REVISTA BRASILEIRA

DE TOXICOLOGIA
BRAZILIAN JOURNAL
Amaral A.M./Revista Brasileira de Toxicologia 20, n.1 e 2 (2007) OF TOXICOLOGY 65
SOCIEDADE
BRASILEIRA DE Revista Brasileira de Toxicologia 20, n.1 e 2 (2007) 65-72
TOXICOLOGIA

Avaliao preliminar da citotoxicidade e

genotoxicidade, da gua da bacia do rio Tapanhon
(SP- Brasil) atravs do teste Allium (Allium cepa)
Alexandre de Morais Amaral1*, Agnes Barbrio1, Jlio Cesar Voltolini1, Layra Barros2

1Departamento de Cincias Biolgicas Universidade de Taubat, Taubat, SP,

2Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, Campinas, SP

Abstract
Preliminary evaluation of cytotoxicity and genotoxicity, of water from the Tapanhon river basin (SP - Brazil) through Allium
test (Allium cepa)

The present study aimed to verify the genotoxic and citotoxic potential in water samples from the basin of Tapanhon River,
Pindamonhangaba, So Paulo, by using the Allium test. Water samples of the Tapanhon River and its affluents (the Primeira
gua and Segunda gua Streams, the Galega Brook) as well as a sample from the Borba Spring have been collected for
negative control. Six bulbs of Allium cepa have been submitted to each of the samples for 24 hours. The roots have been fixed
in ethanol/acetic acid 3:1; they have also been submitted to the Feulgen reaction, and the meristematic portion has been
crushed in slide for cellular analysis. As such, 6000 cells have been collected for evaluation of the mitotic index (MI) and
micronuclei (MNC) as well as 300 cells in the metaphase and anaphase phases, to evaluate chromosome aberrations (CA). No
MNC has been found in the samples tested. The MI values have shown to be elevated in all samples tested when compared to
the control with statistical relevance, however, only for the samples from the Primeira gua Stream and the Galega Brook
(p<0,05). Chromosome aberrations have been observed in all samples (p<0,05). These data suggest that along this bay there
are substances which induce the citotoxic and genotoxic effects, which, in turn, have promoted alterations in the organism
tested.

Keywords: Allium cepa, chromosome aberrations, genotoxicity, citotoxicity, Allium test

