METODOS PARA EL CONTROL MICROBIOLGICO

METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE (N.M.P)

Este mtodo es el ms utilizado para realizar el anlisis del agua potable , el cual es un
mtodo estadstico que sigue una distribucin de Poisson y que considera el nmero de
porciones de muestra que siembra en un medio de crecimiento apropiado y el nmero de
coliformes presentes en dicha porcin.
Mediante el mtodo del N.M.P. vamos a poder realizar el conteo de coliformes totales
presentes en la muestra de agua y luego, si hay coliformes en la muestra, tambin podremos
distinguir entre los coliformes de origen fecal y los de origen no fecal. El microorganismo
caracterstico que indica la presencia de coliformes de origen fecal es Escherichia coli,
mientras que el grupo de coliformes no fecales est dado por un mayor nmero de
representantes que pertenecen a las enterobacterias, tales como Escherichia sp., Klebsiella,
Enterobacter y Citrobacter, y cuyo hbitat generalmente es el suelo y la vegetacin.
METODOLOGA E INTERPRETACIN DEL N.M.P.
Durante la primera parte del mtodo se siembran 3 diluciones seriadas en base 10 de la
muestra de agua a analizar en un tubo conteniendo medio de cultivo Brila Fluorocult y la
conocida campana de Durham. La siembra de cada dilucin se hace por triplicado. El medio
de cultivo utilizado se caracteriza por contener lactosa como fuente de carbono. Entonces, si
hay coliformes, fermentan la lactosa con la produccin de gas como producto de la
fermentacin y se observa la presencia de aire en el interior de la campana. El nmero de
coliformes totales se puede determinar eligiendo el triplete de diluciones seriadas en el cual
se observa ausencia de crecimiento en alguna de las rplicas de la mayor dilucin y
crecimiento en todas las rplicas de la menor dilucin, encontrando una situacin intermedia
en la segunda dilucin.
Una vez confirmada la presencia de coliformes, se intenta identificar en la segunda parte del
mtodo si hay o no coliformes fecales. Existen variantes para poder confirmar el resultado.
La forma ms rpida es utilizando los mismos tubos sembrados anteriormente en el medio
Brila. Otro de los componentes de este medio de cultivo es el MUG, 4-metilumbeliferil-B-D-
glucurnido, un compuesto que puede ser sustrato de la enzima B-D-glucuronidasa para dar
otro compuesto, el 4-metilumbeliferona. Este producto final es fluorescente al ser excitado
por luz ultravioleta. De todos los coliformes nombrados anteriormente, solo Escherichia coli
es capaz de sintetizar esta enzima, por lo tanto, si colocamos los tubos bajo la luz ultravioleta
y vemos fluorescencia, es un indicador de la presencia de coliformes fecales.
Para confirmar el resultado se calcula el N.M.P. de coliformes no fecales sembrando las
muestras, en las mismas diluciones que antes y por triplicado tambin, en tubos con caldo
Citrato de Koser. Este medio se caracteriza por utilizar el citrato como nica fuente de carbono
y que solo los coliformes no fecales pueden utilizar.
El N.M.P. se calcula mediante tablas de estadstica que establecen la cantidad de bacterias
segn la cantidad de tubos de rplica positivos y la dilucin utilizada.
En base a los resultados de estos anlisis se establece el siguiente criterio para la aceptacin
del agua potable para consumo:
Coliformes totales: <2,2 coliformes totales/100ml
Coliformes fecales: 0 coliformes/100ml