CROMATOGRAFA DE GASES

APLICADA A ANLISIS DE GRASAS

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan
CROMATOGRAFA DE GASES

1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

- Precipitacin

- Destilacin

TCNICAS ANALTICAS - Extraccin en fase slida

DE SEPARACIN
- Extraccin lquido-lquido

- Cromatografa

- Electroforesis, etc

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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

En 1903 Tswett aplic por primera vez la cromatografa para separar

pigmentos vegetales, usando un disolvente hidrocarbonado y polvo de inulina
como fase estacionaria. La separacin de bandas coloreadas le llev a llamar
al proceso CROMATOGRAFA

Fase estacionaria: parte que no se mueve con la muestra

Fase mvil: gas o lquido que arrastra a los componentes

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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

Ilustracin de la Cromatografa
Fase
Estacionaria

Separacin

Fase Mvil

Mezcla Componentes
Afinidad por la Fase Afinidad por la Fase
Componentes
Estacionaria Mvil
Azul Insoluble en Fase Mvil

Negro

Rojo

Amarillo
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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

- EN COLUMNA

CROMATOGRAFA
- EN PAPEL

- PLANA

- EN CAPA FINA

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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

CROMATOGRAFA EN COLUMNA

Eluyente Eluato
COLUMNA
entra sale

Fase estacionaria: parte que no se mueve con la muestra

Fase mvil Eluyente: gas o lquido que arrastra a los componentes
Eluato: disolucin que sale
Elucin: proceso de paso del eluyente a travs de la columna

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 1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

flujo

tiempo

Separacin cromatogrfica

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 2. Cromatografia de Gases: fundamento

PRINCIPIO
Reparto de molculas entre una fase mvil (gas) y una fase estacionaria
(slido o lquido)

VENTAJAS
- Gran capacidad de resolucin

- Anlisis rpido

- Pequeo volumen de muestra (l)

- Sistemas de deteccin sensibles (ppm ppb)

- Anlisis cuantitativo

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 2. Cromatografia de Gases: fundamento

INCONVENIENTES

- Limitada a compuestos voltiles

- El analito debe ser voltil a la temperatura del anlisis. Si no es voltil

puede derivatizarse, pero esto consume tiempo

- No aplicable a compuestos termolbiles

- A veces requiere una etapa intensiva previa de preparacin de la muestra

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 2. Cromatografia de Gases: fundamento

DERIVATIZACIN

cidos grasos steres metlicos

O
O
R C OH + CH3OH + catalizador R C O CH3
(voltil en CG)
O
CH 2 O C R
O
O
CH O C R + CH 3 OH + catalizador
3 R C O CH3
O
(voltil en CG)
CH 2 O C R

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 2. Cromatografia de Gases: parmetros

Cromatograma: grfico que representa la respuesta del detector en

funcin del tiempo de elucin

Tiempo de retencin: de un componente es el tiempo transcurrido desde

la inyeccin de la muestra en la columna hasta que ese componente llega
al detector
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 2. Cromatografia de Gases: instrumento

Cromatgrafo de Gases

controlador inyector
de flujo

registrador

columna detector

horno

gas portador

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 2. Cromatografia de Gases: instrumento

Cromatgrafo de Gases

Filtros/Trampas Sistema de datos

H

RESET

Reguladores Jeringa/Muestreador

Inyector

Detectores
Gas Portador
Hidrgeno
Aire

Columna

Horno

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 3. Columnas y Fases Estacionarias

COLUMNAS PARA
CROMATOGRAFA DE GASES

Empaquetadas o Capilares o
rellenas Tubulares abiertas (OT)

Fase estacionaria
lquida sobre un
soporte slido
De pared De soporte De capa
Acero inoxidable, vidrio recubierta recubierto porosa
Di: 3-6 mm (WCOT) (SCOT) (PLOT)
L: 1-5 m

Fase estacionaria Fase estacionaria Fase estacionaria

lquida lquida sobre un slida
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soporte slido Universidad de Jan
 3. Columnas y Fases Estacionarias

