Terapia Gnica

HISTORIA DE LA TERAPIA GENICA

Durante las ltimas tres dcadas una proporcin creciente de investigacin gentica est
dedicada a estudios moleculares en medicina. Esto produjo importantes cambios en el
entendimiento de la fisiopatologa de diversas enfermedades genticas. Aunque muchos
descubrimientos fueron aplicados a las tcnicas diagnsticas, la utilizacin de tcnicas
moleculares en el tratamiento de enfermedades genticas es lgica y natural.
La terapia gnica es la parte de la teraputica que utiliza material gentico en el tratamiento de
enfermedades; intenta modular la funcin celular, pudiendo corregir la deficiencia causada por
la prdida o alteracin de un gen al modificar la expresin de protenas. As, secuencias
codificadoras de protenas, sondas anti-sentido, ADN triples y ribosomas pueden ser
considerados los frmacos de la TG.

CONCEPTOS BASICOS EN GENETICA

I.1 Qu significa gentica?

- La gentica es la rama de la biologa que trata de la herencia y la variacin. Esta
disciplina abarca el estudio de las clulas, los individuos, sus descendientes, y las
poblaciones en las que viven los organismos. Los genticos investigan todas las
formas de variacin hereditaria as como las bases moleculares subyacentes de
tales caractersticas.
I.2 Cul es el centro de la herencia de la clula?
- Los organismos eucariotas se caracterizan por la presencia de un ncleo en el
que se encuentra el material gentico. En los procariotes, como las bacterias, el
material gentico se encuentra en un rea no limitada pero reconocible, de la
clula denominada nucleoide. En los virus, que no son autnticas clulas, el
material gentico esta enfundado en una cubierta proteica denominada cabeza o
cpsula.
I.3 A que se refieren las siglas DNA Y RNA?
- DNA Y RNA son abreviaturas (acrnimos) del cido desoxirribonucleico y del cido
ribonucleico, respectivamente. Son los dos tipos de cidos nucleicos que se
encuentran en los organismos. Los cidos nucleicos junto con hidratos de
carbono, lpidos y protenas, forman las cuatro clases principales de biomolculas
orgnicas que caracterizan la vida en nuestro planeta.
I.4 Cmo esta organizado el DNA para servir como material gentico?
- El DNA, aunque tiene una sola cadena en algunos virus, es normalmente una
molcula de cadena doble organizada en doble hlice. En las molculas de DNA

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 se encuentran unidades hereditarias llamadas genes, que son parte de un
elemento ms grande, el cromosoma.
I.5 Qu es un gen?
- En trminos sencillos, gen es la unidad funcional de la herencia. En trminos
qumicos es una cadena lineal de nucletidos bloques qumicos que constituyen
el DNA y el RNA-. Una definicin ms conceptual es considerarlo como una
unidad de almacenamiento de informacin capaz de sufrir replicacin, mutacin y
expresin. Es un elemento muy complejo.
I.6 Qu es un cromosoma?
- En virus y en bacterias es ms fcil considerar al cromosoma como una molcula
grande, normalmente circular, de DNA, organizada en genes. En eucariotas el
cromosoma es ms complejo. Esta compuesto por una molcula de DNA lineal
asociada a protenas. Adems de la abundancia de genes, los cromosomas tienen
muchas regiones no gnicas. No esta claro el papel que juegan algunas de estas
regiones. El conocimiento sobre los cromosomas, como de los genes, esta en
continua expansin.
I.7 Cundo y como puede visualizarse un cromosoma?
- Si los cromosomas se liberan de la cpsula vrica o de la clula bacteriana, se
puede visualizar al microscopio electrnico. En los eucariotas los cromosomas son
visualizables ms fcilmente en el microscopio ptico, cuando estn en meiosis o
mitosis.
En estos procesos de divisin, el material que forma estos cromosomas estn
fuertemente espiralado y condensado, dando lugar a la caracterstica de los
cromosomas. Despus de la divisin, este material llamada cromatina, se
desespiraliza en la interfase y se puede estudiar mas fcilmente con el
microscopio ptico.
I.8 Cuntos cromosomas tiene un organismo?
- Aunque hay muchas excepciones, los miembros de muchas especies tienen un
numero especifico de cromosomas, denominado el numero diploide (2n),
presentes en una clula somatica. Mediante un cuidadoso anlisis, se ve que
estos cromosomas estn en pareja, y cada miembro del par, cuando son visibles
en la divisin celular, comparte casi la misma apariencia. Los miembros de cada
par denominados cromosomas homlogos, son idnticos en cuanto a su longitud y
a la localizacin del centrmero, el punto en que se unen las fibras del huso en la
divisin.
I.9 Cules son las causas de la variacin gentica?
- Clsicamente, hay dos causas de la variacin gentica: las mutaciones
cromosomitas y las mutaciones gnicas o puntuales. Entre las primeras tambin
llamadas aberraciones cromosmicas, se encuentra la duplicacin, la deleccin y
la reordenacin de segmentos de cromosomas.
I.10 Cmo se almacena la informacin gentica en el DNA?
- La secuencia de nucletidos de un fragmento de DNA que constituye un gen est
presente en forma de un cdigo gentico. Este cdigo especifica la naturaleza
qumica (la composicin de aa.) de las protenas, que son el producto final de la

