INSTITUTO TECNOLOGICO DE MAZATLAN

ING. BIOQUIMICA

SEPTIMO SEMESTRE

REPORTE FINAL DEL BIORREACTOR

ING.
BIORREACTORES
BIOGAS A BASE DE ESTIERCOL Y
NOPAL
Dr. Miguel ngel Franco Nava

Integrantes del equipo:

Carvajal Portillo Jocelyn Pamela

Ibez Garca Guillermo

Lizarraga Duarte Izamary

Mendoza Peraza Paola

Mazatln, Sin., 1432de Diciembre del 2015

 Indice
1. Introduccin.........................................................................................................4

2. Biorreactor...........................................................................................................5

Material del tanque.................................................................................................5

Polietilieno de alta densidad (PEAD)..................................................................5

Poli cloruro de vinilo PVC....................................................................................6

3. Servicios auxiliares.............................................................................................7

Especificaciones.....................................................................................................8

4. Instrumentacin.................................................................................................11

Variables a considerar dentro del biorreactor.......................................................11

Potencial de Hidrogeno........................................................................................12

Sensor...............................................................................................................12

Temperatura.........................................................................................................13

Sensor...............................................................................................................13

Presin..................................................................................................................13

Sensor...............................................................................................................13

Configuraciones....................................................................................................14

Configuraciones: SENSOR ARDUINO..........................................................14

Configuraciones: ARDUINO LABVIEW.........................................................15

5. Tcnicas Analticas...........................................................................................16

Enumeracin bacteriana: el nmero ms probable.............................................16

Objetivo.............................................................................................................17

Fundamento......................................................................................................17

Procedimiento...................................................................................................17

Datos y Anlisis.................................................................................................18

1
 Preparacin de Solucin Salina........................................................................19

Diagrama. Enumeracin Bacteriana: El nmero ms probable.......................21

Resultados nmero ms probable....................................................................22

Humedad y cenizas..............................................................................................22

Objetivo.............................................................................................................22

Fundamento del mtodo...................................................................................22

Procedimiento...................................................................................................22

Diagrama...........................................................................................................23

Resultados........................................................................................................24

Mtodo de combustin hmeda...........................................................................25

Objetivo.............................................................................................................25

Fundamento del mtodo...................................................................................25

Reactivos...........................................................................................................25

Procedimiento...................................................................................................26

Procedimiento...................................................................................................26

Rango y sensibilidad.........................................................................................28

Observaciones al mtodo.................................................................................28

Clculos.............................................................................................................29

Diagrama. Metodo de combustion humeda (walkley and black)......................30

Mtodo de Kjeldahl...............................................................................................30

Objetivo.............................................................................................................30

Fundamento......................................................................................................30

Soluciones y reactivos......................................................................................31

Procedimiento...................................................................................................32

Clculos.............................................................................................................33

2
 Diagrama Mtodo Kjeldahl.............................................................................34

Resultados........................................................................................................36

6. Conclusin.........................................................................................................37

ndice de Figuras

Figura 1. Material del cual esta echo el tanque y el sellado hermtico que permite
la fermentacin anaerbica.......................................................................................7
Figura 2. Tubo que entra dentro del biodigestor por donde se alimentara y tambin
se introducir los sensores al igual que se sacara la materia orgnica....................9
Figura 3. Equipos auxiliares de PVC con inclinacin que funciona para la adicin
de sustancias reguladora de pH que caen al taque por gravedad..........................11
Figura 4. Elementos para censar el pH...................................................................12
Figura 5. Sensor de Temperatura LM35..................................................................13
Figura 6. Conexiones del Sensor LM35 con Arduino..............................................14
Figura 7.Conexion del Electrodo a la tarjeta medidora del pH y a Arduino............15
Figura 8. Conexiones del Sensor de Presin..........................................................15
Figura 9. Conexin de Arduino al Computador.......................................................16
Figura 10. Representacin de la tcnica analtica..................................................17
Figura 11. Diluciones...............................................................................................18

ndice de Tablas
Tabla 1. El nmero ms probable para series de diluciones en rplicas de cinco
por nivel de dilucin.................................................................................................20
Tabla 2.Datos para la curva de calibracin.............................................................26
Tabla 3. Criterios para evaluar un suelo con base en su contenido de nitrgeno
total (Moreno, 1978)..................................................................................................3