INTRODUO dos quais muitos no sofrem degradao durante o trata-

A crescente urbanizao e industrializao tm como
conseqncia um maior comprometimento da qualidade das
guas dos rios e reservatrios devido ao aumento da utili-
zao de produtos qumicos pela indstria, comrcio, agri-
cultura e pela populao de forma geral (GROVER e KAUR,
1999). Os problemas mais graves decorrem, entre outros, do
lanamento indiscriminado de esgotos domsticos, contro-
le inadequado dos efluentes industriais e de prticas agr-
colas deficientes (MORAES e JORDO, 2002).
A maioria dos esgotos industriais e municipais pode
ser caracterizada como misturas extremamente complexas
contendo numerosos compostos orgnicos e inorgnicos,
*Autor correspondente:Alexandre de Morais Amaral. R: Henrique
Homem de Melo, 264, CEP: 12422-530, Pindamonhangaba-SP,
tel/fax (12) 3642-2794, e-mail: xandy_ama@terra.com.br
2006 Sociedade Brasileira de Toxicologia
direitos reservados
mento da gua (NIELSEN e RANK, 1994; RANK e NIELSEN,
1998; GRISOLA et al., 2005).
Muitos tipos de despejos tm sido responsveis por
casos de cncer e doenas genticas em seres humanos
(CABRERA e RODRGUEZ, 1999; EGITO et al., 2007). An-
lises realizadas por OHE et al. (2004), demonstraram que,
rios no mundo, especialmente na Europa, sia e Amrica do
Sul, esto contaminados com mutgenos potentes que agem
direto ou indiretamente na induo de mutaes do tipo
frameshift e substituio de bases. H relatos de que esses
rios liberam descargas no tratadas ou parcialmente trata-
das, oriundas de indstrias qumicas, petroqumicas, refina-
ria de leo, derramamento de leo, destilarias, lixo domsti-
co no tratado, pesticidas. Sabe-se que, a clorao da gua
rica em compostos orgnicos e acaba por produzir uma
mistura complexa de compostos organoclornicos, incluin-
do substncias mutagnicas e carcinognicas, as quais es-
to relacionadas com o tempo de exposio e casos de cn-
cer (KOIVUSALO et al., 1997). Todavia, cidos e compos-
tos mutagnicos presentes na gua de beber clorada tem
causado interesse acerca do risco potencial a vrios tipos
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de cncer (leucemia, linfomas, cncer no fgado, pncreas,
estmago, rim, bexiga). A incidncia desses tipos de cncer
relacionado esses compostos foram obtidos de um levan-
tamento de casos de cncer no perodo de 1966 1989. O
risco relativo ao desenvolvimento do cncer foi calculado
pela Regresso de Poisson, ajustado pela idade, gnero,
classe social, urbanizao e tempo de exposio
(KOIVUSALO et al., 1994; KOIVUSALO et al., 1997;
VILLANUEVA et al., 2001).
Os metais pesados (ferro, nquel e cromo) esto entre
os contaminantes comumente encontrados nessas misturas
e agem como agente genotxico, podendo influenciar o ndi-
ce mittico (IM), induzir aberraes cromossmicas (AC) e
formao de microncleos (MNC) em testes realizados com
Allium cepa (RANK e NIELSEN, 1998; CHANDRA et al.,
2005). Certos metais, em soluo aquosa, podem atravessar a
membrana celular ou entrar por processos de fagocitose ou
pinocitose podendo causar danos estrutura da molcula de
DNA (MATSUMOTO e MARIN-MORALES, 2004).
No Brasil, a Agncia Ambiental do Estado de So
Paulo, CETESB (Companhia de Tecnologia e Saneamento
Ambiental) regula, fiscaliza e monitora a qualidade das guas,
para isso, conta com um amplo aparato bioqumico entre
outros, o que suporta vrios testes, o principal deles - en-
saio de mutagenicidade Salmonella, utilizado desde 1979 em
seu programa de biomonitoramento para qualidade das
guas naturais (UMBUZEIRO et al., 2001; CETESB, 2005a).
Portanto, faz-se necessrio a utilizao de testes sen-
sveis para monitorar a presena de compostos genotxicos
em guas dos rios e reservatrios. Vrios bioensaios po-
dem ser utilizados para este propsito.
Plantas superiores tm se mostrado um sistema teste
muito satisfatrio para monitorar a presena de substncias
mutagnicas, entre elas esto Allium cepa, Tradescantia,
Vicia faba, Crepis capillaris, Hordeum vulgare, Pisum
sativum e Zea mays (SMAKA-KINCL et al., 1996; GRANT,
1999). As razes das plantas so muito teis em testes biolgi-
cos, pois so elas as primeiras a ficarem expostas s varia-
es qumicas da gua e do solo (FISKESJ, 1988). Dentre as
variadas classes de contaminantes acusados pela sensibili-
dade do teste Allium esto: metais pesados (NIELSEN e
RANK, 1994; DASH et al., 1988; MARCANO et al., 1998;
MATSUMOTO et al., 2006), esgotos residenciais e industri-
ais (RANK e NIELSEN, 1998; GROVER e KAUR, 1999;
MORAES e JORDO, 2002), extratos de aterro sanitrio
(CABRERA e RODRGUEZ, 1999; CABRERA et al., 1999) e
amostras de rios e lagos, cujas solues compreendem uma
mistura complexa de substncias de composio variada
(SMAKA-KINCL et al., 1996; MELLO et al., 2004); assim,
corroborando sua sensibilidade e eficincia para o proposto.
