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CROMATOGRAFIA
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Universidad de Santiago de Chile
1.1 DEFINICION
(IUPAC) La Cromatografaes un mtodo fsico de separacin
en el que los componentes de una muestra a separar se
distribuyen entre dos fases segn sus afinidades, una de las
fases es un lecho estacionario de gran superficie (fase
estacionaria) y la otra es un fluido en movimiento (fase
mvil) que atraviesa el lecho estacionario.
Analisis Instrumental 1
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
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Universidad de Santiago de Chile
Mezcla de
pigmentos
vegetales
CaSO4
Universidad de Santiago de Chile
Inicios de la Cromatografa
Mtodos:
MTODOS CROMATOGRFICOS
SIMPLES INSTRUMENTALES
Analisis Instrumental 1
CLASIFICACION DE LA
CROMATOGRAFIA
Fase mvil:
Gas Cromatografa de Gases
Liquido Cromatografa Liquida
Fluido supercrtico SFC
Analisis Instrumental 1
Fase estacionaria
Columna Relleno
Capilar (CG)
CROMATOGRAFIA
Plana Columna
Liquido Gas Fluido Supercrtico
Particin Gas - Liquido
Intercambio inico
Analisis Instrumental 1
Exclusin
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
Clasificacin de la cromatografa
Intercambio inico
Cromatografa de afinidad
Universidad de Santiago de Chile
PARTICIN O REPARTO:
El soluto se equilibra entre el lquido de la fase estacionaria y la fase
mvil, por diferencia de solubilidad. Hasta llegar a un equilibrio
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ADSORCIN
Usa una fase estacionaria slida y una fase mvil lquida o gaseosa.
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
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Universidad de Santiago de Chile
INTERCAMBIO INICO:
Los aniones o cationes se unen covalentemente a la fase estacionaria
slida.
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EXCLUSIN MOLECULAR, FILTRACIN O PERMEACIN
EN GEL:
Separa molculas por su tamao, las molculas grandes pasan ms rpido que
las pequeas, no hay una interaccin entre la fase estacionaria y el soluto.
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CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
Cromatografa de Afinidad
U n a c l a s e
especfica de
molculas, se une a
la fase estacionaria
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Pentano
Ciclohexano
Dioxano
Benceno
ter etlico POLARIDAD
Cloroformo
Analisis Instrumental 1
Cloruro de metileno
Acetona
Etanol
Metanol
Agua
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VENTAJAS DE LA CROMATOGRAFIA
Anlisis rpido (unos minutos)
Eficiente, presenta una alta resolucin
Sensible, fcilmente detectable ppm y ppb
No destructiva , hace posible acoplamiento on line Ej:
Espectrofotmetro de masas.
Alta exactitud en anlisis cuantiaos, RSD de 1-5%
Requiere pequeas cantidad de muestra, tpicamente L
Altamente confiable y simple
Analisis Instrumental 1
No es caro
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
Mtodos analticos
Mtodos de investigacin
Mtodos preparativos
Analisis Instrumental 1
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1ASPECTOS INSTRUMENTALES
Elucin: Es un proceso en el cual los
solutos son arrastrados a travs de una
fase estacionaria por el movimiento de
una fase mvil.
La fase mvil que sale de la columna se
conoce como el eluato.
Eluyente: Es un disolvente que se usa
para transportar los componentes de una
mezcla a travs de una fase estacionaria.
Analisis Instrumental 1
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Universidad de Santiago de Chile
Tiempo muerto (tm): Es el tiempo que una especie no retenida tarda en pasar a
travs de una columna cromatogrfica.
Volumen de retencin (Vr): Es el volumen de fase mvil necesaria para eluir un
soluto determinado de la columna.
Tiempo de retencin (tr): es el tiempo transcurrido entre la inyeccin de una muestra y
Analisis Instrumental 1
tr , B tr , A
2tr
R= =
0.5(wB + wA ) wB + wA
Analisis Instrumental 1
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Factor de capacidad
El factor de capacidad Medida con que tr - tm
Factor de capacidad = k =
la fase estacionaria retiene a un soluto tm
dado
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Ejemplo
Se inyecta en un cromatgrafo de gases una mezcla de benceno, tolueno y metano.
El metano dio un pico muy agudo a los 42 s, mientras que el benceno tarda 241 s en
aparecer y el tolueno 333 s. Hallar el tiempo de retencin ajustado y el factor de
capacidad de cada soluto y la retencin relativa.
tm 42
t r t m 333 42
Tolueno : k = = = 6.9
tm 42
La retencin relativa :
t (tolueno) 333 42
= r = = 1.39
t r (benceno) 251 42
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Ejemplo
En un anlisis cromatogrfico de cido de bajo peso molecular, el cido
butrico eluye con un tiempo de retencin de 7.63 min. El tiempo muerto
de la columna es de 0.31 min. El tiempo de retencin del acido isobutrico
es 5.98 min. Calcular el factor de capacidad de los cidos isobutrico y
butrico y factor de selectividad,
=
tm 0.31 min
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Ejemplo
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Selectividad
La selectividad relativa de una columna cromatogrfica para un par de
solutos viene dado:
k `B t r . A t m
= =
k `A t r . B t m
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Teoras
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B
H = A + + Cu x Ec. de Van Deemter.
