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FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Nos animais: Doena de Bang, Aborto Contagioso, Aborto Infeccioso, Aborto Enzotico e
"Slinking of The Calf".
No homem: Febre Ondulante, Febre de Malta ou do Mediterrneo, Febre Maltesa, Febre de
Gibraltar
ATUALIDADES
Atualmente (2013), na List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature
organizada pelo pesquisador J.P. Euzby h citao de 10 espcies e nenhuma subespcie
neste site www.bacterio.cict.fr/b/brucella. O gnero contm poucas espcies; so elas:
Brucella abortus (Schmidt 1901) (Meyer and Shaw 1920).
Brucella canis (Carmichael and Bruner 1968)
Brucella ceti (Foster et al. 2007)
Brucella inopinata (Scholz et al. 2010)
Brucella melitensis (Hughes 1893) (Espcie tpica do gnero).
Brucella microti (Scholz et al. 2008)
Brucella neotomae (Stoenner and Lackman 1957)
Brucella ovis (Buddle 1953).
Brucella pinnipedialis (Foster et al. 2007)
Brucella suis (Huddleson 1929,)
HISTRICO
Em 1887, foi isolada a primeira espcie do gnero Brucella pelo oficial e mdico
Dr. David Bruce, em amostras (bao) colhidas na necropsia de militares que morreram
vtimas dessa enfermidade nas costas do Mediterrneo, chamada de Febre de Malta. O
organismo foi inicialmente denominado Micrococcus melitensis e posteriormente de
Brucella melitensis.
BRASIL
No Brasil, Gonalves Carneiro, em 1913, relatou, pela primeira vez, um caso de
brucelose no homem. Desde l, vrios inquritos epidemiolgicos revelaram a presena da
enfermidade nos animais domsticos em todo o pas. A brucelose bovina causada pela B.
abortus a mais prevalente das infeces bruclicas no Brasil, seguida da B. suis em
sunos. A B. melitensis e a B. neotomae no foram isoladas/identificadas no pas (Poester et
al., 2002).
Em 1977, um levantamento nacional estimou a prevalncia para cada regio do pas.
Neste estudo a regio Norte obteve uma prevalncia de 4,1%; a regio Nordeste com 2,5%;
a regio Centro-Oeste com 6,8%; Sudeste com 7,5% e regio Sul com 4%. (Brasil, 1977).
Em 2001, o Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) instituiu o
Programa Nacional de Controle e Erradicao de Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) que
definiu estratgias no controle da brucelose bovina no Brasil (Instruo Normativa 2004).
Os inquritos sorolgicos realizados no perodo compreeendido entre 2001 e 2004, nos 13
estados (BA, ES, GO, MG, MT, PR, SC, RJ, RS, SP, SE, TO e DF) constataram que a
infeco est disseminada em todas as reas estudadas e que a situao desigual entre os
estados e mesmo entre regies de um mesmo estado. Detectou-se uma tendncia de
crescimento da brucelose bovina no pas (Centro-Oeste / Norte) com elevao nos estados
com muita tradio na pecuria de corte. Mato Grosso apresentou aumento da prevalncia
quando comparado ao ltimo levantamento da situao nacional realizado em 1975
(Anselmo e Pavez, 1977). Outros estados diminuram sua prevalncia, especialmente os
estados de Minas Gerais e Santa Catarina que apresentou os menores ndices do Brasil
(Lage et al. 2008).
TAXONOMIA
Classicamente, o gnero Brucella continha seis espcies, mas continua evoluindo.
Atualmente, novas espcies foram includas. Cada uma das espcies possui seus
hospedeiros preferenciais: B. abortus (bovinos); B. melitensis (caprinos e ovinos); B. suis
(sunos); B. canis (caninos); B. ovis (ovinos); B. neotomae (rato do deserto, Neotomae
lepida); B. microti (camundongo do campo, Microtus arvalis); B. ceti (cetceos); B.
pinnipedialis (penpedes) e a B. inopinata (homem). Todas so importantes patgenos para
os animais (domsticos e silvestres) e o homem, causando uma doena que denominada
genericamente de brucelose. Exceto a B. neotomae e a B. ovis, todas as demais so capazes
de infectar o homem. Novas espcies como B. pennipedialis dos penpedes; a B. ceti dos
cetceos e a B. microti do roedor Microtus arvalis, e a B. innopinata isolada do homem
foram includas recentemente no gnero.
As alteraes causadas pela brucelose so encontradas nos rgos reprodutores e
sistema microctico fagocitrio (retculo-endotelial). As leses no trato reprodutor incluem
DIAGNSTICO LABORATORIAL
O diagnstico laboratorial complexo, pois exige equipamento, meio e pessoal
qualificado. As caractersticas diferenciais entre diferentes espcies clssicas e seus
biovares do gnero Brucella mostrado no Quadro II abaixo.
Quadro II. Caractersticas diferenciais entre espcies/biovares clssicas do gnero Brucella
__________________________________________________________________________________
C r e s c i m e n t o em c o r a n t e s A g l u t i n a o do s o r o
Espcies Biovar CO2 H2S Tionina Fucsina bsica A M R
_________________________________________________________________________________
B. melitensis 1 n n + + n + n
2 n n + + + n n
3 n n + + + + n
B. abortus 1 (+) + n + + n n
2 (+) + n n + n n
3 (+) + + + + n n
4 (+) + n (+) n + n
5 n n + + n + n
6 n n + + + n n
7 +/- + + + + + n
9 n + + + n + n
B. suis 1 n + + n + n n
2 n n + n + n n
3 n n + + + n n
4 n n + (-) + + n
5 n n + n n + n
B. canis n n + (n) n n +
B. ovis + n + n n n +
B. neotomae n + (n) n + n n
Brucella abortus
Brucelose bovina
Brucelose equina
INTRODUO
O isolamento de Brucella abortus foi obtido nas diversas populaes bovinas
distribudas pelo mundo, embora sejam raros em pases onde programas de controle e
erradicao foram bem sucedidos.
MORFOLOGIA E COLORAO
A B. abortus um bastonete curto ou cocobacilo, medindo 0,5 a 0,7 por 0,6 a
1,5m. Os bastonetes so to curtos que podem ser confundidos com cocos. Eles esto
presentes em arranjos individuais ou cadeias curtas. A B. abortus por ser um parasito
intracelular facultativa e frequentemente encontrada em aglomerados ou em esfregaos de
exsudatos. A B. abortus Gram negativa, corando-se, com alguma dificuldade, pelos
corantes comuns. Ela no lcool cido resistente, mas pode resistir descolorao com
alguns cidos fracos; esta propriedade confere a base para algumas coloraes especiais tais
como a colorao de Kster em que o organismo cora-se de vermelho vivo. B. abortus no
mvel, no forma esporos e no possui cpsula bem desenvolvida. Entretanto, a presena
desta cpsula pode ser demonstrada em cepas isoladas, utilizando-se corantes especiais.
RESISTNCIA E SOBREVIVNCIA
As espcies so inativadas pela pasteurizao entre 10 e 15 segundos; so destrudas
rapidamente pelos desinfetantes comuns como o cresol 3%; hidrxido de sdio a 2%;
compostos de ortofenis 3-5%; mercuriais e lcool 70%.
Solo
Seco 4 dias
mido 66 dias
Frio 151 185 dias
Fezes
Fluidas 8 240 dias
Altas Temperaturas 2 dias
Urina 5 dias
gua
Tratada 5 114 dias
FAGOTIPAGEM
A fagotipagem utilizada para identificar diferentes espcies de Brucella spp,
incluindo as amostras de B. abortus. Os fagos utilizados na rotina so Tb, Wb, Fi, Bk2 e R.
A diluio do fago conhecida como RTD (Routine Test Dilution) que corresponde a
104-105 unidades formadoras de placas por mililitro (UFP/mL). O RTD o nmero mnimo
de fagos responsvel pela lise confluente numa cepa propagante. Os procedimentos para
fagotipagem foram descritos em detalhes por Corbel e Hendy (1985). A fagotipagem uma
ferramenta rpida e segura na identificao de espcies do gnero Brucella.
