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PRACTICA N 3
RESPONSABLE :
II. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL:
Determinar el contenido de nitrgeno orgnico en las aguas
residuales del rio Huallaga.
APLICACIONES
Desde 1883 en que John Kjeldahl present sus trabajos, su mtodo ha
ganado una gran aceptacin y se aplica en una amplia variedad de trabajos
para los anlisis de alimentos, bebidas, piensos, grano, carnes, aguas
residuales, suelos para cultivos y otros. Hoy por hoy es el mtodo ms usado
para el anlisis de protenas y se efecta mediante la determinacin de
nitrgeno orgnico. Esto es as porque los diferentes tipos de protenas
coinciden todas ellas en una proporcin similar de dicho nitrgeno orgnico.
En la mayora de los casos de utiliza el factor de clculo siguiente:
Contenido de protenas = Contenido de nitrgeno orgnico x 6.25
En esta tcnica se digieren las protenas y otros compuestos orgnicos de
los alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de
catalizadores. El nitrgeno orgnico total se convierte en sulfato de amonio
mediante la digestin. La mezcla resultante se neutraliza con una base y se
destila. El destilado se recoge en una solucin de cido brico. Los aniones
de borato as formado se titulan con HCL estandarizado para determinar el
nitrgeno contenido en la muestra.
En general, el mtodo Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar
mediante equipos no muy sofisticados y puede ser realizado por tcnicos
poco experimentados.
RECONOCIMIENTOS
El mtodo Kjeldahl ha sido reconocido oficialmente por un gran nmero de
entidades oficiales y asociaciones como por ejemplo: la AOAC Internacional,
EPA, AACC, AOCS, ISO, USDA y otras.
PROCEDIMIENTO
El mtodo consta de tres etapas: DIGESTIN DESTILACIN
TITULACIN.
En la DIGESTIN se produce la descomposicin del nitrgeno que contienen
las muestras orgnicas utilizando una solucin de cido concentrado. Esto se
obtiene haciendo hervir la muestra en una concentracin de cido sulfrico.
El resultado es una solucin de sulfato de amonio.
En la etapa de DESTILACIN se libera amoniaco, el cual es retenido en una
solucin con una cantidad conocida de cido brico. Inicialmente se realiza
una destilacin con vapor por el mtodo de arrastre de vapor de agua,
mediante la cual acelera la obtencin del destilado.
Al final, se utiliza la TITULACIN para valorar finalmente la cantidad de
amonio presente en la muestra destilada.
REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MTODO DE KJELDAHL
DIGESTIN
catalizadores
(1) n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
protena calor
NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
(2) (NH4)2SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
(3) NH3 + H3BO3 (cido brico) NH4 + H2BO3- (in borato)
TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl
(o H2SO4) estandarizado:
(4) H2BO3- + H+ H3BO3
EQUIPOS DE LABORATORIO
Desde hace unos aos, se vienen desarrollando nuevos equipos y
perfeccionado las tecnologas para ejecutar estas tcnicas analticas.
J.P. Selecta, consciente de estas necesidades de los laboratorios ha
dedicado un considerable esfuerzo en poner en el mercado una renovada
gama de equipos lo ms completa posible con el fin de facilitar la labor de
desarrollar el mtodo Kjeldahl con la rapidez, la precisin y la
reproducibilidad de resultados.
Los equipos para la determinacin del nitrgeno orgnico estn compuestos
por tres elementos bsicos:
- Unidat de digestin Bloc-Digest.
- tiles de manipulacin (Macro o Micro).
- El destilador Pro-Nitro M, Pro-Nitro S (semiautomtico) Y Pro-Nitro A
(automtico)
Recientemente se ha incorporado el sistema automtico Auto Digest 20 el
cual optimiza la rapidez y la fiabilidad a los profesionales de laboratorio.
PROCESO DE DIGESTIN
Una serie de condiciones interrelacionadas en el proceso de digestin
determinan la velocidad de la reaccin y de la descomposicin de nitrgeno
en sulfato de amonio, como son la cantidad de calor transferida, la cantidad
de sales para elevar la temperatura de ebullicin del cido, el catalizador
empleado y el tiempo de la digestin. El ajuste de cualquiera de estos
parmetros tiene influencia sobre el resto. Hay estudios que determinan los
parmetros para obtener las condiciones ptimas dependiendo de la matriz
de las muestras. Por ejemplo, la cantidad de cido necesario vara
dependiendo de la grasa que contiene la muestra. A ms grasa, ms cido
se requiere. Tambin vara con el tiempo de la digestin. A mayor tiempo,
ms cido perdido por evaporacin.
