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MAR
Introduo
Princpio do mtodo
O mtodo fundamenta-se na dosagem dos ons nitritos (reao de Griess) obtidos por reduo
quantitativa (maior de 90%) dos ons nitratos presentes na amostra. Logo, se mede a soma das
concentraes dos ons nitritos e nitratos. O complexo colorido deve ser lido num
comprimento de onda de 543 nm. Deduz-se a concentrao em nitrato, subtraindo-se o nitrito
original da amostra da concentrao de nitrito total dosado (somatrio destes NO2 com o NO3
reduzido). A reduo do nitrato efetuada pela passagem da amostra por uma coluna
redutora preenchida por gros de cdmio tratados com soluo cprica (cdmio envelopado
com cobre).
OBS: Esta anlise precisa ser feita utilizando volume mnimo de 35 ml de amostra, no
possvel realiz-la em microvolumes. Devido a estabilidade da coluna, s possvel ler no
mximo 30 amostras por dia. Para esta anlise, l-se apenas a curva em triplicata, inserindo o
mesmo frasco de reao no aparelho trs vezes, entretanto as amostras so inseridas apenas
uma vez, ou seja, no so lidas em triplicata.
Dicas importantes:
- Para as anlises os reagentes devem estar em temperatura ambiente, por isso devem ser
retirados antecipadamente da geladeira.
- Sempre separar em bqueres de 10 ml uma pequena parcela de soluo padro para a
anlise, e em bqueres de 50 ml os reagentes que sero utilizados, e imediatamente retornar
os frascos geladeira, para melhor conserv-los.
- Jamais pipetar nos frasco de estocagem original:
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a. Retirar uma alquota de 5 mL da soluo padro me e acondicionar em Becker de 10 mL
especfico de NO2 e NO3. Cobrir com papel toalha ou alumnio para evitar poeira e
contaminao durante a aclimatao; (Reserve o volume que utilizou para ambientar o frasco
para utilizar posteriormente no teste de reagente).
d. Retirar o volume de R1 e R2 necessrio para as anlises que far no dia, considere o volume
necessrio para ambientar as pipetas e frascos, fazer o teste de reagente e fixao das
amostras (curvas e leituras);
- Jamais devolver o reagente ou a soluo me que sobrou nas vidrarias de trabalho para os
frascos de estocagem. Por isto economize e organize o volume que ir usar no dia.
1. Materiais necessrios
OBS: Esta quantidade de vidraria foi listada considerando a preparao dos reagentes, dos
padres e anlises feitas no mesmo dia. Devido anlise ser bastante demorada, recomenda-
se preparar todos os reagentes no dia anterior. A soluo tampo pode ser feita no dia
anterior e usada apenas por um dia, se sobrar soluo aps trabalho esta deve ser descartada.
Neste caso as vidrarias podem ser lavadas e secas, e usadas tambm para as anlises, o que
despende menor nmero de material.
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2. Preparo dos reagentes necessrios:
- Utilizando uma proveta de 50 ml, medir este volume de HCL, tomando muito
cuidado; Diluir este cido em 300 mL de gua destilada, usando proveta de 500 ml;
Jamais colocar a gua no cido, explode!! sempre o cido na gua.
- Pesar com auxlio de bquer de 100 ml, na balana analtica, 5 g de sulfanilamida
cristalina, com esptula de inox;
- Dissolver o sal com um pouco da soluo anterior;
- Transferir sal dissolvido e resto da mistura cida para balo de 500 ml, no se
esquecendo de lavar o basto e o bquer com gua destilada dentro do balo,
evitando desperdcio do sal;
- Completar com gua destilada e ajustar menisco com seringa de 1 ml;
- Homogeneizar a soluo por 10X, invertendo e agitando o balo. Este reagente
estvel por no mximo dois (2) meses.
OBS: Deve ser feito no dia da anlise, ou no dia anterior. Deve ser armazenada
em garrafa de plstico fechada, pois voltil. Colocar uma pequena quantidade da
soluo em um bquer e medir o pH com auxlio de pHmetro. Seringa identificada
(amnia), no utilizar pipeta automtica.
