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Practica 3: Microscopa

Materia: Biologa Celular

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CONTENIDO
RESUMEN.......................................................................................................................................... 3
MARCO TERICO ............................................................................................................................ 5
OBJETIVO .......................................................................................................................................... 7
MATERIAL Y PROCEDIMIENTO ................................................................................................... 8
RESULTADOS ................................................................................................................................... 8
DISCUSIN DE RESULTADOS .................................................................................................... 12
CONCLUSIN ................................................................................................................................. 13
REFERENCIAS ................................................................................. Error! Bookmark not defined.
CUESTIONARIO ............................................................................................................................. 15

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RESUMEN
Recordemos que el microscopio es un equipo de buena utilidad, que se emplea mucho en el
mbito de la ciencia, y es para ver a los objetos que no se ven a simple vista, ejemplo: las
bacterias, virus, etc.

En la actualidad, oculares y objetivos estn formadas por varias lentes, cada una de ellas
suma su capacidad de aumento, con lo cual se obtienen mejores imgenes, con mayor
claridad en los detalles. Lo importante, cuando observamos al microscopio, es la calidad de
la imagen y no el aumento, la cual depende del poder de resolucin.

Es necesario conocer y diferenciar a los tipos de clulas como las eucariotas y las procariotas
para ello se realizaron prcticas sencillas utilizando una prueba de bacterias con tincin de
Gram, por lo cual se pudo observar y distinguir las diferencias que se presentaba en cada una
de las muestras, en realidad se pudo observar que en una de ellas se tea de color rosa-rojo
y por otro lado se present un color morado-azul.

Para poder llevar a cabo las observaciones de manera ms exacta se emple los colorantes ya
que son de gran utilidad. Esta sustancia es capaz de dar color a las clulas, tejidos, fibras, etc.
Ms que nada son muy importantes ya que tienen las siguientes funciones: permiten hacer
visibles a los objetos microscpicos y transparentes, revelan su forma y tamao, muestran la
presencia de estructuras internas y externas.

Las tinciones son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el
diagnstico de las enfermedades infecciosas. La tincin de Gram se considera bsica en la
valoracin inicial de muestras para anlisis bacteriolgico.

Es importante recalcar que hay dos tipos de tinciones que se utilizan y son los ms comunes;
estn las simples, es decir, cuando toda la muestra se tie de un mismo color y se utiliza un
solo colorante como azul de lactofenol y tinta china. Por otro lado, se encuentra la tincin
diferencial, y esto consiste cuando se visualiza ms de un color porque se utiliza ms de un
colorante.

De la misma manera para poder observar la estructura de una hoja de planta se utiliz dicha
muestra y se observ cmo estaba compuesta, con una cercana agradable.

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Las plantas estn formadas por cuatro rganos principales: el tallo, la raz, la flor y la hoja.
En este caso se enfoc en el estudio y observacin de la estructura de una hoja.

Las hojas son rganos de los vegetales generalmente de forma laminar, que presentan una
superficie llamada limbo, con dos caras: una anterior, el haz y otra posterior, el envs.

De esta manera se conoce que los microscopios son muy importantes en el trabajo de la
investigacin.

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MARCO TERICO
Actualmente se afirma que todos los seres vivos estamos constituidos por clulas. El tamao
de la mayora de las clulas es menor que el poder de resolucin del ojo humano, que es de
aproximadamente 100 micrmetros, fue por esta razn que el descubrimiento de las clulas
se dio a mediados del siglo XVII cuando se fabricaron las primeras lentes que dieron vida a
los microscopios. Sin embargo, estos lentes eran de muy mala calidad y no permitan
observar de la mejor manera a estos organismos.

Fue hasta el ao de 1665 cuando Robert Hooke logro construir un nuevo microscopio
el cual era mucho mejor que l ya existente. Este nuevo instrumento le permito a
Hooke describir las estructuras que aparecen en una fina lmina de corcho, que por
su forma le recordaban a las celdas de los panales de las abejas. Hooke llam por ello
clulas a estas estructuras (Garrote, 2013).

Actualmente las clulas se clasifican en dos tipos los cuales son procariotas y eucariotas.

