Formulario para la presentacin de

Trabajos de Desarrollo Tecnolgico al

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa 2008 Regin
Metropolitana
IMPORTANTE: Formulario de mximo de 8 carillas, tamao carta, espaciado simple y en tipografa tamao 11. No modificar
la extensin de las dos primeras pginas. Recomendamos completarlo en equipo, estudiantes con su profesor/a. Completar
toda la informacin solicitada.
A. Ttulo del trabajo de desarrollo tecnolgico
Efectividad del uso de bacterias seleccionadas sobre biodegradacin de sustratos
orgnicos de origen vegetal.

B. Datos Generales de los autores/as (El nmero de representantes del equipo de trabajo es de 2
estudiantes y 1 profesor/a asesor/a, referirse a Bases, punto V. e).

Nmero total de estudiantes del equipo de trabajo ( incluir tantas filas como estudiantes participen):
Nombre completo Curso

Representante N1 del equipo de trabajo

Nombre:
Edad: Curso: RUT:
Establecimiento Educacional:
Direccin Particular:
Ciudad/Regin:
Telfono: e-mail:

Representante N2 del equipo de trabajo

Nombre:
Edad: Curso: RUT:
Establecimiento Educacional:
Direccin Particular:
Ciudad/Regin:
Telfono: e-mail:

Profesor/a Asesor/a
Nombre:
RUT:
Especialidad:
Establecimiento Educacional:
Direccin Particular:

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Telfono Celular e-mail
particular: personal:

Director/a del Establecimiento Educacional que respalda la propuesta

Nombre:
RUT:
Firma:
Nombre del Establecimiento Dependencia:
Educacional:
Direccin:
Ciudad/Regin:
Telfono: Fax: e-mail:

En el caso que su equipo de trabajo cuente con la colaboracin de un Cientfico/a Asesor/a en el

desarrollo del trabajo de investigacin presentado completen la siguiente informacin.
Cientfico/a Asesor/a
Nombre:
RUT:
Especialidad:
Institucin en la cual se
desempea.
Direccin Institucin:
Direccin Particular:
Ciudad/Regin:
Telfono: Fax: e-mail:

C. Mencionen si se ha desarrollado parte, o toda el trabajo de desarrollo tecnolgico en otras

instituciones, distintas a tu Establecimiento Educacional.

D. El trabajo ha sido presentada en otros eventos cientficos? S No

Nmbralos:
_______________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

Han ganado premios? S No

Nombre (s) de el/los premio(s):__________________________________

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 2
E. Resumen del Trabajo.
En nuestro pas hay muchos residuos de origen vegetal que se desechas en los jardines y
campos, nosotros proponemos estudiar los efectos de las bacterias del tipo Pseudomonas, sobre
la biodegradacin de estos sustratos orgnicos vegetales. Estas bacterias fueron seleccionadas y
aisladas por mtodos tradicionales sobre agar diferencial y luego en caldos bsicos de cultivos, se
incubaron en un biorreactor en el laboratorio en lnea de microescala; para obtener diversos
productos; como biofertilizantes y/o bioetanol.
Experiencias han determinado que es posible obtener diversos productos de la
descomposicin de sustratos orgnicos vegetales. Nosotros queremos probar su efectividad en
cuanto al uso de bacterias aisladas desde nuestro laboratorio, las que son capaces de inducir
enzimas importantes en la biodegradacin.

F. Presentacin del Problema:

Son muchos los residuos vegetales que se desechan en jardines y la agricultura, estos podran
ser usados en forma efectiva acelerando su reciclaje natural.
1. Nuestro equipo se interes en demostrar la biodegradacin de materia orgnica de origen
vegetal por bacterias aisladas del gnero Pseudomonas, para obtener un Biofertilizante
(Humusl) a bajo costo y/o Bioetanol.
2. Nos planteamos la idea de poner a prueba el uso de Pseudomonas en el proceso de
biodegradadcin aerbia y anaerbia de materia orgnica de origen vegetal, mediante el uso
de un Biorreactor.
3. Queremos probar la eficiencia de la biodegradacin por Pseudomonas sobre materia organica
de origen vegetal

La hiptesis que nos planteamos para el presente estudio es que las pseudomonas son
capaces de degradar materia orgnica y que se puede probar su accin mediante un Biorreactor.
El estudio es parte inicial de un proyecto que tiene como meta estudiar diversas bacterias
nativas, que permitan dilucidar el potencial de degradacin exitosa de materia orgnica para la
obtencin de Biofertilizante y/o Bioetanol, en un proceso ms acelerado.