Os testes biolgicos de mutagenicidade com plan-
tas consistem em verificar a freqncia de microncleos,
aberraes cromossmicas e alteraes no ndice mittico MATERIALE MTODOS
nas clulas do meristema radicular (FISKESJ, 1985; MELLO
et al., 2004). Esses testes fornecem parmetros significantes
para avaliar a toxicidade de misturas complexas de despejos
sem saber sobre sua composio qumica (CHANDRA et
al., 2005), podendo servir como primeiro indicador de dano
e poluio ambiental na gua, ar, e solo, os elementos es-
senciais vida (CABRERA et al., 1999).
Entre os sistemas testes adequados para o
monitoramento da toxicidade, o teste Allium muito conhe-
cido e comumente utilizado em muitos laboratrios. A mitose
no meristema do pice radicular de A. cepa foi material pio-
neiro (introduzido por Levan em 1938) para estudos de
clastognese; resultado da ao de agentes fsicos e qumi-
cos (FISKESJ, 1985). Documentos de reviso publicados
pelo U. S. EPA Programa Gene-Tox, mostraram que foram
utilizadas freqncias de aberraes cromossmicas nes-
tes meristemas como indicadores de clastognese na maio-
ria dos estudos realizados antes da dcada de oitenta
(GRANT, 1982; MARCANO et al., 1998).
As cebolas so fceis de serem armazenadas,
manuseadas e as clulas da raiz constituem um sistema con-
veniente tanto para parmetros macroscpicos (crescimen-
to, deformidade), quanto para parmetros microscpicos
(aberraes cromossmicas). Os resultados com o teste Allium
tm mostrado um bom desempenho em comparao com ou-
tros sistemas, tanto para eucariotos como procariotos
(FISKESJ, 1988). Vrios autores consideram o teste Allium
um bioensaio simples, sensvel, rpido e barato, alm disso, o
A. cepa apresenta nmero reduzido de cromossomos (2n =
16), muitas clulas em diviso, crescimento rpido da raiz,
disponibilidade durante o ano todo, so vantagens que
viabilizam seu uso para biomonitoramento de contaminantes
ambientais usando vrios parmetros de genotoxicidade
(GRANT, 1982; NIELSEN e RANK, 1994; SMAKA-KINCL et
al., 1996; ATEEQ et al., 2002). Portanto o teste Allium capaz
de predizer a ocorrncia de toxicidade (FISKESJ, 1993).
As aberraes cromossmicas freqentemente obser-
vadas so stickiness, c-mitose, fragmentos e pontes (DASH
et al., 1988; FISKESJ, 1985; FISKESJ, 1988; MARCANO
et al., 2004). MNC e AC, foram usados como parmetros de
genotoxicidade e IM como parmetro de citotoxicidade para
testes realizados com A. cepa (SMAKA-KINCL et al., 1996;
MARCANO et al., 2004; CHANDRA et al., 2005).
A contribuio das atividades industriais, agrcolas e
domiciliares para com a degradao qualitativa e quantitativa
dos recursos hdricos pela emisso de efluentes contendo
substncias txicas, que afetam diretamente os organismos
que vivem nestes ambientes, bem como os seres humanos
que venham a entrar em contato com a gua contaminada,
reflete a necessidade de monitoramento constante de fontes
de gua por testes que sejam rpidos, sensveis e de baixo
custo. Para atender a essa necessidade, este trabalho teve
como objetivo a avaliao preliminar da genotoxicidade e
citotoxicidade de amostras de gua da bacia do rio Tapanhon
em Pindamonhangaba-SP atravs do teste Allium.
As amostras foram coletadas na bacia do rio
Tapanhon, localizado na cidade de Pindamonhangaba, situ-
ada no Vale do Paraba, estado de So Paulo, (225550S e
422722O). O clima da regio subtropical quente com
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vero chuvoso e inverno seco com baixa pluviosidade
(VALEDOPARAIBA.COM, 2005). O municpio apresenta alto
ndice de industrializao, contando com empresas dos ra-
mos de metalurgia, siderurgia, farmacologia e qumica
(PINDAVALE, 2005).
A bacia do rio Tapanhon se estende por aproximada-
mente 10,5 km, seu percurso atravessa o municpio no senti-
do SE-NO at desaguar no rio Paraba do Sul (Figura 1), sen-
do composta pelos seguintes tributrios: crrego Segunda
gua, crrego Primeira gua, ribeiro Galega e rio Tapanhon.
Excluindo-se o rio Tapanhon, os demais tm como
caracterstica, nos trechos observados, pouca profundidade
e leito estreito, cruzam a regio urbana da cidade, passando
por bairros residenciais e industriais. O rio Tapanhon mais
largo e mais profundo que os demais e com maior integridade
das caractersticas naturais, apresentando mata ciliar por toda
sua extenso, at o encontro com o rio Paraba do Sul.
Neste trabalho foram utilizadas amostras de gua
da bica Borba como controle, situada s margens da estra-
da municipal do Borba, localizada em Pindamonhangaba-
SP, sendo que a mesma utilizada para consumo pela po-
pulao local.
Foram coletadas 4 amostras de 20 litros de gua, cons-
titudas de mistura composta (gua de ambas as margens
mais a do centro do rio) (CETESB, 2005b) sendo, uma do rio