La clula eucariota posee compartimentos internos delimitados por membranas. Entre


stos se encuentra el ncleo, delimitado por una doble unidad de membrana, en cuyo
interior se encuentra el material gentico o ADN que contiene la informacin
necesaria para que la clula pueda llevar a cabo las tareas que permiten su
supervivencia y reproduccin. (Megas, Molist, & Pombal , 2016)

Imagen 1: Clulas eucariotas animal y vegetal

Recuperada de: http://www.areaciencias.com/celula-animal-vegetal.htm

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Los procariotas, son probablemente la forma de vida ms antigua.

Las clulas de los microorganismos procarioticos se caracterizan por carecer de


sistemas internos de membranas, cuentan con una pared celular que mantiene la forma
de la clula. Algunos son hetertrofos y otros auttrofos porque tiene pigmentos
(Baquero et al, 2006, pp. 20).

Imagen 2-celula procariota


Recuperado de: http://www.definicionabc.com/ciencia/celula-procariota.php

Las clulas por lo regular se miden en micrmetros, sin embargo, hay muchas clulas que no
se logran ver utilizando simplemente el microscopio ptico, para lograr verlas se necesitas
de utilizar tinciones.

La tincin es un mtodo sencillo para incrementar el contraste entre la clula y su


entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las tcnicas de
tincin con diversos colorantes facilitan la observacin al aumentar notablemente el
contraste. (Vzquez, Martn, Silniz , & Serrano , 2010)

Una de las tcnicas ms usadas es la tincin de Gram. La tcnica se basa en aplicar una serie
de colorantes a una muestra de cualquier origen que supuestamente contenga bacterias no
identificadas.

Los colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la pared

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bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el color morado, y se tratara
de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram
negativas (Corralo, 2016)

OBJETIVO
General:

Aprender a utilizar el microscopio

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Identificar las partes y sistemas de un microscopio y su uso correcto

Particulares:
Aprender a enfocar con los objetivos 4x, 10x, 40x y 100x
Manipular las muestras al momento de utilizar el microscopio

MATERIAL Y PROCEDIMIENTO
e realiz la prctica de acuerdo al manual de Santambrosio, Ortega, & Garibaldi (2009) con
las siguientes modificaciones: Se inici con el objetivo de 4x para iniciar los enfoques, se
omiti el paso de cubrir con papel uno de los oculares, se omitieron los pasos que
involucraban la manipulacin del condensador.

RESULTADOS
OBSERVACIN DE CLULA VEGETAL Y ANIMAL. -

Las muestras observadas en el microscopio fueron tanto clula eucariota como procariota.

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CLULA PROCARIOTA: (PROTOZOOS DE VIDA LIBRE)

Frotis de tincin de gram, se presume que es procedente de un cultivo de bacterias.

Utilizando los objetivos 4x; 10x; 40x se observ bacterias gram negativas debido a la
coloracin rojo tenue. Las bacterias con morfologa bacilar (en forma de bastn).

El tamao de las clulas procariotas es de 1000 5000 nanmetros por lo que su observacin
en el microscopio es diminuta.

Se desconoce el tipo de bacteria observada en el frotis.


El tipo de tincin es diferencial.

CELULA EUCARIOTA: (CELULA VEGETAL DE LA HOJA DE UNA PLANTA)

Tincin con Verde malaquita, fragmento de la hoja de una planta sumergida en reactivo.
La microscopia utilizando los objetivos 4x; 10x; 40x se observ la estructura detallada de la
hoja.
4x: estructura contraste claro de la hoja y *nervios de la misma. Se observa pigmentacin
verde intensa.
*nervio principal o medial: son las ramificaciones de la hoja.
10x: observacin de los nervios ms detallada, segmentacin de la hoja (clula vegetal), en
el borde de la hoja se aprecia un corte brusco.
40x: observacin tanto de los nervios como la parte de la hoja ms detallada.
Tincin simple
Se desconoce la especie de la hoja de la planta.