G. Antecedentes de trabajos o soluciones previas relacionadas con el proyecto presentado:

La materia orgnica es la base de la vida. Por eso, los restos orgnicos no se pueden
considerar como desecho sino un recurso valioso para continuar garantizando la fertilidad de la tierra.
Con el proceso del compostaje la materia orgnica se convierte en un recurso de gran valor para frenar
la desertificacin y evitar la contaminacin de los residuos vegetales(hojas, ramas, pasto) (1).
Actualmente estudios han demostrado que la seleccin y bioaumentacin de las poblaciones
microbianas cuyas actividades aporten alguna utilidad, ya sea como antagonistas de patgenos o
plagas, o como promotoras de crecimiento est ocupando las principales reas de inters. Las
bacterias rizosfricas que promueven el crecimiento vegetal va la produccin de sustancias
estimuladoras del crecimiento, a travs de antagonismos con patgenos de plantas, o por incremento
en la disponibilidad de nutrientes esenciales se las incluye dentro de las bacterias promotoras del
crecimiento vegetal (Plant Growth Promoting Rhyzobacteria: PGPR) ( 5 ). Las Pseudomonas
fluorescentes son microorganismos, habitantes comunes del suelo que constituyen desde el punto de
vista de la biotecnologa ambiental un importante grupo de colonizadores rizosfricos, biodegradantes
de materia orgnica vegetal, por dicha razn su inoculacin es implementada para control biolgico,
biorremediacin y biofertilizacin. Este ltimo aspecto se encuentra asociado a la capacidad que tienen
las Psedomonas fluorescentes para degradar distintas formas de materia orgnica vegetal( 6).
Se evalu el efecto de la inoculacin con Pseudomonas sobre una muestra de materia de

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 3
origen vegetal, los determinantes de la biodegradacin y rendimiento, tuvo efecto significativo sobre el
contenido en azcares. Recientes investigaciones han demostrado la existencia de sinergismo entre
microorganismos solubilizadores de fosfato con hongos micorrzicos arbusculares. Estos ltimos seran
los responsables de la traslocacin del P del suelo hacia las races de las plantas ( 10 ).
En la actualidad, gran cantidad de residuos slidos urbanos hace necesario su tratamiento ( 4 ).
El compostaje es un mtodo eficiente en la eliminacin de estos residuos, ya que permite adems el
aprovechamiento del producto final ( 5 ). Este proceso tiene una duracin variable, dado por la calidad
de los residuos, el tamao de partcula, disposicin de la pila, aireacin, humedad y poblacin biolgica
activa. El perodo de transformacin es cercano a 170 das, e implica la acumulacin de gran cantidad
de material en las plantas de compostaje ( 7 ). En trabajos anteriores hemos ensayado inoculos
obtenidos con cultivos monomicrobianos de microorganismos extrados de las pilas, no encontrando
diferencias significativas en el tiempo de compostaje (8). Sin embargo, el inoculo constituy un
agregado significativo en nmero para producir una bioaumentacin y la reduccin del tiempo de
formacin y maduracin del compost ( 7 )
En el presente trabajo se prob la produccin de bioetanol y biofertilizante a partir de la accion
de Pseudomonas seleccionados sobre materia orgnica de origen vegetal, usando un biorreactor a
nivel de microescala.