Tapanhon e uma de cada um de seus trs tributrios: crrego
Primeira gua, crrego Segunda gua e ribeiro Galega, e
20 litros de gua de nascente da bica Borba.
As amostras foram coletadas no ms de novembro
de 2005, perodo de transio entre a estao seca e a chu-
vosa (CPTEC, 2005). Todas as amostras foram coletadas,
obtendo-se uma mistura composta (das margens e uma do
centro do rio), posteriormente, acondicionadas em frascos
plsticos (galo de 20L), sendo imediatamente transporta-
das e submetidas ao experimento.
Nesta mesma poca trinta bulbos de A. cepa foram
obtidos no comrcio local. O protocolo foi baseado em di-
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versas metodologias (FISKESJ, 1985; FISKESJ, 1988;
RANK e NIELSEN, 1998; EVSEEVA et al., 2003) com algu-
mas modificaes. O tamanho dos bulbos foi padronizado
em 3 a 3,5 centmetros de dimetro. Utilizou-se 6 rplicas
para cada tratamento. Os bulbos foram colocados em con-
tato com gua de nascente da bica Borba e, aps um pero-
do de 48 h, foi verificada a viabilidade produo de razes
observando o surgimento destas, e ento submetidas aos
tratamentos, sem nenhuma diluio, em temperatura ambi-
ente e protegidos da incidncia direta de luz solar por 24 h.
Decorrido esse perodo foram retiradas de todos os
bulbos a poro apical das razes (2 a 3 milmetros) e, cada
conjunto de razes de um bulbo foi levado a soluo de etanol/
cido actico proporo de 3:1 por 5 minutos para que ocor-
resse a fixao das clulas. Destas razes, 3 de cada bulbo,
foram submetidas reao de Feulgen (MELLO e VIDAL,
1978), com as seguintes modificaes: as razes foram
hidrolisadas em cido clordrico (HCl) a 4N por 1 hora e 15
minutos temperatura de 25C. A hidrlise foi interrompida
por um banho de HCl a 0,1N gelado, as razes foram submeti-
das por 40 minutos ao reativo de Schiff no escuro. Aps esse
perodo seguiu-se 3 banhos com gua sulforosas por 5 minu-
tos e posteriormente submetidas a 3 banhos com gua desti-
lada. As lminas foram confeccionadas esmagando-se cada
raiz entre lmina e lamnula com 2 gotas de cido actico a
45%. Depois de secas, as lminas foram congeladas em nitro-
gnio lquido para a remoo da lamnula. As lminas foram
imersas em lcool 70% por 5 minutos, secas temperatura
ambiente e contra-coradas com fast green cido (pH 2,7) por
30 segundos (MELLO e VIDAL, 1978). Os preparados seca-
ram a temperatura ambiente, foram embebidos em xilol por 5
minutos; a montagem da lmina permanente foi feita aplican-
do blsamo do Canad e lamnula, levados estufa a tempe-
ratura de 37C para secarem e utilizados para observaes em
microscpio de luz (GRANT, 1982; FISKESJ, 1985; EVSEEVA
et al., 2003; MELLO et al., 2004).
As lminas foram observadas, em ampliao de 400x,
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2000 clulas por raiz foram analisadas (6000 por bulbo), para
MNC e IM e 100 clulas (300 por bulbo) nas fases de metfase
/ anfase mittica para anlise AC.
As mdias do nmero de aberraes e do ndice atividades domsticas, industriais e agrcolas somadas ao
mittico resultado dos diferentes tipos de gua foram com-
paradas atravs da ANOVA (alfa = 0,05) de um fator sendo
que a premissa de heterocedasticidade foi avaliada pelo teste
de Levene. As mdias obtidas foram comparadas entre si
pelo teste de Tukey. A anlise foi realizada com os softwares
"Statsdirect" e "Statistica".
RESULTADOS
No presente estudo, no foi observada, a ocorrncia
de MNC em todas as amostras testadas. O ndice mittico
mostrou-se alterado em todas as amostras quando compa-
radas ao controle, de modo que, para todas houve
estimulao de mitose. Apenas as amostras Primeira gua e
Galega apresentaram diferenas quando comparadas ao
controle e nenhuma das amostras mostrou diferena signi-
ficativa quando comparadas entre si conforme o teste Tukey
(Tabela 1).
DISCUSSO
A crescente utilizao de substncias qumicas nas
seu lanamento indiscriminado no ambiente, expe todos
os seres vivos a uma grande variedade de compostos
mutagnicos e citotxicos. importante ento, que se fa-
am testes de avaliao de mutagenicidade dos corpos
dgua, os principais receptores dos resduos das ativida-
des antropognicas para que, atravs dessa investigao
possam se desenvolver metodologias para diminuir o im-
pacto ambiental.
As misturas complexas apresentam uma imensa gama
de componentes que podem interagir entre si e com os orga-
nismos, causando efeitos genotxicos e citotxicos. Assim,
seja analisando misturas complexas (efluentes diversos) ou
determinada substncia, as alteraes no ndice mittico so
consideradas parmetros citotxicos que permitem estimar o
nvel de citotoxicidade na amostra estudada.
A citotoxicidade indicada por alteraes no ndice
mittico este efeito foi observado em nosso estudo
(ODEIGAH et al., 1997).
Este parmetro permite estimar a freqncia da divi-