COORDENADAS DE LA PLATINA:
NIKON:
Coordenada longitudinal: 24 coordenada transversal: 93
ZEISS:

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Coordenada longitudinal: 11 coordenada transversal: 31

TIEMPO EN CONTRASTAR CON LOS OBJETIVOS:


Mster: Cristian chacn: 26 Rodrigo Gmez: 25
Pupilos: Teresa Daz: 28
Alexis Jimnez: 25
Giovanni Chishna: 24
Cesar Vzquez: 30
Antonio Lara: 29

ANGULO DE OCULAR:
Msters: Cristian chacn: 50 Rodrigo Gmez: 60
Pupilos: Teresa Daz: 67
Alexis Jimnez: 75
Giovanni Chishna: 58
Cesar Vzquez: 62
Antonio Lara: 68

MICROSCOPIOS UTILIZADOS: ZEISS, NIKON.

Las fotografas de las muestras observadas se presentan a continuacin:

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Fotografa 1.1 observacin de la Fotografa 1.2 observacin de la
tincin de gram con objetivo 4x. tincin de gram con objetivo 10x.
Este objetivo es utilizado para El aumento en el contraste es
bsqueda y enfoque. mayor.

Fotografa 1.3 observacin de la Fotografa 1.4 observacin de un


tincin de gram con objetivo fragmento de hoja de una planta para
40x.notese el contraste y observar clulas vegetales. Enfoque y
aumento ms apreciable. bsqueda con objetivo 4x.

Fotografa 1.5 observacin del


mismo fragmento de hoja de una
planta en objetivo 10x. Ntese la
estructura ms detallada de la
hoja.

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DISCUSIN DE RESULTADOS
En esta prctica se observ cmo se clasifican las bacterias por medio de la tincin de Gram.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas se tien de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares (Santambrosio, Ortega, &
Garibaldi, 2009) al igual se pudo diferenciar una clula vegetal de una clula procariota, ya
que contienen distintas caractersticas Una clula eucariota tpica mide entre 10 y 30 m y
una clula procariota son clulas de menor tamao que las eucariotas y suelen medir entre 1
y 10 m (Martinez, 2014), siendo una de las diferencias ms notables entre ellas, esta
diferencia se observ con mayor claridad al comparar las dos observaciones ya que al
observar la clula vegetal se logr ver con mayor detalle la estructura de la misma, no fue en
el caso de las bacterias teidas con Gram, en la cual solo se pudo observar la coloracin
violeta sobre las bacterias, sin lograr una observacin detallada de sus estructuras.

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CONCLUSIN
La prctica de la manipulacin del microscopio es muy importante porque nos permitir
conocer los diferentes tipos de clulas que existen. Gracias al microscopio nosotros logramos
ver muy bien la estructura de una clula vegetal adems de que las tinciones nos ayudaron a
determinar con una mayor claridad las diferencias que existe entre los diversos tipos de
clulas.

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Referencias
Baquero, C., Rivera, H., & Riveros, E. (2006). Organismos procariontes. En Autor, Maestra
enciclopedia temtica ilustrada (Vol. 3, pg. 20). Bogot: Norma.

Corralo, D. S. (5 de Agosto de 2016). Tincin de gram . Obtenido de Webconsultas:


http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
Garrote, J. L. (4 de Abril de 2013). Hooke y el descubrimiento de la clula. Obtenido de
Curiosidaddes cientficas: http://kuriosidadescientifiks.blogspot.mx/2013/04/robert-
hooke-y-el-descubrimiento-de-la.html

Martinez, E. (14 de Septiembre de 2014). La clula. Obtenido de Ciencia en compaa:


https://biocia.files.wordpress.com/2012/08/celula2.pdf

Megas, M., Molist, P., & Pombal , M. (6 de Diciembre de 2016). La clula. Obtenido de Atlas de
histologa vegetal y animal : https://mmegias.webs.uvigo.es/descargas/atlas-celula-01-
introduccion.pdf

Santambrosio, E., Ortega, E., & Garibaldi, P. (30 de Mayo de 2009). Tincin y observacin de
microorganismos. Obtenido de Universidad tecnolgica nacional:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practico
4.pdf

Vzquez, C., Martn, A., Silniz , I., & Serrano , S. (2010). Tcnicas bsicas de microbiologa
observacin de bacterias. Reduca, 15.

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CUESTIONARIO
a) Defina longitud de onda, espectro visible, resolucin y apertura numrica
La longitud de onda es la distancia que existe entre dos puntos sucesivos que se encuentran
en el mismo estado de vibracin (misma elongacin, velocidad, aceleracin). Se simboliza
mediante la letra griega (lambda) y se expresa en unidades de longitud (m). Los mximos
de amplitud se denominan crestas; los mnimos, valles. La distancia entre dos crestas o dos
valles consecutivos se corresponde con la longitud de onda.