ANTGENOS
A parede celular da B. abortus consiste de uma camada externa de
lipopolissacardio na qual a cadeia de polissacardeos fica exposta. A cadeia de
polissacardeo possui os antgenos de superfcie principais (A ou M), os quais esto
envolvidos na aglutinao. Estes antgenos da B. abortus nas cepas lisas esto relacionados
com antgenos de superfcie encontrados na Yersinia enterocolitica 09, sendo fonte de
confuso na interpretao de testes sorolgicos para a brucelose.
As protenas da parede celular esto agrupadas em 3 categorias de acordo com o
peso molecular (SDS-PAGE). As protenas possuem: a) 8.000 a 94.000D; b) 35.000 a
40.000D (porinas) e c) 25.000 a 30.000D. O antgeno protico provavelmente estimule a
reao de hipersensibilidade retardada, provavelmente uma porina. Os antgenos
envolvidos na resposta celular no esto totalmente identificados.
EPIZOOTIOLOGIA
A B. abortus um agente intracelular facultativo de bovinos e outras espcies,
sendo transmitida pela ingesto do alimento ou secrees contaminadas. A transmisso
venrea possvel, mas pouco comum. A transmisso congnita ou intramamria pode
ocorrer. Equinos, ovinos e ces podem infectar-se, mas a transmisso, nestas espcies, para
o hospedeiro primrio pouco provvel. A doena encontrada em todas as regies
criatrias de bovino no mundo, exceto nas reas onde os programas de erradicao tiveram
sucesso.
A B. abortus no resistente luz solar e dissecao, sobrevivendo mais no
inverno do que no vero. Sobrevive no leite, mas destruda pela pasteurizao.
A brucelose bovina endmica no Brasil, estando presente e diagnosticada em
todos os estados, entretanto h grandes variaes entre as estimativas dos estados. O
Ministrio da Agricultura (MA), em 1975, num levantamento soroepidemiolgico estimou
a prevalncia da infeco bruclica em bovinos em 4,0% na regio Sul; 7,5% na regio
Sudeste; 6,8% na regio Centro-Oeste; 2,0% na regio Nordeste e 4,1% na regio Norte
(Anselmo e Pavez, 1977; Poester et al., 2002). Outros estudos, realizados principalmente na
dcada de 80 no detectaram mudanas significativas comparadas estimativa da dcada
anterior. No comeo da dcada de 1990, Minas Gerais iniciou uma campanha de vacinao
compulsria de terneiras com a B19 em todo o estado. Alm de Minas Gerais, o Rio
Grande do Sul era o nico estado que possua um programa de vacinao ativo, mas com
menores ndices de cobertura vacinal (Paulin e Ferreira Neto, 2003).
No Rio Grande do Sul, os levantamentos regionais revelaram que a situao pouco
mudou nos ltimos anos. O programa bem sucedido de vacinao contra a brucelose bovina
fez baixar a prevalncia de 2% para 0,6% em 1986. O ltimo levantamento, realizado em
2006, revelou uma prevalncia ao redor de 1% com variaes, segundo a regio do Estado.
Segundo os dados oficiais, a prevalncia da brucelose bovina no Brasil variou entre 4 e 5%,
no perodo de 1989-1998 (Brasil, 2001).
Os estudos brasileiros mostraram que foram isoladas e identificadas a B. abortus
biovares 1, 2, 3 e 6 e a B. suis (Garcia-Garrillo, 1987; Langenegger et al., 1975). Giorgi et
al. (1972), em So Paulo, isolaram 23 amostras de B. abortus e B. suis de bovinos, sunos e
equinos. No Rio Grande do Sul, Poester (1974; 1977) isolou B.abortus biotipo 1 e B. suis
de bovinos, equinos e sunos. No Rio de Janeiro, Langenegger et al. (1975), isolaram e
identificaram 10 amostras B. abortus, sendo 4 cepas de B. abortus biotipo 1 e 6 do biotipo
3 de bovinos em matadouro. A maioria dos casos de brucelose humana est ligada a
atividade profissional do trabalhador e essencialmente relacionada com o magarefe.
A prevalncia da infeco humana ou animal muito provavelmente esteja
subestimado, pois so reduzidos os trabalhos disponveis. Em Minas Gerais, Godoy et al.
(1977) estimaram prevalncia de 0,28% de reagentes dentre 9.360 amostras de doadores de
sangue. Barufa (1978), no Rio Grande do Sul, evidenciaram que a enfermidade era mais
frequente em pessoas da zona rural; mais frequente no homem do que na mulher e que o
consumo de queijo no pasteurizado seria a fonte de infeco para o homem.
Nos Estados Unidos, 85% das infeces em bovinos so causadas pelo bitipo 1; as
remanescentes pelos bitipos 2 e 4. As propriedades de maior tamanho provavelmente
possuem maiores infeces maiores pela manuteno de animais, latentemente infectados.
O uso de reas de pastejo comunitrias pode ser um fator na transmisso de B. abortus
entre as propriedades. H casos de infeco por B. abortus em vrias espcies silvestres
como bises, cervdeos e alces. O convvio destas espcies com bovinos aumenta a
IMUNIDADE
A B. abortus parasito intracelular facultativo, podendo escapar do efeito
bactericida do anticorpo ou complemento presente no plasma. A imunidade protetora
depende principalmente da resposta celular em que a atividade ltica dos macrfagos
iniciada, aps a ativao das linfocinas pelos linfcitos T. A opsonizao pelos anticorpos
DIAGNSTICO
A infeco causada pela B. abortus pode ser detectada, atravs do: a) diagnstico
bacteriolgico; b) diagnstico sorolgico e c) diagnstico molecular.
Diagnstico bacteriolgico
O isolamento da B. abortus obtido pelo cultivo no meio base (agar Triptose ou
agar Albimi) com a adio de soro e ATMs. O cultivo incubado 37C em uma atmosfera
de 10 % de CO2, durante, pelo menos, 4 dias.
As amostras podem ser obtidas de feto abortado; placenta; exsudato uterino; leite e
abscessos. A prova biolgica consiste na inoculao de tecidos ou fluidos macerados em
cobaias, devendo ser sacrificados 3 a 6 semanas, mais tarde. O soro testado para a
Diagnstico sorolgico
Os testes sorolgicos para diagnstico da brucelose tiveram inicio, em 1897, com o
desenvolvimento do teste de aglutinao de Wright (Wright e Smith, 1897). Problemas de
reaes sorolgicas positivas resultantes de exposio a outras bactrias ou reaes
cruzadas foram detectados. Desde ento, melhores testes tm sido desenvolvidos e muitos
destes so utilizados mundialmente. Raras enfermidades infecciosas apresentam tanta
variedade diagnstica como a brucelose. Estes mtodos incluem testes aplicados no soro,
no sangue total, no muco vaginal, no plasma seminal, no leite dessorado ou no leite total.
O diagnstico da brucelose, de um modo geral, enfrenta situaes especficas e
prprias que podem interferir com o desempenho dos testes aplicados (sensibilidade e
especificidade). Reaes inespecficas so atribudas a anticorpos naturais ou a produtos
catablitos de organismos que compartilham antgenos de estruturas semelhantes s da
Brucella. Reaes cruzadas com outros microrganismos como: Salmonella urbana,
Escherichia coli O:116 ou O:157, Stenotrophomonas maltophilia e Yersinia enterocolitica
O:9 so alguns desses exemplos.
A membrana externa da brucela lisa composta de fosfolipdios, protenas e LPS-S.
A maioria dos testes sorolgicos, particularmente aqueles que utilizam suspenso de
bactrias ntegras como o teste de soro-aglutinao lento (SAL) em tubo; o teste do
Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) e o teste de Fixao do Complemento (FC); a
maioria dos testes de ELISA e o Teste do Anel em Leite (TAL) foram desenvolvidos para
detectar anticorpos contra a cadeia O do LPS-S.