Tabela 1: Anlise de varincia e comparao entre os valores mdios do ndice Mittico nas
amostras da bacia do rio Tapanhon. ANOVA; F = 3,6; P = 0,02.

Com relao s aberraes cromossmicas, no hou-
ve diferena estatstica significante entre todas as amostras
quando comparadas entre si, porm clulas aberrantes fo-
ram observadas em todos os tratamentos, apresentando re-
sultados estatisticamente significativos quando compara-
das ao controle (Figura 2). O maior nmero de ocorrncias
foi observado na amostra Tapanhon e o menor na amostra
Segunda gua (Tabela 2). As aberraes observadas com
maior freqncia foram stickiness, pontes, desgarrados, c-
mitoses e, em pequena freqncia, anfases multipolares
(Figura 3).
so celular e pode ser correlacionado com o padro de
crescimento da raiz (MARCANO et al., 2004). Assim, a ini-
bio do crescimento da raiz resultado da inibio de clu-
las diviso celular levando diminuio do ndice mittico
(LIU et al., 1992). Um declnio do ndice mittico abaixo de
22% em relao ao controle pode causar efeito letal ao orga-
nismo (ANTONSIEWICZ, 1990).
No presente estudo, observamos alterao do ndice
mittico nas clulas expostas s amostras Primeira gua e
Galega. Nossos dados so semelhantes aos encontrados em
outros estudos realizados no Brasil. GRISLIA et al. (2005)
obtiveram alterao do ndice mittico nas clulas de A. cepa
ao analisarem esgoto domstico proveniente de um efluente
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Figura 2: Comparao do nmero de aberraes cromossmicas em razes expostas a gua da

bacia do rio Tapanhon. * = P < 0,05 (teste de Tukey)

