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DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES POR EL METODO

DEL ACIDO DINITROSALICILICO (DNS)

Principio del mtodo

El mtodo del cido 3,5-dinitrosalicilico (DNS) se basa en la reduccin del DNS


(de color amarillo) por la glucosa al cido 3- amino-5-dinitrosalicilico de color rojo
previo calentamiento.

1.1 Materiales.

Reactivo DNS.
Agua destilada.
Solucin de glucosa al 0.4g/L.
Cubetas.
Tobos de reaccin.
Micropipetas.
Bao mara a 90C.
Bao de hielo a 4C.
Espectrofotmetro (540nm).

1.2 Procedimiento.

a) Realizar curva de calibracin de glucosa.


Preparar solucin de glucosa a 0.4g/L.
Realizar los estndares de glucosa a partir de la solucin anterior y como lo
determina el siguiente esquema:

Esquema de estndares de glucosa.


Volumen Glucosa Volumen agua Concentracin del
en ml (0.4mg/ml) destilada estndar (mg/ml)
0.0 1.0 0.00
0.1 0.9 0.04
0.2 0.8 0.08
0.3 0.7 0.12
0.4 0.6 0.16
0.5 0.5 0.20
0.6 0.4 0.24
0.7 0.3 0.28
0.8 0.2 0.32
0.9 0.1 0.36
1.0 0.0 0.40
Agregar 1ml de DNS a cada una de los estndares anteriores incluyendo el
blanco.
Mezclar y someter a incubacin a 90C durante 5min.
Parar la reaccin en bao de hielo a 4C durante 5min.
Leer a 540nm.
Calcular ecuacin de la recta y parmetros estadsticos.

Nota: las muestras problemas debern ser ledas sobre la curva anterior utilizando
el mismo mtodo de preparacin empleando para los estndares.

PREPARACIN DEL REACTIVO DE DNS

Compuesto Cantidad

Acido 3,5-dinitro saliclico (DNS). 1g

Tartrato de sodio y potasio 30g


tetrahidratado.

Prepare 20ml de NaOH 2N (pesar 1.6g NaOH) y disuelva en ellos el tartrato, luego
de disuelto lleve a un volumen final de 100ml, y en completa oscuridad disolver el
DNS (reactivo fotosensible).