3
 1. Introduccin
Uno de los objetivos principales para el establecimiento de biodigestores es que
ellos se constituyen en una valiosa alternativa para el tratamiento de los desechos
orgnicos presentes en las aguas residuales ya que previene la contaminacin de
los cuerpos de agua y al mismo tiempo suministra un gas combustible
(fundamentalmente metano) que puede emplearse para satisfacer la demanda de
energa de una comunidad y un efluente que puede ser utilizado como fertilizante.

El biogs es empleado fundamentalmente en la generacin elctrica, en motores

para bombas de agua, alumbrado, en la coccin de alimentos y equipos de
refrigeracin. El efluente en el riego de pasturas y en la generacin de biomasa
cuando es sometido a pos-tratamiento.

El tratamiento de excremento de animales en sistemas de Biogs mejora las

condiciones de saneamiento para los propietarios de la planta, sus familias y la
comunidad entera ya que el contenido inicial de patgenos del excremento se
reduce apreciablemente debido a los procesos de fermentacin.

Infortunadamente en la implementacin de la tecnologa del Biogs se han

presentado dificultades relativas al manejo y operacin de los biodigestores, uso
del biogs, pobre seleccin de reactores, escasez de aceptacin sociocultural
entre otros. Estas dificultades han conllevado al mal uso de la tecnologa e
inclusive a su abandono en algunas regiones.

El material qu aqu se presenta ofrece una compilacin referente a los aspectos

bsicos de la tecnologa del biogs, que se debe tener en cuenta al momento de
proyectar una instalacin y algunos criterios de diseo y operacin, con el
propsito de buscar una revalidacin y afirmacin de esta tecnologa tan
importante en el mejoramiento de la calidad de vida de las comunidades.

4
 2. Biorreactor
El biorreactor que realizaremos lleva por nombre biodigestor. Un biodigestor es un
sistema natural y ecolgico que aprovecha la digestin anaerbica (en ausencia
de oxgeno) de las bacterias para transformar el estircol en biogs y fertilizante.
El biogs puede ser empleado como combustible en las cocinas, o iluminacin, y
en grandes instalaciones se puede utilizar para alimentar un motor que genere
energa elctrica.

Son tres los lmites bsicos de los biodigestores:

La disponibilidad de agua para hacer la mezcla con la materia orgnica que

ser introducida en el biodigestor
La cantidad de materia orgnica disponible
La apropiacin de la tecnologa

El biodigestor a elaborar ser de polietileno ya que este es un material menos

corrosivo que los metales comunes y el medio a fermentar es un medio de mucha
corrosin.

Los modelos de biodigestore construidos a partir de mangas de polietileno tubular,

se caracterizan por su bajo costo, fcil instalacin y mantenimiento, as como por
requerir slo de materiales locales para su construccin que es lo que se tiene
planeado realizar. Por ello se consideran una tecnologa apropiada.

Material del tanque

Polietilieno de alta densidad (PEAD)
El polietileno de alta densidad o PEAD (HDPE en ingls) es un polmero de
cadena lineal no ramificada, por lo cual su densidad el alta y las fuerzas
intermoleculares tambin.

5
Propiedades
Es un material termoplstico parcialmente amorfo y parcialmente cristalino. El
grado de cristalinidad depende del peso molecular, de la cantidad de comonmero
presente y del tratamiento trmico aplicado.

Presenta mejores propiedades mecnicas (rigidez, dureza y resistencia a la

tensin) y mejor resistencia qumica y trmica que el polietileno de baja densidad,
debido a su mayor densidad. Adems es resistente a las bajas temperaturas,
impermeable, inerte (al contenido), con poca estabilidad dimensional y no txico.

Tambin presenta fcil procesamiento y buena resistencia al impacto y a la

abrasin. No resiste a fuertes agentes oxidantes como cido ntrico, cido sulfrico
fumante, perxidos de hidrgeno o halgenos.