Tabela 2: Nmero de aberraes observadas em metfases e anfases em clulas de raiz de

Allium cepa depois de submetidas a diferentes tratamentos.
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municipal em Braslia/DF. EGITO et al. (2007) analisaram a
superfcie da gua do rio Pitimb/RN em diferentes pontos,
observaram alteraes no ndice mittico sendo que, em dois
de seus tratamentos os resultados referentes a este parmetro
foram maiores em relao ao controle. Em nosso estudo, a
estimulao mitose observada nos tratamentos acima cita-
dos pode ser devido aos dejetos ricos em fsforo e nitrog-
nio, so abundantes nos esgotos domsticos e causas co-
muns da eutrofizao (WANG, 2006; QUIBLIER et al., 2008).
Os locais amostrados no presente estudo, recebem efluentes
desta natureza, portanto, possvel que ocorra aumento dos
elementos responsveis pela eutrofizao. Embora nosso
estudo no tenha avaliado esses parmetros, sugerimos que
o aumento do IM possa iniciar uma linha de observao quan-
to aos possveis efeitos da eutrofizao, e que o aumento no
IM pode refletir uma citotoxicidade to relevante quanto o
efeito mitodepressivo referido na literatura (ODEIGAH et al.,
1997; MARCANO et al., 2004; CHANDRA et al., 2005).
PALCIO et al. (2005) pesquisaram a sensibilidade de A.
cepa frente concentrao de determinados metais pesados
sulfatados (cobre, zinco e chumbo) no rio Toledo/DF e con-
cluram que estes metais foram responsveis pela toxicidade
observada; a qual influenciou o crescimento das razes de A.
cepa. Isso indica que, embora alguns elementos, at mesmo
alguns metais, como cobre, sejam essenciais para o metabo-
lismo de plantas e animais, sua concentrao e sua combina-
o com outros elementos podem tornar esses elementos
txicos. CHANDRA et al. (2005) estudando a influncia de
efluentes industriais em clulas de A. cepa indicaram altera-
o dose-dependente no ndice mittico; o que afeta direta-
mente o crescimento e elongao da raiz.
As aberraes cromossmicas, parmetros
indicativos de genotoxicidade, apresentaram nveis
significantemente maiores, em todas as amostras, quando
comparadas ao controle (ODEIGAH et al., 1997; GROVER e
KAUR, 1999; EVSEEVA et al., 2003; CHANDRA et al., 2005).
Resultados semelhantes foram obtidos por GROVER e
KAUR (1999) que, ao analisarem efluentes domstico e in-
dustrial na ndia observaram nveis significantes de aberra-
es cromossmicas. Igualmente, SMAKA-KINCL et al.
(1996), avaliaram amostras de gua do rio Dava/Eslovnia,
o qual recebe resduos domsticos e industriais, e detecta-
ram clulas mitticas aberrantes a nveis significativos. Os
resultados obtidos por EVSEEVA et al. (2003) ao estudarem
amostras de gua de um reservatrio natural prximo a uma
indstria produtora de rdio na Rssia mostraram aumento
no nmero de clulas aberrantes em todas as amostras tes-
tadas; a observao de alto efeito mutagnico, simultanea-
mente com o aumento da proliferao celular (tambm ob-
servado em nosso estudo citotxico) pode ser conseqn-
cia de uma reduo no tempo necessrio aos reparos no
DNA. Opostamente, efeitos altamente txicos promovem
um atraso nos checkpoints do ciclo celular ou ainda morte
celular se as leses no DNA no so reparadas. A ocorrn-
cia de aberraes no estgio mittico pode ter sido resulta-
do de toxicidade nas fibras do fuso acromtico (CHANDRA
et al., 2005). MATSUMOTO e MARIN-MORALES (2004)
ao avaliarem o potencial mutagnico de amostras de gua
do rio Sapucaizinho/SP/Brasil, o qual recebe efluente in-
dustrial de curtume, observaram alta taxa de aberraes
cromossmicas, muito provavelmente devido presena
de resduos de cromo no tributrio oriundos desta ativida-
de. ODEIGAH et al. (1997) ao estudarem efluentes de uma
jazida de leo na Nigria, tambm observaram induo,
estatisticamente significante, de aberraes
cromossmicas. Ao estudarem a citotoxicidade e o modo
de ao do herbicida hidrazida maleica em razes de A.
cepa, MARCANO et al. (2004) observaram alta freqncia
de aberraes cromossmicas evidenciando um efeito
clastognico nas amostras testadas.
As mitoses aberrantes podem ter sido resultado de
fuso anmalo, causado por perturbaes durante a mitose
(CHANDRA et al., 2005). A aberrao cromossmica mais
freqente, em todas as amostras, foi stickness; resultado
tambm observado nos trabalhos de SMAKA-KINCL et al.
(1996) e MARCANO et al. (2004). Este fenmeno tem sido
relatado como indicativo de alta toxicidade com efeito
irreversvel podendo levar a clula morte (FISKESJ, 1985;
MARCANO et al., 1998).
A amostra que demonstrou maior nvel genotxico
em relao ao controle (8,52%) foi a coletada no rio Tapanhon
(27,41%), seguido do ribeiro Galega (23,41%), crrego Pri-
meira gua (21,64%) e crrego Segunda gua (19,69%).
Sugerimos que o rio Tapanhon, concentre uma imensa gama
misturas complexas visto que, sendo o ltimo rio a compor
a bacia do rio Tapanhon (Figura 1), recebe efluentes diver-
sos trazidos por seus afluentes (ribeiro Galega, crrego
Primeira gua e crrego Segunda gua), o que aumenta a
complexidade e quantidade de compostos em sua constitui-
o responsveis por sua alta genotoxicidade. Caracteristi-
camente, o crrego Primeira gua e o ribeiro Galega, rece-
bem efluentes domsticos visto que parte de seu percurso
ocorre sob bairros residenciais; para estes mesmos pontos
de coleta, foram observados os maiores nveis de alterao
do ndice mittico, o que refora dados da literatura ao rela-
tarem que os efeitos genotxicos e citotxicos esto direta-
