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3.

MTODOS ANLITICOS

ANLISIS DE LA COMPOSICIN DE LOS ACEITES

Los aceites esenciales son mezclas que pueden llegar a ser muy
complejas, por lo que la identificacin de sus componentes no es una tarea
simple; Anteriormente, esta identificacin se converta en una larga y tediosa
operacin, que consuma muchsimo tiempo, ya que requera el aislamiento y
purificacin de cada componente (utilizando, por ejemplo, cromatografa en capa
fina, cromatografa en columna, destilacin fraccionada, etc) y su posterior
determinacin estructural por mtodos tradicionales (obtencin de derivados,
reacciones de coloracin, pruebas de grupos funcionales, etc).

En las ltimas dcadas, el desarrollo de tcnicas instrumentales de anlisis y


su acoplamiento a sistemas informticos y bases de datos, ha cambiado
sustancialmente el panorama, agilizando de forma notable la identificacin de los
componentes de las esencias, han contribuido especialmente a este cambio, el
desarrollo de tcnicas como:

Tcnicas cromatogrficas de alta resolucin, principalmente la


cromatografa de gases con columnas capilares.
Tcnicas espectroscpicas, particularmente la espectrometra de
masas (EM), la espectroscopia infrarroja (IR) y la espectroscopia de
resonancia magntica nuclear (RMN).
Sistemas cromatogrficos acoplados a tcnicas espectroscpicas,
especialmente la cromatografa de gases acoplada a la espectrometra de
masas (CG-MS) y la cromatografa de gases acoplada a la espectroscopia
infrarroja (CG-FTIR)[5].

3.1. Cromatografa en fase gaseosa

La cromatografa de gases es una tcnica de separacin basada principalmente


en fenmenos de particin entre una fase mvil gaseosa (helio, argn,
hidrgeno, nitrgeno) y una fase estacionaria constituida por un lquido muy
viscoso retenido en el interior de una columna cromatogrfica. La columna se
coloca en un horno con temperatura regulable y programable, lo que nos permite
influir de forma decisiva en la separacin de los componentes de la mezcla.
El cromatgrafo se completa con un sistema de inyeccin, que nos
permite introducir la muestra en la columna y un detector que muestra las
diferentes sustancias a medida que van saliendo de la columna, una vez
separadas. Las columnas cromatogrficas utilizadas actualmente son de tipo
capilar: estn constituidas por un tubo de cuarzo flexible de dimetro muy
pequeo (normalmente 0.25 mm) y muy largo (25 a 60 m, hasta 200 m);
proporcionan alta resolucin y permiten separar las mezclas multicomponentes
de sustancias de diversa polaridad y/o peso molecular (monoterpernos,
sesquiterpenos, etc)

3.2. Cromatografa en fase gaseosa acoplada a espectrometra de


masas

Es un mtodo muy adecuado para la identificacin debido a que los


componentes del aceite son compuestos voltiles y de bajo peso molecular. La
esencia se inyecta directamente en el cromatgrafo, sin ningn tratamiento
previo, lo cual elimina posibles modificaciones en la composicin de la muestra
o en la estructura de sus constituyentes debidas a pretratamiento.
No se eliminan las alteraciones debidas a la temperatura de anlisis, que
puede afectar componentes termosensibles. En el cromatgrafo, los
componentes de la esencia se separan, tras lo cual penetran en el espectrmetro
de masas, que permite registrar el correspondiente espectro de cada una de las
sustancias separadas. Los constituyentes del aceite esencial se identifican
gracias a los diferentes patrones de fragmentacin que se observan en sus
espectros de masas.
La CG-EM permite realizar en una sola operacin, para una muestra del
orden de 1 L, un anlisis cualitativo junto con una indicacin de las proporciones
en las que se encuentran componentes. Cuando se dispone de sustancia patrn,
la calibracin del equipo permite un anlisis cuantitativo exacto de la muestra.
Es posible determinar ndices de retencin en el CG-EM, pero estos pueden no
ser comparables con los bibliogrficos, que generalmente se han obtenido con
cromatgrafos no acoplados a un espectmetro
3.3. Espectrometra de masas
La identificacin de los componentes de los aceites esenciales se realiza
con base en sus espectros de masas (EM), obtenidos por impacto electrnico
y/o por ionizacin qumica. Varios analizadores msicos (magntico,
cuadrupolar, de trampa inica) se utilizan en espectrmetros de masas
acoplados a cromatgrafos de gases.
En los ltimos aos los detectores de trampa inica se emplean cada vez
con ms frecuencia en los estudios de mezclas complejas, incluyendo los aceites
esenciales, sobre todo cuando se requiere alta sensibilidad en los anlisis. En
un espectro de masas, se observa, en abscisas, la relacin masa/carga (m/z) de
los iones formados al fragmentarse la molcula y en las ordenadas, la intensidad
(abundancia) de cada uno de los iones formados. Dado que la carga suele ser
unitaria, m/z corresponde generalmente a la masa de los fragmentos inicos[5].
Las masas de los iones formados a partir de los terpenos, principales
constituyentes de los aceites esenciales, son bastante parecidas. Sin embargo
difieren en su abundancia lo cual permite su identificacin