Poli cloruro de vinilo PVC

Siendo uno de los materiales ms conocidos y con mayor disponibilidad de
adquirirlo con un costo no muy elevado se pude decir q el material de PVC o
conocido como polipropileno que cumple con los requerimientos e
especificaciones de hermeticidad, para fabricar un biodigestor.

La tubera se debe seleccionar con el espesor de pared suficiente para soportar la

presin de diseo del biodigestor en su caso, resistir cargas externas previstas.
Cada componente de la tubera deber de ser diseada para resistir las presiones
de operacin y las caractersticas termodinmicas del gas, a efecto de que estas
operen adecuada y eficientemente en el momento de mxima demanda de biogs.

Las razones por lo cual escogimos este tipo de material es de fcil manejo, es
ligero excelente para obtenerlo y que se cuenta con mucho material en la
escuela.

Caractersticas que lo hacen el ms idneo para utilizarlo en nuestro biodigestor

son:

Teniendo en cuenta el coeficiente trmico que es capaz de resistir

temperaturas de 20 C como mnima puesto q el material se ablanda y
una mxima de 70 C
6
 Es un tubo rgido fuerte, resistente a los qumicos, que se corta y mide
fcilmente.

Estanqueidad.

Facilidad de montaje.

Puesta en marcha inmediata.

La superficie lisa facilita mnimas prdidas de carga.

Tipo de junta mediante encolado y unin elstica.

Estos materiales anteriormente mencionados fueron los elegidos para la

elaboracin de nuestro biodigestor ya que en conjunto con el equipo decidimos
seran los materiales idneos para la realizacin del biodigestor.

Figura 1. Material del cual esta echo el tanque y el sellado hermtico que permite la fermentacin
anaerbica

7
 3. Servicios auxiliares
Durante este tiempo en nuestro campo de los servicios auxiliares hemos
determinado los equipos que nos ayudaran al mantenimiento ptimo de las
condiciones de nuestro biorreactor y al buen funcionamiento del mismo.

Nuestro tanque es anaerobio y tiene una capacidad de 200L con dos entradas,
una de alimentacin y otra de salida, el biorreactor descansa sobre un tipo
columpio que servir de agitacin ya que el proceso de fermentacin necesita una
leve agitacin peridicamente.

Como lo que buscamos es obtener biogs a partir de estircol mezclado con

nopal, se necesitara un mini tanque con una capacidad aproximada de 20L para
almacenar el metano que se generar de nuestra fermentacin.

Especificaciones
Dado que el proceso es a temperatura ambiente no se necesitar algn
intercambiador de calor o un serpentn para subir o bajar temperaturas por lo que
este equipo auxiliar queda descartado.

Nuestro tanque se ver apoyado con un manmetro para poder medir y mantener
la presin en un nivel estable a partir de una bomba de vaco.

Tambin se utilizar un potencimetro para mantener los niveles adecuados de

pH, para ello se usar una de las entradas para introducir soluciones buffer para
mantener el pH adecuado en un rango entre 5-7.

Para la alimentacin se usara una de las entradas como embudo para que sea
ms fcil y se sellara con un tapn para evitar que el gas se escape.

Uno de los problemas que se nos presento fue que nuestro tanque solo tiene dos
entradas y nosotros necesitamos cuatro entradas por lo que la solucin propuesta
fue utilizar en cada una de las dos entradas una t de PVC para generar las 4 que
necesitbamos y con tubos de PVC, 1 de tamao entre 2 y 4 pulgadas para
introducir la materia prima por este. El otro no debe de ser un tamao tan grande

8
ya que solo se usara para el manmetro y la salida del gas. Los diferentes equipos
auxiliares que son 4: manmetro, potencimetro, alimentacin y salida del gas.

Figura 2. Tubo que entra dentro del biodigestor por donde se alimentara y tambin se introducir los
sensores al igual que se sacara la materia orgnica

Tambin necesitaremos otro tipo de servicios auxiliares como lo son el agua que
se utiliza para el lavado y limpieza del biorreactor y del rea del proceso, esta
debe de ser potable y estar libre de sedimentos.

Otro servicio auxiliar es la electricidad que tiene como propsito proporcionar la

energa para accionar las bombas, compresores, motores elctricos y otros
equipos mecnicos, paneles de control y alumbrado. El sistema elctrico estar
constituido por la fuente, el equipo de transformacin, dispositivos de proteccin,
etc.

