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CURSO DE FISIOTERAPIA
Unidade Piza - Av. Paris, 675 - Jardim Piza Fone: (43) 3371-7700 Fax: (43) 3371-7721 Londrina/PR
CEP: 86.041-100
CURSO DE FISIOTERAPIA
DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
DOCENTES: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 1
Tema I:
- Introduo ao trabalho experimental.
Introduo:
O trabalho que se realiza em um curso prtico requer ao lado de grande
dedicao e interesse, muito cuidado e ateno. Para facilitar esse trabalho sero dadas
algumas instrues que, devidamente observadas, conduziro a melhores resultados.
Objetivos:
- Conhecer as normas de segurana no trabalho de laboratrio e descrever a elaborao de
um relatrio de aula prtica.
- Ao aquecer o tubo de ensaio, deve-se proceder de maneira adequada, para que o contedo
no seja lanado fora, causando acidentes graves. Lquidos inflamveis (ter, lcool,
acetona, benzeno, etc.) no devem permanecer prximo da chama.
- Reaes com liberao de gases txicos devero ser realizadas na capela.
- Deve-se tomar o mximo de cuidado com cidos e bases concentradas, pois estes atacam
a pele. No caso de acidentes com substncias custicas, a parte atingida deve ser
imediatamente lavada com gua e o fato comunicado ao professor(a).
- Antes de iniciar e ao terminar as experincias a bancada deve permanecer organizada.
- Ao final da aula, a equipe dever limpar todo o material e a bancada.
- Entregar os relatrios solicitados nas datas estipuladas pelo(a) professor(a).
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Tema II:
- Aparelhagem de laboratrio: pipetagem.
Objetivos:
- Descrever o material utilizado no laboratrio de Bioqumica e seu uso;
- Executar corretamente a operao de pipetagem, manipulando pipetas de diferentes
volumes.
Frasco de Erlenmayer
Tubo de Ensaio
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Vidro de relgio
Pea de vidro de forma cncava. usado
para cobrir bqueres, em evaporaes, e
como recipientes destinados a conter
substncias em pequenas quantidades a
serem submetidas ao processo de pesagem
em balana de preciso.
Pipeta graduada
Pipeta volumtrica
Bico de Bunsen
Garra
Liga-se a haste atravs de parafusos e
destina-se a sustentao de utenslios.
Pina
Tela de amianto
Tcnica:
- Leitura correta de volume: ao ler volumes em vidraria volumtrica deve-se evitar erros
decorrentes de mau posicionamento de seu olho em relao a altura do menisco do lquido.
Procure sempre se posicionar de modo que sua linha de viso fique na mesma direo da
superfcie do lquido.
- Modo correto de se ler o volume de um lquido em um aparelho volumtrico: linha de viso
horizontal superfcie do lquido.
Materiais:
- 02 bqueres de 100 mL cada;
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- 01 pipeta graduada de 1 mL;
- 01 pipeta graduada de 5 mL;
- 01 pipeta graduada de 10 mL.
Reagente:
- 100 mL de soluo diluda de azul de metileno (por bancada).
Tcnica:
- Com pipeta de 1 mL, transferir ao outro becker 1 mL de soluo e 0,3 mL de soluo. Com
pipeta de 5 mL, transferir ao outro becker 3,5 mL de soluo.
- Com pipeta de 10 mL, transferir ao outro becker 7,6 mL de soluo.
Estudo dirigido:
1) Indique o nome e uso de cada um dos materiais que esto na sua bancada.
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Tema III:
- Determinao do pH pelo mtodo colorimtrico verificao do efeito tampo.
Objetivos:
- Determinar os valores de pH comparando com uma escala padro colorimtrica e verificar
a capacidade tamponante de solues quando acrescentado cido ou base em pequenos
volumes.
Introduo:
O mtodo colorimtrico de determinao de pH baseia-se nos conhecimentos dos Pks dos
indicadores, os quais podem ser considerados como cidos e bases fracas. A dissociao de
um indicador cido em forma simplificada a seguinte:
HIn In- + H+
cido Base
(Cor A) (Cor B)
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TCNICA
Soluo Padro 1 2 3 4 5 6 7 8
pH
3 1mL
4 1mL
5 1ml
6 1mL
7 1mL
8 1mL
9 1mL
10 1mL
H2O (dest.) 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL
Indicador 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas
Universal
1 2 3 4
Indicador Universal 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas
H2O (dest.) 10mL 5mL 10mL 5mL
Tampo (pH 7) 0 5mL 0 5mL
pH
NaOH (0,1N) 0,1mL 0,1mL 0 0
HCl (0,1N) 0 0 0,1mL 0,1mL
pH
a) Anotar os valores de pH obtidos nos tubos 1, 2, 3 e 4 comparando com a escala padro.
b) Soprar o ar expirado por 1 minuto com o auxlio de uma pipeta nos tubos 1 e 2. Anotar
os valores de pH.
c) Interpretar os resultados.
