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UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE ZOOTECNIA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA

Ao del Buen Servicio al Ciudadano

INFORME DE PRCTICA N 3

TEMA:

Tcnicas Bsicas para la Preparacin de Muestras: Tincin Simple y


Observacin en Fresco
CURSO:

Bases de la Vida Animal

PROFESOR:
Md. Vet. Pea Crdova, Kleyber

ALUMNA:

Mrquez Gallardo, Asly Luciana

AO:
I. INTRODUCCIN
El presente informe pone en manifiesto las tcnicas bsicas de tincin, las
mismas que fueron realizadas en el Laboratorio de Bromatologa. Durante la
prctica observamos protozoos mediante la observacin en fresco, y bacterias,
las cuales tienen un tamao tal que la mayora de sus clulas resultan difciles de
ver con el microscopio ptico, por la falta de contraste entre la clula y el
medio que la rodea, por lo que se recurre a la utilizacin de colorantes.
II. IMPORTANCIA

JCOME, L. 2013 seala que las tinciones en microbiologa son las primeras
herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnstico de las
enfermedades infecciosas. Desde hace ms de un siglo han ayudado a resolver
problemas de etiologa microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se
han ido desarrollando para la deteccin de los diferentes agentes infecciosos en
los que se incluyen bacterias, parsitos, protozoos y hongos.

III. OBJETIVO
Iniciar al estudiante en el correcto desarrollo de tcnicas bsicas de
coloracin.
IV. REVISIN BIBLIOGRFICA
4.1. TINCIN SIMPLE
4.1.1. AQUIAHUATL, M. 2012 seala que los microorganismos
vivos o activos son por lo general incoloros (excepto algas y
cianobacterias), por los que no se observarn con facilidad en un
microscopio ptico de campo claro por la falta de contraste entre
las clulas y el medio circundante, por lo que es necesario fijarlos
y teirlos en un frotis. Un frotis se prepara distribuyendo una
pequea suspensin de los microorganismos sobre una superficie
transparente que, posteriormente, se fija a la superficie con calor
o solventes orgnicos; lo que causar la inactivacin o muerte
celular y algunas modificaciones de sus caractersticas.
4.1.2. VOLKE, T. 2012 seala que la tincin simple se basa en la
afinidad del colorante por los componentes celulares. La tincin
puede ser uniforme o presentar algunos grnulos en su interior.
Se utiliza para destacar el microorganismo completo,
para que se vean las formas y las estructuras celulares
bsicas.
Se usa un nico reactivo, que preferentemente es de tipo
bsico y contiene un cromgeno (compuesto que da color
al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las
bacterias posee componentes con carga negativa que
atraen y enlazan el cromgeno. Se utilizan solo para
incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el
colorante y quedarn teidas del mismo color. Por tanto,
la tincin simple mejora la observacin de la clula
completa. Si se utiliza un mordiente (sustancia qumica
utilizada para intensificar la coloracin), hay que
aadirlo justo antes del colorante
Se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico
(azul de metileno, safranina).
Se denominan colorantes bsicos si el cromforo
(porcin coloreada) de la molcula est cargada
positivamente, por ejemplo, cristal violeta y azul de
metileno son colorantes bsicos. Otros colorantes de esta
categora utilizados con frecuencia en bacteriologa son
safranina, fuchina bsica y verde malaquita.
Bajo condiciones normales de crecimiento, la mayor
parte de los procariotas tienen un pH interno prxima la
neutralidad (pH 7.0) y una superficie celular cargada
negativamente, as los colorantes bsicos son los ms
eficaces.
4.2. OBSERVACIN EN FRESCO
4.2.1. DAZ, M. 2009 cita que la observacin en fresco consiste en
observar los microorganismos vivos que puede haber en el
producto examinado, sin fijacin ni tincin, en suspensin
acuosa, pudiendo objetivar su cantidad, sus caractersticas
morfolgicas y su movilidad. Es una tcnica de fcil realizacin,
en la que el producto a examinar se sita entre porta y
cubreobjetos. Si el material procede de una toma en medio slido
o de una toma directa, se emulsionar en una gota de agua
destilada o solucin salina. Si el material es lquido se depositar
directamente entre porta y cubre. El volumen de la gota debe ser
adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya que, en caso
contrario, un exceso de lquido se traducir en un desbordamiento
de ste bajo los lmites del cubre, o un cubre "flotante" que
dificultar nuestra observacin por la formacin de corrientes
lquidas. Si el producto va a permanecer mucho tiempo en el
portaobjetos, es conveniente prevenir la desecacin mediante la
aplicacin de parafina en los bordes inferiores del cubreobjetos.
La observacin se realiza, en general, con objetivo de 40x en
microscopio de campo claro. La microscopa de contraste de
fases y de campo oscuro facilita mucho la visin en fresco.

