LOS MTODOS

EN MICROBIOLOGIA

MSc. Lic. La Toruo V..

 OPERACIONES FUNDAMENTALES EN
MICROBIOLOGA

Aislamiento : La separacin de un
microorganismo
i i particular
ti l de d la
l poblacin
bl i mixta
i t
que existe en la naturaleza.

Cultivo: El crecimiento de la poblacin microbial

en ambiente
bi artificial,
ifi i l bajo
b j condiciones
di i d
de
laboratorio.
 CULTIVOS

CULTIVO MIXTO CULTIVO PURO

 MEDIOS DE CULTIVO

Es un conjunto de nutrientes,
nutrientes factores de
crecimiento y otros componentes que
crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos
 COMPOSICION DEL CALDO NUTRITIVO

Peptona
p 5g
g Casena parcialmente
hid li d por tripsina
hidrolizada i i

Extracto de carne Concentrado desecado de

3g extracto de carne en agua
caliente
NaCl 8 g Osmorregulador
Agua destilada
1000 ml

Este medio se solidifica agregando 15 g/l de agar,

denominndose AGAR NUTRITIVO
 ESTERILIZACIN
Es el proceso de remover o destruir todos los organismos
vivos asociados a un determinado material. Este proceso se
l
logra por exposicin
i i del
d l material
t i l a un agente t fsico
f i o
qumico letal, o en casos especiales como las soluciones, al
proceso de filtracin

TIPOS DE ESTERILIZACIN

Por calor: Hornos: 165C

Autoclaves

Por tratamiento qumico: Oxido de etileno

Por filtracin: 0.45m

0.22m
En un laboratorio de microbiologa todas las
manipulaciones deben ser llevadas a cabo de tal
modo que se impida la contaminacin en el rea
de trabajo.
La obtencin de un cultivo puro se hace
mediante TECNICAS DE AISLAMIENTO
 AISLAMIENTO DE CULTIVOS PUROS

Tcnica de siembra por

estras

Tcnica de vaciado en caja

Cultivo de
microorganismos
anaerobios

Aislamiento de cultivos
puros en medios lquidos

Cultivo mixto de dos

miembros
 Tcnica de siembra por estras

La tcnica de aislamiento ms utilizada consiste en

sembrar en un medio de cultivo slido en placa de tal
manera que los microorganismos generen colonias
separadas ("Aislamiento por agotamiento en estras").
Tcnica de vaciado en caja
Aislamiento de cultivos puros en medios lquidos

Para la inoculacin de un medio lquido a partir de un

cultivo en medio slido se utiliza el asa de siembra.
 REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES Y
AMBIENTALES DE LOS MICROORGANISMOS
PRINCIPIOS DE NUTRICIN MICROBIAL

Requerimiento de carbono
* Como fuente de Energa
* Como fuente de Crecimiento

Requerimiento de Nitrgeno y Azufre

* Grupos aminos
* Sulfhdricos
 CATEGORAS NUTRICIONALES ENTRE LOS
MICROORGANISMOS

Fuente de Fuente de
Tipo Ejemplo
Energa Carbono

Fotoauttrofos Luz CO2 Chromatium

Fotohetertrofos Luz Compuestos Rhodopseudomona

orgnicos
Oxidacin de
Quimioauttrofos compuestos CO2 Thiobacillus
inorgnicos

Oxidacin de
Quimiohetertrofos compuestos Compuestos Escherichia coli
orgnicos orgnicos
 Composicin
p q
qumica Forma q
qumica en el
de la clula medio de cultivo
Agua (80-90%) Agua (principal)
Bioelementos mas
abundantes: Macronutrientes (g/l)
C, N, S, P, H y O
Bioelementos menos
Micronutrientes (mg/l)
abundantes:
En forma de sales
K, Mg, Ca y Fe
Bioelementos presentes en Elementos trazas (cantidades
pequeas cantidades: Cu, Zn, g/l)
muy pequeas: /l)
Mo, Co

Factores de crecimiento: Aminocidos y vitaminas.

Existe una gran diversidad en cuanto a requerimientos de F. de C.
Leuconostoc mesenteroides: 20 a.a y 10 vitaminas
E Coli: no requiere F.
E. F de C.
C
OXIGENO PARA LOS MICROORGANISMOS

Organismos
Organismos aerobios: Utilizan el oxgeno
molecular como agente oxidante.

Organismos
Organismos anaerobios: Utilizan el oxgeno
integrado a molculas orgnicas, pero no en forma
molecular.

Organismos anaerobios facultativo:

Pueden desenvolverse tanto en presencia como en
ausencia del oxgeno molecular

Organismos microaerfilos: Cantidades

mnimas de oxgeno molecular para sus
procesos vitales.
 TEMPERATURA DE CRECIMIENTO ( 0C )

GRUPO MNIMA
OPTIMA MXIMA

Mesfilas 10 - 15 30 - 45 35 - 47

Psicrfilas
5 e iinferior
f i 20 - 30 30 - 35
facultativas
Psicrfilas
5 e iinferior
f i 15 - 18 19 - 22
obligadas

Termfilas 40 - 45 55 - 75 60 - 85
 LMITES DE pH PARA EL DESARROLLO DE VARIAS
ESPECIES DE BACTERIAS

Bacteria Inferior ptimo Superior

Thiobacillus
thiooxidans 0.5 2.0 3.5 6.0

Acetobacter
aceti 4.0 4.5 5.4 6.3 7.0 8.0

Staphylococcus
St h l
aureus 4.2 7.0 7.5 9.3

A t b t spp.
Azotobacter 5.5 7.0
0 7.5 8
8.5

Chlorobium
limicola 6.0 6.8 7.0

Thermus
aquaticus 6.0 7.0 7.8 9.5
 CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Clasificacin segn:
g Observacin

Se depositan
Leche, en forma
Naturales huevos, frutas natural en
envases
esterilizados
Infusiones de
Origen
origen vegetal
A tifi i l
Artificiales i l ms
y animal A
Agar-sangre
sales
inorgnicos
Sustancias
Sintticos qumicas
puras
 CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Propiedades
Agua ms
fisiolgicas y
Lquidos sustancias
bioqumicas
solubles
(caldo simple)

Baja Mejoramiento
Semislidos concentracin del cultivo
Consistencia de solidificantes investigado

Aislamiento y
Igual que los
conservacin de
medios lquidos
Slidos cultivos puros,
ms
morfologa de
solidificantes
colonias etc.
 CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Caldo simple, Para cultivo de la

Habituales agar
g nutritivo mayora
y de los
microorganismos

Sabouraud
Aislamiento de (hongos)
Especiales ciertos grupos Omeliansky
de microorg. (celulosa)
Diagnstico Examen M. Endo Levine
USO diferencial bioqumico (E.coli)
Seleccin hacia
IInhiben
hib ell algunas
Selectivos desarrollo de propiedades ej.
ciertos grupos Resistencia a la
Penicilina
Siembra
primaria y Inhibe el
Conservados transporte de desarrollo de
material saprofitos
patolgico
GRACIAS POR SU ATENCIN