REFERNCIA BIBLIOGRFICA:
ARANHA, L. F. Bioqumica odontolgica. So Paulo: Sarvier, 1996.
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CURSO DE FISIOTERAPIA
DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
DOCENTE: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 2
Tema I:
- Reaes qualitativas para identificar protenas e aminocidos.
Objetivos:
- Caracterizar a presena de protenas em material biolgico;
- Verificar a existncia de alguns aminocidos.
Reao de Biureto:
As substncias que contm duas ou mais ligaes peptdicas do reao de
Biureto positiva (tripeptdeos, oligopeptdeos e protenas). O on cobre fornecido por uma
soluo diluda e alcalina de CuSO4 se complexa com os grupos aminos das ligaes
peptdicas desenvolvendo uma colorao violeta. O composto formado pode ser representado
como:
Materiais:
- 02 tubos de ensaio;
- 01 estante para tubos;
- 04 pipetas de 1 mL.
Reagentes:
- 1 mL de soluo de protena: clara de ovo a 10% V/V em soluo salina ou tampo fosfato
10 mL pH 7,0.
- 1 mL de soluo de NaOH 2,5 N.
- 1 mL de soluo de CuSO4 (gua destilada).
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Tcnica:
- Preparar os tubos A e B conforme descrito no quadro 1 e observar os resultados.
CONCLUSO
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Tema II:
- Caracterizao da enzima urease.
Introduo:
A urease uma enzima que catalisa a hidrlise da uria em amnia e dixido
de carbono, como demonstrado na reao abaixo:
H2N
C = O + H2O CO2 + 2NH3
H2N
Em meio aquoso:
2NH3 + 2H2O 2NH4OH (Hidrxido de amnio)
Objetivos:
- Verificar a atividade especfica da enzima urease;
- Comprovar experimentalmente a destruio da urease pelo calor;
- Inibir a ao da enzima urease na presena de metais pesados.
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1. Caracterizao da urease como enzima:
Atividade da enzima: a atividade da enzima pode ser observada pela colorao
formada atravs do indicador vermelho de fenol que em meio alcalino rosa, indicando a
presena de carbonato de amnio.
Materiais:
- 02 tubos de ensaio;
- 01 suporte para tubos;
- 01 pipeta de 1 mL;
- 02 pipetas de 5 mL.
Equipamento:
- Banho-maria a 37C.
Reagentes:
- 1 mL de soluo de urease.
- 3 mL de soluo de uria.
- 4 gotas de indicador vermelho de fenol (VF).
- gua destilada.
Tcnica:
- Preparar os tubos como indicado no quadro 6, observar e registrar os resultados.
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Agitar Sim Sim
BM 37C Sim Sim
RESULTADO
CONCLUSO
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA DA UFPR. Bioqumica: aulas prticas. 5. ed. Curitiba:
Editora da UFPR, 1997.
CHAMPE, P. C.; HARVEY, R. A. Bioqumica ilustrada. 2. ed. Porto Alegre: Artes Mdicas,
1997.
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CURSO DE FISIOTERAPIA
DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
DOCENTE: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 3
I. INTRODUO
Devido sua reduzida espessura, a membrana plasmtica no, visvel ao microscpio de luz
comum, embora alguns mtodos indiretos permitam detectar sua existncia. Entre suas vrias funes,
a membrana plasmtica delimita o meio intercelular, selecionando as molculas que devem ou no
penetrar na clula. Assim, esta aula prtica tem por objetivos demonstrar a presena da membrana em
clulas eucariontes vegetais e animais, bem como observar o comportamento da membrana plasmtica
quanto sua permeabilidade seletiva e diferentes substncias e tratamentos.
II. MATERIAL
III. PROCEDIMENTO
IV. RESULTADOS
a) Que diferenas voc observou nas clulas da epiderme de cebola em cada um dos diferentes
tratamentos a que esta foi submetida?
b) Explique o efeito da soluo concentrada de NaCI sobre o comportamento seletivo da membrana
plasmtica, bem como o posterior efeito da gua destilada.
c) Os resultados seriam os mesmos se a clula submetida a esse tratamento fosse animal?