Fixao do Complemento
Este teste considerado como o teste confirmatrio na deteco sorolgica de
anticorpos de animais infectados. Ele foi modificado, padronizado e adaptado ao sistema de
microplacas (Alton et al. 1988; Anon, 2000). Ao contrrio do teste SAL, os ttulos no
diminuem quando a doena torna-se crnica. Os resultados so expressos em unidades
internacionais (UI) e, apesar de no estar padronizado no Brasil, o ponto de corte definido
por alguns pases em 20 UI que aplicado rigorosamente onde a B19 no tiver sido
utilizada por muitos anos. A sua aplicao restrita em pases que aplicam a B19 como a
frica do Sul que frequentemente tem problemas com um nmero inaceitvel de falso-
positivos, pois a vacinao induz a ttulos significantes. necessrio treinamento e
experincia para certificar como livres de brucelose, quando rebanhos ou animais
individualmente so positivos ao teste.
Os ttulos vacinais tendem a declinar mais rpido do que aqueles devido infeco
com cepas de campo. O declnio de ttulos tambm dependente da idade de vacinao dos
animais. Existe uma dificuldade na diferenciao das reaes vacinais das causadas por
cepas selvagens, no existindo nenhuma prova sorolgica capaz de diferenciar ttulos
vacinais de infecciosos. A vacinao de novilhas e animais adultos pode resultar em muita
confuso na interpretao de testes laboratoriais, sendo essencial o registro de vacinaes e
de datas de nascimento para permitir a correta interpretao dos resultados do testes de FC.
Este teste preconizado em bovinos para comrcio internacional.
cuidado ao empregar-se esta tcnica em rebanhos vacinados com B19, pois muitos
resultados falso-positivos podem ocorrer. O teste tem sido indicado para o comrcio
internacional de bovinos pela OIE (Anon, 2000).
VACINAS
H dois imungenos importantes no controle da infeco por B. abortus: a vacina
elaborada com a amostra B19 e a vacina elaborada com a amostra RB51. As 2 vacinas so
vivas. A cepa 19 consiste de uma linhagem vivel, caracterizada pela baixa virulncia
(cobaias e bovinos) e excelente propriedade imunizante. Esta cepa possui grande
estabilidade. A sua virulncia no foi alterada desde 1930, ano em que foi isolada pela
primeira vez. A cepa B19 uma amostra lisa de B. abortus, levemente patognica para
cobaias. Vacas prenhes podem abortar pela inoculao da vacina B19 e, nesse caso, o
organismo vacinal pode ser demonstrado com facilidade nas membranas fetais e feto. A
linhagem vacinal, raramente eliminada pelo leite. Ela pode causar infeco no homem,
geralmente de forma leve, com perodo de recuperao mais curto do que infeces por
cepas virulentas. Esta vacina deve por isso ser manipulada com cuidado.
As terneiras (bezerras) devem ser vacinadas entre 4 e 8 meses de idade. A vacinao
nessa idade recomendada para evitar a persistncia de aglutininas e problemas no
diagnstico mais tarde.
A cepa B19 protege da infeco por B. abortus cerca de 70% das vacas ou por 4 a 5
gestaes, sendo mais efetiva na proteo de animais jovens de cria quando aplicada sob
bases populacionais. Animais adultos vacinados com a B19 so protegidos, mas
desenvolvem aglutininas, persistentemente. H evidncias de que se reduzirmos a dose
vacinal haveria uma menor persistncia de aglutininas, mas esta prtica no recomendada
no Brasil. A vacinao de vacas no perodo de prenhez inicial com grandes doses (60
bilhes) de B19 produz uma alta probabilidade de infeco uterina. O risco menor quando
a dose reduzida (300 milhes).
A vacina elaborada com a cepa rugosa 45/20 de MacEwen no mais empregada
em nosso meio, mas foi usada no Brasil e amplamente utilizada na Irlanda e outros pases
europeus no controle da brucelose bovina, no passado. uma vacina produzida com a
bactria morta e com adjuvante oleoso.
CONTROLE E PREVENO
As perdas econmicas advindas da brucelose, juntamente com o perigo de infeco
humana, impuseram o programa de controle e erradicao da doena. No Brasil, a perda
econmica com a brucelose bovina foi estimada, em 1971, como algo em torno de 32
milhes de dlares anuais (Poester et al., 2002). muito provvel que esses prejuzos
estejam subestimados e urge que faamos um levantamento da prevalncia da brucelose em
todos os estados do Brasil. Assim poderamos inferir nos prejuzos diretos e indiretos da
brucelose nos bovinos e em outros animais de produo.
Os princpios incorporados no PNCEBT foram dependentes das condies locais,
manejo e do nmero de animais envolvidos.
1) Animais infectados devem ser detectados, marcados e eliminados da propriedade.
A deteco realizada pela sorologia ou ainda utilizando o Teste do Anel no Leite como
teste de triagem, seguido pelo teste de aglutinao de cada amostra animal com sacrifcio
dos reagentes.
2) A vacinao obrigatria com B19 de terneiras (bezerras) entre 4-8 meses deve
aumentar a resistncia dos animais. importante esclarecer que no RS aconselhado fazer
a vacinao de animais um pouco mais cedo, pois algumas raas europias ciclam com 5-6
meses de idade.
3) Princpios gerais de higiene so impostos na preveno da infeco ou re-
introduo da infeco. A doena desaparece dentro de 2 anos e, ao final de 5 anos, dos
animais com infeco crnica, se forem tomadas essas medidas,.
VACINA RB51
A amostra RB51 uma amostra rugosa, estvel e que no contm cadeia O no LPS
da parede celular e comporta-se bioquimicamente como a linhagem lisa 2308 em sua
utilizao do eritritol, da qual foi originada. A RB51 induz a formao de anticorpos s
protenas da membrana externa, mas no contra a cadeia O. Por esta razo pode ser
aplicada em animais com qualquer idade, pois no interfere com os testes sorolgicos. Ela
possui reduzida virulncia para camundongos por ter um perodo curto de "clearence" no
bao, conferindo por isso imunidade ao camundongo imunizado e desafiado com B. abortus
2308. Esta vacina est sendo utilizada em vrios pases, inclusive no Brasil, pois no
interfere nos testes sorolgicos tradicionais para deteco de anticorpos contra o LPS
(lipopolissacardio) da cadeia O.
A vigilncia de uma propriedade deve ser mantida por meio de testes sorolgicos
peridicos; pelos testes nos animais comprados; pela ocorrncia de sinais clnicos
compatveis com a enfermidade e pelo exame sorolgico de animais enviados ao
matadouro.
Quadro IV. Resultado dos testes, segundo a tcnica AAT, 2ME de brucelose LABACVET-UFRGS, entre
2001 e 2010.
2004 61 0 0 0
2006 6 2 33,3 ?
2008 12 0 0 0
2010 10 3 3 30 30
2011
Brucella ovis
Brucelose Ovina
Epididimite Ovina
INTRODUO
A Brucella ovis causa uma enfermidade crnica nos ovinos e, caracterizada
principalmente por alteraes testiculares com conseqncias sobre a fertilidade dos
carneiros, abortos ocasionais nas ovelhas e aumento da mortalidade de perinatal em
cordeiros.
HISTRICO
A B. ovis foi isolada, na Nova Zelndia, pela primeira vez, em 1952, por McFarlane
e colaboradores.
Na Austrlia, Simmons e Hall, em 1953, isolaram e descreveram o organismo como
semelhante a brucella like organism.
Em 1953, Buddle e Boyes consideraram-na como uma mutante da Brucella
melitensis. Buddle props os nomes de Brucella ovis, tendo como base os antgenos de
superfcie comuns entre a amostra e as amostras rugosas de B. abortus e B. melitensis.
Props tambm o nome da doena como epididimite infecciosas dos carneiros.
A homologia do DNA recentemente props a existncia de uma nica espcie, a B.
melitensis, no gnero Brucella e as demais espcies (de hoje) seriam biovares. Assim
teramos B. melitensis biovar Ovis. Esta proposta, no entanto, no se concretizou na prtica.
DISTRIBUIO
A infeco cosmopolita, especialmente nos pases onde h criao de ovinos. A
infeco maior quando detectada pela primeira vez, podendo variar entre 20 a 60% dos
carneiros e em 45 a 75% dos rebanhos testados. A prevalncia baixa, nos pases onde h
programas de controle, entretanto a erradicao difcil de ser alcanada.