H. Objetivos y resultados a obtener:

Objetivos:
4. Determinar el efecto de las bacterias Pseudomonas sobre la descomposicin de sustratos
orgnicos de origen vegetal
5. Bioaumentar las bacterias Pseudomonas con el fin de obtener un biofertilizante activado con estas
bacterias en un Biorreactor.
6. Establecer las posibles correlaciones existentes entre el desarrollo de estas poblaciones y la
descomposicin de los sustratos vegetales.
7. Probar la efectividad del este biofertilizante obtenido, en plntulas recin germinadas de poroto y
lentejas.
Resultados a obtener:
a. Las bacterias bioaumentadas en el Biorreactor son capaces de descomponer el sustrato orgnico
de origen vegetal
b. Estimular el crecimiento de las plntulas recin germinadas de Lentejas y Porotos la ser regadas
con el biofertilizante.
c. El producto resultante de la biodegradacin tiene propiedades similar al Vermi-compost Natural
Forma de validacin:
a) Probar la bioaumentacin bacteriana en el filtrado obtenido.
b) Obtener azcares fermentables en el filtrado del biorreactor.
c) Demostrar la capacidad fertilizante sobre crecimiento de plantas recin germinadas de Poroto y
Lentejas. La apreciacin del crecimiento y verificar los promedios de biomasa de las poblaciones de
plntulas trabajadas

I. Sealen los materiales utilizados en el proyecto tecnolgico.

Construccin deBiorreactor : Reconocimiento y anlisis bacteriolgico.
2 botellas de bebida desechables de 2 litros de 5 Cpsulas de Petri
capacidad con tapa.
1 botellas de plstico de12 litro de capacidad. Medidor de pH
3 metros de manguera de acuarios Medio de cultivo de Agar nutritivo
Una bomba de aireacin de acuario Medio de cultivo de Agar diferencial para bacterias
del suelos.
Una bomba impelente de agua cap. 60 cm. Estufa de cultivos.

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 4
 Alambre Set de tincin Gram.
Tapn de goma Microscpio.
Buffer fosfato pH 7,1 Asa de nicron
Silicona lquida para sellar. Pipetas.
Efectividad del biofertilizante :
30 vasos desechables Arena fina esterl
2 Pipetas de 10 ml. Grava fina
Olla a presin Esferas de Pluma vit
Balanza analtica. Tierra de Hojas
PBS Agua destilada
Jeringa de 5 ml. Invernadero casero.
Presencia de Bioetanol
2 Pipetas de 10 ml 6 tubos de ensayo
Balanza analtica cido sulfrico diluido (50%)
Papel filtro, embudo de vidrio Pipetas de 10 ml.
Vaso precipitado de 500 ml. Dicromato de potasio
Matraz de Erlenmeyer de 200 ml. Horno Microondas
.cido sulfrico , Dicromato de porasio

K. Presentacin de Resultados:
Se evalu por triplicado el crecimiento bacteriano en el
biorreactor, utilizando el mtodo de dilucin y siembra en placas con
medio agar nutritivo. Las placas sembradas se incubaron a temperatura
entre 20 y 25C en una estufa de cultivo, se realiz el recuento de
colonias por Unidad de formacin de colonias cada 24 horas, dando el
siguiente resultado:
Tabla N 1: N de unidades formadoras de colonias de muestras extradas del
Biorreactor.
N De Placa UFC/ 24 horas UFC 48 horas UFC 72 horas
Placa 1 8 21 32
Placa 2 17 28 31
Placa 3 18 30 25
SUMA 43 79 88
PROMEDIO 14,3 26,3 29,3

Grfico N 1: Promedio de formacin UFC de muestras extradas del biorreactor cada 24 horas por 3
das

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 5
A La evaluacin del biofertizante resultado (humus) en el crecimiento de plntulas recin germinadas de
porotos y lentejas fue el siguiente:

Experimental 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
48 horas - - - - - - - - - - Sin crecimiento = -
4 dias - - - - - + - + + - Poco Crecimiento= ++
6 das - - + - + - + + + ++ Crecimiento notable = +++
8 das + + + + + ++ ++ ++ + +
10 das ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ +++
12 das ++ ++ ++ ++ ++ +++ - +++ +++ +
14 Das ++ ++ +++ +++ +++ +++ ++ +++ + +++

Control 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
48 horas - - - - - - - - - - Sin crecimiento = -
4 dias - - - - - + - + + - Poco Crecimiento= ++
6 das - - + - + - + + + + Crecimiento notable = +++
8 das + + - - - + - + + -
10 das - - - - - - - - - -
12 das - - - + + + - + - -
14 Das - + + - - - - - - -