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 expresin gnica. Se producen mutaciones cuando se altera la secuencia de
nucletidos.
I.11Cmo esta organizado el cdigo gentico?
- En el DNA hay cuatro nucletidos distintos, diferencindose entre si por uno de
sus componentes, la base nitrogenada. El cdigo gentico es un triplete; por
consiguiente cada combinacin de tres nucletidos constituye una palabra del
cdigo, casi todos los posibles tripletes especifican uno de los 20 aa., que son las
unidades qumicas que forman las protenas.
I.12 Cmo se expresa el cdigo gentico?
- La informacin codificada en el DNA se transfiere primero en el proceso de
trascripcin a la molcula de RNA mensajero (mRNA). Posteriormente el mRNA se
asocia con un orgnulo celular, el ribosoma, en donde se traduce una molcula
proteica.
I.13 Hay excepciones donde las protenas no son el producto final de un gen?
- S, por ejemplo, los genes que modifican el RNA ribosmico (rRNA), que forma
parte del ribosoma, y los del RNA transferente (tRNA), que actan en el proceso
de traduccin, se transcriben pero no se traducen. Por consiguiente, a veces el
RNA es el producto final de la informacin gentica almacenada.
I.14 Qu es la gentica mdica?
- La gentica media toma parte de todas las aplicaciones de la gentica en la parte
mdica. Por tanto, incluye los estudios de la herencia de las enfermedades en las
familias, el mapeo (o trazado del mapa) de los genes patolgicos en sus
localizaciones especificasen los cromosomas, el anlisis de los mecanismos
moleculares mediante los cuales los genes provocan la enfermedad, y el
diagnostico y el tratamiento de la enfermedad gnica.
I.15 Por qu el conocimiento de la gentica mdica es importante para el
mdico actual?
- Primero porque las enfermedades genticas forman una gran parte de la carga
patolgica total, tanto en la poblacin peditrica como en la adulta. Esta
proporcin continuara aumentando a medida que se incrementen nuestros
conocimientos sobre la base gentica de las enfermedades; y segundo porque la
medicina moderna esta poniendo nfasis creciente en la importancia de la
informacin y la gentica proporciona una base para el conocimiento de la
constitucin biolgica fundamental del cuerpo, alcanzando con ella de una forma
natural un conocimiento mas preciso del proceso patolgico y en muchos casos
este conocimiento puede dar lugar a la prevencin real de la enfermedad, as
como un tratamiento mas efectivo de esta.
I.16 Qu tipos de enfermedades genticas existen?
- Se calcula que cada ser humano tiene entre 50 mil y 100 mil genes diferentes. Las
alteraciones de estos genes o la combinacin de estas puede producir trastornos
genticos. Estas enfermedades se clasifican en varios grupos principales: 1)
enfermedades cromosomitas, en las que se pierden, duplican o alteran de
alguna forma cromosomas enteros o grandes segmentos de estos.

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TERAPIA GENICA

2.1 Concepto
El concepto de terapia gnica resulta de la observacin de que ciertas enfermedades,
entre ellas particularmente el cncer, resultan de daos genticos especficos (Felgner y
Rhodes, 1991; Anderson, 1992; Roemer y Friedman, 1992; Pyeritz, 1992; Kart y Broker,
1994; Friedman, 1996). En principio, las patologas causadas por defectos monogenticos
podran ser curadas mediante la insercin y expresin de una copia normal del gen daado.
2.2 Objetivos de la terapia gnica
Aunque dentro de unos aos ser posible mediante la terapia gnica reparar los errores
que existen en un gen y causan la enfermedad, los objetivos actuales son ms modestos.
En primer lugar, la terapia gnica trata de complementar o sustituir el defecto en la funcin
de un gen defectuoso introduciendo otra copia normal de ste en las clulas.
2.3 Requisitos y criterios para realizar estudios de terapia gnica
Evidentemente la meta de los estudios que involucran la terapia gnica como alternativa
teraputica es la posibilidad de la utilizacin en la clnica.

ESTRATEGIAS DE TERAPIA GENICA

En terapia gnica se utilizan dos grandes estrategias actualmente: las estrategias ex

vivo (consiste en extraer clulas de un paciente, modificarlas in vitro mediante un vector
retrovrico y reimplantarlas en el organismo) y las estrategias in vivo (se trata de
administrar el gen corrector al paciente en lugar de hacerlo a clulas en cultivo).
3.1Estrategias ex vivo
El tratamiento est basado en la obtencin previa de clulas del paciente
procedentes de un tejido u rgano de inters. A continuacin se procede a la
disgregacin de las mismas y su mantenimiento en condiciones de cultivo de tejidos in
vitro, en donde las clulas son posteriormente transfectadas por el "gen teraputico"
utilizando para ello un vector adecuado.

3.1.1 Mtodos de transferencia gentica in vitro

3.1.1.1 Mtodos no virales
A) Qumicos: Fosfato clcico.
B) Fsicos: Electroporacin, Microinyeccin, Bombardeo de partculas.
C) Fusin: Complejos ADN-liposomas.
D) Endocitosis mediada por receptor: Complejos ADN-protena, Complejos
ADN-cpsida/ envoltura viral, Inmunoliposomas/liposomas destinados.
3.1.1.2 Mtodos virales
A) Adenovirus

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 B) Retrovirus
C) Virus adeno-asociados
D) Herpes virus
3.2 Estrategias in vivo
El tratamiento est basado en la administracin sistemtica de la construccin
gnica de inters. Aunque el ADN puede ser administrado de forma directa lo
habitual es recurrir a la ayuda de algn vector que facilite el proceso de
transferencia del gen y permita la entrada y localizacin intracelular del mismo, de
tal forma que ste resulte en un gen funcionante.