A B. ovis produz doena clnica ou subclinica em ovinos que caracterizada por
leses genitais em carneiros e placentite nas ovelhas. A principal consequncia da doena
a reduo na fertilidade dos machos, abortos espordicos na fmea e aumento da
mortalidade perinatal. A doena tem sido relatada na Argentina, Austrlia, Brasil, Canad
Chile, Frana, Alemanha, Hungria, Mxico, Nova Zelndia, Peru, Romenia, Russia,
Repblica Eslovaca, frica do Sul, Espanha, Uruguai, EUA, mas provavelmente ela ocorra
na maioria dos paises produtores de ovinos.
IMPACTO ECONMICO
O impacto econmico difcil de ser quantificado. No Brasil, sabemos que a
enfermidade causa prejuzo direto e indireto sobre a produtividade dos rebanhos infectados,
especialmente sobre a fertilidade de reprodutores ovinos (machos e fmeas). Recentemente,
as autoridades governamentais brasileuras elaboraram um programa nacional de controle da
brucelose ovina para o Brasil, mas ainda no foi efetivamente implantado.
CARACTERSTICAS BIOQUIMICAS
Perderam a atividade da urease e no reduzem nitrato a nitrito. So catalase
positivas e oxidases negativas. H2S negativas. Crescem nas concentraes de fucsina bsica
e tionina. Oxidam: L-alanina, D-alanina, L-asparagina, D-asparagina, cido d-glutmico,
DL-serina, e adonitol. No oxidam: L-arabinose, D-galactose, D-glicose, D-ribose, meso-
eritritol, D-xilose, L-arginina, DL-citrulina, DL-ornitina e L-lisina.
FAGOTIPAGEM
A B. ovis no lisada pelos fagos: Tibilisi, Weybridge, M51-S708, Firenze, BK,
MC/75, D ou grupo R. No entanto lisada pelo fago R/O, tanto na RTD (dose rotina de
teste) como 104 RTD. No h biotipos reconhecidos.
TRANSMISSO
A principal forma de transmisso por via venrea. A transmisso macho para
macho possvel em que machos infectados e animais susceptveis compartilham o mesmo
espao. Sodomia outro meio de transmisso.
A maioria dos casos ocorre aps a estao de monta ou acasalamento.
Indubitavelmente existem mecanismos complexos que no esto totalmente conhecidos,
mas a transmisso venrea passiva de macho infectado para macho suscetvel via fmea
infectada parece ser a mais importante forma de transmisso para manter e difundir a
doena. A probabilidade de infeco depende principalmente da via, da dose e das
caractersticas intrnsecas do animal, tais como idade e raa.
A infeco experimental no carneiro pode ser obtida de muitas formas: oral,
intravenosa, intratesticular, conjuntival, intraprepucial subcutnea, atravs de escarificaes
da pele, intraretal, e intranasal. Embora no haja estudos comparativos, os melhores
PATOGENIA
H um longo perodo de latncia antes de surgirem os sinais clnicos evidentes,
assim como a infeco causada por outras espcies de brucelas. Sob condies
experimentais, o agente permanece confinado aos linfonodos prximos ao local de entrada
por 2 a 3 semanas e ento ocorre bacteremia.
Nos carneiros experimentalmente infectados, a bactria tem sido isolada do fgado,
rins, bao, testculo, epiddimo, vescula seminal, glndula bulbouretral, ampolas e
linfonodos ilaco, pr-escapulares, pr-crural, submaxilar, parotdio e retrofarngeo. Os
rgos-alvo so epiddimo e glndulas sexuais acessrias com eliminao do agente,
atravs do smen, na maioria dos carneiros. Nos animais reagentes, geralmente o cultivo
negativo, mas a bacteria pode estar localizada em outros rgos. Essa hiptese consistente
com o isolamento da B. ovis no bao e linfonodo ilaco de animais experimentalmente
infectados e que no foram isoladas dos rgos genitais e glndulas sexuais acessrias. A
localizao no epiddimo acompanhada por edema perivascular e infiltrao dos
Patologia no Macho
Carneiros infectados no desenvolvem epididimite palpvel, mesmo quando a B.
ovis est associada epididimite ovina, Em levantamento conduzido com 267 carneiros
soropositivos, somente 125 (46,8%) mostraram alteraes testiculares palpveis. Uma
proporo importante de carneiros infectados no evidencia leses escrotais.
Na maioria dos casos, a localizao testicular unilateral e a cauda do epiddimo o
local mais comum. Alteraes na cabea e no corpo do epiddimo so frequentes. A atrofia
testicular e aumento da cauda do epiddimo so caractersticas da fase crnica da doena. A
aparncia macroscpica dos testculos geralmente normal, mas pode-se perceber
granulomas e calcificao. O epiddimo afetado parece firme, mostrando superfcie
esbranquiada ao corte em consequncia da proliferao de tecido conectivo.
Frequentemente so encontrados no tecido conectivo, abscessos, contendo substncia
cremosa ou caseosa. Hemorragia e inflamao exsudativa na tnica vaginal so achados
Lesoes no Macho
O exame microscpico dos epiddimos infectados mostra edema intersticial, fibrose
e infiltrado perivascular de linfcitos e plasmcitos. Os ductos epididimrios mostram
hiperplasia epitelial com cistos intraepiteliais, contendo neutrfilos e restos celulares.
Granuloma espermtico circundado por linfcitos, clulas gigantes e epiteliides so
achados frequentes.
A atrofia testicular deriva do processo regressivo do epitlio testicular e suspeno
da espermatognese. Pode tambm ocorrer proliferao do tecido conectivo intertubular,
granuloma espermtico extratubular, necrose e calcificao dos ductos seminferos.
As principais alteraes das vesculas seminais incluem a infiltrao de linfcitos e
plasmcitos; fibrose e hiperplasia epitelial difusa com cistos intraepiteliais, contendo
neutrfilos.
A inflamao das ampolas est associada com a epididimite. reas focais de
hiperplasia com cistos intraepiteliais vazios e acmulo de neutrfilos no lmen das
dilataes do epitlio so geralmente observadas. Alem disso, acmulo de clulas redondas
e fibrose podem ser visualizados na lmina prpria.
O exame microscpico da prstata e da glndula bulbouretral revela uma discreta
infiltrao de clulas redondas e hipertrofia glandular focal. Formaes papiliformes e
concrees (corpora amilacea) so frequentes nessas duas glndulas acessrias.
Nas ovelhas infectadas observa-se um exsudato purulento, variando de uma pequena
quantidade sobre a superfcie da membrana corioalantide intacta at uma grande
Identificao do Agente
A existncia de leso macroscpica (epididimite uni ou bilateral) no carneiro pode
ser indicativa de infeco, mas exames laboratoriais so necessrios para confirmar a
doena, atravs de mtodos diretos e indiretos.
Esfregaos diretos podem ser examinados, atravs da colorao de Gram ou Stamp
e a presena de cocobastonetes demonstrada em muitos animais infectados. Entretanto,
outras bactrias com caractersticas morfotintoriais semelhantes (B. melitensis,
Chlamydophila abortus) podem estar presentes.
Exame Direto
O diagnstico direto realizado, atravs do isolamento da B. ovis no smen, nos
tecidos do carneiro ou ainda nas secrees ou leite de fmeas em meio de cultivo seletivo.
As tcnicas de biologia molecular como PCR e eletroforese de campo pulsante tm sido
aplicadas, entretanto as tcnicas indiretas baseadas nos testes sorolgicos so as preferidas
no diagnstico de rotina. O smen do carneiro pode ser obtido facilmente por meio do
eletroejaculador. O smen pode ser colhido para bacteriolgico em sacos plsticos ou por
meio de subio tomado da cavidade prepucial aps a eletroejaculao.
Cultivo
No isolamento da B. ovis, as amostras de smen so semeadas diretamente em
plascas de AS apropriadas (Thayer-Martin); incubadas a 10% de CO2.