Control 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
48 horas - - - - - - - - - - Sin crecimiento = -
4 dias - - - - - + - + + - Poco Crecimiento= ++
6 das - - + - + - + + + ++ Crecimiento notable = +++
8 das + + + + + ++ ++ ++ + +
10 das - + - + ++ + + ++ ++ +++
12 das ++ ++ + + + +++ - +++ +++ +
14 Das + + ++ + ++ + + + + ++

Tabla N 2 y Grfico N 2 de la biomasa hmeda al final del perodo de crecimiento de 2 semanas:

(MEDIDA EN Gramos)

Experimental Control 1 ( Tierra de hojas +agua detilada) Control 2 ( PBS)

1 4,5 1 2,2 1 3,1
2 3,5 2 1,1 2 3,2
3 4,1 3 2,2 3 3,5
4 3,7 4 3,0 4 4,1
5 3,9 5 1,5 5 3,4
6 4,1 6 1,5 6 4,0
7 4,2 7 2,2 7 3,5
8 3,6 8 2,1 8 3,1
9 3,5 9 1,9 9 2,9
10 3,5 10 1,8 10 3,0
SUMA 38,6 19,5 33,8
PROMEDIO 3,86 1,95 3,38

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 6
Se verific el contenido de bioetanol del filtrado del Biorreactor con la reaccin con acido crmico en 2 ml de
muestra por triplicado cada 72 horas. Los resultados se registr en la siguiente tabla:

Presencia de Alcohol Da 3 Da 6 Da 9 Da 12
1 === ++ +++ ++++
2 + ++ +++ ++++
3 === + ++ +++
TABLA 3: INTENSIDAD RELATIVA COLORIMETRICA DEL COLOR VERDE (PRESENCIA DE ALCOHOL)
(+)= aparicin de alcohol
(=)= No hay presencia de alcohol

M. Conclusiones:.
De acuerdo a los resultados (Grfico 1)confirmaron que las Pseudomonas en el Biorreactor
son eficientes para degradar materia orgnica de origen vegetal en condiciones controladas,
proliferando sin problemas. Se produce un biofertilizante de caractersticas de eficiencia superior a
la de la tierra de hojas, denotado significativamente en el crecimiento de las pltulas de Lentejas y
Porotos (Grafico N2). Las proyecciones de esto tienen validez dentro de la dimensin del sustrato
de origen vegetal utilizado y el tiempo empleado para su descomposicin natural, y el tiempo de
cultivos de las plntulas que fueron 2 semanas a microescala .
De acuerdo a lo observado el contenido de la materia orgnica y la presencia de
Pseudomonas, es cierto que el proceso de biodegradacin puede ser acelerado, se demostr que
tambin se podra eliminar en gran medida el mal olor causado por la descomposicin.
Por otro lado el proceso del compostaje dirigido con el biorreactor dio a lugar a un material
de descomposicin muy fino soluble de fcil aplicacin, lo que podra significar su uso en la
fertilizacin de jardines o predios. En este caso se podra mezclar con tierras desgastadas y as
darle un uso adicional.
Las bacterias que fueron aisladas hicieron su trabajo en un tiempo aprox, de 2 semanas,
sin embargo no sabemos si se requera otras bacterias u hongos para llegar a un producto de ms
eficiencia en la induccin del crecimiento vegetal. El biofertilizante obtenido podra ser muy til en
la recuperacin de suelos desgastados, pero no sabemos si por s slo fuese capaz de devolver
todo el potencial del suelo.
Los resultados (TABLA 3) confirmaron que las Pseudomonas usadas son eficientes para
degradar aserrn en las condiciones proporcionadas por el Biorreactor, lo cual se evidencia por la

