Hojas), asperulosido (Flores),
catapol, gardoside y otros (en toda la planta). De todos ellos la
aucubina es el glucosido mas abundante (1.3% en hojas secas),
con propiedes antibacteriana, antiinflamatoria, hepatoprotectoras,
antioxidantes
5. Acidos (planta): triterpenico libres, acido oleonolico, acido
clorogenico, neoclorogenico, ursolico, salicico, cafeico, ctrico,
ferulico, pantateolico, fumarico
6. agua
7. Azucares: sacarosa, fructuosa, ramnosa, xilosa, sorbitol
8. Protenas:
9. Grasas: contiene en su mayora cido oleico (37%) y linoleico
(25%)
10. Vitaminas: cido ascrbico, colima, vitamina B1, betacarotenos,
vitamina K
11. Minerales: potasio, magnesio, calcio, silicio, zinc, manganeso entre
otros3
Los alcaloides: Son compuestos que contienen nitrgeno de gusto amargo, son
bases orgnicas que se aslan principalmente de las plantas superiores y se han
encontrado en ms de 100 familias de fanergamas y en menor proporcin en
criptgamas (licopodios), El mtodo de seleccin incluye los pasos necesarios para

3
http://www.botanical-online.com/medicinalsllanten.htm#

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la obtencin, preparacin y posible fraccionamiento de la muestra, la aplicacin de la

tcnica analtica adecuada y el tratamiento de los datos obtenidos.

microorganismos (ergot) y animales (peces y sapos). Algunos son muy txicos y

otros en dosis apropiadas, son drogas comnmente usadas en medicina como
la morfina.
Tipos de alcaloides y funcin de los alcaloides:
Se ha discutido mucho sobre la funcin que los alcaloides desempean en el
mundo vegetal sin que se haya dejado a dar ninguna razn concluyente. Entre
las muchas interpretaciones de para qu sirven los alcaloides tendramos los
siguientes:
Valor defensivo: se ha considerado estos compuestos como una manera
que tiene los vegetales de protegerse a la agresin de los animales.
Valor hormonal: se funcin sera equivalente la que realizan las
hormonas e equiparables a la hormona animal adrenalina. Lo cierto es
que suele coincidir los niveles ms altos de los mismo con los momentos
de metabolismo ms intenso
Valor aleloptico: las plantas utilizaran los alcaloides para influir
positivamente o negativamente sobre otras especies prximas. Bien para
comunicarse con especies similares o inhibir el crecimiento de otras que
podran resultar competitivas, como la cocana, la cafena o la estricnina
que impide el crecimiento de otras especies junto a ella.
Reactivo de dragendorff: en la presencia de alcaloides se detecta al producirse
una coloracin naranja rojiza cuando el papel impregnado con este reactivo se
pone en contacto con la solucin acida de los alcaloides. Cuando se usa como
reactivo de precipitacin las bases precipitan como solidos marrones y de los
precipitados lavados, pueden recuperarse los alcaloides con una solucin
saturada de carbonato de sodio.
Durante la extraccin y el aislamiento no existe un mtodo nico, pues el mtodo
a utilizar depende de la naturaleza del material a procesar con de las estructuras
qumicas y por ende de las propiedades fsicas, de los alcaloides presentes o
que se desean separar del material biolgico. Las extracciones ms usuales son:
Extraccin en medio acido: la percolacin se emplea con cido diluido
a temperatura ambiente.
Extraccin con solventes organicos: la planta se seca y molida puede
extraerse con solventes inmiscibles con el agua (cloroformo,
diclorometano, benceno, acetato de etilo) o con mezclas de solventes ms
polares: butanol-agua, dependiendo de la naturaleza de las bases que se
desea extraer.
Una vez obtenidos los crudos de la fraccin bsica, estos pueden separarse
mediante:

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a) mtodos cromatogrficos, b) preparacin de derivados cristalinos seguidos de

recristalizaciones o de cromatografa, c) cristalizacin fraccionada, d) separacin
por distribucin contracorriente utilizando como fase acuosa buffers de diferente
pH, e) arrastre de vapor, este ltimo en el caso de los voltiles
Los mtodos cromatogrficos recomendados son: papel (analtica), capa fina
(analtica y preparativa) y columnas en fase normal (silicagel o alumina), en fase
reversa (RP-8 y RP-18).4
Cromatografa de capa fina: La fase estacionaria o tambin
llamada, absorbente, se encuentra colocada uniformemente, formando una
finsima capa de un espesor en torno a 0.1 mm, sobre un soporte o placa de
vidrio o metal. La mezcla que deseamos analizar se colocar a una corta
distancia del borde inferior de la mencionada placa, la cual introduciremos en
una cubeta o recipiente que contendr la fase mvil, o tambin llamado, eluyente.
La fase mvil ir ascendiendo poco a poco sobre la placa de la fase estacionaria
a travs de capilaridad, desplazando a los diferentes componentes de la mezcla
a analizar, a distintas velocidades, lo que provocar la separacin de la mezcla
La relacin de las distancias recorridas por el compuesto y por el disolvente,
desde el punto de origen del cromatograma, se conoce como Rf (rate factor), el
cual posee un valor constante para cada compuesto en condiciones
determinadas. Estas condiciones pueden ser el tipo de absorbente utilizado, el
tamao de la cubeta, la temperatura, el disolvente, etc. As, para poder calcular
el Rf, se sigue la siguiente frmula:

=

Una vez realizada la cromatografa, pasamos a su visualizacin. La gran parte
de las placas cromatogrficas contienen un producto indicador fluorescente que
permite la visualizacin de los compuestos que son activos a la luz ultravioleta,
concretamente a 254 nm. El indicador absorbe la luz UV, y emite luz visible,
por lo general de color verde. La presencia de un compuesto activo que se
encuentra en el UV evita quie dicho indicador absorba luz en la parte en la cual
hemos colocado el producto, lo cual se traduce en ver una mancha en la placa
lo que nos indica la presencia de un determinado compuesto.
Cuando se trata de compuestos que no consiguen absorber la luz UV, la
visualizacin del cromatograma necesita usar un agente revelador. Dicho
revelador debe reaccionar con los productos que son absorbidos dando
compuestos de colores. Por lo cual, el revelador a usar depende del tipo de
compuesto que queramos visualizar.5

4
https://books.google.com.pe/books?id=hPkjgPwXD-
QC&pg=PA385&lpg=PA385&dq=alcaloides+aislamiento&source=bl&ots=N8Tbrf_gnA&sig=7ERiJhKn5OiP
psMtGeYz_wpNaeg&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiwguyj_a_UAhVCVT4KHRLjBdYQ6AEIQDAK#v=onepage&q=alcaloides%20aisla
miento&f=false
5
http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-en-capa-fina

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Parte experimental

Tabla 1 Materiales y reactivos utilizados

Material y equipo Reactivo

1fiola de 50ml
Hidrxido de sodio ()
1 matraz Erlenmeyer
Acetato de etilo
1 embudo
Agua destilada 40ml
Pera de separacin
cido sulfrico(2 4) al 2%
Papel indicador de pH
Sulfato de sodio anhidro
Hojas de llantn

1) Pesamos 5 gramos de hoja de llantn molidas previamente se las llev

a un matraz Erlenmeyer para adicionarle cido sulfrico (2 4) al
2%, luego lo llevamos a ebullicin suave por 30 min.

2) Lo dejamos enfriar y filtramos por gravedad, el filtrado lo pasamos a

una pera de separacin e iniciamos la separacin con 5 ml de acetato
de etilo, repitiendo este proceso dos veces.

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3) La solucin acuosa se lleva a un pH 11 con solucin de NaOH, luego

se vuelve a extraer con 5ml de acetato de etilo, este proceso se repiti
tres veces.

4) La fase orgnica que extrajimos lo secamos con sulfato de sodio

anhidro.

5) Se empez a sembrar muestra de la fase orgnica de la extraccin del

llantn en dos placas para cromatografa de capa fina y se corrieron
ambas en un sistema de fase mvil de ter de petrleo- acetato de
etilo (5:95).

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6) Una vez corrida la muestra en la cromatografa por capa fina, se

procedi a revelar una placa en Dragendorff y la otra placa en vainillina
con cido sulfrico al 5%, la placa revelado con vainillina y cido
sulfrico se procedi a calentar levemente.

7) Se obtuvieron los Rf respectivos a cada corrida de muestra para un

grupo (alcaloides en cocana) y para nuestro grupo (alcaloides en
llantn) tanto en Dragendorff como en vainillina.

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Resultados

Resultado de Cromatograma
Para la Hoja de coca.
Tabla 2 Rf de tropanos en la hoja de Coca (Toxicology: Mechanisms and Analytical Methods-editado por
C. P. Stewart,A. Stolman).

a) Reactivo de Dragendorff

Tabla 3 Con reactivo de Dragendorff en hoja de coca solvente ter de petrleo AOet (.5-9.5).

Rf terico Rf diferencia Rf experimental Compuesto

0.0600 0 0.0600 Tropine
0.2600 0 0.2600 Homatropine

b) Vainillina
Tabla 4 Con Vainillina en hoja de coca solvente ter de petrleo AOet (.5-9.5).

Rf terico Rf diferencia Rf experimental Compuesto

0.4100 0.0131 0.4231 Atropine

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Para la hoja de llantn presenta alcaloides como plantagonina, colina,

noscapina, indicaina e indicamina.

a) Reactivo de Dragendorff

Tabla 5 Reactivo de Dragendorff en hoja de llantn solvente ter de petrleo AOet (.5-9.5).