A colheita e transporte de amostras uma tarefa trabalhosa, pois alguns animais
infectados no excretam ou a eliminam intermitentemente e, por isso, o bacteriolgico de
smen no prtico e nem til no diagnstico da infeco, especialmente em programas de
controle e erradicao de grande escala.
Isolamento e identificao
As colnias da B. ovis no so hemolticas; so circulares, convexas; possuem
bordos inteiros; so do tipo rugoso quando examinadas pela luz oblqua; positivas ao teste
de acriflavina. A B. ovis perdeu a atividade de urease; falha na reduo de nitrato para
nitrito; catalase positiva; oxidade negativa; no produz H2S; no crese na presena de
violeta de metila, mas geralmente cresce na presena de concentraes de fucsina bsica e
tionina.
A maioria dos laboratrios de diagnstico veterinrio no est equipada na
identificao completa da B. ovis, sendo necessria a adoo de um protocolo prtico e
presuntivo na identificao. A maioria das B. ovis pode ser identicada, tendo como base as
caracteristicas de crescimento, observao direta, utilizando a luz refletida oblqua,
colorao de Stamp, Gram, catalase, oxidase, urease e teste de acriflavina. Entretanto, a
identificao definitiva deve ser realizada no laboratrio de referncia com experincia na
identificao e tipificao de Brucella spp. Recentemente, um mtodo de eletroforese de
campo pulsante foi desenvolvido para o gnero Brucella spp e com essa tcnica possvel
diferenciar B. ovis das outras espcies.
Fagotipagem
Diagnstico sorolgico
Teste de Imunodifuso em gelose de agar (IDGA), Teste de Fixao do
Complemento (FC) e, ensaio imunoenzimtico (ELISA), utilizando antgenos de superfcie
solveis da B. ovis, podem ser utilizados. Alguns testes de ELISA, que utilizam protenas
recombinantes e monoclonais, esto sendo testadas em pesquisas de campo. As
sensibilidades dos testes IDGA e ELISA so semelhantes e o teste de ELISA apresenta
maior sensibilidade do que o teste de FC. A combinao da IDGA e ELISA apresenta os
melhores resultados em termos de sensibilidade, embora o teste de IDGA seja mais prtico
e barato. O teste recomendado para o comrcio internacional permanece sendo o teste de
FC.
O LPS da parede celular o principal antgeno de superfcie na maioria das
bactrias Gram negativas, sendo verdade para as brucelas lisas. Entretanto a B. ovis
rugosa e, portanto sua superficie celular difere das demais brucelas lisas. A principal
diferena na estrutura da parede celular entre as brucelas lisas e rugosas a ausncia de
cadeia O no LPS das amostras rugosas. O LPS da B. ovis assim como o LPS das mutantes
rugosas de B. abortus e B. melitensis podem ser extradas com o uso de solventes
orgnicos.
A tcnica de ter-de-petrleo-cloforfrmio-fenol (PCP), originalmente desenvolvida
para mutantes rugosas de enterobactrias a tcnica de escolha para obter LPS de B. ovis,
uma vez que ela produz antgeno essencialmente livre de protenas e cidos nuclicos.
Entretanto a grande hidrofobicidade do LPS purificado representa um problema para o seu
uso em muitos testes sorolgicos. A estrutura do LPS da B. ovis no tem sido estudada e
conhecida. Embora ela contenha acar presente na estrutura ncleo-lipdio A do LPS de
outras brucelas, o LPS purificado da B. ovis revela somente uma reao de identidade
parcial com o LPS dos mutantes rugosos de B. abortus e B. melitensis ou com o LPS
Antgenos
O tratamento das brucelas rugosas pela tcnica da salina aquecida (mtodo da salina
quente) produz extratos antignicos solveis cujo componente principal precipita com o
soro das brucelas rugosas. Por essa razo, o antgeno termorresistente tem sido referido
como o antgeno rugoso especfico ou quando obtido da B. ovis ele chamado antgeno
especfico da B. ovis. Entretanto, a caracterizao qumica do antgeno termorresistente da
B. ovis mostrou que so enriquecidos com LPS rugoso, protenas da membrana externa e
outros componentes externos da membrana. Assim, o antgeno termorresistentes contm
determinantes do LPS especficos para a B. ovis, mas outros componentes antignicos
adicionais. O antgeno termorresistente, devido a sua solubilidade em gua e alta
concentrao em eptopos na superfcie celular o melhor antgeno para o diagnstico e
tm sido amplamente utilizados para o diagnstico sorolgico da infeco causada pela B.
ovis.
A B. ovis cepa REO 198 CO2 independente e por isso, recomendada como fonte
de antgeno termorresistente para os testes sorolgicos. Esta cepa foi obtida no Institute
National de la Recherche Agronomique (INRA) Laboratoire de Pathologie Infectieuse et
Immunologie, Nouzilly, Frana. Meios slidos so satisfatrios para o crescimento da B.
ovis REO 198. O ideal seria inclurem-se vrias cepas ou linhagens na elaborao do
antgeno.
O antigeno deve ser preparado como segue:
1) Crescimento exponencial de uma cepa de preferncia aerbia (B. ovis REO 198)
em frascos de Tripticase soja em incubador orbital a 37 C e a 150 rpm; ou em garrafas
Roux de Tripticase Soja Agar ou outro meio adequado, com 5% de soro ou em fermentador
descrito para B. abortus, mas com a adio de 5% de soro ao meio.
Brucella canis
Brucelose Canina
INTRODUO
A brucelose canina era uma enfermidade associada B. abortus, B. suis e a B.
melitensis, antes do isolamento da B. canis, em 1966. A fonte de infeco em quase todos
os casos era o consumo de animais domsticos infectados ou pelo contato de ces com
derivados destes. Em contraste forma espordica da brucelose canina, h outra,
extremamente infecciosa para os ces, causada por uma nova espcie de Brucella.
Em 1966, Carmichael, nos Estados Unidos, durante uma investigao sobre a causa
de abortos em ces da raa Beagle, isolou um cocobastonete Gram negativo de vrios fetos
abortados. Mais tarde, vrias outras observaes deram suporte incluso deste organismo
no gnero Brucella, sendo denominada B. canis.
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
AGENTE-INFECO
A B. canis o agente etiolgico da brucelose canina; enfermidade caracterizada por
manifestaes clnicas variadas. A maioria dos ces infectados no apresenta sinais clnicos
perceptveis, mostrando-se clinicamente normais.
As manifestaes clnicas indicativas da enfermidade no so exuberantes, mas
associadas com o trato reprodutor.
O sinal clnico primrio na fmea infectada o aborto, podendo ser acompanhado
ou no de mortes embrionrias ou natimortos.
Nos machos, os sinais clnicos mais comuns so: epididimite, orquite e/ou atrofia
testicular e dermatite de escroto. Outras manifestaes podem incluir: linfadenites e
esplenites, leses oculares, discoespondilites e osteomielites.
A contaminao ocorre, atravs das mucosas (oral, vaginal ou ocular). A bactria
fagocitada e ser transportada por macrfagos e granulcitos para os linfonodos regionais e
sistema circulatrio.
Bacteremia aparece entre 1 a 4 semanas, aps a infeco, podendo durar seis meses
e, algumas vezes, podendo persistir por 60 meses. A fase de bacteremia acompanhada de
sinais clnicos como febre discreta, linfadenopatia discreta e astenia de inconstante a
moderada. A fase de bacteremia pode levar leses inflamatrias nos discos intervertebrais
(discoespondilite), no globo ocular (uvete) e nos rins (glomerulonefrite), mas o mais
importante, que o agente atinge o trato reprodutos de machos e fmeas prenhas.
Nos machos, causa espermatozides anormais, levando esterilidade, aps cinco
semanas ps-infeco. Outros sinais como orquite, epididimite, hipertrofia prosttica,
edema do escroto podem ser detectados. Nas formas crnicas, h atrofia de um ou ambos os
testculos.
