IFRJ INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DO RIO DE JANEIRO

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POP 005e1r2 ESPECTRO DE ABSORO DO AZUL DE BROMOFENOL EM FUNO DO pH

Autor: Instrumental Revisor: Mrcia Aprovao: Validade:

28/03/08 24/08/09 // //

1. Introduo
Obter o espectro de uma substncia consiste em submet-la a vrios comprimentos de onda ()
de uma faixa pr definida, medindo a absorbncia a cada e apresent-los em sequncia. Em
geral, o espectro apresentado em forma de grfico (absorbncia versus comprimento de onda),
e facilita a identificao do lmbda mximo - MAX, isto , a faixa de comprimento de onda cuja
absorbncia a de maior valor.
O espectro pode ser obtido em varredura, quando cada faixa medida em sequncia por um
nico detector, depois de separada pelo monocromador (elemento dispersor + conjunto de
fendas). Ou pode ser obtido de forma instantnea, quando os comprimentos de onda so
separados espacialmente pelo elemento dispersor (rede de difrao ou prisma) e atingem todos
ao mesmo tempo o detector mltiplo (Detector de Arranjo de Diodos DAD, por exemplo).

2. Procedimento
a) Preparo das Amostras (4 Amostras)

1 Azul de bromofenol em meio cido:

Adicionar 5,0 mL de HCl 0,10 mol/L em balo volumtrico de 50,0 mL e acrescentar 1,00 mL
de soluo de AZUL DE BROMOFENOL1. Avolumar com gua deionizada ou ultrapura;
2 Azul de bromofenol tamponado em pH 3,56:
Adicionar 10,0 mL de soluo tampo pH 3,562 em outro balo volumtrico de 50,0 mL e
acrescentar 1,00 mL de soluo de AZUL DE BROMOFENOL. Avolumar com gua deionizada ou
ultrapura;
3 Azul de bromofenol tamponado em pH 4,01:
Adicionar 10,0 mL de soluo tampo pH 4,01 em outro balo volumtrico de 50,0 mL e
acrescentar 1,00 mL de soluo de AZUL DE BROMOFENOL. Avolumar com gua deionizada ou
ultrapura;
4 Azul de bromofenol em meio alcalino:
Adicionar 5,0 mL de NaOH 0,10 mol/L em outro balo volumtrico de 50,0 mL e acrescentar
1,00 mL de soluo de AZUL DE BROMOFENOL. Avolumar com gua deionizada ou ultrapura;

Observar e fotografar a colorao das solues. Pedir instruo ao professor e utilizar o POP do
equipamento para utilizar o espectrofotmetro.

1
A soluo de azul de bromofenol deve ter concentrao prxima a 0,5 g/l.
2
A soluo saturada de tartarato cido de potssio gera um tampo 3,50.
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ATENO: este documento confidencial e s pode ser reproduzido para uso interno ou com a autorizao
do responsvel pelo laboratrio.
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Autor: Instrumental Revisor: Mrcia Aprovao: Validade:

28/03/08 24/08/09 // //

b) Obteno do Espectro
Utilize gua deionizada ou ultrapura como branco. A absorbncia do branco tambm varia a
cada . Logo, necessrio ajustar o zero da absorbncia (100% de transmitncia) com o
branco em cada comprimento de onda da faixa de trabalho;
Obter o espectro de absoro do indicador na faixa de 400 a 700 nm para as quatro solues
em espectrofotmetro com detector multicanal.
Obter os valores de energia (P e P0) na faixa de 400 a 700 nm com resoluo de 2 nm para as
quatro solues, em espectrofotmetro de varredura.
3. Tarefas
a) Apresentar os espectros obtidos no espectrofotmetro multicanal, identificar o max de cada
espcie (4 solues de azul de bromofenol) e identificar o ponto isosbstico;
b) A partir dos dados obtidos no espectrofotmetro de varredura (P e P0), montar o espectro de
absoro para as 4 solues em um mesmo grfico, com o auxlio de uma planilha eletrnica;

c) Estimar a absortividade de cada espcie do azul de bromofenol (meio cido e meio bsico);
d) Explicar, a partir da frmula estrutural do azul de bromofenol, os espectros de absoro
obtidos nos pHs 3,50 e 4,00. Estime as concentraes da mistura dos cromforos nesses pHs, a
partir das absortividades e absorbncias nos respectivos max de cada espcie.
Br Br Br Br
HO OH HO O

Br Br Br Br
O
S O SO3H
OH
Azul de Bromofenol
pH 3,0 (amarelo) MAX 436 nm pH 4,6 (azul) - MAX 592 nm
ref. J. Lurie - Handbook of Analytical Chemistry
4. Trmino
1. Rinsar a cubeta ao menos 3 vezes com gua deionizada e ultrapura, escorrer e deixa-la
secando.
2. Fechar os programas de aquisio e tratamento de dados.
3. Desligar o espectrofotmetro e cobri-lo com sua capa.
4. Lavar toda a vidraria usada e organizar a bancada.
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do responsvel pelo laboratrio.