UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRION

INGENIERA Ambiental

Ing. Qco. Julio Asto Lin

Docente del curso

Presentado Por:

Leslin Licet BALVIN BUSTAMANTE

Anlisis Instrumental
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INGENIERA Ambiental
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INGENIERA Ambiental

La dilucin es la reduccin de la concentracin de una sustancia qumica en

una disolucin.
La dilucin consiste en rebajar la cantidad de soluto por unidad de volumen de
disolucin. Se logra adicionando ms diluyente a la misma cantidad de soluto: se
toma una poca porcin de una solucin alcuota y despus esta misma se introduce
en ms disolvente.

Aprender a usar el equipo espectrofotmetro.

Realizar la prctica de manera ms precisa y con buen desempeo.
Hallar a graficas las ondas conoidales mediante los datos obtenidos de la
dilucin de solucin.
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Piseta.
Solucin estndar.
Agua destilada.
3 fiolas de 50 ml.
Cubeta.

Micropipeta Electrofotometro
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SOLUCIONES ESTANDAR: Son soluciones concentradas que venden las empresas de

reactivos qumicos.

Una solucin estndar se compra teniendo en cuenta el analito que se quiere analizar. Para su
conservacin la solucin estndar viene disuelta en un medio cido o alcalino.

Dilucin de Soluciones Estndar

Para los anlisis las soluciones estndar son muy concentradas (1000 ppm) y debern diluirse
(Bajar su concentracin) aadiendo ms agua.

SOLUCIN DILUDA = SOLUCIN PATRN

SOLUCIONES SOLUCIONES
STANDAR PATRONES

LEY DE LA DILUCIN

La cantidad de soluto se mantiene constante antes y despus de una dilucin. Por tanto, lo que
vara es la cantidad de solvente (agua)... Se aade:

n moles de soluto en E = n moles de soluto en P

VC = VC
E E P P
Solucin Concentrada Solucin Diluida
SOLUCION ESTANDAR SOLUCION PATRON
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Volumen de solucin estndar a medir

VE, Volumen de la solucin concentrada estndar a medir. V = V (C /C )

CE, Concentracin de la solucin concentrada estndar: 1000 ppm E P P E
VP, volumen de la solucin patrn a diluir.
CP, concentracin de la solucin patrn (diluida).
Conversin de ml a l
1 mililitro = 1000 microlitros
Como vE resultan pequeos valores en ml, los ml. deben pasarse a l.

ESPECTROFOTOMETRA ULTRAVIOLETA VISIBLE. LEY DE

LAMBERT-BEER.
Los mtodos espectroscpicos de anlisis estn basados en la medida de la radiacin
electromagntica que es absorbida o emitida por una sustancia. En funcin de ello se clasifican
fundamentalmente en:

Mtodos de absorcin: Se basan en la disminucin de la potencia de un haz de radiacin

electromagntica al interaccionar con una sustancia.

Mtodos de emisin: Se basan en la radiacin que emite una sustancia cuando es excitada
previamente por medio de otro tipo de energa (trmica, elctrica).

Mtodos de fluorescencia: Se basan en la radiacin que emite la sustancia cuando es

excitada previamente por un haz de radiacin electromagntica.

Otras clasificaciones de los mtodos espectroscpicos se establecen en funcin de la regin del

espectro electromagntico que interviene en la tcnica. As, pueden utilizarse regiones como rayos
X, ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas, etc. En la Figura pueden verse las regiones del
espectro electromagntico, en funcin de los valores de la longitud de onda () de cada radiacin:
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En esta figura puede tambin observarse como la luz visible para el ojo humano constituye
nicamente una pequea parte del espectro electromagntico.

Dado que los primeros mtodos espectroscpicos desarrollados corresponden a la regin del visible
recibieron la denominacin de mtodos pticos, la cual se utiliza todava con frecuencia. A
continuacin, se ofrece una breve informacin sobre la ley de Lambert-Beer y la espectrofotometra
de absorcin en la regin visible del espectro.

De acuerdo con estas expresiones, si la muestra no absorbe radiacin, P y P0 coinciden, por lo tanto,
A=0, y se transmite toda la radiacin T=1 (100% de transmitancia). Si, en otro caso, se transmite
solo un 1% de radiacin (T=0.01), P=P0/100, la absorcin de radiacin que ha tenido lugar
corresponde a A=2.