3.2.1 Mtodos no virales

Inespecficos
- DNA desnudo
- Complejo DNA-liposomas
Especficos
- Mediados por receptor
- Complejos DNA-protena
- Inmunoliposomas/liposomas destinados
3.2.2 Mtodos virales
Retrovirus
Adenovirus
Virus adeno-asociados
Herpes virus
3.3 Introduccin del transgn
Antes de explicar ms detalladamente el modo de introduccin del transgn y ver
las enfermedades en las que se aplica la terapia gnica, es conveniente definir de
forma clara qu es un transgn, tambin denominado construccin gentica.
Podramos definirlo como un conjunto de uno o ms genes y secuencias
reguladoras que controlan la expresin de ste. Este transgn es el que tiene la
funcin teraputica, y es el que da la terapia gnica. Hasta el momento no se ha
realizado ninguna experiencia, a pesar de ser lo ms idneo en un tratamiento,
debido a su dificultad. Actualmente la mayora de las experiencias se estn
realizando en modelos animales, pero tambin existen ya ensayos clnicos en
humanos.
3.3.1 Mtodos directos
3.3.1.1 Sistemas qumicos
A) Transferencia con fosfato de calcio

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 Se empez a usar esta tcnica en los aos 60, pero fue en los 70 cuando
se empez a desarrollar suficientemente para tener buenas eficacias de
transfeccin. Se basa en la precipitacin del DNA exgeno y los iones de calcio,
provocando que la clula, mediante endocitosis, introduzca el DNA en su interior.
La eficacia de transfeccin puede llegar al 10% de las clulas, aunque
suele ser transitoria. No es una tcnica que provoque toxicidad en las clulas pero
la expresin del transgn es muy pequea. nicamente se usa en cultivos
celulares, y por lo tanto su aplicacin es "ex vivo".
3.3.1.2 Sistemas fsicos
A) Microinyeccin
Consiste en colocar el DNA mediante una inyeccin en el ncleo de las
clulas. Al introducirlo directamente all, evitamos la degradacin citoplasmtica y
lisosomal. Se realiza mediante un micromanipulador, microscopio invertido que
permite la visualizacin.
B) Electroporacin
Se introduce la construccin gnica mediante un choque elctrico a las clulas
que provoca la formacin de poros en sus membranas , por donde entra el
transgn. Est especialmente indicado para clulas con una alta tasa de
proliferacin. Sin embargo, muchas clulas mueren al no soportar el choque
elctrico por lo que muchas veces no es la forma ms indicada en algunos tipos
celulares.
C) DNA desnudo
Consiste en la introduccin del DNA en una solucin salina o srica,
normalmente mediante inyeccin intramuscular, para conseguir la expresin del
transgn. Se ha observado actualmente expresin en timo, piel, msculo cardaco
y msculo esqueltico. No se conoce el mecanismo por el que llega a entrar a la
clula aunque se postula que es a travs del complejo del poro nuclear.
3.3.2 Mtodos directos (mediados por vectores)
3.3.2.1 Vectores no virales
A) Liposomas
En 1965 se descubri que los liposomas (bolsas rodeadas de una
membrana lipdica a semejanza de una clula eucariota animal) eran capaces de
hacer entrar DNA en la clula, pero hasta 1980 no se consigui una eficacia de
transfeccin adecuada. Existen dos tipos de liposomas: liposomas catinicos y
liposomas aninicos.
3.4.Otras estrategias utilizando cidos nucleicos
Como ya hemos visto la terapia gnica supone la manipulacin de las clulas
utilizando procedimientos destinados tanto a reparar e incorporar nuevos genes en la clula
como tambin a bloquear e inhibir la sobreexpresin de los mismos con fines teraputicos.
3.4.1 Oligonucletidos antisentido
Los oligonucletidos son secuencias cortas de cidos nucleicos diseados
para unirse a secuencias especficas de ADN (formacin de ADN triplex) o ARN

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 (formacin de heteroduplex ARN-ADN). Los oligonucletidos antisentido son
complementarios de secuencias especficas de un determinado ARN mensajero
(secuencia sentido) .
3.4.2 Reparacin gentica mediante oligonucletidos
Es una estrategia destinada a reparar genes cuya alteracin es originada por
una mutacin puntual conocida y el objetivo es activar selectivamente los mecanismos
celulares de reparacin del ADN, el lugar de la mutacin.
3.4.3 Ribozimas
El trmino ribozima ha sido introducido para describir molculas de ARN con
actividad enzimtica. Se ha identificado una enorme variedad de motivos catalticos de
ribozimas, todos los cuales catalizan reacciones en sustratos de ARN. Estas
reacciones llevan a cabo la rotura y ligacin de las cadenas en sitios especficos.
- El aumento del reciclaje del sustrato mediado por los ribozimas.