Se denomina espectro visible a la regin del espectro electromagntico que el ojo humano es
capaz de percibir. A la radiacin electromagntica en este rango de longitudes de onda se le
llama luz visible o simplemente luz. No hay lmites exactos en el espectro visible; un tpico
ojo humano responder a longitudes de onda desde 400 a 700 nm aunque algunas personas
pueden ser capaces de percibir longitudes de onda desde 380 a 780 nm.

La resolucin es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos.


Cuanto mayor sea el poder de resolucin, mayor ser la definicin del objeto. La resolucin
es inversamente proporcional a la distancia mnima a la cual se pueden distinguir dos puntos
muy cercanos.

Apertura numrica (NA): Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar
los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales est constituido el objeto que se
observa

b) Cul es la importancia del uso del condensador?


El Condensador es un componente principal del microscopio debido a que este concentra y
regula los rayos luminosos que provienen de la fuente luminosa.

c) Qu diferencia hay entre el ojo humano, microscopio ptico y microscopio


electrnico?

La principal diferencia que existe entre el ojo humano y los microscopios es la resolucin
que estos tienen por ejemplo el microscopio ptico puede alcanzar una resolucin de 100 nm
y el microscopio electrnico puede alcanzar hasta 1 nm de resolucin mientras el ojo humano
alcanza solamente las 100 micras de resolucin.

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d) Para qu se emplea el microscopio de campo oscuro, el microscopio de contraste de
fases y el microscopio de fluorescencia?
El microscopio de campo obscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un
cono hueco concentrado sobre el espcimen. Se utiliza para analizar elementos biolgicos
transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es
decir, sin matarla.

El microscopio de contraste de fases es igual de suma importancia en el laboratorio porque


nos permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. La
mayora de los organismos vivos no pueden ser teidos debido a que los colorantes utilizados
pueden daar su estructura celular hasta el punto de su muerte.

En cambio, el microscopio de fluorescencia se utiliza mucho para detectar sustancias con


auto fluorescencia, es decir, vitamina A o sustancias marcadas con fluorocromos.

Qu es microscopia led?
Microscopio led: Incluye la ms amplia gama de mtodos de contraste. Alta estabilidad,
amplio espacio para trabajar con herramientas, distancias de trabajo considerables para
grandes envases de cultivo, iluminacin sin calor y una unidad electrnica independiente
hacen que el trabajo con este microscopio sea sencillo y cmodo. Es ideal para cultivos de
clulas y tejidos, micro manipulacin y exmenes en clulas vivas.
e) Explique qu son tinciones simples y qu son tinciones diferenciales y d 2 ejemplos
de cada una de ellas
Tincin simple: Es aquella que solo usa un colorante y esta permite diferenciar estructuras
de microorganismos
Ejemplo: azul de metileno y cristal violeta
Tincin diferencial: es aquella en la cual se aplica ms de un colorante y permite diferenciar
entre tipo de microorganismos
Ejemplo: cido-alcohol resistente y tincin Gram

f) Por qu existen objetivos con diferentes aumentos? Le sirvieron en la presente


prctica? Explique sus respuestas Qu dificultades se presentaran si se iniciara un

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enfoque de muestra con la lente de mayor aumento? Por qu debe emplearse aceite de
inmersin con el objetivo de 100X?
Existen objetivos con diferentes aumentos debido a que se pueden intercambiar para
aumentar, en forma creciente, el tamao de la imagen.
Nos fue de ayuda debido a que se pudo observar con ms detalle la estructura y forma que
compone el cabello.
Si iniciamos con un objetivo mayor que el de 4x, se dificultara a la hora de enfocar nuestra
muestra a tratar. Es recomendable comenzar por el objetivo de 4x e ir cambiando hasta
alcanzar el objetivo de 100x
Se debe emplear aceite de inmersin en el objetivo de 100x debido a que se utiliza para contar
con una observacin ms detallada de una muestra mediante la inmersin del lente objetivo
y el espcimen en un aceite transparente de alto ndice de refraccin

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