XLIV Congresso Brasileiro de Engenharia Agrcola - CONBEA 2015

Hotel Fazenda Fonte Colina Verde - So Pedro - SP

13 a 17 de setembro de 2015

OTIMIZAO DA METODOLOGIA DE EXTRAO DE POLUENTES ORGNICOS

PERSISTENTES EM GUA

LUDIMARA JSSICA DE S1, TAYANE CRISTIELE R. MESQUITA2, RIZIA RODRIGUES

SANTOS3, GEVANY PAULINO DE PINHO4, FLAVIANO OLIVEIRA SILVRIO5

1Discente em Engenharia Agrcola e Ambiental, Instituto de Cincias Agrrias UFMG, Montes Claros- MG.
2Discente em Engenharia Agrcola e Ambiental, Instituto de Cincias Agrrias UFMG, Montes Claros- MG.
3Enga Agrnoma, Mestranda em Produo Vegetal, Instituto de Cincias Agrrias UFMG, Montes Claros- MG.
4Professora do Instituto de Cincias Agrrias UFMG, Montes Claros- MG.
5Professor do Instituto de Cincias Agrrias UFMG, Montes Claros- MG.

Fone: (38) 2101 7770, gevanypp@ufmg.br

Apresentado no
XLIV Congresso Brasileiro de Engenharia Agrcola - CONBEA 2015
13 a 17 de setembro de 2015- So Pedro SP, Brasil

RESUMO: Os inseticidas organoclorados foram empregados no controle de pragas objetivando

aumentar a produtividade agrcola. Dentre os compostos mais utilizados destacaram-se o Aldrin,
Dieldrin, Endrin, Lindano, cis-Clordano, trans-Clordano, Hexaclorobenzeno, Heptaclorobenzeno, DDT
e Mirex. Estes foram classificados como Poluentes Orgnicos Persistentes (POPs) devido alta
toxicidade e persistncia no ambiente. O monitoramento dos nveis de concentrao desses compostos
fundamental para avaliao de guas destinadas ao consumo humano e agrcola. No Brasil, a resoluo
357/2005 do Conama estabelece os limites mximos permitidos para estes compostos em gua. Para o
controle ambiental faz-se necessrio o uso de tcnicas que permitam quantificar os POPs em baixas
concentraes, possibilitando o monitoramento em gua. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho
otimizar a tcnica de Extrao Lquido-Lquido com Partio em Baixa temperatura (ELL-PBT) dos dez
POPs em amostras de gua e, posterior, anlise por Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria
de Massas (CG-EM). Os parmetros avaliados foram fase extratora e fora inica, empregando um
planejamento fatorial 22. O estudo revelou que a fase extratora constituda somente por acetonitrila
apresentou melhor porcentagem de extrao e menor desvio padro relativo. A ELLPBT mostrou ser
uma alternativa simples e eficiente para monitoramento dos poluentes em amostras de gua.
PALAVRAS-CHAVE: poluentes orgnicos persistentes, inseticidas organoclorados, contaminantes
ambientais.

OPTIMIZATION OF EXTRACTION METHODOLOGY OF PERSISTENT ORGANIC

POLLUANTS IN WATER

ABSTRACT: Organochlorine pesticides were applied on pests control in order to increase agricultural
productivity. Among the most commonly used compounds, are highlighted Aldrin, Dieldrin, Endrin,
Lindane, cis-Chlordane, Trans-Chlordane, hexachlorobenzene, Heptachlorobenzene, DDT and Mirex.
They were classified as Persistent Organic Pollutants (POPs) due to the high toxicity and persistence in
the environment. The concentration levels monitoring of these compounds is essential for evaluating
water destined for human consumption and agriculture. In Brazil, The CONAMA resolution 357/2005
establishes the maximum limits allowed of these compounds in water. For environmental control, it is
necessary to use techniques to quantify POPs in low concentrations, allowing the water monitoring. In
this context, this study aimed to optimize the technique of Liquid-Liquid Extraction with low
Temperature Partitioning (LLE-LTP) of the ten POPs in water samples, and later, analysis by Gas
Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The evaluated parameters were extraction
phase and ionic strength, applying a 22 factorial experimental design. The study revealed that the
extraction phase composed only of acetonitrile showed better extraction percentage and lower relative
standard error. The LLE-LTP proved to be a simple and efficient alternative for the monitoring of
pollutants in water samples.
KEYWORDS: Persistent Organic Pollutants, organochlorine pesticides, environmental contaminants.