APLICACIN DE LA TERAPIA GENICA

4.1 En Animales
El primer ejemplo de terapia gnica en mamferos fue la correccin de la deficiencia
en la produccin de la hormona de crecimiento en ratones. La mutacin recesiva little (lit)
produce ratones enanos. A pesar de que estos presentan un gen de la hormona del
crecimiento aparentemente normal, no producen mRNA a partir de este gen.
4.2 En humanos
Quizs, la aplicacin ms excitante y polmica de la tecnologa de los transgenes es
la que respecta a la terapia gnica humana, es decir, el tratamiento y alivio de las
enfermedades genticas humanas mediante la adicin de genes silvestres exgenos para
corregir la funcin defectuosa de las mutaciones.
En los seres humanos puede utilizarse dos tipos bsicos de terapia gnica, la
somatica y la germinal.
4.2.1 Terapia en clulas somticas
La terapia gnica en clulas somatica, que ha sido el ncleo central de la
investigacin de terapia gnica en seres humanos, consiste en la introduccin de
genes normales en clulas somticas humanas para tratar un trastorno especifico.
Las clulas del paciente pueden extraerse y manipularse fuera del cuerpo (terapia ex
vivo) o, en algunos casos, las clulas pueden tratarse mientras permanecen en el
cuerpo (terapia in vivo).
4.2.1.1 Vectores retrovirales
Los retrovirus son capaces de insertar copias de sus genomas en las
clulas husped despus de retrotranscribir su RNA viral en el DNA. Los
retrovirus se integran en el DNA del husped con un lato grado de eficacia, lo
que los convierte en una opcin razonable como vector de cesin de genes. Los
retrovirus deben ser modificados para que no se repliquen ni afecten al
husped. Esto se realiza utilizando tcnicas de DNA recombinante que

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 provocan la deleccin de la mayor parte del genoma retroviral, sustituyndola
por una copia normal de un gen humano, sus elementos reguladores y una
seal de poliadenilacion (el material gentico humano se denomina inserto).
Los retrovirus pueden aceptar insertos de incluso 8 Kb.
4.2.1.2 Vectores adenovirales
Debido a la incapacidad de los retrovirus para invadir las clulas que no
se dividen, se han estudiado otros sistemas de cesin que no tengan esta
limitacin. Un ejemplo importante es el adenovirus, un virus con DNA con doble
filamento utilizado a menudo en las preparaciones de vacunas. Igual que el
retrovirus, el adenovirus puede aceptar un inserto que no supere los 7 u 8 Kb de
longitud. Antes de su empleo en terapia gnica se han de manipular los
adenovirus para que tengan una replicacin diferente.
4.2.1.3 Terapia gnica en enfermedades no hereditarias
Por ejemplo en el tratamiento del melanoma maligno se ha insertado ex vivo
un gen codificador de factor de necrosis tumoral (TNF: tumor necrosis facto) en
linfocitos que infiltran tumores. Aunque el TNF es toxico administrado por va
sistmica, se espera que los linfocitos que infiltran tumores, que tienen como
objetivo natural los melanomas, dirijan de forma especfica el TNF hacia los
tumores y los destruyan.
La terapia gnica se esta ensayando tambin en el tratamiento de la artritis
reumatoide y su objetivo consiste en bloquear los efectos inflamatorios de la
interleucina (IL-1). Se inserta un gen codificador de la protena antagonista del
receptor IL-1 (IRAP) en las clulas sinoviales que revisten las articulaciones,
limitando as la inflamacin causada por IL-1.
4.2.2 Terapia de lnea germinal
La terapia de clulas somticas consiste en la alteracin nicamente de las clulas
somticas especificas y, por lo tanto, difiere poco en principio de muchos otros tipos de
intervencin medica (P. Ej. los transplantes de medula sea). En cambio, la terapia
gnica germinal implica la alteracin de todas las clulas del cuerpo, incluyendo las
que originan a los gametos. Por lo tanto, este tipo de terapia gnica no solo afectara al
paciente sino tambin a todos sus descendientes.
IV. ENFERMEDADES TRATADAS POR TERAPIA GENICA
Existe una gran esperanza para pacientes afectados por alguna enfermedad puedan ser
tratados por terapia gnica, por la cual, se le sustituye un gen defectivo por un gen normal. An
as, los obstculos que supone la terapia gnica son muy importantes.
5.1 Fibrosis qustica
Se han utilizado muchos experimentos en los que se usaron cultivos celulares para
encontrar un camino eficiente para introducir genes humanos en clulas sin que sufran
reordenamientos u otras alteraciones que puedan afectar a la expresin gnica, es decir,
que el gen introducido sea estable.
5.2 Fibroblastos de la piel utilizados en terapia gnica
Un tipo de clulas que sirve como vehculo para transferir genes son los
fibroblastos de la piel. Estas clulas han sido usadas en pacientes afectados de

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 mucopolisacaridosis, que es una enfermedad hereditaria que se caracteriza por la
deficiencia de enzimas lisosomiales.
5.3 Terapia gnica aplicada a hepatocitos
Otro tejido diana para la terapia gnica es el hgado . Un gran nmero de
enfermedades metablicas hereditarias afectan al hgado, y el transplante de hgado ha
sido utilizado para tratar estas enfermedades y otras como son la hipercolesterolemia y
hemofilia. Estas tcnicas se han desarrollado a partir de aislamiento y cultivo de
hepatocitos.