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Utilizando o pHmetro (Alfa Kit):
1. Ligar
2. Passar gua destilada no sensor
3. Colocar o sensor na soluo do pHgmetro que fica na porta da geladeira,
especfico da Alfa Kit
4. Deixar estabilizar em pH 7
5. Lavar novamente com gua destilada
6. Ler a amostra (tampo)
Solues padro:
I. NITRATO
II. NITRITO
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b. Soluo intermediria (100 uM)
NITRITO NITRATO
100 M NO3 100 m NO2
BRANCO A BRANCO B BRANCO A BRANCO B
1,0 M A 1,0 M B 1,0 M A 1,0 M B
2,0 M A 2,0 M B 2,0 M A 2,0 M B
4,0 M A 4,0 M B 4,0 M A 4,0 M B
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Figura 1: Bomba peristltica.
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13. Passar aproximadamente 200 ml de tampo nas colunas, a fim de tirar
possveis bolhas formadas na sua montagem e renovar o tampo das colunas;
ATENO: Sempre cuidar o volume de tampo disponvel nos bqueres de entrada
de amostra, em caso de proximidade de esgotamento, desligar rapidamente a
bomba peristltica, pois caso o bquer seque, entrar bolha na coluna, e o ar oxida
o cdmio, e o nitrato no mais reduzido a nitrito, prejudicando a anlise.
14. Ao trmino da passagem de soluo tampo pelas colunas, deve-se verificar o
fluxo de passagem da amostra pelas mesmas. O fluxo dever estar entre 5 e 8
mL/min:
- Na sada das mangueiras, colocar dois tubos de ensaio de 15 ml;
- Com auxlio de cronmetro, ligar a bomba e deixar o tampo passar durante
exatos 1 minuto;
- Durante este tempo, os tubos de ensaio devem conter preferencialmente 7
ml de volume, em ambos os tubos;
- Para conseguir esta medida, deve-se regular tanto o boto de fluxo na frente
da bomba, que deve ficar aproximadamente entre 10 e 12 e tambm pode-se
apertar ou soltar os parafusos da cermica branca onde passam as
mangueiras.
- S se roda as amostras com os fluxos em aproximadamente 7 ml/min, e
estando iguais as duas colunas.
15. Ativar as colunas com uma mistura de 50% soluo padro de 100 uM de NO3 +
50 de soluo tampo , passando aproximadamente 100 ml de cada;
16. Passar bastante tampo para limpar as colunas.
5. Analisando
Geral:
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- Organizar as amostras em ordem crescente de numerao, manter sempre a ordem para
facilitar no planilhamento dos dados;
- Descongelar as amostras at temperatura ambiente e homogeneiz-las calmamente por 10 X
(pode-se utilizar ventilador para acelerar o processo de descongelamento);
- Lembrar-se de rodar uma amostra da soluo de concentrao conhecida Merk, que servir
tambm para se ter certeza de que o mtodo est bem calibrado;
- Anotar em caderno o nmero do frasco em que a amostra foi acondicionada;
- Lembrar-se de sempre passar gua destilada na proveta 3 x entre uma amostra e outra, alm
da ambientao com a amostra!
Anlise:
- Medir, com auxlio da proveta de 50 ml, 35 mL de gua destilada, para o branco A e para o
branco B;
- Transferir volume para o bquer de entrada, sendo uma entrada A e outro na entrada B;
- Novamente, com auxlio da proveta, aferir 35 ml de tampo e adicionar nos bqueres,
ficando, ento, 50% de gua destilada + 50% de soluo tampo;
- Anotar sempre em qual coluna se est passando cada amostra: A ou B, assim como nmero
da amostra, frasco em que a mesma est reagindo, e nmero de leitura da amostra no
espectro.
IMPORTANTE: No espectrofotmetro ser gerada uma curva para as coluna A e outra curva
para a coluna B, uma para nitrito e outra para nitrato. Deve ser salva apenas a curva de nitrato
(A e B), a de nitrito serve apenas para verificar a eficcia de reduo da coluna. Deve-se rodar
as amostras A a partir da curva a e B, idem.
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- Passar aproximadamente 200 ml de soluo tampo pelas colunas;
- Desconectar a mangueira da coluna da bomba;
- Conectar a mangueira de entrada da amostra no outro lado da coluna, a fim de fech-la.
Lembrando que o procedimento deve ser feito pressionando-se o final da mangueira, para
evitar entrada de ar na mesma e na coluna;
- Repetir procedimento para a outra coluna;
- Guardar ambas as colunas dentro da caixa especfica para as mesmas. No caso de sobra de
soluo tampo utilizada no dia, deve-se retirar um pouco da soluo antiga da caixa e repor
com o restante da nova, a fim de melhor conservar as colunas;
- Ainda deve-se passar aproximadamente 200 ml de gua destilada pelas mangueiras da
bomba peristltica, antes de guard-la.