El tiempo de digestin debe determinarse dependiendo de la cantidad de
recuperacin mediante la utilizacin de muestras de matriz conocida.
La adicin de sales es til para elevar la temperatura de ebullicin del
H2SO4. Dependiendo del tipo de sales empleadas, la temperatura puede
pasar de ser de 330C estando el cido sulfrico slo, a una de 400C, con lo
que se acelera el ritmo de la descomposicin y se acorta el tiempo de la
digestin de forma considerable.
Para realizar la digestin, suele utilizarse un bloque calefactor construido en
aluminio, rodeado de una gruesa capa de aislante trmico y montado en una
estructura de acero inoxidable. Hay distintos tamaos de bloque para 6, 12 y
20 muestras. El elemento calefactor es una resistencia elctrica de alta
potencia la cual se controla desde un equipo electrnico que incorpora un
microprocesador el cual permite al usuario elegir y memorizar varios
programas de trabajo con rampas y tiempos totalmente programables. Dicha
capacidad de programacin consigue optimizar las digestiones de acuerdo
con el material empleado.
Caractersticas:
o Manipulacin automtica de las muestras.
o Calentamiento uniforme.
o Unidad automtica de control con capacidad para 20 programas de
temperatura, tiempo, elevacin de muestras una vez finalizada la
digestin y marcha/paro del Scrubber. Salida RS-232 para registro de
temperatura y programacin de la digestin desde ordenador.
o Sistema colector de gases que permite ser utilizado sin cabinas
extractoras.
Se suministra completo compuesto de:
o 1 bloque metlico calefactor de 20 plazas.
o1 sistema de elevacin automtico de las muestras.
o1 programador Rat-2 de procesos tiempo/temperatura.
o1 gradilla con soporte portatubos.
o1 colector de humos.
o 20 tubos para digestin de 250 ml de capacidad.
PROCESO DE DESTILACIN
El producto de la digestin suele ser diluido con agua libre de amoniaco para
minimizar los efectos de las mezclas que contienen altas proporciones
acido/sales.
PROCESO DE VALORACIN
El cido brico captura el gas de amonaco y forma un complejo amonaco-
brico. Cuando el amonaco es capturado el color de la solucin receptora
cambia. Se procede de la siguiente forma:
Valorar el destilado con HCl H2SO4 hasta el cambio de color. (Punto final:
pH 4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
De hecho, se pueden utilizar diferentes indicadores para obtener un viraje lo
ms limpio y pronunciado. Si se hace difcil detectar el punto de viraje, puede
ser til utilizar una solucin de referencia de blanco.
CLCULOS
Al hacer los clculos hay que tener en cuenta la solucin receptora y los
factores de dilucin utilizados en proceso de destilacin. Se pueden tomar
referencias en los mtodos de referencia publicados.
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14
Dnde:
N= Normalidad del cido de valoracin
V= Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Para pasar a contenido de protenas corregir por el factor adecuado segn
la naturaleza de la muestra. (6.25 por defecto)
Peridicamente realizar un ensayo en blanco y restarlo del resultado.
Caractersticas:
o Unidad de destilacin por arrastre de vapor.
o Con valorador automtico On-line por colorimetra.
o Generador de vapor compacto con termostato de seguridad de sobre
temperatura y presos tato de proteccin contra sobrepresin.
o Puerta de seguridad que impide la destilacin con la puerta abierta.
o Deteccin de presencia de tubo de digestin/destilacin. Este
dispositivo impide la dosificacin de NaOH si no hay tubo.
o Adaptador
universal para tubos de digestin/destilacin MACRO ( 42
mm) y MICRO ( 26 mm).
o Ahorro de espacio en el laboratorio: Los depsitos de H2O y NaOH,
cido Brico y HCl se alojan en el interior del equipo. Sistema de vaciado
del tubo de digestin/destilacin y del colector.
o Paro de la destilacin automtico.
o Display LCD de 20 x 4 caracteres de gran tamao.
o Salida RS-232 para imprimir los resultados.
o Bastidor de acero inoxidable y frontal de plstico ABS.
Especificaciones:
o Rango de medicin: de 0.2 a 200 mg Nitrgeno.
o Recuperacin de Nitrgeno: > 99,5%.
o Velocidad de destilacin: de 35 a 40 ml/minuto.
o Consumo de agua de refrigeracin: de 80 a 100 litros/h.
o Consumo de agua del generador de vapor: 2,5 litros/h.
o Capacidad del depsito de agua para el generador de vapor: 6 litros.
o Capacidad del depsito de NaOH: 2 litros.
o Capacidad del depsito de cido Brico: 2 litros.
o Capacidad del depsito de reactivo de valoracin: 2 litros.
o Precisin del valorador: 1,5%.
o Dosis mnima del valorador: 0,01 ml.