5.4 Linfocitos modificados genticamente

Un sistema de entrega a clulas de melanomas malignos est siendo utilizada en
experimentos clnicos. Los linfocitos infiltrantes en tejidos (TILs) son linfocitos que se
infiltran el tumores slidos y que pueden matar clulas tumorales si se administran junto a
la interleuquina 2 (IL-2),que es un factor decrecimiento de linfocitos. Cuando los TILs eran
aislados de melanomas malignos, estimulados en su crecimiento en un cultivo tisular con
IL-2, y se inyectaban de nuevo al paciente, en ocasiones producan la regresin del
melanoma.
5.5 Utilizacin de clulas hematopoyticas en la expresin de clulas en animales
De la misma manera que el retrovirus acta como un vector para transportar un gen
a una clula, la clula puede ser considerada como un vector en el siguiente paso del
proceso, que es transportar el gen al cuerpo del paciente.
5.6 Deficiencia de adenosina desaminasa (inmuno deficiencia combinada grave)
Se debe a un trastorno autosmico recesivo. Su deficiencia origina una disfuncin
intensa en las clulas T y B, que provoca la muerte de los pacientes antes de los dos aos
de edad por infeccin masiva. Se comenz a estudiar su tratamiento por terapia gnica en
1.990 para una mutacin en el gen adenosina desaminasa. Los nios aquejados de este
mal eran incapaces de iniciar una respuesta inmunitaria ante las infecciones y estaban
abocados a una vida muy limitada, ("nios burbuja"). Sin una especial atencin moran
irremediablemente.
5.7 Transferencia de mioblastos usada para tratar la distrofia muscular Duchene
Los mioblastos son las clulas stem del msculo esqueltico. Durante el desarrollo,
los mioblastos se fusionan para formar fibras musculares multinucleadas. Un pequeo
nmero de mioblastos no se fusionan y forman clulas individuales, llamadas clulas
satlite, que se sitan entre las membranas de las fibras musculares y de la matriz
extracelular que cubre las fibras musculares.
5.8 Terapia gnica en la cura del cncer
El diagnstico del cncer a nivel molecular permitir un pronstico ms preciso;
pero an podemos llegar ms lejos utilizando una terapia gnica que tiene como finalidad
la destruccin selectiva de la clula tumoral. La prdida del oncosupresor p53 puede ser
corregida introduciendo una copia sana en la clula neoplsica; la sobreexpresin del
oncogn k-ras tambin puede suprimirse introduciendo el gen k-ras antisentido que
inactive su expresin o bloquee sus ARNs.

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ENFERMEDADES TRATADAS MEDIANTE TERAPIA GNICA
1.- Hemofilia
La Terapia Genica est resultando tambin eficaz en casos de hemofilia A y B donde se
encuentran alterados los factores coagulantes VIII y IX, respectivamente. En ellas se han
realizado aproximaciones utilizando el transgn de estos factores y vectores retroviales,
adenovirus, virus adenoasociados y ADN desnudo administrados por vas comunes como la
subcutnea, intramuscular, intraheptica, intraperitoneal, o intravenosa. Valores equilibrados de
stos en el flujo sanguneo reducirn sustancialmente los episodios de hemorragias
espontneas y la necesaria infusin de estas protenas en los pacientes de este tipo de
hemofilia.

2.- Fibrosis qustica

En la fibrosis qustica se ha observado un defecto en el gen que codifica para el canal de cloro
conocido como CFTR, que resulta en un transporte anormal de electrlitos en las glndulas
exocrinas y conduce a una enfermedad crnica obstructora de los pulmones, insuficiencia
pancretica exocrina y aunento de la cantidad de electrlitos en el sudor.

3.- Distrofia muscular Duchenne

En un avance significativo hacia un tratamiento para la distrofia muscular de Duchenne (DMD),
investigadores han usado Terapia Genica para proteger msculos respiratorios vitales en
ratones con la enfermedad, debido a que la mayor causa de muerte en la DMD es el deterioro
del diafragma. La nueva investigacin ha demostrado por primera vez cmo el diafragma puede
ser rescatado por medio de la inyeccin intravenosa con el gen de la distrofina, que es
defectuoso en las personas con DMD.

4.- Alteraciones hepticas

A pesar de los problemas tcnicos, existen protocolos clnicos aprobados para la
transferencia ex vivo de genes al hgado, para el tratamiento de la insuficiencia heptica aguda
e hipercolesterolemia familiar. Una de las vas para restituir la funcionalidad del hgado cirrtico
se enfoca en la degradacin del exceso de acumulacin de protenas de la matriz extracelular,
principalmente colgena tipo I en el parnquima heptico.

5.- Diabetes

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La Terapia Genica mantiene abiertas dos lneas de investigacin en pacientes con diabetes tipo
1, caracterizada por una prdida completa de las clulas betapancreticas. Mientras la primera
se basa en la modificacin de la respuesta anmala del sistema inmunitario, la segunda intenta
aumentar el nmero de clulas capaces de secretar insulina.

6.- Enfermedades neurodegenerativas

Se han realizado tambin aproximaciones de TG en el tratamiento de la enfermedad de
Alzheimer en humanos. Tambin se h analizado a pacientes en las primeras etapas de la
enfermedad, con la implantacin de clulas cutneas a las que previamente se les ha
introducido el gen del factor de crecimiento neurolgico (NGF) que ha mostrado resultados
positivos en el deterioro cerebral en monos viejos.
7.- Ceguera
Se han realizado estudios en un tipo de ceguera total, acompaada de degeneracin de la
retina, que se relaciona con mutaciones en el gen RPE95. Los resultados de este estudio
constituyen el primer xito para prevenir la ceguera en un mamfero y tienen una importancia
adicional, si consideramos que las mutaciones del gen RPE95 se observan en el humano en la
ceguera congnita conocida como amaurosis de Leber. Hasta ahora, los experimentos
realizados en animales han sido un xito.

8.- Insuficiencia cardaca

Individuos con insuficiencia cardiaca presentan alteraciones en la regulacin de esta protena.
La sobre-expresin, mediante un virus adenoasociado, de una forma mutada del gen de la
fosfolamban bloquea a la protena nativa. En estos casos se utiliz un catter, similar al utilizado
en la actualidad para practicar angioplastias, para transportar el virus hasta el lugar de accin.