Los voltajes necesarios son los especificados para los motores elctricos y dems
equipos accionados elctricamente que sern de 120V y los instrumentos
generalmente necesitan voltajes entre 12-24V. Y la corriente puede ser de dos
tipos: de corriente alterna (AC) y la corriente continua o directa (DC) que
proporciona un valor constante todo el tiempo, como pilas, etc. Tambin se usaran
como proteccin de los circuitos se usaran interruptores en caso de existir una

9
sobrecarga o falla. Todos estos equipos elctricos deben ser a prueba de
explosiones.

Del punto de suministro al punto de utilizacin la corriente elctrica se distribuye

por medio de conductores que pueden ser alambres, cordones o cables.

Hilo o alambre: Es un conductor constituido por alambre macizo, de cobre.

Cordn: Es un conductor constituido por varios hilos unidos elctricamente
enrollados helicoidalmente alrededor de uno o varios hilos centrales.
Cable: Es un conductor formado por uno o varios hilos o cordones aislados
elctricamente entre s.
Por lo que podemos concluir que los equipos a utilizar sern:
Unin T.- para tener las 2 salidas que necesitamos en una sola.
Llaves de bola y mariposa.- para poder abrir y cerrar el flujo sin que se
escape el gas.
Manmetro.- para medir la presin que se va generando, con la
descomposicin de la materia orgnica.
Bomba de vaco.- para succionar el gas y hacerlo que pase por la solucin
de hidrxido de sodio.
Tubos PVC y 3.- para la salida del gas y pase por el manmetro. 3
este ser el tubo por donde se alimentara el biorreactor y por donde se
estabilizara el pH de la mezcla.
Coples, niples.- para sellar bien las conexiones y no haya fugas de gas.
Alambre galvanizado.- por este se deslizara los sensores del pH y el
termmetro hacia el fondo o el medio del tanque.
Tapones.- para sellar la salida del tanque sin fugas.
Embudo.- para una adecuada alimentacin del biorreactor sin derrames ni
escurrimientos.

10
 Figura 3. Equipos auxiliares de PVC con inclinacin que funciona para la adicin de sustancias
reguladora de pH que caen al taque por gravedad

4. Instrumentacin
Los biorreactores estn equipados con distintos instrumentos. Estos se utilizan
para facilitar el registro y anlisis de variables de operacin y de parmetros
especficos que sirven para mantener, dentro de ciertos intervalos de valores, las
condiciones de operacin de biorreaccion.

El biorreactor que se utiliz para la produccin de biogs a base de estircol y

nopal cuanta con 3 diferentes sensores que nos ayudaran a medir las variables del
sistema. Cada una de ella fue adaptada de manera que no alteran el sistema ni el
sistema los alterara a estos.

Variables a considerar dentro del biorreactor

Potencial de Hidrogeno

Temperatura

Presin
11
Potencial de Hidrogeno
El pH en un digestor anaerbico inicialmente decrecer con la produccin de
cidos voltiles. Sin embargo, como las bacterias productoras de metano
consumen los cidos voltiles y la alcalinidad es producida, el pH del digestor
incrementa y despus se estabiliza. En un digestor anaerbico operado
apropiadamente un pH de entre 6.8 y 7.2 ocurre a medida que los cidos voltiles
son convertidos a metano y dixido de carbono. El pH de un sistema anaerbico
es significativamente afectado por el contenido de dixido de carbono del biogs.

La estabilidad de los digestores es incrementado por una concentracin de

alcalinidad alta. Las bacterias productoras de metano son estrictamente
anaerbicas y son sumamente sensibles a los cambio en la alcalinidad, pH, y
temperatura.

Sensor
Para poder medir el pH necesitamos 2 componentes, un electro de pH, un
conector BNC hembra que funciona como tarjeta medidora de seales analgicas
para pH.

En conjunto todos estos componentes nos ayudan a tomar las mediciones de pH

para poder enviarlas a Arduino y este a mandar las seales a LabView y tener un
registro de cada medicin.