V CONCLUSO
1. Compare as figuras a seguir com as suas observaes microscpicas e, resumir o comportamento
das hemcias nas diferentes solues de NaCl.
VI. BIBLIOGRAFIA
JUNQUEIRA & CARNEIRO. Biologia Celular e Molecular.
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CURSO DE FISIOTERAPIA
DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
DOCENTES: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 4
Tema I:
Reconhecimento do microscpio ptico e microscopia
Objetivo:
Reconhecer as partes do M. O.
Identificar as propriedades e funes do M. O.
Focalizar uma estrutura especificada pelo(a) professor(a).
Materiais:
- Lmina
- lamnula
- conta-gotas
- gua
- caneta
- papel
Tcnica:
a) Colocar uma gotinha de gua na lmina;
b) Sobre a gotinha, colocar um pedao de papel com uma letra desenhada a caneta azul ou
preta;
c) Cobrir a letra com a lamnula;
d) Esquematizar a letra em vista real;
e) Levar a lmina ao M.O.
f) Focalizar, observar e esquematizar em 4X e em 10X.
V RESULTADO:
Vista real
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4X 10X
VI CONCLUSO:
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Tema II:
Extrao de DNA de morango (Fragaria ananassa ROSACEAE)
Introduo:
Os morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies
diferentes que ocorriam naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas Amricas (Chile e
Estados Unidos). Prestam-se muito bem para a extrao de DNA porque so fceis de serem
macerados e quando maduros produzem pectinases e celulases, que so respectivamente as
enzimas que degradam os reforos celulares de pectina e a celulose. Alm disso, os morangos
atuais so octaplides, ou seja, possuem 8 genomas!
Material:
Morangos maduros
Saco plstico resistente
Tubo de ensaio
Filtro de papel (destes usados para coar caf) com a base
Detergente domstico
Sal de cozinha
lcool gelado (colocado no congelador por 1 noite)
Basto de vidro
gua morna (70o 75o C)
Procedimento:
1. Coloque 2 ou 3 morangos, sem os cabinhos e as folhas, dentro do saco plstico e feche. Por
fora, amasse-os bem.
2. Adicione uma colher rasa de detergente, uma pitada de sal e um pouco de gua morna.
Amasse um pouco mais os morangos para misturar tudo muito bem.
3. Coe essa mistura para dentro de um copo alto.
4. Pegue uma quantidade de lcool que seja mais ou menos igual ao volume de suco que est
dentro do copo. Adicione o lcool gelado aos poucos, deixando escorrer pela lateral do copo
para formar uma camada acima da mistura com fruta.
6. Aguarde um pouco e veja o DNA se formando na parte que separa as duas camadas (ou
fases). Com o palito, voc pode "pescar" o DNA. Depois, misture tudo usando o palito e veja o
DNA se formando.
CONCLUSO
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Perguntas:
1. Explique qual a funo de cada regente usado nessa extrao simplificada do DNA:
a) do sal
b) do detergente
c) do lcool
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CURSO DE FISIOTERAPIA
DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
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AULA PRTICA N 5
Tema: NCLEO CELULAR (CROMATINA)
Procedimento
- Levar a lmina ao M.O.
- Focalizar em 4x, 10x e 40x
- Colocar leo de imerso
- Passar para 100x e esquematizar.
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100x 100x
CONCLUSO
Legenda
1. Envelope nuclear
2. Nuclolo
3. Heterocromatina
4. Eucromatina
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VII- BIBLIOGRAFIA:
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Histologia Bsica.
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DISCIPLINA: CINCIAS MOLECULARES E CELULARES
DOCENTE: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 6
I - Assunto: Ciclo Celular
Interfase Prfase
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V - Concluso:
a) Resuma as caractersticas que voc observou no ncleo da clula em intrfase.
b) Ao observar as fases da mitose, corno voc foi reconhecendo o material gentico em cada
uma delas?
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VII- BIBLIOGRAFIA:
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular.
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CURSO DE FISIOTERAPIA
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DOCENTE: VALRIA BELLO
AULA PRTICA N 7
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3. Qual a proporo esperada de afetados na descendncia de casamentos onde um dos
cnjuges afetado e o outro heterozigoto para anomalias condicionadas por herana
autossmica recessiva?
6. Um homem C com Hemofilia clssica casa com a filha D de sua tia materna. O av materno
de ambos hemoflico. C e D tm um filho afetado, duas filhas afetadas e duas filhas normais.
a) Desenhe o respectivo heredograma, ou genealogia.
b) Por que duas filhas so afetadas?
c) Qual o risco de um filho de uma das filhas afetadas ser afetado?
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