mente correlacionados (FISKESJ, 1985; NIELSEN e RANK,
1994). J o crrego Segunda gua parece receber menos
efluentes domsticos j que no percorre por sob bairros
residenciais, entretanto, certamente recebe efluentes agr-
colas, pois percorre por trechos rurais da cidade, onde h
criao de gado bovino; sua nascente localiza-se prxima a
um bairro industrial e ao aterro sanitrio municipal, para os
quais deve haver tratamento de esgoto, fato este que pode
explanar para o baixo nvel genotxico observado. A Empre-
sa de Saneamento Bsico da cidade de Pindamonhangaba,
afirmou que, 90% do esgoto recolhido tratado (SABESP,
2005); entretanto, consideramos razovel inferir que os 10%
restante do esgoto no tratado podem responder por res-
postas mutagnicas, clastognicas, genotxicas e
citotxicas.
 Amaral A.M./Revista Brasileira de Toxicologia 20, n.1 e 2 (2007)
CONCLUSO
Embora os resultados obtidos referem-se apenas
uma campanha de amostragem, os efeitos observados apon-
tam para a necessidade de uma melhor caracterizao qumi-
ca, microbiolgica somada a implantao de um
biomonitoramento constante da bacia do rio Tapanhon. Vale
ressaltar que, o despejo indiscriminado de resduos diver-
sos lanados aos corpos dgua, observado neste estudo,
mostra a condio degradada do ambiente promovida pela
ao antropognica; com base nessa observao somada
ao crescente turismo na regio, sugerimos que os rgos
competentes promovam campanhas de conscientizao
conservao ambiental, salientando a importncia das guas
fluviais e para futuras dificuldades para obteno de gua
superficial potvel.
Em nosso estudo objetivamos analisar possveis efei-
tos causados por substncias potencialmente genotxicas
e/ou citotxicas, assim, estudos futuros se fazem necessri-
os deteco especfica das genotoxinas e citotoxinas, a
fim de adotar medidas corretivas e preventivas.
O teste Allium para aberraes cromossmicas em
metfase/anfase um bom candidato para este
biomonitoramento. Alm disso, um bom indicador de
citotoxicidade o ndice mittico. Uma anlise qumica das
amostras poderia, em uma segunda etapa, identificar o tipo
de substncia causadora da genotoxidade e citotoxidade.
RESUMO
O presente trabalho teve como objetivo verificar o
potencial citotxico e genotxico em amostras de gua da
bacia do rio Tapanhon, Pindamonhangaba, So Paulo, utili-
zando o teste Allium. Foram coletadas amostras de gua do
rio Tapanhon e seus tributrios (crregos Primeira gua e
Segunda gua, ribeiro Galega) e amostra de nascente da
bica Borba para o controle negativo. Seis bulbos de Allium
cepa foram submetidos a cada uma das amostras por 24h.
As razes foram fixadas em etanol/cido actico 3:1, subme-
tidas reao de Feulgen e a poro meristemtica esmagada
em lmina para anlise celular. Foram contadas 6000 clulas,
para avaliao do ndice mittico (IM) e microncleos (MNC)
e 300 clulas nas fases de metfase/anfase, para a avalia-
o de aberraes cromossmicas (AC). No foi observado
MNC nas amostras testadas. Os valores do IM mostraram-
se elevados em todas as amostras testadas quando compa-
rados ao controle, porm com relevncia estatstica apenas
nas amostras do crrego Primeira gua e ribeiro Galega (p
< 0,05). Aberraes cromossmicas foram observadas em
todas as amostras (p < 0,05). Estes dados sugerem que ao
longo desta bacia h substncias indutoras de efeito
citotxico e genotxico que promoveram alteraes no or-
ganismo testado.
Unitermos: Allium cepa, aberraes cromossmicas,
genotoxicidade, citotoxicidade, teste Allium
71
AGRADECIMENTOS
Nosso agradecimento as Dra. Maria Ceclia Barbosa
de Toledo e Dra. Maria Clia Villac, docentes da Universida-
de de Taubat e a Dra. Gisela de A. Umbuzeiro, cientista da
CETESB, pela contribuio cientfica.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Antonsiewicz D. Analysis of the cell cycle inn the root
meristem of Allium cepa under the influence of Ledakrin.
Folia Histochem Cyto 1990; 28:79-96.
Ateeq B, Farah MA, Ali, MN, Ahmad W. Clastogenicity
of pentachlorophenol, 2,4-D and butachlor
evaluated by Allium root tip test. Mutation Res
2002; 514:105-113.
Cabrera GL, Rodrguez DMG. Genotoxicity of leachates from
a landfill using three plant bioassays. Mutation Res
1999; 426:207-210.
Cabrera GL, Rodrguez DMG, Maruri AB. Genotoxicity of
the extracts from the compost of the organic and the
total municipal garbage using three plant bioassays.
Mutation Res 1999; 426:201-206.
Centro de previso de tempo e estudos climticos (CPTEC).
Estao Primavera. Disponvel em http//
www.cptec.inpe.br/clima. Acessado em 02 Abril. 2005.
Chandra S, Chauhan LKS, Murthy RC, Saxena PN, Pande
PN, Gupta SK. Comparative biomonitoring of leachates
from hazardous solid waste of two industries using Allium
test., Sc. Total Environ 2005; 346:56-59.
Companhia de tecnologia de saneamento ambiental
(CETESB). Relatrio de Qualidade das guas Interiores
do Estado de So Paulo 2004. So Paulo, SP 2005a; 297 p.
Companhia de tecnologia de saneamento ambiental
(CETESB). Guia de coleta e preservao de amostras de
gua. Comunicao pessoal 2005b.
Dash S, Panda KK, Panda BB. Biomonitoring of levels of
mercurial derivaties in water and soil by Allium
micronucleus assay. Mutation Res 1988; 203:11-21.
Egito LCM, Medeiros MG, Medeiros SRB, Agnes-Lima LF.
Cytotoxic and genotoxic potential of surface water from
the Pitimbu river, northeastern/RN Brazil. Gen Mo. Biol
2007; 30:435-441
Evseeva TI, Geras Kin SA, Shuktomova II. Genotoxixity
and toxicity assay of water sampled from a radium