Figura 4. Elementos para censar el pH

12
Temperatura
La temperatura es uno de los factores ms importantes que afectan la actividad
microbiana dentro de un digestor anaerbico, y la produccin de metano es
fuertemente dependiente de la temperatura. Las fluctuaciones en la temperatura
afectan la actividad de las bacterias productoras de metano a un rango mayor que
la temperatura de trabajo.

La temperatura influye no solo en las bacterias productoras de metano sino

tambin en las bacterias productoras de cidos. Por lo tanto, las fluctuaciones en
la temperatura pueden ser ventajosas para ciertos grupos y desventajosas para
otros. Por ejemplo, un incremento de temperaturas de 10 C puede parar la
produccin de metano o la actividad de las bacterias productoras de metano en
un plazo de 2 horas, mientras que la produccin de cidos voltiles aumenta.

Sensor
El sensor de temperatura utilizado fue un LM35, este enva las seales a la tarjeta
Arduino y este a LabView.

Figura 5. Sensor de Temperatura LM35

Presin
Sensor
El sensor de presin que se utilizo fue Veris PG07AJ, que funcionan de igual
manera que los sensores mencionados anteriormente, envan a Arduino la seal y
este la enva a LabView para tener el registro.

13
Configuraciones
Configuraciones: SENSOR ARDUINO
Los 3 sensores que se utilizaron fueron conectados a una tarjeta Arduino que es la
encargada de recibir las seales analgicas de cada uno, convirtiendo estas
seales analgicas a digitales para poder leerlas en LabView el programa
seleccionado para llevar el registro de las variables a travs del tiempo necesario
a procesar el biogs.

La configuracin del sensor de temperatura a Arduino quedo de la siguiente

manera:

Figura 6. Conexiones del Sensor LM35 con Arduino

La configuracin del sensor de pH quedo de esta manera:

14
 Figura 7.Conexion del Electrodo a la tarjeta medidora del pH y a Arduino

Y por ltimo la configuracin del sensor de presin:

Figura 8. Conexiones del Sensor de Presin

Configuraciones: ARDUINO LABVIEW

Antes que nada es necesario el descargar el programa LabView y adems
descargar los drivers necesarios para LabView pueda programar con Arduino. Una
vez instalado todo de manera correcta la conexin entre Arduino y LabView es
sumamente sencilla ya que es salida de USB hacia la computadora. Una vez
conectado Arduino al computador se abre LabView y se es necesario el programar
para cada uno de los sensores un diagrama de bloques.

En este caso se realizaron 3 programaciones que se conjuntaban en un diagrama

de bloques general donde las mediciones de la variables se realizan una tras de
otra; es decir, primero se lea la variable de temperatura, despus de terminar en
ese circuito se pasaba a la variable de presin hasta llegar a la de pH, se hizo de
esta manera para tener un rango de tiempo para poder checar que las variables y
as poder corregir si una de ellas se encontraba mal.

15
 Figura 9. Conexin de Arduino al Computador

5. Tcnicas Analticas
Enumeracin bacteriana: el nmero ms probable
El mtodo del nmero ms probable (NMP) es una estrategia eficiente de
estimacin de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluacin
cuantitativa de clulas individuales no es factible. La tcnica se basa en la
determinacin de presencia o ausencia (positivo o negativo) en rplicas de
diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en
muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este
mtodo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la

16
poblacin(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad
poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de ese atributo en diluciones
seriadas y el uso de una tabla probabilstica.

Objetivo
Determinar el nmero de bacterias metanognicas en estircol de vaca con nopal.

Fundamento
Mtodo Numrico

Procedimiento
1. Preparar una solucin salina, agregar 36 gramos de Hidrxido de Sodio
(NaOH) y aforar a 1 litro en un matraz aforado.

2. Colocar 10 ml de heces con nopal en un vaso precipitado de 100 ml.

3. Agregar 1 gramo de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de

solucin salina y homogenizar por 5 min en un vortex.

4. Hacer dilucin en serie en 7 tubos de ensayo agregando al tubo 1

10 1
gramo de muestra en 9 ml de solucin salina a 0.85%, y de este agregar 1
ml al tubo 2
10 con 9ml de NaOH, y as sucesivamente hasta llegar a
tubo 10
7
.

