05/09/2011
ESTERILIDADADE
Controle de Produtos Estreis
ambientes controlados
teste de esterilidade
Aula adaptada de Profa. Dra. Patrcia Santos Lopes
Tipos de Esterilizao
Destrutiva: trmica, radiao, qumica
Remoo: filtrao esterilizante (0,22 m)
Sterility Assurance Level (SAL): nvel de garantia
de esterilidade que consegue-se conferir ao
processo
mtodo destrutivo: 10-6
mtodo de remoo: 10-3
Controle Ambiente
Sala limpa: condies controladas de ar, material
de construo, procedimentos operacionais,
visando controlar a concentrao de partculas
em suspenso no ar.
Confiabilidade do processo esterilizante
Ausncia de contaminao endotxica no
produto acabado.
Limites para contaminao particulada no vivel.
Total ausncia de formas viveis capazes de
reproduo (formas demonstrveis de vida)
Produtos estries Vrus depende
Injetveis
de clulas para
viabilidade!!!!!
Parenterais de grande volume
Produtos oftalmolgicos
Produtos correlatos implantveis
Produtos otolgicos (ideal)
Prteses
Bioburden
Conhecimento do bioburden
Bioburden ou biocarga: acompanha o produto.
uma soma de tudo que est contaminando o
produto antes do mesmo ser esterilizado.
Deve ser analisado antes e depois do processo
esterilizante
Ideal: baixos nveis de Bioburden
Controle do Ambiente
Classificao da rea Ou m3
Classe 100: 100 partculas/ p3 de ar
Classe 10.000: 10.000 partculas/ p3 de ar
Partculas 5m
O controle realizado de acordo com a classe
da produo.
Cada pessoa libera uma camada completa de clulas da pele a
cada 1 a 2 dias, estimada em cerca de 107 a 109 partculas, com
dimenso de 5 m)
As clulas tm tamanho aproximado de 40 m, porm sofrem
fragmentaes, resultando em tamanhos mdios de 20 m, e mais
de 10% abaixo de 10 m.
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Comparao das classificaes dos padres de purificao de

aerotransportados com relao referncia farmacutica do
Especificaes grau de sala limpa
EM/ISSO 14644-1 EU GMP US FED STD Japo Brasil
Atualmente h padres globais para salas limpas JIS B 9920 RDC 17
estabelecidos e publicados pela international
Standards Organization (ISO) e Comitee for ISO class 3 1 3
European Normatization (CEN) ISO class 4 10 4
Substituem os padres europeus, americanos e
japoneses ISO class 5 Grau A e B 100 5 Classe A e B

So denominados: EN/ISO 14644 Classrooms and ISO class 6 1000 6

Associated Controlled Enviorments-
Biocontamination Control (para particulados: EN/ISO 14698) ISO class 7 Grau C 10000 7 Classe C

O Brasil traduziu esta norma na RDC 17/2010 ISO class 8 Grau D 100000 8 Classe D

ISO class 9 1000000 9

Classificao das salas conforme ISSO 14644-1 Controle de Ambiente

Limites de mxima concentrao (partculas/ m3)
Qualidade do ar
Nmero de Filtro HEPA (Hight Efficiency Particulate Air) filtros
classificao 0,1 m 0,2 m 0,3 m 0,5 m 1 m 5 m
ISO
absolutos (arranjo randomizado de fibras de vidro com dimetro
variando de 0,1 a 10,00 m)
ISO class 1 10 2
ISO class 2 100 24 10 4 Controle de partculas
ISO class 3 1.000 237 102 35 8 DOP (dioctil ftalato, C24H38O4) ou cloreto de sdio
ISO class 4 10.000 2370 1020 352 83 atomizado (partculas de 0,02 1,1 m, produzidas por
ISO class 5 100.000 23.700 10.200 3.520 832 29 atomizao de soluo de 2 a 10% de NaCl)
ISO class 6 1.000.000 237.000 102.000 35.200 8.320 293
Certificado de reas limpas (de 6 em 6 meses)
ISO class 7 352.000 83.200 2.930
ISO class 8 3.520.000 832.000 29.300 Teste DOP: avalia a eficincia de um filtro na remoo de partculas de
ISO class 9 352.000.000 8.320.000 293.000 ar, baseado na reteno de aerossis de 0.3 m de dioctilftalato (dioctyl
phthalate DOP), normalmente expresso em termos percentuais.
Um filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) deve reter, no mnimo,
99.97% de aerossis de DOP com 0,3 m de tamanho.

Controle de Ambiente Teste de esterilidade

Controles rotineiros Amostragem
Contadores de partculas por volume de ar Meios de cultura
Exposio de placas Mtodos de inoculao
Rodac e Swab
Tempo de incubao
Pessoal
Temperatura de incubao
Enchimento simulado (Media Fill)
Interpretao dos resultados

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Teste de esterilidade
Teste destrutivo
Baseia-se em amostragem de acordo com o
tamanho do lote e tipo de produto
Farmacopias diferem entre si
Problemas inerentes ao prprio teste (analista/
ambiente)
Teste de esterilidade
Mtodos de inoculao
Mtodo direto: inoculao direta de quantidades
ou volumes pr-estabelecidos da amostra em
volumes estipulados de diversos meios de
cultura
Mtodo indireto: filtrao da amostra atravs de
membrana 0,45m, seguida da incubao da
membrana (dividida em dois) nos respectivos
meios de cultura.
Teste de esterilidade
Tempo de incubao
Teste indireto: 7 dias (apenas quando a
esterilidade trmica mida tenha sido
empregada no produto final) ou 14 dias (atuais
farmacopias)
Teste direto: 14 dias com visualizao perdicas
Temperatura de incubao
Tioglicolato: 30- 35 C
TSB: 20-25 C
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Teste de esterilidade
Ambiente controlado
Treinamento de analista
Controle de meios de cultura
Evitar falso-positivo
Incubar o meio de cultura verificar eficcia do
processo de esterilizao
Evitar falso-negativo
Grow Promotion inocular 100 UFC para verificar
viabilidade do meio
No se esquecer de neutralizar
interferentes!!!
Teste de esterilidade
Meios de cultura
Meios ricos para garantir recuperao dos
microrganismos estressados
Tioglicolato
Crescimento de bactrias aerbias, anaerbias,
microaerbias e mesfilas
Rezasurina: indicador de oxi-reduo
Caldo casena soja (TSB): crescimento de fungos e
bactrias psicrfilas (viveis em TC)
Teste de esterilidade
Interpretao
Observao macroscpica para visualizao da
turvao
1 tubo turvo: nova anlise com dobro de amostra e
identificao do microrganismo
Positivo: identificao do microrganismo
Se os microrganismos forem os mesmos reprova o
lote, se forem diferentes, novo re-teste.