9.- Arterosclerosis
Recientemente se ha abierto la posibilidad de aplicar la Terapia Gnica a patologas como la
arteriosclerosis. Aunque los resultados iniciales no han sido del todo buenos (ya que tan slo
consiguieron evitar la amputacin de la pierna gangrenada durante varias semanas), s
consiguieron revascularizar la extremidad.

10.- Disfuncin erctil e infertilidad

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La sobre-expresin de factores de crecimiento antes de una prostatectoma radical podra
ayudar a reparar el nervio cavernoso y, de esta manera, se podra minimizar la disfuncin erctil
neuroptica y preservar la capacidad de ereccin.

11.- Terapia gnica utilizando fibroblastos de la piel

Estas clulas han sido usadas en pacientes afectados de mucopolisacaridosis, que es una
enfermedad hereditaria que se caracteriza por la deficiencia de enzimas lisosomiales.

CONCLUSIONES
Aunque se ha dado una visin de la Terapia Gnica slo en el tratamiento de enfermedades
hereditarias, la ingeniera gentica desde su inicio se ha utilizado para sintetizar, y en algunos
casos liberar, protenas con fines teraputicos.
La modificacin gentica de vegetales y animales permite, no slo mejorar sus rendimientos o
resistencias frente a plagas o inclemencias naturales, sino tambin la produccin de protenas
de inters farmacutico

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Animales transgnicos
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Los animales transgnicos son aquellos que poseen un gen que no les pertenece. La forma ms
sencilla para generar un animal transgnico requiere
primero aislar el gen que se desea introducir en el
genoma del animal. Este gen que no pertenece al
genoma de la especie del animal se denomina
transgn. Esto requiere el empleo de tecnologa de
ADNrecombinante, ingeniera gentica(es el conjunto
de tcnicas que permite modificar las caractersticas
genticas de los organismos) y de labio tecnologa
(ciencia que utiliza sistemas biolgicos naturales para
obtener productos de inters para el ser humano).
En los animales transgnicos, el transgn se introduce
en zigotos de modo que el embrin que resulte habr
integrado el transgn en todas sus clulas y originara un
animal transgnico. Una forma de conseguir los
trasgenes es mediante la tcnica del micro-inyeccin de material gentico que se desee.
En cuanto a los animales se experimenta sobretodo con ratones, ratas, conejos, peces y cerdos
entre otros.
Se producen un animal transgnico insertando o suprimiendo un gen de su genoma. Se Intenta
as modificar el fenotipo del animal. La modificacin es o sea la creacin de una funcionalidad
nueva aadiendo un gen al genoma, o sea la supresin de una funcionalidad suprimiendo la
expresin de un gen del genoma. El gen es insertado o suprimido por medio de la tecnologa de
ADN que combina.
Los animales transgnicos son menos fciles realizar que las plantas transgnicos,
principalmente porque las clulas animales no son todo totipotenciales. Las modificaciones
genticas deben ser realizadas sobre clulas (clulas ES) del embrin y a un estadio muy precoz
de su desarrollo. Adems, los ciclos reproductores de los animales son ms largos y ms
complejos. La bsqueda pues es mucho ms lenta.
El primer animal transgnico fue un ratn gigante en el genoma del cual se inserta el gen de la
hormona del crecimiento humano hGH. Actualmente, existen unos pollos, conejos, ratas, cerdos,
vacas, cabras y peces transgnicos. Pero, el 95 % de los animales transgnicos, son unos
ratones. Estos animales, son utilizados ms para la bsqueda que para la alimentacin. Esto
podra cambiar.
Los animales transgnicos se estn utilizando para:
1. Estudiar el desarrollo y la fisiologa del animal.
2. Estudiar las enfermedades y los tratamientos.
3. Producir productos biolgicos
4. Someter a un test productos biolgicos (Vacunas...)
5. Aumentar el peso de los animales y su calidad.
6. Obtener los rganos que hay que trasplantar
Mtodos
Hay que primero identificar luego aislar el gen que se quiere insertar en el genoma del animal
para modificar su fenotipo. Una vez el gen identificado, hay varios manera de insertarlo.
1. Micro inyeccin en l proncleo de un zigoto

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En una hembra se induce una sper ovulacin. Se fertiliza esta hembra in vitro. Un vulo
fertilizado es tomado e inmovilizado por una micropipeta bajo controle microscpica. En el
proncleo masculino, se inyecta una pequea cantidad de una solucin que contiene muchas
copias del transgn. Este vulo es introducido en el tero de madres adoptivas tratado para
recibir el embrin y permitirle desarrollarse.
Este mtodo no permite decidir el lugar donde uno o varios transgenes sern insertados. La
insercin se hace en el hazard. La insercin puede hacerse en un gen y producir anomalas
atadas a la inactivacin del gen en cuestin. El mtodo no permite tampoco saber cuntas
copias del gen han sido insertadas.
2. Transmisin utilizando un vector retro viral

