PRCTICA N 01

RECONOCIMENTO Y MANEJO DEL MATERIAL DE LABORATORIO DE MICOLOGA

El trabajo en un laboratorio involucra el uso de equipamientos, ya que, debe contener los

suministros y equipos necesarios para la realizacin de las diferentes pruebas micolgicas y
otros elementos cuyos riesgos es necesario conocer y que ser necesario prevenir en todos los
casos.

.- MATERIAL DE VIDRIO

PLACAS DE PETRI .- . Se utiliza para el cultivo de cualquier tipo de microorganismo y

tambin permiten el aislamiento del hongo.

LAMINAS PORTAOBJETOS.- se utilizan para tcnicas de laboratorio en las que se hacen

observaciones en vivo o o exmenes directos.

LAMINAS CUBREOBJETOS.- las que se cubren las muestras que quiero ver al
microscopio.

- MATERIAL DE METAL

ASAS MICOLGICAS.- Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos

(pequeo volumen que contiene microorganismos en suspensin) al medio de cultivo

MICROSCOPIO.- que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser
vistos a simple vista, es decir, permiten aumentar el tamao de los microorganismos cientos o
miles de veces.

Material de esterilizacin

Autoclave.- es un procedimiento de eleccin para el instrumental de uso medico repetido ,

funciona a 121C durante un minimo de 20 minutos

Calor seco .- horno se emplea para utensilios de vidior o metal (pipetas) que pueden soportar
a una temperatura de 170 C por dos horas

Otros materiales

Algodn

Alcohol yodado .- permite hace una desinfeccin intensiva del material de trabajo

Mechero de alcohol.- para dar un potente calor calorfico y evitar intervencin de otros
patgenos ambientales .

Toma de muestra

La toma de muestra clsica se hace mediante raspado de las uas con una cucharilla, bistur o
cureta, el instrumental se introduce tomando parte de la base o el lado cncavo de la ua. De
forma reciente, es posible utilizar aparatos especiales para la perforacin de las uas y obtencin
del polvo de las mismas;. Lo ms adecuado es que el paciente coloque el dedo (de pie o mano)
sobre una caja de Petri, para que el polvo de la perforacin caiga directamente sobre sta y
obtener gran cantidad de polvo de uas, sin que se lastime al paciente. La muestra obtenida se
puede guardar en la misma caja de Petri o entre dos portaobjetos cubiertos, para su transporte
y posterior anlisis, o bien se puede colocar sobre un portaobjetos para para su estudio
inmediato.

Para certificar que la muestra es positiva o negativo realizamos un examen directo

3.1. EXAMEN DIRECTO

Es una tcnica rpida que puede ser til al clnico y en algunos casos llegar a ser diagnstica.
Entre los principales exmenes directos tenemos:

3.1.1. Hidrxido de potasio (KOH)

Disuelve rpidamente las clulas permitiendo digerir material proteico, observando con mayor
nitidez los elementos fngicos, Adicionalmente, La observacin de hifas, permite sugerir la
presencia de invasin mictica.

Observacin de microscopio.-

Si en la observacin en el microscopio hubo presencia de hifas entonces pasamos al siguiente

paso aislar

Luego: se prepara el medio oga a travs de dos elementos:

Medio Sabouraud dextrosa (SAB):

Se le emplea para el aislamiento primario, identificacin y mantenimiento de la mayora de los

hongos patgenos. Su cantidad fue 150 ml.

Pesar:

Peptona 10 g

Glucosa 20 g

Agar 20 g

Agua destilada 1000 mL

Disolver los ingredientes en el agua destilada.

Controlar el pH a 5,6.

Esterilizar a 121 C por 15 minutos.

Verter en tubos o placas.

La Oxitetraciclina tiene un efecto antimicrobiano se debe a que inhibe la sntesis de protenas.

La Oxitetraciclina es activa contra una gran variedad de grmenes Gram positivos y
gramnegativos. Su cantidad fue o.3 ml.

OGA: Oxitetraciclina glucosa agar

Una vez licuado el agar Sabouraud y a temperatura ambiente se mezcla con el antibitico ya
mencionado y luego se vierte en placas. Dejamos unos minutos que se solidifiquen y pasamos a
aislar con la muestra clnica

Para inocular la muestra:

Primero hacemos la correcta rotulacin : nombre del paciente , que tipo de muestra clnica, y
fecha en que sembr.

Usamos la aza fngica que es de forma d ngulo recto que facilita la extraccion de la muestra
para ser inoculada al medio

Con mechero en nuestro lado esterilizamos la aza , luego extraemos muestra y luego se hace un
pequeo orificio en el medio y colocamos la muestra luego se esteriliza la aza nuevamente se
tapa la placa Petri envolvemos y lo dejamos a temperatura ambiente hasta ver resultado
crecimiento fngico

Observacin de oga .-

Cultivo en agar Sabouraud .- es utilizado para el aislamiento e identificacin de hongos (formas

miceliares y formas levaduriformes)

Resultados de sabouraud

Materiales:

Materiales: Placa de petri ; portaobjetos; cubreobjetos; doblar una barra de vidrio ( V de

vidrio); pinzas de diseccin; lanceta de siembra; agua destilada; placas con medio de cultivo
(Saboureaud glucosa o Saboureaud cloranfenicol o un medio morfolgico adecuado)

Construccin de la V de vidrio

1.- Fabricacin de la V de vidrio

 1.1 -Cortar una varilla de vidrio de longitud algo inferior al dimetro de la placa de
petri

1.2 - Calentar la parte central de la varilla con la llama del mechero Bunsen

1.3 - Doblar en forma de V

Esterilizacin

2 -Esterilizar en el autoclave el material (portaobjetos, cubreobjetos, V de vidrio, agua

destilada y medio de cultivo)

Cultivo:

3 Cultivo: 3.1 -Introducir la barra de vidrio en la placa

3.2 -Colocar el portaobjetos sobre la barra de vidrio

3.3 -Recortar un cuadradito de medio de cultivo(superficie = de la del cubreobjetos).

Colocarlo sobre el portaobjetos. Ver Video

3.4 Tomar un fragmento de micelio e inocular en los cuatro lados del medio de
cultivo. V

3.5 -Colocar el cubreobjetos sobre el medio de cultivo inoculado.

3.6 -Aadir el agua destilada esteril en la placa.

3.7 -Cerrar la placa

Observacin

1) Hifa, (2) Conidiforo, (3) Filide, (4) Conidia, y (5) Septos

Secado
Sellado

4 .1- Colocar una gota de lactofenol sobre un portaobjetos limpio

4.2 - Flamear las pinzas

4.3 -Retirar el cubreobjetos

4.4 - Colocar el cubreobjetos sobre el portaobjetos y esperar unos instantes para que
acte el lactofenol

4.5 -Observar al microscopio con el objetivo seco fuerte (x40)

Localizar estructuras caractersticas del hongo (conidioforos, esporangios,...)