Analisis Instrumental 1
ux
u x esla velocidad lineal de flujo
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
Caminos mltiples.
Termino A
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Universidad de Santiago de Chile
Difusin longitudinal B/ux
Al aumentar la velocidad
menor tiempo de
permanencia en la columna
menor tiempo para la
difusin
Es mayor en cromatografa
de gases que en
cromatografa liquida, ya que
los coeficiente de difusin
Analisis Instrumental 1
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Universidad de Santiago de Chile
Transferencia de masa en FE (Csu)
Transferencia de masa Contribucin al ensachamiento de la banda debido
al tiempo necesario para que un soluto se desplace desde las FM y FE a la
interfase entre las dos fases.
Htransferencia de masa= Cux= (Cs+Cm)ux
2k d 2
transferencia de masa en FE Cs =
3(k + 1) 2 Ds
1 + 6k + 11k 2 r 2
transferencia de masa en FM Cm =
24(k + 1) 2 Dm
HP
VARIAN
AGILENT
SHIMAZU
CARLOS ERBA
PERKIN ELMER
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2.1.2 GAS DE ARRASTRE (GAS CARRIER)
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Universidad de Santiago de Chile
2.1.2 GAS DE ARRASTRE (GAS CARRIER)
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Universidad de Santiago de Chile
el detector
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Universidad de Santiago de Chile
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Universidad de Santiago de Chile 2.1.2 GAS DE ARRASTRE (GAS CARRIER)
El agua e hidrocarburos pueden ser fcilmente removidos colocando un
filtro con tamiz molecular de 5 A entre el cilindro e instrumento. (El filtro
puede ser regenerado calentando por 3 horas a 300 C)
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Universidad de Santiago de Chile
2.1.2 GAS DE ARRASTRE (GAS CARRIER)
CONTROL DE FLUJO
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Universidad de Santiago de Chile
2.1.2 GAS DE ARRASTRE (GAS CARRIER)
Control de flujo
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Universidad de Santiago de Chile
Medicin de flujo:
Analisis Instrumental 1
v
Velocidad lineal de flujo = u =
tM
v = volumn de la columna (mL)
t M = Tiempo
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Universidad de Santiago de Chile Muestras gaseosas
Muestreo de gases Muestras lquidas
Muestras solidas.
JERINGAS
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Inyectores
Analisis Instrumental 1
Sistema de inyeccin
Pyrosep
Inyector { linner }
Shimadzu, Split/Splitless
Analisis Instrumental 1
PerkinElmer, On-Column
PerkinElmer, Split/Splitless
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Inyeccin de muestra (con y sin divisin. Split)
Split Splitless
Analisis Instrumental 1
On-column
Analisis Instrumental 1
SISTEMA DE INYECCIN
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PURGA Y TRAMPA (PURGE AND TRAP)
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T baja T alta
T T 56
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
PREPARACIN DE MUESTRAS
Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
AUTO SAMPLER
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Universidad de Santiago de Chile
COLUMNAS CROMATOGRFICAS
Analisis Instrumental 1
Polietilenglicol
Polidimetilsiloxano
Fases estacionarias
Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
Universidad de Santiago de Chile
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Universidad de Santiago de Chile
Temperatura de la columna.
La temperatura de la columna debe ser mayor que la
temperatura de los componentes de la muestra que
pasan a un velocidad razonable.
No necesita ser mayor que la temperatura de
ebullicin, solo que este a una temperatura en que
presin vapor sea considerable.
A altas temperaturas los tiempos de retencin
disminuyen
Isotrmico o temperatura programada (gradiente de temperatura)
Analisis Instrumental 1
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SISTEMAS DE DETECCIN
Universidad de Santiago de Chile
Simplicidad en su operacin
Identificacin de compuestos positiva
Tcnica no destructiva
Pequeo volumen en prevencin del mezclado de
componentes
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Detector de Conductividad trmica, TCD
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Universidad de Santiago de Chile
Detector de Conductividad trmica, TCD
Analisis Instrumental 1
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Analisis Instrumental 1 Universidad de Santiago de Chile
Universidad de Santiago de Chile
Detector de Azufre-Fsforo, FPD
Fotomtrico de flama
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Universidad de Santiago de Chile
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Universidad de Santiago de Chile
acerca de la estructura de
compuestos desconocidos.
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Espectrmetro de Masas Analizadores de masa
*La operacin general del espectrmetro de masas es:
a) crea iones en fase gaseosa
b) separa los iones en base a su relacin (m/z).
c) mide la cantidad de iones de cada relacin (m/z).
Una vez ionizadas las molculas, estas pasan al analizador de iones el cual los transporta
hacia el detector: Existen diferentes tipos de analizadores los que son utilizados de acuerdo
a las necesidades. Dentro de los analizadores podemos citar, la trampa de iones, el sector
Analisis Instrumental 1
GC-MS
Universidad de Santiago de Chile
Comparacin de Detectores
Detector Lmite de Rango lineal Comentarios Tratamiento
deteccin g analito