4.2.2. LPEZ, A. 2010 seala que la observacin en fresco, son todas


aquellas formas o mtodos de observacin, mediante los cuales
los objetos a investigarse, no sufren cambios o alteraciones en
cuanto a su forma, estructura o composicin qumica o sentido
de vitalidad de los mismos; para ello los objetos debern
ser observados tal como existen o mximo inmersos en un medio
similar, como el caso de las soluciones fisiolgicas. Solo as
podrn ser estudiados en su real y verdadera naturaleza. Estos
mtodos no suelen dar sin embargo la mxima visualizacin del
objeto. Su uso se recomienda para el estudio de parsitos en
heces, de secreciones corporales, etc. Las preparaciones en fresco
permiten observar a los microorganismos suspendidos en un
lquido en condiciones de vida normal. Es muy til para observar
especies que se daaran al teirlas o fijarlas, como espirilos, as
como para observar la movilidad, fenmenos de multiplicacin y
esporulacin.
V. MATERIALES

5.1.Microscopio ptico
5.2.Lminas portaobjetos
5.3.Laminillas cubreobjetos
5.4.Piseta con agua destilada
5.5.Azul de metileno o safranina.
5.6.Mechero
5.7.Asa de siembra
5.8.Material biolgico (cultivo bacteriano y agua estancada)

VI. PROCEDIMIENTO
6.1.TINCIN SIMPLE
6.1.1. En una lmina portaobjetos limpia, deposita una gota de cultivo
bacteriano con el asa de siembra, la cual previamente debe
esterilizarse en el mechero.
6.1.2. Con la misma asa de siembra extenderla suavemente.
6.1.3. Fijar la extensin del mechero.
6.1.4. Cubrir la extensin con cuatro gotas de azul metileno o safranina
por 1.
6.1.5. Lavar la extensin.
6.1.6. Fijar en el mechero
6.1.7. Observar en el microscopio.
6.2.OBSERVACIN EN FRESCO
6.2.1. En una lmina portaobjetos, colocar una gota de agua estancada.
6.2.2. Con una laminilla cubreobjetos, por capilaridad proteger la gota
de agua estancada.
6.2.3. Observacin microscpica.
VII. RESULTADOS

7.1.TINCIN SIMPLE

Fig.01 Tincin simple de cultivo bacteriano con safranina (40x)

7.2.OBSERVACIN EN FRESCO

Fig.02 Observacin en fresco de agua estancada (40x)


Fig.03 Observacin en fresco de protozoarios (40x)

VIII. CONCLUSIN
El adecuado uso del microscopio y la aplicacin de las normas de bioseguridad;
nos permitir las correcta realizacin de las tcnicas de tincin simple, y por
ende, la ntida observacin a travs del microscopio de microorganismos como
las bacterias (cocos, diplococos y racimos) y protozoarios (movimientos y
formas).

IX. BIBLIOGRAFA CONSULTADA

Volke T. 2012 Tincin Simple


Disponible en: https://es.scribd.com/doc/80998594/Tincion-Simple
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
Aquiahuatl, M. 2012; Prado, L.; M. Salazar Manual de Microbiologa
General-Universidad Autnoma Metropolitana.
Disponible en:
http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbi
ologia_general.pdf
Jcome, L. 2013; Durn, M. ; Coln, C. ;S. Ortega Las tinciones
bsicas en el laboratorio-Investigacin en discapacidad, Vol. 3, Nm. 1.
Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2014/ir141b.pdf
X. ANEXOS

Fig.01 Colorantes para la tincin de clulas

Fig.02 Clases de Bacterias

Fig.03 Protozoarios