Rf terico Rf diferencia Rf experimental Compuesto

0.6500 0.0500 0.6000 Papaverina
0.5400 0.0600 0.6000 Noscapina

b) Vainillina

Tabla 6 Vainillina para la hoja de llantn solvente ter de petrleo AOet (.5-9.5).

Rf terico Rf diferencia Rf experimental Compuesto

- - 0.0962 -
aqu no hemos podido localizar e identificar qu tipo de compuesto es o asociarlo.

Discusiones

La cromatografa en capa fina se realiz por el mtodo ascendente, esto

es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical, por
la accin de la capilaridad.
Durante la cromatografa se us el reactivo de Dragendorff ya que es
utilizado como revelador durante los procedimientos convencionales de
cromatografa en capa fina (CCF) debido a la alta sensibilidad que
presentan frente a alcaloides6

El reactivo de Dragendorff form bandas color anaranjado intenso sobre

la placa de CCF7 , siendo ms selectivo, permitiendo ver slo algunos
compuestos, en este caso los alcaloides, en los cuales la respuesta de la
reaccin es significativa.

Las placas tambin se revelaron en una cmara extractora utilizando el

reactivo vainillina - cido sulfrico como revelador, dndonos en la placa
una coloracin celeste esto se debe a que el cido sulfrico reacciona con
todo tipo de hidrocarburo insaturado, revelndolo, despus se determin
el Rf (Factor de Retencin), utilizando la frmula de Randerath , la cual

6
Gunatilaka et al., 1980; Harborne, 1998; Rezai-Basiri et al., 2010
7
Vitale et al., 1995

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consiste en dividir la distancia recorrida por el compuesto sobre la

distancia recorrida por el eluyente8, sin embargo como lo vimos en los
resultados (tabla 5) no se ha podido identificar a qu tipo de alcaloide le
corresponde ese factor de retencin, esto se debe a que el compuesto
encontrado en el revelado con vainillina no sera alcaloide, sino un
flavonoide ya que el su Rf se acerca mucho al de la literatura.

Cuando una extraccin depende del pH es porque la molcula tiene varios

grupos protonables o desprotonables, como el grupo amino o carbonilo.
Segn el pH con el que se trabaje, los grupos que haya estarn de una u
otra forma, pero solo se irn a la fase orgnica cuando el balance de
cargas de dicha molcula sea cero, es decir, la molcula sea electro
neutra y por lo tanto apolar e insoluble en agua, pero s que sea soluble
en fase orgnica donde realizamos nuestra extraccin.

La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador

fluorescente que permite la visualizacin de los compuestos activos a la
luz ultravioleta (254nm).El indicador absorbe la luz y emite luz visible. La
presencia de un compuesto activo en el UV evita que el indicador absorba
la luz en la zona en la que se encuentra el producto, y el resultado es la
visualizacin de una mancha en la placa que indica la presencia de un
compuesto.

Para la extraccin de alcaloides se debe tener en cuenta que debido a

que los alcaloides son compuestos de carcter bsico, su solubilidad en
los diferentes solventes vara en funcin del pH, es decir segn el estado
en que se encuentre si estn en forma de base, son solubles en solventes
orgnicos no polares como benceno, ter etlico, cloroformo,
diclorometano acetato de etilo.

Comparando el Rf de las hoja de llantn y coca presentado en la

siguiente tabla y en la ilustracin 2 vemos que definitivamente la hoja de
coca contiene ms alcaloides que la hoja de llantn.

Rf Dragendorff Vainillina
Llantn 0.60 0.096
Coca o.26 0.431

8
Harry W. Lewis & Christopher J. Moody. Experimental Organic Chemistry: Principles and Practice

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Ilustracin 2 Comparacin de llantn y coca en los revelados.

Conclusiones

Se logr determinar de manera cualitativa la presencia de alcaloides en

el llantn a travs de la cromatografa en capa fina.

Se logr reconocer alcaloides con el revelado con dragendorff, sin

embargo no se pudo determinar el alcaloide o no, presente en el
revelado con vainillina.

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Bibliografa

http://www.botanical-online.com/medicinalsllanten.htm#

https://books.google.com.pe/books?id=hPkjgPwXD-
QC&pg=PA385&lpg=PA385&dq=alcaloides+aislamiento&source=bl&ots=N8Tbrf
_gnA&sig=7ERiJhKn5OiPpsMtGeYz_wpNaeg&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiwguyj_a_UAhVCVT4KHRLjBdYQ6AEIQDAK#v=onepa
ge&q=alcaloides%20aislamiento&f=false

http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-en-capa-fina

Gunatilaka et al., 1980; Harborne, 1998; Rezai-Basiri et al., 2010

Vitale et al., 1995

Harry W. Lewis & Christopher J. Moody. Experimental Organic Chemistry:

Principles and Practice

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