DEFINICION DEL PROBLEMA

El proceso de extraccin del DNA es una tcnica muy importante para los bilogos que deben
poner en prctica, esta consiste en separar el DNA de cualquier tipo de tejido ya sea vegetal o
animal, en este caso se trabajo con tejido animal (hgado de pollo), para esto se necesitan
ciertas sustancias para lograr la separacin y de material por supuesto. Para la separacin de
este tejido solo se tiene que cortar una pequea porcin de membrana del hgado, solo una
pequea porcin se necesita para la separacin y extraccin.

OBJETIVO GENERAL

Extraer y separar DNA Y RNA de tejido animal (hgado de pollo), para observar sus
caractersticas.

JUSTIFICACIN

El objetivo de esta prctica es conocer como separar y extraer DNA a partir de un tejido animal
(hgado de pollo), siguiendo una metodologa dada por el profesor como se menciono en la
parte anterior un bilogo debe como conocer y aprender cmo se da la extraccin y la
separacin del DNA para que en un futuro determinado se llegara a presentar esto, nosotros ya
sabemos de que se trata este trabajo.

FUNDAMENTO TERICO

Como ya mencionado en la parte anterior la metodologa o el manual del trabajo nos fue
entregado de manera individual, pero se trabajo de manera en equipo, el manual del trabajo
nos brinda la siguiente metodologa o sea todos los puntos a conocer para lograr el objetivo de
la practica:

A) Rompimiento de membranas y pared celulares.

Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenzalo, es decir muelelo
con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco.
B) Digestion

Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrgale el Buffer de

extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto
(500 ul aprox).

Cuando hayas agregado el Buffer de extraccin a tu muestra, agtala e incbala por 10 minutos
con agitacin espordica.

C) Separacin de Protenas, Carbohidratos y Lpidos

A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrgale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol

frio usa guantes y no inhales los vapores.

Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a
temperatura ambiente por 5 min.

Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000
rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.

Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.

D) Precipitacin de cidos nucleicos DNA y RNA

A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrgale 400 ul
de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversin, suave y observa como se
precipita el DNA.

D) Recuperacion de la pastilla.

Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
E) Resuspension.

Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estril.

MATERIALES Y MTODOS.

Los materiales que se ocuparon para realizar la practica son los siguientes:

*Tubos de centifruga 1ml

*Tubos de ensayo de 5ml

*Centrifuga

*MicroPipetas de 1000 y 200 ul

*Agua Destilada estril (20 ml para todos)

*Etanol al 100% frio (20 ml para todos)

*NaCl 3M

*Buffer de extraccin de ADN (Urea, Nacl, EDTA, (20 ml para todos)

*Fenol/Cloroformo/Isopranol fri. (20 ml para todos)

*Mortero y pistilo

*Aguacate, cacahuate, hojas, carne, hgado, sangre.

*Papel aluminio

*Ceenpack

*Guantes

En cuanto al mtodo que nos basamos en realizar fue con la ayuda del manual que nos
proporciono el profesor para dicha practica.
RESULTADOS

A) Rompimiento de membranas y pared celulares.

Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenzalo, es decir muelelo
con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco.
B) Digestion

Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrgale el Buffer de

extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto
(500 ul aprox).

Cuando hayas agregado el Buffer de extraccin a tu muestra, agtala e incbala por 10 minutos
con agitacin espordica.
C) Separacin de Protenas, Carbohidratos y Lpidos

A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrgale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol

frio usa guantes y no inhales los vapores.

Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a
temperatura ambiente por 5 min.

Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000
rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.

Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.

D) Precipitacin de cidos nucleicos DNA y RNA

A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrgale 400 ul
de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversin, suave y observa como se
precipita el DNA.

D) Recuperacion de la pastilla.

Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.

E) Resuspension.

Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estril.

CONCLUSIONES

Dentro de las conclusiones se puede decir que se lograron los objetivos de la prctica, la
separacin ya la extraccin del DNA a partir de tejido animal se logro correctamente, ahora
esto aun no ha terminado completamente aun siguen algunos procesos como la purificacin del
DNA, etc. Para observar con ms claridad las caractersticas del DNA, algunas recomendaciones
son el uso adecuado en esta prctica, se necesita de mucho cuidado y poner atencin en los
procedimientos ya que cualquier error podramos perder todo nuestro trabjo realizado.

BIBLIOGRAFIA

Gerald karp. Biologa celular y molecular. ED McGrawHill 1998. Pg. 727-730.

Biologa Molecular y Herencia. Robert A. Wallace, Jack L. King, Gerald P. Sanders., 1a

edicin. Editorial

Trillas. Mxico 1991: pgina 97, 98.

http://pdf.rincondelvago.com/biologia-molecular_1.html