III Congreso Escolar de Ciencia y Tecnologa EXPLORA CONICYT 2008 Regin Metropolitana 7
aparicin de bioetanol. Adems se puede apreciar que esta ocurre con posterioridad a los 6 das
desde su incubacin.La obtencin de bioetanol, fue mnima, por lo que no sestamos seguros si las
condiciones utilizadas para el trabajo de las seudomonas es el ms adecuado para obtener este
alcohol, como tampoco medimos la eficiencia de la bacteria empleada para este efecto. Sin
embargo, nuestros hallazgos son un pequeo aporte al uso de los residuos vegetales, esto podra
ser una fuente ms para realizar un reciclaje controlado de bajo costo, inclusive para emplearlo a
nivel de hogares, granjas u otros lugares donde se produzcan desechos orgnicos vegetales..
En la fotografa N 2 se muestra las reacciones de identificacin del bioetanol a los 3, 6, 9 y
12 das de incubacin, es evidente que hay formacin de bioetanol, debido a los azcares
removibles desde el sustrato utilizado y sobre el cual trabaj la Pseudomona, sin embargo hacia el
12 da se percibe una disminucin en la reaccin, posiblemente debido al agotamiento de la
capacidad biodegradadora de estas bacterias, por factores como acmulo de sustancias que
dificultan la biodegradacin, descomposicin del bioetanol ya producido, falta de otros factores de
crecimiento, etc. Seguimos pensando que todava hace falta mayor investigacin y aplicacin de
las ya existentes, de modo se pueda establecer una metodologa para extraer ms eficientemente
Bioetanol a partir de desechos orgnicos de origen vegetal.
La proyeccin de esta investigacin puede ser desde el punto de vista del uso de cepas
bacterianas de Pseudomonas que pueden ser ms eficientes en esta descomposicin acelerada:
Se podra utilizar otras cepas de Pseudomonas inducibles genticamente y probarlas con
diversos sustratos(papel o aserrn), y as obtener otros productos tiles como etanol, metano, etc.
Otro punto de vista podra ser perfeccionar el uso de este biorreactor para aumentar la
eficiencia y la precisin en la obtencin de datos, para probar la accin de cepas aisladas para ser
usadas en la biodegradacin de estos sustratos orgnicos provenientes de diversas fuentes.

N. Bibliografa Consultada.
1) www.scielo.org.ar/pdf/ram/v37n2/v37n2a11.pdf -
2) www.scielo.org.pe/scielo.php
3) www.encuentros.uma.es/encuentros61/pseudomonas.htmlAlexander M. 1980.
4) Introduccin a la Microbiologa del suelo. AGT. Edit. S.A. Mxico.
5) Dashti N., Zhang R., Hynes R. & Smith D. 1997. Application of plant growth-promoting
rhizobacteria to soybean (Glycine max (L.) Merr.) increases protein and dry matter yield
under shortseason condition. Plant Soil. 188: 33-41.
6) Prez C., De La Fuente L., Arias A. & Altier N. 2000. Uso de Pseudomonas fluorescentes
nativas para el control de enfermedades de implantacin en Lotus corniculatus L.
Agrociencia. IV (1): 41-47.
7) Santillana N. 2001. Efecto de la Biofertilizacin en el crecimiento de Trifolium repens y
Lolium multiflorum en condiciones de invernadero. En: Vilca, J. (Edit). 2001. Investigacin.
(9). ISSN 1684-0089.
8) Santillana N., Freire J.R.J., S, E.L.S. & Sato M. 1998. Avaliao de estirpes de Rizbio
para a produo de inoculantes para trevo vermelho. R. Bras. Ci. Solo. 22(2): 23137.
9) Siquiera O. & Franco A. 1988. Biotecnologa del suelo. Fundamentos y perspectivas para
las Ciencias Agrarias en los Trpicos Brasileos. Escuela Superior de Agricultura de
Lavras, Brasil.
10) Zago V., De-Polli H. & Rumjanek N. 2000. Pseudomonas spp. Fluorescentes Bacterias
promotoras de crescimento de plantas e biocontroladoras de fitopatgenos em sistemas de
produo agrcola. Seropdica: EMBRAPA Agrobiologa. 32p. EMBRAPA-CNPAB,
Documento N 127. SIN 0104-6187.

NOTA: Los espacios destinados a cada tem dentro del formulario pueden ser adaptados segn las necesidades de cada
trabajo, respetando el lmite mximo de 8 carillas.

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