INTRODUO: Os inseticidas organoclorados foram empregados no controle de pragas objetivando

aumentar a produtividade agrcola e suprir a demanda alimentcia. Dentre os compostos mais utilizados
destacaram-se o Aldrin (ALD), Dieldrin (DLD), Endrin (END), Lindano (LND), cis-Clordano
(cis-CLD), trans-Clordano (trans-CLD), Hexaclorobenzeno (HCB), Heptaclorobenzeno (HPT), DDT
e Mirex (MRX). Apesar dos benefcios proporcionados eles apresentam caractersticas como
bioacumulao, persistncia ambiental e alta toxicidade, alm de causar srios riscos sade, como
problemas no sistema reprodutor e endcrino (JONES et al., 1999; RISSATO et al., 2004; AUGUSTO
et al., 2012). Devido a essas caractersticas foram classificados como Poluentes Orgnicos Persistentes
(POPs) e a sua utilizao foi proibida ou restrita em vrios pases, porm a sua persistncia faz com
que eles ainda possam ser encontrados em diversos compartimentos ambientais (BOWLER et al., 2001).
No Brasil, a utilizao desses compostos proibida e seus limites mximos, permitidos para disposio
em guas superficiais destinadas a consumo humano e agrcola, so estabelecidos pela resoluo
357/2005 do Conselho Nacional de Meio Ambiente (Conama). Neste cenrio, importante o
monitoramento das guas possibilitando o levantamento de reas contaminadas. Para isso, necessrio
o desenvolvimento de metodologias que permitam detectar e quantificar os POPs de maneira eficaz.
Dentre as metodologias utilizadas para extrao de resduos de agrotxicos em matrizes ambientais
destaca-se a Extrao Lquido-Lquido com Partio em Baixa temperatura (ELL-PBT) devido sua
praticidade, baixo consumo de amostra e solventes orgnicos e nmeros de etapas reduzido (PINHO
et al., 2014). Este trabalho teve como objetivo otimizar a metodologia ELL-PBT para anlise de dez
POPs em amostras de guas, por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (CG-EM).

MATERIAL E MTODOS: Reagentes: Os padres analticos dos poluentes orgnicos persistentes