EMPAQUETADAS CAPILARES

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 3. Columnas y Fases Estacionarias

Eleccin de Fase Estacionaria

SEMEJANTE DISUELVE SEMEJANTE

- Lquidos polares para analitos polares
- Lquidos no polares para analitos no polares

Buena
eleccin
Mala
eleccin

Comparacin de dos fases lquidas para una separacin de pesticidas

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 4. Formas de trabajo

150 C
RGIMEN ISOTERMO

50 a 250 C a 8 C/min

PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA

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 4. Formas de trabajo

Rgimen isotermo (45C)

Rgimen isotermo (145C)

Programacin de temperaturas
(30-180C)

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 5. Inyeccin de muestra

FORMAS DE INTRODUCCIN DE LA MUESTRA

- MANUAL: jeringa hipodrmica

- AUTOMTICA: inyector automtico

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 5. Inyeccin de muestra

INYECTOR DE VAPORIZACIN DIRECTA

gas
portador

septum
inserto aguja

aerosol de muestra

GC columna
empaquetada

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 6. Detectores
Detector de ionizacin de llama (FID)

- La alta temperatura de la llama aire/H2 piroliza los compuestos procedentes de

la columna que llegan a sta, que quedan convertidos en iones y electrones:
(CH) (CH)+

- Los iones recolectados en el electrodo o colector originan una corriente elctrica

proporcional a la cantidad de analito que llega a la llama

electrodo colector
de iones positivos

entrada de aire

llama aire/H2
PRCTICAMENTE
entrada de H2
CUALQUIER
COMPUESTO ORGNICO

salida de la columna
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 6. Detectores
Detector de Nitrgeno-Fsforo (NPD)

- Similar al detector de ionizacin de llama pero modificado

- Especialmente sensible a compuestos qe tienen nitrgeno y fsforo

PESTICIDAS
HERBICIDAS
MEDICAMENTOS

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 6. Detectores
Detector de captura electrnica (ECD)

- 3H 63Ni que emiten partculas

PESTICIDAS
- Ionizacin del gas portador (N2) por las partculas : CLOROFLUOROCARBONOS
N2 + (e-) N2+ + 2 e- BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)
- Estos iones N2+ establecen una lnea base

- Los elementos electronegativos de la muestra capturan partculas :

X (F, Cl, Br) + (e-) X-

- La lnea base decrece y el decrecimiento constituye la seal, siendo proporcional a la cantidad

de analito que llega al detector

Electrodo colector

Corriente seal
Fuente

Desde columna (N2 + analitos)

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1. Tcnicas analticas de separacin: Cromatografa

2. Cromatografia de Gases: Fundamento, parmetros, instrumento

3. Columnas y Fases Estacionarias

4. Formas de trabajo

5. Inyeccin de muestra

6. Detectores

7. Calibracin

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 7. Calibracin

Calibracin

Mtodo de la normalizacin del rea

Reparto proporcional del rea total. Es necesario eluir todos los
componentes

% componente i= Ai / Ai x 100
Ai: rea del pico cromatogrfico de cada componente

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 7. Calibracin

Mtodo del patrn interno

Se aade el patrn interno al comienzo del anlisis. Se utiliza como

patrn para todos los componentes de la muestra

mi = mpi x Ai / Api

Ai: rea del pico cromatogrfico de cada componente

Api: rea del pico cromatogrfico del patrn interno
mpi: masa de patrn interno aadida a la muestra
mi: masa de cada componente

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 7. Calibracin
Determinacin de cidos Grasos en Aceites

Peak Identification
1. Methyl Palmitate
2. Methyl Palmitoleate
3. Methyl Stearate
4. Methyl Oleate
5. Methyl Linoleate
6. Methyl Linolenate

Heliflex AT-WAX, 30m x 0.25mm x 0.25m

Temp: 220C Carrier: Helium at 0.7mL/min (23cm/sec) Detector: FID at 250C
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 7. Calibracin
Esteroles en aceite de oliva

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 7. Calibracin

Determinacin de Pesticidas Organoclorados

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