Proceso de purificacin:
3.4. DESTILACIN:
Es la operacin de separar,
mediante calor, los diferentes
componentes lquidos de una mezcla,
aprovechando las diferencias de
volatilidades de los compuestos por
separar
3.5. LA EXTRACCIN POR ARRASTRE DE VAPOR DE AGUA

Consta de elementos y equipos tales como: generador de vapor, extractor,


condensador y separador.

Esta tcnica es muy utilizada a nivel industrial por varias razones: los aceites
esenciales estn constituidos qumicamente por terpenoides y fenilpropanoides
compuestos que son voltiles y por lo tanto arrastrables por vapor de agua, tiene
un alto rendimiento, se obtiene un aceite muy puro, se puede procesar grandes
cantidades del material vegetal y no se requiere utilizar tecnologa muy
sofisticada.

PROCEDIMIENTO
La muestra vegetal generalmente fresca y cortada en trozos pequeos,
es encerrada en una cmara inerte y
sometida a una corriente de vapor de
agua sobrecalentado, la esencia as
arrastrada es posteriormente
condensada, recolectada y separada de la
fraccin acuosa.
Por efecto de la temperatura del
vapor (100 C) en un cierto tiempo, el
tejido vegetal se rompe liberando el aceite
esencial. Adicionalmente el aceite esencial debe de ser insoluble en agua, ya
que despus del condensador, en el separador debe de formarse dos fases: una
de aceite esencial y otra de agua. Si el aceite esencial presenta componentes
solubles en agua estos quedarn en la fase acuosa que puede comercializarse
como tal: agua de rosas, agua de jazmn.

3.1.2 NEUTRALIZACION En esta etapa se eliminan cidos grasos libres por la


accin de soda custica, adems de neutralizar la acidez residual del aceite
proveniente de los cidos grasos libre. Para eliminar la totalidad de los cidos
grasos libres (AGL), sin deteriorar el aceite, se utiliza un vaco de hasta 5 mm de
Hg y calentndolo a una temperatura de 180-240C. Los aceites bien
neutralizados contienen menos de 0.1% de cidos grasos libres. Esto es
recomendable especialmente si los aceites se utilizarn para el proceso de
hidrogenacin.

Para Aceite de oliva

DETERMINACIN DEL GRADO DE ACIDEZ


1. OBJETO
Determinar los cidos libres en los aceites de oliva.
El contenido en cidos grasos libres se expresa mediante la acidez
calculada segn el mtodo convencional.
1.1. Principio
Disolucin de la muestra en una mezcla de disolventes y valoracin de los
cidos grasos libres mediante una solucin etanlica de hidrxido potsico.

1.2. Reactivos
Todos los reactivos deben ser de calidad analtica reconocida y el agua
utilizada debe ser agua destilada o de una pureza equivalente.

1.2.1. Mezcla de ter dietlico y etanol de 95% (V/V), en proporcin de


volumen 1:1.
Nota: El ter dietlico es muy inflamable y puede formar perxidos
explosivos. Debe utilizarse tomando especiales precauciones.
Debe neutralizarse exactamente en el momento de su utilizacin con la
solucin de hidrxido potsico (1.2.2) en presencia de 0,3 ml de la solucin de
fenolftalena (1.2.3) por cada 100 ml de mezcla.
Nota: Si no es posible utilizar ter dietlico, puede sustituirse por una
mezcla de disolventes formada por etanol y tolueno. Si fuera necesario, el
etanol podra sustituirse, a su vez, por 2-propanol.

1.2.2. Solucin etanlica valorada de hidrxido potsico, = 0,1M o, en


caso necesario, = 0,5M.