Na fmea prenha, a infeco geralmente leva a morte embrionria entre os dias 10 e
20 aps a concepo ou ao abortamento entre 45 e 59 dias de gestao. O aborto seguido
de secreo vaginal que pode persistir de 1 a 6 semanas. Geralmente a cadela pare filhotes
mortos ou filhotes que sobrevivem apenas algumas horas ou dias. Raramente, a prenhez
chega a termo.
As fontes de infeco so representadas por smen, urina, fetos abortados ou
secreo vaginal. Os animais so infectados por via venrea ou pela ingesto de material
infectado. Infeco iatrognica (transfuso de sangue, uso de material de injeco
contaminado) possvel.
ZOONOSE
Os tcnicos (laboratrio, os proprietrios de animais, veterinrios) podem ser
infectados, apesar de o homem ser relativamente resistente a B. canis. Os sinais clnicos
(febre, calafrios, fadiga, perda de peso, linfadenopatia) so mais moderados do que aqueles
observados em outras espcies e, em muitos casos, so completamente assintomticos. As
complicaes so raras (artrite, meningite, endocardite), mas foram descritas.
A presena da brucelose canina nos centros urbanos brasileiros preocupante, pois
representa risco sade pblica, pelo estreito convvio ou contato com os seus familiares,
tanto pela populao de ces infectados e no domiciliados quanto por aqueles ces
infectados dentro de criatrios. Estudos epidemiolgicos dirigidos brucelose canina nestes
centros urbanos forneceram dados importantes quanto a sua apresentao, distribuio,
comportamento da enfermidade venrea para os caninos, mas tambm como uma zoonose,
especialmente para criadores, proprietrios, tratadores e clnicos veterinrios.
IMPACTO ECONMICO
O impacto econmico decorrente da infeco pela B. canis nos criatrios
complexo e difcil de estimar, pois as perdas incluem principalmente a queda brusca no
nmero de filhotes, eliminao de reprodutores infectados (machos e fmeas) da
reproduo; perda de material gentico superior; gastos com a reposio de animais
hgidos; os gastos com diagnstico, tratamento, desinfeco e preveno da infeco;
gastos com monitoramento do criatrio e a perda de confiana entre quem os criam e quem
os compram. Talvez essas dificuldades sejam, em parte, razo para que nenhuma medida
seja tomada por parte da sociedade interessada somente no comercio de animais a despeito
do bem estar animal. hora de estimar os prejuzos causados com a brucelose canina em
criatrios, pois a infeco causada pela B. canis acomete um grande nmero de animais
(canis), onde ela ocorre sob a forma silenciosa ou sob a forma de pequenos surtos,
envolvendo animais com alto valor zootcnico.
EPIDEMIOLOGIA
A enfermidade foi registrada nos Estados Unidos; em pases da Europa; no Japo,
Madagascar e Mxico. Na Amrica do Sul, especialmente no Peru, Argentina e Brasil.
Estudos epidemiolgicos mostraram que a prevalncia da infeco causada pela B. canis
varivel, dependendo da rea geogrfica e do tipo de teste aplicado. Estudos sorolgicos
obtidos tm permitido valiosa informao sobre a enfermidade na populao canina bem
como na populao humana, representando, deste modo, mais um risco sade pblica.
DIAGNSTICO LABORATORIAL
O diagnstico laboratorial da brucelose canina uma tarefa difcil e complexa,
incluindo as tcnicas de isolamento, segundo evidencia a Tabela 1.
O diagnstico sorolgico uma probabilidade diagnstica, pois dependem da
relao agente-hospediero e o tempo de infeco. Eles incluem o teste de fixao do
complemento (FC), soroaglutinao lenta (SAL), soroaglutinao rpida (SAR),
imunofluorescncia (IF), o teste de ELISA e imunodifuso (IDGA). A imunodifuso em
gelose de agar (IDGA) a tcnica mais utilizada no diagnstico laboratorial da infeco por
ser de fcil realizao, rpida e barata. Alm disso, esta tcnica possibilita utilizar, tanto o
antgeno superficial rugoso da B. ovis quanto da B. canis e da RB51.
HEMOCULTIVO
O hemocultivo da B. canis pode ser obtid atravs da seguinte tcnica:
1- Um volume de 100L (0,1 mL) de sangue, colhido com heparina ou citrato de sdio
semeado em placas de agar sangue (Brucella agar, Triptose agar); incubadas a temperatura
de 37C em atmosfera normal.
SMEN e URINA
Smen e urina devem ser cultivados por 4-7 dias em caldo seletivo e posteriormente
em gelose. Outras amostras clnicas eventualmente so trituradas em stomacher; inoculadas
em paralelo em meios seletivos e no seletivos.
As placas devem ser conservadas por 30 dias; examinada periodicamente em
estereoscpio com luz obliqua. As colnias suspeitas devem ser submetidas ao exame
bacterioscpico, teste de oxidase e tipo respiratrio. A identificao precisa da espcie est
reservada aos laboratrios especializados que pode pesquisar a aglutinao com antissoro
preparado com uma cepa de Brucella em fase R (geralmente uma cepa de Brucella ovis)
posteriormente se estudar as caractersticas bioqumicas; lisotipia e oxidao de acares e
aminocidos.
Tabela 1 Resultados Esperados no isolamento da B. canis em amostras clinicas
CONTROLE E PREVENO
O controle torna-se um dilema, quando a brucelose foi diagnosticada num criatrio,
A eliminao da infeco demanda tempo e custos, mas a doena pode apresentar uma crise
emocional ou quando ces de valor gentico so acometidos.
A preveno particularmente importante nos canis. Ao contrrio da brucelose nos
outros animais domsticos, a brucelose canina no uma doena de notificao obrigatria
e sua prevalncia est baseada em limitados estudos sorolgicos. A incidncia da
enfermidade nos ces pouco diferente de quando ela foi reconhecida nos anos sessenta;
com exceo de alguns criatrios comerciais e organizaes de criadores de ces ou clubes
de caa que instituram medidas preventivas de maneira privada.
A preveno da reproduo em canis/criatrios dever incluir um plano de
monitoramento alem de cuidados sanitrios e de higiene.
Os testes sorolgicos incluem vantagens e desvantagens que devem ser conhecidas
pelos clnicos veterinrios conforme tabela 2.
1-Os testes sorolgicos devem ser realizados duas vezes com intervalos de um ms
em todos os ces introduzidos em um canil de reproduo.
2-As cadelas de um criatrio/canil devem ser testadas vrias semanas antes do cio
esperado. Se outros testes alem do SAT-2ME so necessrios para certificao de livres de
brucelose, haveria tempo para aplicar aqueles procedimentos antes do perodo do cio.
3-Nenhum animal novo deve ser introduzido na reproduo at que tenham sido
considerados negativos a dois testes com um ms de intervalo.
4-Testes anuais devero ser aplicados em todos os animais ou quando houver
alteraes reprodutivas ou abortos.
5-H fortes suspeitas de brucelose canina nos casos de aborto at que seja provado o
contrrio.
6-Ces com testes de triagem positivos ou inconclusivos devem ser isolados e
avaliados por hemocultura e sorologia, utilizando testes mais especficos como AGID,
utilizando antgeno de protenas citoplasmticas.
VACINAO
No existe vacina e a profilaxia baseia-se sobre as medidas de ordem sanitrias tais
como isolamento do agente; eutansia dos infectados; desinfeco dos locais; quarentena e
vigilncia serolgica antes da introduo em uma criao.
O tratamento com antimicrobiano no 100% eficaz. Ele geralmente est associado
ao uso de tetraciclinas a aminosdio durante um ms.
PERSPECTIVAS
A preocupao em conhecer dados sobre brucelose canina nas diferentes faculdades
de veterinria do pas tem como objetivos: 1) Obter dados quanto prevalncia de
brucelose canina em ces atendidos pelo servio de atendimento policlnico nas instituies
de ensino superior, especialmente por no haver muitos registros. 2) Isolar a B. canis em
amostras clnicas bem como aplicar testes sorolgicos no monitoramento e controle da
infeco. 3) Prestao de servio especializado comunidade acadmica pelo treinamento
de tcnicos, estudantes e outros profissionais 4)Garantir segurana dos acadmicos e
professores quando do manuseio desses animais em aulas prticas de clinica mdica e
cirurgia.