Al incidir radiacin electromagntica visible sobre la materia puede ser totalmente absorbida o
totalmente reflejada. En el primer caso el objeto aparecer de color negro y en el segundo de color
blanco. Puesto que nosotros percibimos los objetos por medio de la luz reflejada, si hacemos incidir
un haz de luz blanca (que contiene todas las longitudes de onda) sobre un objeto, ste absorber
ciertas longitudes de onda y reflejar otras, siendo stas ltimas las responsables del color. Se dice
que este color (observado) es complementario del que se percibira si la luz absorbida se pudiera
detectar. Dado que en la parte experimental de esta prctica las medidas van a realizarse con
espectrofotometra visible, es conveniente conocer para qu longitud de onda tiene cada color su
mxima absorcin, lo que se muestra en la tabla siguiente:

Longitud de Onda de Color Absorbido Color Observado

Mxima Absorcin (nm)
380-420 Violeta Amarillo-verde
420-440 Azul-violeta Amarillo
440-470 Azul Anaranjado
470-500 Verde-azul Rojo
500-520 Verde Prpura
520-575 Amarillo-verde Violeta

Pantalla de visualizacin
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Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es
necesario seleccionar previamente una
longitud de onda puesto que tanto A como
varan con ella. Para ello se obtiene
previamente el espectro de absorcin de la
sustancia, que consiste en una representacin
de los valores de absorbancia frente a la
longitud de onda expresada en nanmetros
(nm). Del espectro de absorcin puede
seleccionarse el valor de longitud de onda para el cual la absorbancia es mxima. La Figura muestra
dos ejemplos de espectro de absorcin.

Espectro electromagntico es la distribucin

energtica del conjunto de las ondas
electromagnticas.
Por lo general, las radiaciones electromagnticas
se clasifican en base a su longitud de onda.
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Preparacin de una solucin estandarizado de Cu de 1000ppm, dilucin de

solucin, curva patrn, obtencin de longitud mxima y determinacin de una
muestra desconocida.

1. En una balanza analtica se pesa o.5g/500ml de Cu.

2. Se disuelve el Cu con una cantidad de cido ntrico concentrado (lo suficiente para
disolverse el Cu).

3. Una vez disuelto echar a la fiola y completar con agua destilada y amoniaco y hacer hervir.

OJO: se hace hervir a ebullicin suave

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Siguiendo con la prctica para obtener la solucin patrones se seguir los
siguientes pasos:

4. Primero se debe de lavar las 3 fiolas para su respectivo uso.

5. Encontrar los volmenes de solucin estndar de concentracin 1000 ppm, para preparar
3 soluciones patrones de concentraciones 1ppm, 3 ppm y 5 ppm utilizando fiolas de 50 ml.

6. Una vez hallada los volmenes. En la 1ra fiola se introduce 50 uL de solucin estndar, En
la 2ra fiola se introduce 150uL de solucin estndar, en la 3ra fiola se introduce 250uL de
solucin estndar. Todo con la ayuda de la micro pipeta.

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7. Luego a cada fiola que obtiene solucin estndar se le agrega agua destilada completando
los 50 ml de la fiola con la Pizeta.

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8. Luego se agita las fiolas haciendo que se disuelva la solucin.

1 2

9. Colocar en la cubeta una alcuota del blanco (agua sola). En 400 nm de , la lectura de A
debe ser 0 si no lo fuera ajustar a este valor con el botn respectivo.

10. Espectrofotmetro UV-Visible a diferentes dentro del rango Visible (400-800 nm)
aumentando de 20 en 20 nm y anotando la A en cada caso. Graficar A vs . El pico ms alto
del grfico ser max. Trabajando con la solucin patrn mayor(5ppm)

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Se debe diluir obteniendo por lo menos tres tipos de diluciones.

DILUCION 1: 3ppm
3 5 7
DILUCION 2: 5 ppm
PPM
PPM PPM
DILUCION 3: 7 ppm

Sol. Cp, VE = 0,1Cp VE, uL Agua aadida 100 -

Patrn ppm mL VE, mL

Blanco 0 0 0 0

3 1,5 0,15 mL 150uL 99,85mL

5 2,5 0,25mL 250uL 99,75mL

7 3,5 0,35mL 350uL 99,65mL

La cubeta una alcuota de la solucin patrn de mayor concentracin (7ppm)

Pico
ms
alto
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Grafica de la curva patrn y obtencin de longitud mxima.

900

800
700
600
500
400
300
200
100
0
0 5 10 15 20 25

Grafica para la determinacin de una muestra desconocida.

Absorbancia ppm
0.014 3
0.026 5
0.035 7

ppm
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04
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Se logr el reconocimiento adecuada de los materiales de laboratorio y su funcionamiento para

aplicar en la carrera de ingeniera ambiental para un mundo sostenible.
atendimos a la explicacin concreta por parte del ingeniero sobre como es el funcionamiento del
instrumento de laboratorio.
esta prctica nos ayuda a realizar procesos de control en las muestras de agua, como determinar los
diversos elementos que estn contenidos en ello.
gracias a esta prctica tenemos el conocimiento de cmo utilizar los dos diversos tipos de
espectrofotmetros.

Hewlett Packard. 1988. The Diode-Array Advantage in UV-VIS Spectroscopy. Publication

No12 - 55948912.

Inge, J.A. Jr. and Crouch, S.R. 1988. Spectrochemical Analysis. Prentice Hall International,
Inc.

Skoog, D.A. y West, D.M. 1984. Anlisis Instrumental. 2a edicin. Ed. Interamericana.