Cultivos celulares

Angie Carolina Morales.

Manuela Ramrez.
Maritza Camila Patio.
Paula Andrea Grisales
Sebastian Toro.
Tema: Cultivos celulares.

Subtemas:
Tipos de cultivos celulares.
Lneas celulares. Ventajas y desventajas del
uso de stas.
Medios de cultivos, tipos, componentes,
Medios de congelacin
Almacenamiento de clulas.
 Tipos de cultivos celulares.

El cultivo celular es el
proceso por el cual
tanto en clulas
procariotas como
eucariotas , pueden
cultivarse en
condiciones
controladas.
Cultivos en monocapa
Tipos de cultivo de acuerdo a su forma
de cultivo

. Cultivo primario
. Lnea celular
. Cultivos secundarios.
. Cocultivo
 Cultivos tridimensionales

Permiten estudiar la
proliferacin y
morfologa epitelial;
as como su
interaccin con otras
clulas.
 Cultivo de rganos
Ampliacin de un cultivo de clulas de
tejidos no disgregadas a un tejido
tridimensional.

Cultivo de celulas
Se refiere al cultivo de clulas , tomadas
del tejido original.
 Cultivo primario

Clulas reasociadas,
para recrear la
estructura
tridimensional del
tejido.

https://www.ecured.cu/Cultivo_Celular
http://www.ehu.eus/biofisica/pdf/cultivo_celular.pdf
 Lneas celulares

Conjunto de clulas idnticas que provienen

de la multiplicacin in vitro de un clon.

Bartom MV. Lineas celulares.Celulas hibridas. En: Pablo E, Gil-Loyzaga. Cultivo de clulas animales y humanas. Aplicaciones en medicina regenerativa. Madrid: Visin libros; 2011. P 273-286.
 Caracteristicas de las lneas celulares

Formacin a partir de un cultivo primario

Pueden ser finitas o infinitas

Son el resultado de un cambio genotpico denominado

transformacin

Las lneas celulares continuas son usualmente aneuploides y

el nmero de cromosomas es variable.
 Ventajas de las lneas celulares

Disponer de un gran nmero de clulas

Bajo requerimiento de suero, uso de medios menos enriquecidos y

su habilidad de crecer en suspensin.

Las clulas pueden expresar cambios fenotpicos y/o genotipicos

ante la presencia en el medio de cultivo de diferentes elementos.

Las clulas modifican su proceso de sntesis y secrecin por

alteraciones enzimticas, proteicas, etc.
 Desventajas de las lneas celulares
Los procesos esenciales de caracterizacin de cualquier
tipo de lnea celular deben mantenerse invariables
mientras se utilicen clulas en cualquier estudio in vitro.

Inestabilidad cromosomal.

Gran variedad de prdida de marcadores especficos del

tejido y otros.
 Aplicaciones de las lneas celulares

Actividad intracellular
Estudios bioqumicos, metablicos,de biologa molecular,
genticos.
Genes y oncogenes.
Clulas tumorales
Flujo intercelular: hormonas, receptores, fluctuaciones
metablicas.
Interacciones celulares
Ecotoxicologa
 Lneas celulares representativas

HeLA Bibliografia:
Hep-2 Bartom MV. Lneas celulares.Clulas hbridas. En: Pablo E,
Gil-Loyzaga. Cultivo de clulas animales y humanas. Aplicaciones
en medicina regenerativa. Madrid: Visin libros; 2011. P 273-286.

MDCK Bruce A, Dennis B. Introduccin a la biologa celular. 2a ed. Buenos

Aires: Medica Panamericana; 2006

3T3 Herrero L, Avila R, Corrales E, Hun L. Procedimientos en virologa

mdica. 1 ed. San Jose, C.R.: Editorial de la Universidad de Costa
Rica;2004

Clulas ES
 Medios de cultivo
Se realiza en medios artificiales
preparados mediante la mezcla de
componentes purificados o de
soluciones orgnicas complejas.

Los instrumentos utilizados son

aquellos que mantienen las
condiciones fsico-qumicas
adecuadas.
Los tipos de sustrato ms empleados

Vidrio.
Ventajas
Su escaso coste y su facilidad de limpieza y
esterilizacin.
Especialmente til para su posterior
observacin al microscopio por su calidad
ptica.