Methods of seawater analysis / ed. by Klaus Grasshoff ... With contributions by Leif
Anderson; Constant van den Berg. - 3., completely rev. and extended ed. - Weinheim; New
York; Chiester; Brisbane; Singapore; Toronto: Wiley-VCH, 1999.
Avaliao ambiental de esturios brasileiros: diretrizes
metodolgicas/organizadores. Paulo da Cunha Lana ... [et al.]. Rio de Janeiro : Museu
Nacional, 2006. 156p. , 28 cm (Srie Livros , 22). Projeto RECOS Uso e Apropriao de
Recursos Costeiros, Grupo Temtico Biodiversidade e Qualidade Ambiental.
ANEXO 1
2) Cdmio
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b. Adicionar a soluo de sulfato de cobre em quantidade suficiente (~ 5 vezes
o peso do cdmio) e agitar vagarosamente por 3 minutos, ou at que a
colorao azul desaparea e no haja cobre disperso.
c. Enxaguar o cdmio com gua destilada, evitando contato com o ar.
d. Colocar l de vidro na coluna e encher a mesma com tampo (NH4Cl).
Colocar o cdmio cuperizado no interior da mesma.
e. O empacotamento dos gros deve ser feito com suaves batidas na coluna de
vidro.
f. Quando estiver toda preenchida com cdmio, colocar l de vidro na outra
extremidade da coluna.
ANEXO 2
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Data anlise Br. Cubeta Abs Reta Calibrao Absorbncia Concentrao fator Coluna A x y xy x y
7/5/2014 1 0 coluna A 0,130 1,000 7,7 0,130 1,000 0,13 0,0169 1
2 0 0,240 2,000 8,3 0,240 2,000 0,48 0,0576 4
3 0 coluna B 0,120 1,000 8,3
0,230 2,000 8,7 n SUM x SUM y SUM xy SUM x SUM y
2 0,370 3,000 0,610 0,075 5,000
A B A B
Abs Abs - 50% (SUM (SUM
Padres Frasco Coluna cub Abs - Br cub Abs - 50% BrH20 Abs - Br H20 Abs - Br H20 y=mx+b
lida BrH20 x) y)
para BR1 A 0,11 1 0,110 0,03666667 0,1369 9 m 9,0909 Fator e deve ser entre 8 e 12
calibrao BR2 B 0,11 2 0,110 0,055 b -0,182
1,0 NO2 A 0,24 3 0,240 0,130 r 1
1,0 NO2 B 0,24 1 0,240 0,130 Coluna B x y xy x y
1,0 NO3 A 0,24 2 0,240 0,130 0,120 1,000 0,12 0,0144 1
1,0 NO3 B 0,23 3 0,230 0,120 0,230 2,000 0,46 0,0529 4
2,0 NO2 A 0,37 1 0,370 0,260
2,0 NO2 B 0,36 2 0,360 0,250 n SUM x SUM y SUM xy SUM x SUM y
2,0 NO3 A 0,35 3 0,350 0,240 2 0,350 3,000 0,580 0,067 5,000
2,0 NO3 B 0,34 1 0,340 0,230
(SUM (SUM
y=mx+b
x) y)
Abs - 50%
Amostra Frasco coluna Abs Cubeta Abs - Br cub Abs - 50% BrH20 [ ] M [ ] M 0,1225 9 m 9,0909 Fator e deve ser entre 8 e 12
BrH20
-0,03666667 -0,152 b -0,091
21/jan 0,120 0,12 0,07 0,682 r 1
Eficincia
0,100 0,1 0,06333333 0,758 das colunas
redutoras
VALORES DE BRANCO E TAMPO
0,110
coluna
0,11 0,06 0,591 [ ]P Abs % mdia
A
0,100 0,1 0,06333333 0,758 NO2 1,00 0,13 100 96
0,110 0,11 0,06 0,591 NO3 1,00 0,130
0,100 0,1 0,06333333 0,758 NO2 2,00 0,260 92
0,110 0,11 0,06 0,591 NO3 2,00 0,240
0,100
coluna
0,1 0,06333333 0,758 [ ]P Abs % mdia
2
0,120 0,12 0,07 0,682 NO2 1,00 0,130 92 92
0,100 0,1 0,06333333 0,758 NO3 1,00 0,120
0,110 0,11 0,06 0,591 NO2 2,00 0,250 92
0,100 0,1 0,06333333 0,758 NO3 2,00 0,230
PLANILHA DE EXCEL PARA CORREO DOS DADOS DE NITRITO+NITRATO, DESCONTANDO
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