EJEMPLO PRCTICO
DETERMINACIN DE EL AGUA RESIDUAL POR EL MTODO DE
KJELDAHL.
1. Principio:
El mtodo consiste en mineralizar la muestra con cido sulfrico concentrado
y alcalinizar con hidrxido de sodio. El amonaco liberado es arrastrado por
destilacin y recogido sobre cido brico. La posterior valoracin con cido
clorhdrico permite el clculo de la cantidad inicialmente presente de protena
en la muestra.
2. Reactivos necesarios:
o cido sulfrico 96% (d=1.84).
o NaOH, solucin 35% (p/v).
o Indicador mixto, especial para titulaciones de amonaco.
o Catalizador Kjeldahl.
o cido brico al 4% (p/v).
o HCl 0.25N.
o Agua destilada.
o Piedra pmez en granos.
Nota: Es muy importante que todos los reactivos estn totalmente exentos
de nitrgeno.
3. Material necesario:
o Balanza de resolucin 0.1 mg.
o Unidad digestora (Bloc-Digest).
o Programador de proceso RAT.
o Colector / Extractor de humos.
o Destilador Pro-Nitro M o Pro-Nitro A.
o Bureta para valoracin.
4. Digestin:
o Pesar alrededor de 1 gramo de muestra perfectamente molida y
homogeneizada en un papel exento de nitrgeno e introducirlo en un
tubo de digestin.
o Aadir al tubo con muestra 10 g de catalizador Kjeldahl, 25 ml de cido
sulfrico al 96% (d=1.84), y algunos grnulos de piedra pmez tratada.
o Colocar los tubos de digestin con la muestras en el Bloc-Digest con el
colector de humos funcionando.
o Realizar
la digestin a una temperatura entre 350..420C y un tiempo
que puede variar entre 1 y 2h.
o Al
finalizar, el lquido obtenido es de un color verde o azul transparente
dependiendo del catalizador utilizado.
o Dejar enfriar la muestra a temperatura ambiente.
o Evitar la precipitacin agitando de vez en cuando.
o Dosificarlentamente 50 ml de agua destilada en cada tubo muestra.
(Tener precaucin con la violencia de la reaccin).
o Dejar enfriar la muestra a temperatura ambiente.
o Si se produce precipitacin agitar o calentar ligeramente.
5. Destilacin:
Dosificar 50 ml de cido Brico en un matraz Erlenmeyer, y algunas gotas de
indicador mixto. Colocar el Erlenmeyer en la alargadera del refrigerante
teniendo la precaucin de que sta quede sumergida dentro del cido Brico.
6. Ensayo en blanco:
Despus de la destilacin de una muestra realizar un ensayo en blanco,
aplicando el mtodo descrito, pero utilizando 5 ml de agua destilada.
7. Valoracin:
Valorar con cido clorhdrico 0.25N el destilado obtenido, hasta que la
solucin vire de verde a violeta.
http://www.uv.es/gidprl/practica_Kjeldahl/index.html
Destilacion:
METODO KJENDHAL
+
1gr. De catalizador
Sulfato de Cu
Sulfato de K
Sulfato de K
5 ml +
H2SO4
Llevar al digestor de protenas x 3h aprox.
Hasta la solucin cristalina
Retirar y enfriar solucin cristalina
Proceder a destilacin:
a) Verter la muestra en el embudo. Enjuagar
b) Aadir 5ml. De NaOH (80%). Enjuagar
c) Serrar las llaves
d) Colocar Erlenmeyer con 5ml. De indicador (rojo de metilo + verde de
Br cresol + Ac. Brico al 4%).
V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
5.1 RESULTADOS:
Muestra
Nitratos Conductividad
de %N Turbidez pH
estudio 220 - 275 s/cm
M1 0.42 0.254 - 0.073 9.21 545 9.06
M2 0.51 0.254 - 0.074 6.92 541 9.04
M3 0.255 - 0.075 7.38 541 9.03
5.2 DISCUCIONES:
VI. CONCLUSIONES
%N
0.42
0.51
Conductividad
Turbidez pH
s/cm
9.21 545 9.06
6.92 541 9.04
7.38 541 9.03
http://www.uv.es/gidprl/practica_Kjeldahl/index.html
ANEXO
Dnde:
A= cido clorhdrico usado en la titulacin (mL)
B= Normalidad del cido estndar
C= peso de la muestra (g)