En este mtodo un virus es utilizado para transportar el transgn en las clulas embrionarias. El
virus inserta el transgn en el genoma. Aqu tambin, la insercin se hace al azar.
3. Transformacin clulas embrionarias
Este mtodo permite insertar el transgenes en un lugar determinado del genoma. El gen es
insertado en clulas madre por recombinacin entre un vector y el genoma de la clula madre.
Las clulas madre tan modificadas son inyectadas en blastocitos. stos son implantados en una
madre adoptiva. Habr que desde luego seleccionar la descendencia para descubrir los
animales transgnicos.
Utilizacin de animales transgnicos
1. Fisiologa y desarrollo
Los animales transgnicos pueden servir para el estudio del control de la expresin de los genes.
Podemos tambin estudiar cmo ciertos genes intervienen en el funcionamiento y el desarrollo
del cuerpo. Podemos estudiar por fin el papel de un gen en el modificante o suprimindolo.
As, se ha estudiado el papel del gen HNF6 en el desarrollo del hgado y del pncreas.
2. Estudio de enfermedades
Si se quiere comprender el papel de un gen en el desarrollo de una enfermedad, o imitar
enfermedades, podemos preparar a animales transgnicos para este gen. Para estudiar el
tratamiento de ciertas enfermedades, se crean transgenes que reproduce la enfermedad.
Existen ratones transgnicos que reproducen los sntomas de enfermedades humanas, como
ciertos cnceres, fibrosis qustica, artritis reumatoide y el Alzheimer. Estos animales
transgnicos no son, probablemente ningunos bonos modelos de las enfermedades humanas.
3. Produccin de productos biolgicos
Se crean a animales transgnicos que producen medicinas, protenas etc.
Por ejemplo, para el tratamiento del enfisema se utiliza una protena humana, la a-1-
antitripsina. Pudimos producir ovejas transgnicas que producen esta protena en grandes
cantidades en su leche.
4. Ensayo de seguridad de vacunas y productos qumicos
Se han desarrollado ratones transgnicos para ensayar las vacunas. Tambin se emplean
animales transgnicos con genes que les hacen ms sensibles a la toxicidad de frmacos o
productos qumicos presentes en el ambiente, de forma que los ensayos se realizan con menos
animales y se obtienen resultados con mayor rapidez.
5. Donacin de rganos
Se han desarrollado cerdos transgnicos para producir rganos para trasplantar. Para impedir
el rechazo se ha insertado un gen que expresa una protena humana en la superficie de las
clulas del animal.

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El riesgo existe tambin de transmitirle al hombre un virus de puerco. El injerto permitira
posiblemente el salto de especie y pues el riesgo de una epidemia.
6. Incrementar en animales de granja la calidad y cantidad de sus productos
La ingeniera gentica en animales de granja se ha dirigido a mejorar la productividad animal:
se han desarrollado vacas que producen ms leche (Hay ya demasiada leche en el mundo!),
ovejas que producen ms lana y peces con mayor tasa de crecimiento
Se podran intentar ganar el apoyo de los comerciantes produciendo peces genticamente
modificado. Se podr modificar el crecimiento, la resistencia a las enfermedades etc. Ms de 20
especies de peces ya han sido creadas y dos de ellas esperan su aprobacin en los Estados
Unidos.
La manipulacin gentica de los animales de granja puede ser desagradable para el animal. Por
ejemplo, el puerco en los que se introdujo el gen de la hormona del crecimiento de la vaca para
aumentarle la produccin de carne, sufre de artritis, de herida, de enfermedad de los riones y
de los problemas de fertilidad.
Obtencin de animales transgnicos:
Existen tres mtodos principalmente para la obtencin de animales transgnicos mediante la
introduccin de ADN extrao en sus cadenas genticas:
MICRO INYECCIN:
Es una tcnica fcilmente aplicable a una amplia variedad de especies, pero con el
inconveniente de que el gen se inserta al azar en el genoma y que solo el 5% de los vulos dan
lugar a un animal transgnico vivo.
Proceso:
Se provoca sobre ovulacin en las hembras
Los vulos son fecundados in vitro (se necesita una gran cantidad de vulos fecundados para
asegurar el proceso)
Se inyecta el nuevo gen en el ncleo del ovulo
Los vulos se reintroducen en las hembras
El porcentaje de xito es muy bajo.
RETROVIRUS:
Mediante esta tcnica se consigue que el transgn est presente en todas las clulas del individuo
transgnico, sin embargo el gen tambin se inserta al azar. Cabe la posibilidad de que el
retrovirus usado como transporte se reproduzca en el organismo transgnico dando lugar a
enfermedades.
Proceso:
Se elige un virus benigno y se atena hasta eliminar su carga viral.
Se inserta el transgn que se quiere introducir de tal manera que el virus acta como un
transporte
Cuando el virus comienza a replicarse en el interior de las clulas libera el transgn
CLULAS MADRE EMBRIONARIAS:
Es el mtodo menos aleatorio y se utiliza cuando es importante dirigir las secuencias genticas a
lugares especficos del genoma.
Cuando las clulas madre estn en cultivo es posible llevar a cabo modificaciones genticas
especficas como la eliminacin o sustitucin de un gen.
Las clulas modificadas son inyectadas en embriones en fase de blastocito.
Se inserta el embrin en una madre adoptiva y los individuos resultantes portan el gen solo en un
porcentaje de sus clulas.