Plstico desechable
Muy empleado en la actualidad como material
desechable estril por radiacin
Microsoportes ("microcarriers"). Se trata de
soportes plsticos (poliestireno).
Anon, (2017). [ebook] Available at:
http://www.cultek.com/inf/otros/solucion
es/soluciones-cultivos_celulares-protoc
olos.pdf [Accessed 17 Aug. 2017].
Multiplacas
Es una variante de las placas de Petri. Placas de
varios pocillos, desde 6 a 96 pocillos.

Frascos de Roux (botellas ventiladas o no)

Recomendables para el mantenimiento de las
lneas y la produccin de clulas, o bien para el
crecimiento de clulas en suspensin.

Anon, (2017). [ebook] Available at:

http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
"Roller bottles".
Se trata de tubos, con una cara plana sobre la
que se fija el cultivo, y que se incuban se
destinan a la produccin de gran nmero de
clulas.
 Propiedades fsicas.
Las caractersticas del medio son:

pH, osmolaridad, temperatura, viscosidad y

tensin superficial.

El pH ptimo de crecimiento para la mayora de

tipos celulares es de 7,4

Lneas normales de fibroblasto

crecen mejor entre pH 7,4 y 7,7

El indicador de pH

El medio de cultivo debe estar

tamponado, a fin de evitar los
cambios bruscos de pH.
Clulas epidrmicas pueden ser mantenidas a pH
5,5
Osmolaridad.
.

Es recomendable emplear medios ligeramente

hipotnicos especialmente en incubadores sin
control de la humedad ambiente.

Temperatura
La temperatura tiene gran influencia en la tasa
de crecimiento de las clulas, de ah la
importancia de un buen control de sta en la
incubacin.

Anon, (2017). [ebook] Available at:

http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
 Viscosidad

La viscosidad del medio viene

determinada fundamentalmente por
el contenido en suero y tiene poca
influencia sobre el crecimiento.

(menor dao a ms viscosidad)

Anon, (2017). [ebook] Available at:

http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
Tensin superficial

La tensin superficial se ha de
mantener baja, y en general slo se
ve alterada por :

La aparicin de espumas en los

cultivos en suspensin donde se
burbujea CO2.

Riesgo de contaminacin si la
espuma alcanza el cuello del
recipiente de cultivo
Anon, (2017). [ebook] Available at:
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
 Condiciones fisiolgicas
Medio Basal de Eagle (BME).
Medio elemental con slo los aminocidos
esenciales. Se necesita siempre la
suplementacin con suero bovino fetal al 10 %.
Crecimiento de fibroblastos de ratn y clulas
HeLa.
Medio Mnimo Esencial de Eagle (MEM).
Es el medio de uso ms corriente, contiene ms
aminocidos y en mayor concentracin que el
BME. Se usa para cada casi todo tipo de cultivos
y requiere la adicin de suero (10%)
RPMI 1640.
Medio diseado para el crecimiento de
linfoblastos y lneas celulares leucmicas en
suspensin. Tiene un amplio rango de
aplicaciones con suplementos adecuados
Medio MEM modificado por Dulbeco (DMEM).
Contiene cuatro veces la concentracin de
aminocidos y vitaminas que el BME. Se usa
para la seleccin de hibridomas .
Modificacin de Iscove del medio DMEM
(IMDM).
Es un medio muy completo que incluye en su
formulacin albmina bovina, transferrina,
selenito, et... Es muy til para el cultivo de
linfocitos en medio libre de suero. Tambin
sirve para otros tipos celulares, pero en ese
caso requiere suero a bajas concentraciones.
Anon, (2017). [ebook] Available at:
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
McCoy 5A. Todo medio de cultivo est formado en general por los
Medio diseado para el crecimiento de lneas siguientes elementos:

celulares diploides tanto de rata como

humanas.
Medio L-15 de Leibovitz.
Utilizado para el cultivo de virus
Medio F-10 de Ham.
Para el crecimiento de lneas celulares
humanas, debe ser suplementado con protenas
y hormonas. Contiene metales como Fe, Cu, Zn.
Es til para el cultivo de clulas amniticas.
Medio F-12 de Ham.
til para el crecimiento de lneas celulares son
suplementos protenicos. Combinado con
IMDM es un medio que se usa como libre de
suero.
Medio 199.
Anon, (2017). [ebook] Available at:
Muy usado para el cultivo de clulas no http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/soluc
diferenciadas y estudio de cromosomopatas. iones-cultivos_celulares-protocolos.pdf
[Accessed 17 Aug. 2017].
 MEDIOS DE CONGELACIN.