1.3. Material
Material habitual de laboratorio, y en particular:
Balanza analtica
Matraz Erlenmeyer de 250 ml de capacidad
Bureta de 10 ml de capacidad, con graduacin de 0,05 ml

1.4. Procedimiento
1.4.1. Preparacin de la muestra para la prueba La determinacin se
efectuar en una muestra filtrada. Si el contenido global de humedad e
impurezas es inferior al 1%, se utilizar la muestra tal cual.
1.4.2. Muestra para la prueba
Tomar la muestra, segn el grado de acidez previsto, de acuerdo con el
cuadro siguiente:

Grado de acidez Peso de la muestra en Precisin de la muestra


previsto (g) de la pesada en gramos

<1 20 0.05
1a4 10 0.02
4 a 15 2.5 0.01
15 a 75 0.5 0.001
> 75 0.1 0.0002
1.4.3. Determinacin
Disolver la muestra (1.4.2) en 50 a 150 ml de la mezcla de ter dietlico y
etanol (1.2.1), previamente neutralizada.
Valorar, agitando, con la solucin de hidrxido potsico de 0,1M (1.2.2) (vase
nota 2) hasta el viraje del indicador (la coloracin rosa de la fenolftalena debe
permanecer al menos durante 10 segundos).
Nota 1: La solucin etanlica valorada de hidrxido potsico (1.2.2) puede
sustituirse por una solucin acuosa de hidrxido potsico o sdico siempre que
el volumen de agua aadido no provoque una separacin de las fases.
Nota 2: Si la cantidad necesaria de la solucin de hidrxido potsico de
0,1M supera los 10 ml, debe utilizarse una solucin de 0,5M.
Nota 3: Si la solucin se enturbia durante la valoracin, aadir una
cantidad suficiente de la mezcla de disolventes (1.2.1) para que la solucin se
aclare.
1.5. Expresin de la acidez en porcentaje de cido oleico
La acidez, expresada en porcentaje de cido oleico es igual a:

100 V x c x M
=
1000 10
Siendo:
V: volumen en ml de la solucin valorada de hidrxido potsico utilizada.
c : concentracin exacta, en moles por litro, de la solucin de hidrxido
potsico utilizada.
M: peso molecular del cido en que se expresa el resultado (cido oleico
= 282).
P: peso en gramos de la muestra utilizada.
Se tomar como resultado la media aritmtica de dos determinaciones.

DETERMINACIN DEL NDICE DE


PERXIDOS
1. OBJETO
La presente norma describe un mtodo para la determinacin del ndice
de perxidos de los aceites y grasas.
2. MBITO DE APLICACIN
La presente norma es aplicable a los aceites y grasas animales y
vegetales.
3. DEFINICIN
El ndice de perxidos es la cantidad (expresada en miliequivalentes de
oxgeno activo por kg de grasa) de perxidos en la muestra que ocasionan la
oxidacin del yoduro potsico en las condiciones de trabajo descritas.

5. APARATOS

Todo el material utilizado estar exento de sustancias reductoras u oxidantes.

Nota: No engrasar las superficies esmeriladas.

5.1. Navecilla de vidrio de 3 ml

5.2. Matraces con cuello y tapn esmerilados, de 250 ml de capacidad


aproximadamente, previamente y llenos de gas inerte puro y seco (nitrgeno o,
preferiblemente, dixido de carbono).

5.3. Bureta de 25 o 50 ml, graduada en 0,1 ml.

6. REACTIVOS
6.1. Cloroformo para anlisis, exento de oxgeno por borboteo de una
corriente de gas inerte puro y seco.

6.2. cido actico glacial para anlisis, exento de oxgeno por


borboteo de una corriente de gas inerte puro y seco.

6.3. Solucin acuosa saturada de yoduro potsico, recin preparada,


exenta de yodo y yodatos.
6.4. Solucin acuosa de tiosulfato sdico 0,01N o 0,002N valorada
exactamente; la valoracin se efectuar inmediatamente antes del uso.
6.5. Solucin de almidn, en solucin acuosa de 10 g/l, recin
preparada con almidn soluble.
7. MUESTRA
La muestra se tomar y almacenar al abrigo de la luz, y se mantendr
refrigerada dentro de envases de vidrio totalmente llenos y hermticamente
cerrados con tapones de vidrio esmerilado o de corcho.

8. PROCEDIMIENTO

Aadir 10 ml de cloroformo (6.1). Disolver rpidamente la muestra


problema mediante agitacin. Aadir 15 ml de cido actico (6.2) y, a
continuacin, 1 ml de solucin de yoduro potsico (6.3). Cerrar rpidamente el
matraz, agitar durante 1 minuto y mantenerlo en la oscuridad durante 5 minutos
exactamente, a una temperatura comprendida entre 15 y 25C.

Aadir 75 ml aproximadamente de agua destilada.

Valorar (agitando al mismo tiempo vigorosamente) el yodo liberado con la


solucin de tiosulfato sdico (6.4) (solucin 0,002N si se presuponen valores
inferiores a 12 y solucin 0,01N si se presuponen superiores a 12), utilizando la
solucin de almidn (6.5) como indicador.

Efectuar dos determinaciones por muestra.

Realizar simultneamente un ensayo en blanco.

Si el resultado del ensayo en blanco sobrepasa 0,05 ml de la solucin de


tiosulfato sdico 0,01N (6.4), sustituir los reactivos.