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Animales transgnicos con fines comerciales:
A lo largo de los siglos se han producido animales con nuevas combinaciones de genes,
utilizando mtodos tradicionales de reproduccin mediante cruces selectivos e hibridaciones,
pero siempre con la limitacin de que los genes que se cruzaban deban pertenecer a la misma
especie o a especies muy parecidas.
Actualmente y desde los aos 80, la transgnesis ha permitido superar este obstculo,
permitiendo a los cientficos investigar en la mutacin de ciertas especies con el fin de que el
beneficio econmico para sus productores sea mayor
Mamferos:
Conejo
Vacuno
Cerdo
Oveja
Cabra
Aves:
Pollo
Codorniz
Peces:
Salmon
Trucha
Tilapia
Carpa
Pez gato
Medaka
Dorada

ESISTENCIA A ENFERMEDADES:
Implantacin de genes para fortalecer el sistema inmunolgico del animal, de manera que sea
ms resistente o incluso inmune a ciertas enfermedades.
HORMONA DEL CRECIMIENTO:
Se induce un mayor y ms rpido crecimiento de la especie mediante la implantacin de la
hormona del crecimiento
ANIMALES TRANSGNICOS CON FINES MDICOS:
La creacin de aminales transgnicos puede tener tambin un fin teraputico, ya que estos
pueden servir para avanzar en el tratamiento de enfermedades, para generar medicamentos de
manera endgena o incluso como donantes de rganos.
Ejm:
RATONES EN LA INVESTIGACIN CONTRA EL CNCER:
Se asla el gen humano causante de la enfermedad sobre la que se quiere investigar para despus
implantarlo en el ratn por lo cual este desarrolla una enfermedad igual a como lo hara un ser
humano, por lo cual los cientficos pueden investigar nuevos tratamientos sin arriesgar vidas
humanas.
BIO-REACTORES:
La industria farmacutica est desarrollando diversos animales que gracias a la introduccin en
su ADN de ciertos genes humanos, son capaces de producir protenas humanas que pueden
ayudar a tratar ciertas enfermedades.

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A este proceso lo denominan pharming, trmino ingls hibrido de farm (granja) y pharm
(farmacia). Algunos ejemplos:
Vacas, ovejas y cabras cuya leche puede ser usada para tratar la diabetes, el enfisema pulmonar
o la hemofilia, entre otras enfermedades.
El pez tilapia puede producir insulina humana para diabticos.
Cerdos que contienen hemoglobina humana en sus glbulos rojos.
XENOTRANSPLANTES:
Gracias a la implantacin de genes humanos, animales como el cerdo se convierten en posibles
donantes de rganos ya que llevan en su ADN el antgeno regulatorio del complemento humano,
es decir, que evita que se produzca el rechazo hiperagudo tpico en trasplantes entre especies
distintas.
Debido al tamao de sus rganos, el cerdo se podra convertir en el principal donante
transgnico: hgado, rin, corazn.

Ventajas
La ingeniera gentica permite modificar genticamente animales, con diferentes aplicaciones:
Ayudar a los investigadores a identificar, aislar y caracterizar los genes y as entender cmo
funcionan.
Servir como modelos de enfermedades que afectan al hombre y as poder desarrollar nuevas
medicinas y nuevas estrategias de tratamiento.
Como fuente de tejidos y rganos para trasplantes en humanos.
Para mejoramiento del ganado y otros animales de importancia econmica.
Para producir leche con mayor valor nutricional o que contenga protenas de importancia
farmacutica (que se purifican de la leche en grandes cantidades).
Destruir especies perjudiciales para el ser humano o su entorno, un ejemplo es que se pretende
utilizar un gen de la medusa que activa un mecanismo de destruccin para combatir las plagas
de polillas que atacan a los cultivos de algodn. Esto pretenden llevarlo a cabo liberando 3.600
polillas transgnicas en un campo experimental de EEUU con el fin de que se mezclen con las
naturales y directamente se auto-exterminen.
En otros casos la simple experimentacin como es el caso del mono `Andi, al que han
introducido un gen que produce una protena que brilla bajo la luz fluorescente simplemente
para demostrar que es posible realizar la transferencia de genes a un animal casi superior o
el caso del cerdito NT-2 al cual le han introducido este mismo gen haciendo que su hocico y sus
pezuas brillen.

Desventajas
Transgnesis, como sistema de mejora gentica, puede tener las mismas consecuencias
negativas que han causado la prdida de cientos de razas autctonas (originarias,
nativas) en todo el mundo, al introducir otras con mejores caractersticas productivas. El

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 desafo de los investigadores es evitar la prdida del patrimonio gentico que garantiza la
biodiversidad, ya que en este momento se conocen los medios para evitarlo.
Corresponde tambin a la comunidad cientfica realizar estudios de impacto
medioambiental que permitan beneficiarse de nuevas tcnicas, sin que ello ponga en
peligro el medio natural.
La introduccin de una nueva informacin gentica (el transgn) dentro del genoma de
un organismo puede presentar algunos problemas en relacin a dnde y cundo
expresar el transgn, tal como se indica a continuacin:
Integracin mltiple (en tndem o no), Lugar de integracin indeterminado (efecto de
posicin).
Metilacin y falta de expresin, Mosaicismo (germinal y somtico) .Expresin
especfica/ectpica, Expresin variable.

REFERENCIAS

- OROZCO OROZCO, E. y P.,GARIGLIO VIDAL, (1999). Genetica y biomedicina

molecular. Mexico D.F. Edit. Limusa S.A. pp 111-118.
- S. KLUG, W. y M.,R. CUMMINGS. (1999). Conceptos de genetica. Madrid. Prentice Hall.
5ta Edic. pp 6-8, 495-498.
- http://www.medspain.com/ant/n1_oct98/genetica.htm
- http://www.geocities.com/HotSprings/Villa/3479/notisex_16.htm
- http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/tergen-2.htm
- http://aragoneria.com/boreas/articulos/terapiagenica1.htm

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