production industry storage cell territory by means of
Allium-test. J. Environ. Radioactivity 2003; 68:235-248.
Fiskesj G. The Allium test in wastewarter monitoring.
Environ. Toxicol. Water 1993; 8:291-298
Fiskesj G. The Allium test - a alternative in environmental
studies: the relative toxicity of metal ions. Mutation Res
1988; 197:243-260.
Fiskesj G. The Allium test as a standard in environmental
monitoring. Hereditas 1985; 102:99-112
Grant WF. Chromossome aberration assays in Allium.
Mutation Res 1982; 99:273-291.
72 Amaral A.M./Revista Brasileira de Toxicologia 20, n.1 e 2 (2007)
Grant WF. Higher plant assays for the detection of
chromossomal aberrations and mutations - a brief
historical background on their use for screening and
monitoring environmental chemicals. Mutation Res
1999; 426:107-112.
Grisola CK, Oliveira ABB, Bonfim E, Klautau-Guimares
MN. Genotoxicity evaluation of domestic sewage in a
municipal wastewater treatment plant. Genet.Mol. Biol
2005; 28:334-338.
Grover IS, Kaur S. Genotoxicity of wastewater samples from
sewage and industrial effluent detected by the Allium
root anaphase aberration and micronucleus assays.
Mutation Res 1999; 426:183-188.
Koivusalo M, Pukkala E, Vartiainen T, Jaakkola JJ,
Hakulinen T. Drinking water chlorination and cancer-a
historical cohort study in Finland. Cancer Causes
Control 1997; 8(2):192-200.
Koivusalo M, Jaakkola JJ, Vartiainen T, Hakulinen T,
Karjalainen S, Pukkala E, Tuomisto J. Drinking water
mutagenicity and gastrointestinal and urinary tract
cancers: an ecological study in Finland. Am J Public
Health 1994; 84(8):1223-1228.
Liu D, Jiang W, Li Maoxie. Effects of trivalent and hexavalent
chromium on root growth and cell division of Allium
cepa. Hereditas 1992; 117:23-29
Ma T, Xu Z, Xu C, McConnell H, Rabago EV, Arreola GA,
Zhang H. The improved Allium/Vicia root tip
micronucleus assay for clastogenicity of environmental
pollutants. Mutation Res 1995; 334:185-195.
Marcano L, Carruyo I, Campo AD, Montiel X. Cytotoxicity
and mode of action of maleic hydrazide in root tips of
Allium cepa L.. Environ. Res 2004; 94:221-226.
Marcano L, Bracho M, Montiel X, Carruyo I, Atencio L.
Efecto mitotxico y genotxico del cadmio en
poblaciones meristemticas de Allium cepa L. (cebolla)
Cincia 1998; 6:93-99.
Matsumoto ST, Mantovani MS, Malaguttii MIA, Dias AL,
Fonseca IC, Marin-Morales MA. Genotoxicity and
mutagenicity of water contaminated with tannery
effluents, as evaluated by the micronucleus test and
comet assay using the fish Oreochromis niloticus and
chromosome aberrations in onion root-tips. Genet. Mol.
Biol 2006; 29:148-158.
Matsumoto ST, Marin-Morales MA. Mutagenic potential
of the water of a river that receives tannery effuent
using the Allium cepa test system. Cytologia 2004;
69:399-408.
Mello MLS, Junqueira AC, Maria CCJ, Ribeiro DM, Ferreira
RC, Verssimo RV, Schildknecht PHPA, Monteiro G, Coltri
PP, Ogusucu R, Faria VG, Santos AB, Borges IG, Silva
EA. Monitoramento por ensaios biolgicos de poluio
ambiental no lago do parque ecolgico Hermneges
Freitas Leito Filho (1998 a 2004). In: I Congresso de
Meio Ambiente Paulnia e Regio Metropolitana de Cam-
pinas, 2004, Paulnia. Anais - CD-Rom. Campinas:
UNICAMP, 2004. p. 1-8.
Mello MLS, Vidal BC. A reao de Feulgen. Cincia e cultura
1978; 30: 665-676.
Moraes DSL, Jordo BQ. Degradao de recursos hdricos
e seus efeitos sobre a sade humana. Rev Sade Pblica
2002; 36(3):370-4
Nielsen MH, Rank J. Screening of toxicity and genotoxicity
in wastewater by the use of the Allium test. Hereditas
1994; 121:249-254.
Odeigah O, Nurudeen O, Amund OO. Genotoxicity of oil
field wastewater in Nigeria. Hereditas 1997; 126:161-167
Ohe T, Watanabe T, Wakabayashi K. Mutagens in surface
waters: a review. Mutat. Res 2004; 567:109-149.
Palcio SM, Espinoza-Quiones FR, Galante RM, Zenatti
DC, Seolatto AA, Lorenz EK, Zacarkim CE, Rossi N,
Rizzuto MA, Tabacniks MH. Correlation between heavy
metal ons (Copper, Zinc, Lead) concentrations and root
length of Allium cepa L. in polluted river water Braz.
Arch. Biol. Technol 2005; 48:191-196.
Pindavale. Dados Gerais sobre Pindamonhangaba. Dispo-
nvel em http:// www.pindavale.com.br/acidade/
dadosgerais.asp. Acessado em 31 Mar. 2005.
Quiblier C, Leboulanger C, San S, Dufour P. Phytoplankton
growth control and risk of cyanobacterial blooms in
the lower Senegal river delta region. Water Res 2008;
42(4-5):1023-34
Rank J, Nielsen MH. Genotoxicity testing of wastewater sludge
using the Allium cepa anaphase-telophase chromossome
aberration assay. Mutation Res 1998; 418:113-119.
SABESP. Sua regio. Disponvel em http://
www.sabesp.com.br. Acessado em 21 Mar. 2005.
Smaka-Kincl V, Stegnar P, Lovka, Toman MJ. The evaluation
of waste, surface and ground water quality using the
Allium test procedure. Mutation Res 1996; 368:171-179.
Umbuzeiro GA, Roubicek DA, Sanchez PS, Sato MIZ. The
Salmonella mutagenicity assay in a surface water quality
monitoring program based on a 20 year survey. Mutation
Res 2001; 491 1190-2001
Valedoparaiba.com. Geografia do Vale - clima. Disponvel
em http:// www.valedoparaiba.com/geografiadovale/
clima.asp. Acessado em 25 Mar. 2005.
Villanueva C, Kogevinas M, Grimalt J. Chlorination of
drinking water in Spain and bladder cancer. Gac Sanit
2001; 15(1):48-53.
Wang B. Cultural eutrophication in the Changjiang (Yangtze
River) plume: History and perspective. Estuar. Coast.
Shelf S 2006; 69:471-477