ALD, DLD, END, LND, cis-CLD, trans-CLD, HCB, HPT, DDT e MRX foram adquiridos da Sigma
Aldrich (USA), com pureza de 99,9%. Solues padres individuais dos analitos, a uma concentrao
de 500 mg L-1, foram preparadas em acetonitrila (Merck, Brasil) grau HPLC. A partir destas solues
foi preparada uma soluo intermediria a 25 mg L-1 contendo todos os compostos e, com a diluio
desta, uma soluo de trabalho a 4 mg L-1. As solues foram armazenadas a 4 C, em frascos mbar.
O sulfato de sdio anidro e o cloreto de sdio foi obtido da Dinmica (Brasil) grau PA. Os solventes
utilizados foram acetonitrila (Merck, Brasil) e acetato de etila (Vetec, Brasil) grau HPLC.
Amostras de gua: Na otimizao da tcnica ELL-PBT foi utilizada gua destilada e deionizada, com
o objetivo de diminuir a interferncia dessa com os compostos. Equipamento e condies de anlise:
Para otimizao e validao do mtodo de extrao foram empregados o vortex da Phoenix (Brasil). Os
extratos obtidos foram analisados utilizando um cromatgrafo a gs, Agilent Technologies, (CG
7890A), acoplado a um detector de massas (EM 5975C). Os analitos foram separados utilizando uma
coluna capilar DB-5 MS (Agilent Technologies, 30 m x 250 m d.i. x 0,25 m espessura do filme).
Hlio (pureza de 99,9999%) foi utilizado como gs de arraste, com fluxo de 1 mL min-1. O injetor foi
operado no modo splitless, liner sem l de vidro, com temperatura de injeo de 270C. A programao
da temperatura foi de 100 C a 20 oC min-1 at 200 oC (2 min), de 200 C a 280 C, com taxa de
aquecimento de 10 C min-1. O volume de amostra injetado foi de 1 L, utilizando seringa automtica.
O espectrmetro de massa foi operado em modo de ionizao por impacto de eltrons a 70 eV e
analisador de massa quadrupolar. Extrao Lquido-Lquido com Partio em Baixa Temperatura
(ELL PBT): Adicionou-se 4 mL de gua destilada em um frasco de vidro transparente de 22 mL e
fortificou-se com 100 L de soluo de trabalho contendo todos os POPs a 4 mg.L-1, visando obter uma
amostra contaminada com a concentrao de 0,05 mg L-1. Em seguida foi adicionado 8 mL de fase
extratora. Esse sistema foi homogeneizado em vrtex por 30 segundos, mantido em repouso por 1
minuto e em seguida levado para congelamento da fase aquosa temperatura de -20 C. Aps
congelamento retirou-se 2 mL da fase orgnica lquida que foi transferida para um tubo falcon de 15 mL
contendo 0,6 g de Na2SO4. O sistema foi homogeneizado em vrtex por 30 segundos e deixado em
repouso por 1 minuto. Finalmente, foi transferido 1 mL da soluo para um frasco transparente e
armazenado em geladeira at o momento da anlise por CG-EM. Planejamento fatorial 22: Na
otimizao da ELL-PBT foi utilizado um planejamento fatorial completo de dois fatores com dois nveis
para obter extratos com maiores percentuais de recuperao para os POPs. Adotou-se a combinao de
fatores: (1) avaliao de fase extratora, adio de acetato de etila; e (2) fora inica, adio de NaCl. A
composio da fase extratora (monofsica) foi obtida a partir dos solventes acetonitrila (ACN) ou
acetonitrila e acetato de etila (ACT). O planejamento fatorial 22 requer 4 ensaios que foram feitos em
duplicatas, totalizando 8 amostras. Para os nveis sem a presena do fator foi empregado o sinal negativo
e para os nveis com a presena do fator, sinais positivos. Os ensaios foram delineados da seguinte
forma: para o fator (1) s amostras fortificadas foram acrescidas de 8ml de ACN (nvel -) e 6,5 mL de
ACN com 1,5 mL de ACT (nvel +). Para o fator (2) foram adicionados 0g (nvel -) e 0,1g de NaCl
(nvel +), conforme est representado na Tabela 1. Para avaliar os efeitos dos fatores do planejamento
fatorial foram usadas as porcentagens de recuperao obtidas para cada um dos POPs aps extrao
nas amostras de gua, empregando a ESL-PBT.

TABELA 1: Fatorial para amostras de poluentes orgnicos em gua

Fator codificado Fator original

Teste
F1 F2 ACN: ACT (v/v) NaCl/g
1 - - 8,0:0 0
2 + - 6,5:1,5 0
3 - + 8,0:0 0,1
4 + + 6,5:1,5 0,1

RESULTADO E DISCUSSO: A otimizao visou melhorar o percentual de extrao dos dez POPs
em gua. Todos os compostos foram analisados por CG-EM, simultaneamente, gerando um nico
cromatograma para cada amostra. Os sinais cromatogrficos dos compostos foram obtidos de acordo os
seus respectivos tempos de reteno (tr), sendo possvel detect-los em 17 minutos. O percentual de
extrao foi calculado comparando a rea de cada sinal no cromatograma do extrato de gua com a rea
do sinal da soluo padro do analito em ACN, no mesmo tempo de reteno. Os fatores empregados
em cada repetio, as mdias percentuais de extrao do planejamento fatorial e os seus respectivos
desvios padro relativo esto descritos na Tabela 2. As mdias percentuais de extrao para cada
composto foram submetidas anlise estatstica com o objetivo de avaliar a influncia significativa de
cada um dos fatores isoladamente bem como das interaes entre os fatores em suas taxas de
recuperao. Na Tabela 3 apresentado o resumo das taxas mdias de recuperao de cada POP, o efeito
de cada fator, as interaes e as estimativas do erro experimental. Foi adotado o teste t com o nvel de
95% de probabilidade.