Conservacin por congelacin: Se

congelan las clulas en suspensin
en un lquido con un agente
crioprotector y se guardan a
temperaturas inferiores a cero
grados centgrados, con lo que el
agua se congela. De esta forma, al no
disponer las clulas de agua en
forma lquida, no hay crecimiento.
Cuando se quiere trabajar con las
clulas as conservadas, se recuperan
subiendo la temperatura.
MEDIOS DE CONGELACIN.

Los cuatro factores que influyen en la

viabilidad y estabilidad de las clulas
conservadas por este mtodo son los
siguientes:
Edad de las clulas.
Velocidad en congelacin y
descongelacin.
Temperatura de almacenamiento.
Empleo de agentes crioprotectores.
 MEDIOS DE CONGELACIN.
Criopreservantes.
Las sustancias denominadas
criopreservantes impiden
por interaccin molecular
con el agua, la accin
destructiva del
congelamiento sobre las
clulas, es decir, protegen de
la formacin de cristales de
hielo con un grado bajo de
toxicidad para las clulas
vivas.
 MEDIOS DE CONGELACIN.
MEDIO MEM (Minimum Essential Medium) (EARLE):

DEFINICIN: es una mezcla de sales enriquecida con

aminocidos, vitaminas y otros componentes esenciales para el
crecimiento celular.

ACCIN: acta como una solucin nutritiva en cultivo celular.

El MEDIO MEM es considerado una solucin nutritiva estndar

en cultivo de clulas por poseer los nutrientes bsicos para el
mantenimiento celular. Este medio puede ser usado con
aminocidos esenciales, no esenciales o aun variando cualquier
otro componente.

VENTAJAS: Probado en por lo menos tres linajes celulares

diferentes, siendo siempre determinados su pH y osmolaridad.
Cada lote es liberado solo si est dentro de los lmites adecuados,
adems de promover un ptimo crecimiento celular.
MEDIOS DE CONGELACIN.

Mtodos generales de conservacin de microorganismos (PDF

Download Available). Available from:
https://www.researchgate.net/publication/262724715_Metodos_
generales_de_conservacion_de_microorganismos [accessed
Aug 11, 2017].
 MEDIOS DE CONGELACIN.
50% SFB:
El suero fetal bovino es el
suplemento mas comn en los
medios de cultivo de clulas
animales. Se utiliza como un
complemento de bajo costo para
proveer un medio de cultivo ptimo.
El suero provee portadores o
quelantes de nutrientes lbiles o
insolubles en agua, hormonas y
factores de crecimiento, inhibidores
de proteasas, y se une y neutraliza
sustancias txicas.
von Seefried A, Macmorine H. The
use of foetal, calf and adult bovine
sera for the growth of serially
subcultivated diploid cells. Dev Biol
Stand. 1976;37:83-
Los componentes principales son:
- Protenas necesarias para la adherencia de
las clulas a la matriz de soporte
- Enzimas y Hormonas proteicas
- Factores especficos de promocin del
desarrollo celular
- Factores de inhibicin del desarrollo celular
- Hormonas no proteicas
- Lpidos esenciales para el desarrollo,
diferenciacin y multiplicacin celular
- Minerales
- Metabolitos y nutrientes
- Substancias con capacidad de tampn
(buffer)
- Inhibidores de proteasas
- Ligantes
- Inactivantes de materiales txicos
 MEDIOS DE CONGELACIN.
8% dimetil sulfoxido.
El DMSO es un solvente bipolar, hidrosoluble, de
bajo peso molecular. Su accin se atribuye
principalmente a la habilidad de prevenir la
acumulacin excesiva de electrolitos y otras
sustancias durante el proceso de congelacin, y la
formacin de cristales de hielo que rompen la
estructura de la membrana, su bajo peso molecular
permite la entrada rpida a travs de la membrana
celular.
 ALMACENAMIENTO DE CLULAS.
Las clulas obtenidas de cultivos primarios o de lneas celulares
establecidas pueden almacenarse durante un largo periodo de tiempo en
temperaturas bajo cero, por esto se utiliza la criopreservacin que favorece:

El mantenimiento de la integridad de la clula sin utilizar tejidos animales primarios.

Evita la prdida de la lnea por contaminacin.
Evita la prdida de la lnea por cambios genticos.
Evitar continuos subcultivos de una lnea celular que no es de uso rutinario.
Mantener una provisin suplementaria en prdida accidental de un cultivo.
... GRACIAS ...