CONSIDERAES GERAIS
Os estudos de hibridizao do ADN-ADN tm mostrado que o gnero Brucella
constitui uma nica espcie genmica. Segundo as regras de prioridade, Verger e
colaboradores propuseram que o nome de B. melitensis, B. abortus, B. canis, B. neotomae,
B. ovis e B. suis deveriam ser considerados como simples biovares da Brucella melitensis.
Esta proposio respeitou (e respeita hoje) os critrios utilizados para a definio de uma
espcie bacteriana apesar de que em 1988, o subcomit de taxonomia de o gnero Brucella
ter considerado a existncia de uma nica espcie no gnero Brucella, este mesmo comit
admite o uso da nomenclatura anterior bem como o uso corrente em trabalhos baseados na
taxonomia.
A reduo do gnero Brucella a uma nica espcie no adotada por parte da
grande maioria dos bacteriologistas e compreende parte dos especialistas do gnero
Brucella. Depois da reunio de 11 septembro de 2003, o subcomit de taxonomia de
Brucella decidiu por unanimidade rever a situao anterior e de reconhecimento
existncia de novas espcies dentro do gnero Brucella.
O reconhecimento dessas espcies justificado por estudos fenotpicos, pela
epidemiologia, pela importncia dessas bactrias dentro da Sade Animal e Humana e pela
utilizao potencial delas em guerra bacteriolgica.
Classicamente, as espcies do gnero Brucella foram isoladas de mamferos
terrestres. Mais tarde, a partir de 1994, amostras do gnero Brucella spp foram isoladas de
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
CARACTERSTICAS GERAIS
As novas espcies B. ceti e B. pinnipedialis so constituidas de cocos,
cocobastonetes e/ou de bacilos curtos; Gram negativos; com 0,5 a 0,7m de dimetro e de
0,6 a 1,5m de comprimento; se apresentam de maneira isolada ou agrupada em curtas
cadeias ou em pequenos filamentos; possuem os antgenos do gnero Brucella; so imveis
e desprovidas de flagelos, aerbias; catalase, oxidase nitrato redutase e urease positivos;
indol negativas; H2S negativas; incapazes de liquefazer a gelatina e no acidificam os
acares contidos em meios convencionais.
Crescimento obtido em temperatura compreendida entre 20 e 40 C (temperatura
tima 37 C) e pH timo compreendido entre 6,6 e 7,4.
No AS com sangue ovino, as colnias so visveis aps 3 a 4 dias de incubao a
37C. Elas so convexas, circulares, de contorno regular, no hemoltica e com 0,5 a 1,0
mm de tamanho. O crescimento estimulado pela adio de soro ou sangue. No meio de
gelose glicose-soro, as colnias so transparentes, convexas, lisas, brilhantes, de contornos
regulares e apresentam uma colorao mel plida quando examinadas sob iluminao
oblqua.
B. ceti capaz de crescer em 3 a 4 dias em meio Farrell enquanto que o crescimento
da B. pinnipedialis retardado (7 a 10 dias) ou no observado. A grande parte das cepas da
B. ceti cultivada na ausncia de CO2 enquanto que o CO2 necessrio para a grande
maioria das amostras da B. pinnipedialis.
As caractersticas que permitem diferenciar a B. ceti e B. pinnipedialis das outras
espcies esto contidas no Quadro 1.
SINAIS CLNICOS
As alteraes reprodutivas como aborto, em fmeas; orquite/epididimite, leses
granulares, em machos, so sinais primrios da brucelose nos animais terrestres.
A avaliao da fertilidade em animais marinhos de vida livre difcil, entretanto nos
Estados Unidos, em 1999, Miller e colaboradores relataram casos de aborto em dois
golfinhos (Tursiops truncatus) capturados.
O DIAGNSTICO DIFERENCIAL
Em golfinhos com meningite, o diagnstico diferencial inclui parasitismo
(Nasitrema spp), infeco estafiloccica, herpes e infeces por Morbillivirus. Outras
doenas que causam aborto, orquite, epididimite, abscessos e doenas sistmicas devem ser
considerados e evidncia de infeco por Brucella.
ESTUDOS MOLECULARES
Os estudos moleculares evidenciaram que as cepas dos mamferos marinhos diferem
das dos mamferos terrestres e mesmo entre as linhagens que acometem os cetceos e os
pinpedes. Algum tempo atrs, pesquisadores sugeriram a criao de uma nova espcie
denominada B. maris, entretanto ela no foi aceita. Mais recentemente, duas novas espcies
foram sugeridas; a B. cetaceae e a B pinnipediae, as quais ainda no foram oficialmente
aceitas nem rejeitadas.
Em 2007, Foster e colaboradores sugeriram os nomes de B. ceti e B. pennipedialis
para as brucelas de cetceos e de focas, respectivamente (Foster et al 2007).
ZOONOSE
A brucelose uma importante zoonose para o homem causando a grande variedade
de sinais e sintomas clnicos, incluindo febre ondulante, fadiga, prostrao, dor articular,
mialgia, depresso e anorexia. Frequentemente ocorrem sequelas e perodos de
recrudescncia, aps o episdio inicial de infeco. A brucela pode ser transmitida de
animais para o homem pelo contato direto com animais infectados; pela ingesto de
produtos infectados e pela inalao de aerossis.
Quatro espcies do gnero Brucella (classif. atual) so causas primrias de infeco
no homem. A B. melitensis bastante infecciosa, sendo transmitida por caprinos e ovinos.
A B. abortus transmitida por bovinos. A B. suis transmitida por sunos e a B. canis
transmitida por ces. As outras espcies de Brucella infectam raramente ou no infectam o
homem.
H alguns poucos relatos na literatura relativos infeco humana causada por
linhagens de Brucella de mamferos marinhos.
Brew et al. 1999 registraram o caso ocorrido em um laboratorista que adquiriu os
sinais clnicos compatveis com brucelose. A infeco foi confirmada pelo isolamento,
testes diagnsticos sorolgicos, PCR, RFLP de Brucella de origem marinha ().
Sohn et al. (2003) relataram em dois pacientes peruanos, os quais foram
diagnosticados como portadores de neurobrucelose. O quadro clnico foi confirmado pelos
testes diagnsticos (isolamento, PCR, sequenciamento de DNA) como infectados
naturalmente por linhagens de Brucella de mamferos marinhos.
Na Nova Zelndia, McDonald e colaboradores, em 2006, relataram um caso em um
homem de 43 anos, morando em Auckland - Nova Zelandia, o qual apresentou sinais de
osteomielite espinal por 2 semanas com sinais de febre, rigor e fraqueza lombar. Os testes
aplicados reagiram tanto para a B. suis quanto B. melitensis. As amostras foram ento
enviadas ao laboratrio de Referncia internacional que o identificou como relacionado a
Brucella originria dos Estados Unidos de golfinhos (Tursiops truncatus) e da foca comum
(Phoca vitulina).
EPIDEMIOLOGIA PREVALNCIAS
H na literatura relatos em muitos lugares e em diversas ocasies de isolamento de
Brucella e comprovao sorolgica em muitos mamferos marinhos, especialmente no
Hemisfrio Norte.
LESES
Pequenas alteraes patolgicas tm sido relatadas nos primeiros estudos nos
animais marinhos encalhados no leste do Atlntico Norte apesar do sucesso no isolamento
de agentes cepas pertencentes ao gnero Brucella. Contrariamente com as leses
granulomatosas e caseosas observadas e relatadas nas gnadas da baleia minque (B.
acutorostrata) no Oeste do Pacfico. Leses granulomatosas caseosas testiculares foram
constatadas em 31% (11/35) e 38% (35/93) em machos da baleia minque do Pacfico Norte
capturados em 2000 e 2001 respectivamente.