TABELA 2. Mdia percentual de extrao do planejamento fatorial de cada contaminante organoclorado

em gua e seu desvio padro relativo.

FE(1) FI(2) trans- cis-

TESTE LND HCB HPT ALD DLD END DDT MRX
F1 F2 CLD CLD
1 - - 102 103 98 106 102 103 105 125 95 106
(0,8) (4,2) (8,2) (1,8) (0,7) (1,6) (0,9) (7,7) (26,2) (0,3)
2 + - 84 81 80 84 88 89 89 103 74 86
(2,4) (2,0) (2,9) (0,4) (7,1) (8,5) (2,6) (1,6) (3,1) (0,1)
3 - + 110 99 111 103 116 117 104 139 112 108
(5,4) (4,1) (9,4) (2,9) (5,6) (7,3) (9,3) (8,1) (11,1) (4,7)
4 + + 115 104 111 108 110 113 114 135 132 113
(2,8) (0,8) (2,1) (0,5) (2,9) (3,3) (1,8) (2,1) (0,03) (1,4)
NS: (1)FE: Fase extratora; (2)FI: Fora Inica; F1: Fator 1; F2: Fator 2.
TABELA 3. Mdia percentual de extrao para cada composto organoclorado em gua, efeitos de cada
fator e interao entre os dois fatores ( estimativa do erro experimental).
(a) (1) (2)
COMPOSTO RM FE FI (1) e (2)
LND 102,82,94 -15,433,24* 10,773,24* 33,24
HCB 96,72,67 -14,394,66* 3,94,66 84,66
HPT 99,85,65 -19,495,57* 11,445,57 -15,57
ALD 100,21,40 -14,912,52* 3,902,52 62,52
trans-CLD 103,84,22 -15,844,32* 11,604,32* -24,32
cis-CLD 105,45,44 -18,014,77* 9,954,77 -454,77
DLD 102,93,76 -8,734,04 5,984,04 74,04
END 125,46,14 -15,317,92 20,37,92 77,92
DDT 103,210,44 -16,2713,19 22,0713,19 513,19
MRX 103,41,70 -15,164,37* 7,344,37 54,37
NS: (a)RM:
Recuperao mdia; (1) FE: Fase extratora; (2) FI: Fora inica; *Efeito estatisticamente significativo ao nvel de 95%
de probabilidade pelo teste t.

Verificou-se que o uso de ACT na fase extratora influenciou significativamente ao nvel de 95% de
probabilidade pelo teste t na porcentagem de extrao dos compostos LND, HCB, HPT, ALD,
trans-CLD, cis-CLD e MRX, diminuindo o percentual de extrao. A interao entre os dos fatores (1)
e (2) no influenciou significativamente no percentual de extrao dos dez compostos estudados.
A adio de NaCl apresentou efeito positivo no percentual de extrao dos compostos, pois a utilizao
de fora inica na fase aquosa favoreceu a extrao para a fase orgnica, porm o desvio padro relativo
foi elevado. O Teste 1 apresentou porcentagem de extrao superiores a 95% com desvio padro relativo
inferior a 8%, com exceo do DDT. Dessa forma, utilizou-se acetonitrila como solvente extrator,
descartando-se a necessidade do uso de acetato de etila e de NaCl. Consequentemente, o procedimento
de extrao foi simplificado pela reduo do nmero de etapas.

CONCLUSES: O estudo realizado mostrou que a utilizao da metodologia ELL-PBT otimizada para
deteco de poluentes orgnicos persistentes em amostras de gua eficiente, pois os percentuais de
extrao foram superiores 95% para todos os compostos. Em relao s metodologias da literatura,
a ELL-PBT foi mais simples, com nmero reduzido de etapas, mas rpida e menor volume de solvente
orgnico. Este estudo est em processo de validao da metodologia.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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