COLETA DE AMOSTRAS
As amostras so isoladas de pulmes, do bao, do fgado, do lquido peritoneal, do
corao, dos rins, do epiddimo, dos ovrios, do leite, de abscesso, dos linfonodos e do
sangue. Em alguns animais, nenhuma patologia pode ser associada presena do agente,
enquanto em outros animais pode-se notar epididimite discoespondilite, meningite, leses
purulentas, necrose heptica, necrose esplnica, necrose dos linfonodos, peritonite, mamite
e endometrite. O diagnstico presuntivo da infeco pode ser evidenciado atravs da
presena de anticorpos anti-Brucella em outras espcies: golfinho sombra (Lagenorhynchus
obscurus), marsopa espinosa (Phocoena spinipinnis), baleia piloto (Globicephala melas),
baleia comum (Balaenoptera physalus), baleia boreal (Balaenoptera borealis), foca de
Weddell (Leptonychotes weddellii), mora do Atlantico (Odobenus rosmarus rosmarus),
foca de Kerguelen (Arctocephalus gazella) .
Estudo realizado em animais vivos nas costas da Esccia mostrou que
aproximadamente 49% das focas comuns e 33% dos botos eram soropositivos.
A ingesto de mamferos marinhos ou alimentos contaminados por esses animais
podem representar perigo para os animais silvestres e domsticos.
Os ursos polares consomem grandes quantidades de focas e um estudo mostrou que
5,4% dos ursos polares apresentarm anticorpos anti-Brucella.
As carcaas dos mamferos marinhos encontrados nas praias podem representar um
risco para os animais que crculam naquele ambiente. A inoculao experimental por via
intravenosa de cepas de Brucella isoladas de mamferos marinhos em bovinos provocou
abortos e a mesma amostra pode ser reisolada do feto. Por sua vez, a inoculao por via
DIAGNSTICO LABORATORIAL
O isolamento realizado em paralelo em meio de Farrell (incubado pelo menos por
14 dias aps a concluso do cultivo) e em AS incubado a 37 C em atmosfera enriquecida
com 10% de CO2. O meio de Farrell deve conter concentraes menores de bacitracina e/ou
de cido nalidxico, pois favorecem o cultivo da Brucella pinnipedialis.
O aspecto da colnia; o exame microscpico aps a colorao de Gram e a pesquisa
de anticorpos aglutinantes em lmina com soro anti-Brucella abortus permitem orientao
do diagnstico. O diagnstico da espcie mais complexo, devendo ser confiado a
laboratrios especializados.
O diagnstico sorolgico emprega os testes clssicos utilizados para o diagnstico
de brucelose dos mamferos terrestres (AAT, FC, ELISA, etc.). Embora esses testes ainda
no estejam validados.
CONTROLE
Mtodos especficos de controle no foram estabelecidos para a brucelose em
mamferos marinhos. Princpios gerais de controle de infeco, incluindo o isolamento,
desinfeco e higiene devem ser utilizadas com os animais infectados em instalaes
martimas de mamferos. Alguns autores sugerem que os centros envolvidos na reabilitao
de mamferos marinhos devem rotineiramente selecionar animais para Brucella spp.
Brucella microti
Prof. Marcos JP. Gomes
INTRODUO
Atualmente, alm das oito espcies descritas, h mais outra espcie que foi
adicionada s isoladas. A nova espcie chama-se B. microti, espcie isolada do
camundongo do campo (Microtus arvalis). Este roedor do campo provoca grandes
prejuzos s colheitas de cereais na Europa e reservatrio para outros agentes como
Leptospira interrogans, Francisella tularensis e Babesia microti.
Em 1996, a populao de camundongos do sul da Morvia (Repblica Tcheca) foi
objeto de um levantamento para melhor conhecer a dinmica das populaes. Entre 1999-
2003, os pequenos roedores foram vtimas de uma epidemia com grande mortalidade. As
observaes microscpicas das leses permitiram demonstrar cocobastonetes Gram
negativos.
O exame bacteriolgico efetuado em quatro animais capturados, em setembro de
2000, permitiu isolar em cultivo puro, oito amostras nas quais cinco pareciam assemelhar-
se com amostras do gnero Ochrobactrum spp. Duas dessas amostras, as amostras CCM
4915 e CCM 4916, foram de fato submetidas a um estudo bacteriolgico mais completo,
sendo identificadas como cepas de Ochrobactrum intermedium. O O. intermedium um
germe do solo, raramente responsvel por infeco em vertebrados, sendo pouco provvel
que o O. intermedium fosse a origem das epidemias observadas nos camundongos. As
amostras CCM 4915 e CCM 4916 foram submetidas a um estudo taxonmico.
O sequenciamento dos genes rrs, recA, omp2a e omp2b, assim como a hibridizao
ADN-ADN permitiu colocar as duas cepas dentro do gnero Brucella. A sequncia dos
genes rrs (1422 pb) e recA (897 pb) apresentaram 100% de semelhana com as seqncias
das Brucella spp. As sequncias dos genes omp2a (1104 pb) apresentaram 100 % de
semelhana com a sequncia da cepa 6516/98 da B. pinnipedialis, enquanto que a
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
sequencia dos genes omp2b apresentou 99% de semelhana com a cepa B3196 da B.
abortus e 99 % de similitude com a linhagem B. suis 1330.
A tcnica de AMOS (AMOS para AbortusMelitensisOvisSuis) permite detectar e
diferenciar B. abortus, B. melitensis, B. ovis e B. suis, permitiu obter um fragmento de
2.000 pb ausente nas outras Brucella spp. A amplificao da regio situada em direo ao
gene bp26 conduz a obteno de um amplicon de 1029 pb, caracterstico das Brucella spp
isoladas de mamferos terrestres. A tcnica de MLVA [multilocus VNTR (variable-
number-tandem-repeats) analysis] efetuadas nas amostras CCM 4915 e CCM 4916 e em
424 amostras de Brucella spp revelaram que as cepas isoladas de roedores formavam um
grupo distinto das outras espcies do gnero Brucella.
As caractersticas fenotpicas permitem diferenciar as cepas CCM 4915 e CCM
4916 das outras espcies do gnero Brucella. Assim, em fevereiro de 2008, Scholz e
colaboradores sugeriram o nome de B. microti para esta bactria.
CARACTERSTICAS GERAIS
As cepas de B. microti so cocobastonetes ou de bastonetes curtos, Gram negativos,
com 0,5 a 0,8 m de diametro por 0,6 a 1,4 m de comprimento, e apresentam-se isoladas
ou agrupadas em filamentos irregulares, aerbias, imveis, no esporuladas, oxidase
positiva, catalase positiva, metabolismo oxidativo e aglutinao pelo soro anti-M diludo a
1/80.
CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
Apresentam resposta positiva aos testes de:
Reduo dos nitratos (com formao de gas), Reduo dos nitritos, Urease, VP,
Fenilalanine desaminase, assimilao (galeria API 20 NE) de Adipato, L-arabinose, N-
acetil-glucosamina, D-glicose, Maltose e D-manose, Oxidao (utilizao do meio OF,
Difco), Frutose, Glucose, Maltose e Xilose.
PATOGENICIDADE
A infeco dos camundongos provoca caquexia, edema de extremidades dos
membros, artrites, orquites e adenites. Esses abscessos so, algumas vezes, sobre os
membros e sua ruptura causa perfuraes na pele. Na necropsia, h presena de abscessos
peritoniais, esplenomegalia, hepatomegalia pouco pronunciada e hemorragias intestinais
moderadas.
A inoculao por via subcutnea de 2,5 x 107 microrganismos em camundongos de
laboratrio (Cd SPF da linhagem ICR) provoca, em 4 a 69 dias, morte de 50 % dos
animais. Os camundongos mortos apresentam abscesso, uma ligeira esplenomegalia, um
exsudato peritonial contendo bactrias Gram negativas observadas nas leses.
Patogenicidade para o homem ou para outras espcies animais no foi ainda
documentada.
DIAGNSTICO
B. microti facilmente isolada das leses em agar nutritivo e no TSA. A
identificao delicada, pois a B. microti pode ser confundida com uma espcie do gnero
Ochrobactrum, especialmente quando se utiliza a galeria API 20 NE conduzindo a uma
identificao errnea de Ochrobactrum anthropi. De qualquer forma a ausncia de
motilidade permite distinguir facilmente B. microti de Ochrobactrum spp.
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