Figura 10. Representacin de la tcnica analtica

5. Despus en cajas Petri con Agar TSA (Tripticasa de soya), sembrar desde
la dilucin 103 hasta la 107 .

17
 6. Inoculacin: Transfiera 5 l de la dilucin apropiada al rea
correspondiente. Repita esta operacin cinco veces por cada dilucin:

Figura 11. Diluciones

7. Permita que el inoculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa

con cinta testigo. Invierta la placa e incube a 25C por 7 das.

8. Evaluacin de crecimiento: Para cada dilucin en ascendencia evalu el

crecimiento o no crecimiento sobre cada rplica inoculada.

9. Meter a esterilizar despus de haber terminado el conteo.

Datos y Anlisis
Utilizando los valores ofrecidos en la tabla 1, determine la poblacin estimada para
su muestra (ej., 5-5-3-2-0: 1,383).

De su patrn de respuestas no estar en la tabla, promedie el valor estimado del

patrn superior e inferior presente en la tabla 1

Ejemplo: 5-4-1-1-0 no est en la tabla, entonces promedie 5-4-1-0-0 (169) y 5-4-2-

0-0 (216) como el resultado ms apropiado: 5-4-1-1-0 = (169+216)/2 = 193).

Este valor obtenido es el NMP sin ajustar.

Para calcular la densidad poblacional de la muestra, entonces tendr que

multiplicar el NMP sin ajustar por el factor de correccin de volumen (ver nota

18
Tabla 1) por el recproco del factor de dilucin menor inoculado en la placa (ej., 5-
5-3-2-0: 1,383 X 200 X 1000 = 2.78 x 108 clulas/g de suelo)

Preparacin de Solucin Salina.

Pesar 36 g de NaOH. Agregar 200 ml de Agitar para

agua destilada en homogenizar.
vaso precipitado.

Aforar a 1 litro con agua Vaciar la solucin a un matraz

destilada. aforado

19
Tabla 1. El nmero ms probable para series de diluciones en rplicas de cinco por nivel de dilucin

20
 Diagrama. Enumeracin Bacteriana: El nmero ms probable.

10 ml de Muestra 1 ml de Muestra + 9 ml de Agitar durante 5 min.

Solucin salina.

Hacer 5 repeticiones por Sembrar en caja petri

Dilucin en serie.
cada tubo.

Incubar a 26C durante 7 Evaluacin del

das. crecimiento.

21
Resultados nmero ms probable
Poblacin de bacterias metanognicas.

Caja petri 1: 5-5-4-1-0-0: 1690

Caja petri 2: 5-5-3-1-1-0: ---- 5-5-3-1-0-0: 1070 y 5-5-3-2-0-0: 1383 entonces:

1070

1383:2453/2:1227

Caja petri 3: 5-5-3-2-0-0: 1383

Humedad y cenizas
Objetivo
Determinar la humedad presente en una muestra tomada del biorreactor la cual se
calcula por la diferencia de peso entre una misma muestra hmeda, y despus de
haberse secado en la estufa hasta obtener un peso constante.
Determina la cantidad de materia orgnica presente en la muestra por calcinacin.

Fundamento del mtodo

El mtodo utilizado para esta medicin es el gravimtrico, para determinar
nicamente la cantidad de agua de los suelos y la cantidad de materia orgnica
presente.

Procedimiento
1. Se meten los crisoles limpios a la estufa de secado a 80 C por 4 horas
aproximadamente para ponerlos a peso constante.
2. Se sacan los crisoles con las pinzas y se colocan en el desecador por unos
20 minutos a que se enfren.
3. Se pesa los crisoles en la balanza analtica y se le agrega 1 g de muestra
con ayuda de una esptula.
4. se colocar el crisol con la muestra dentro de la estufa de secado a 80 C de
12 a 24 horas.
22
 5. secar la muestra de la estufa con las pinzas y colocarla dentro del
desecador por unos 20 minutos a que enfri.
6. Pesar la muestra seca en la balanza analtica.
7. Calcular los porcentajes de humedad en el suelo por la diferencia de peso.

% de humedad = (peso inicial- Peso final)

X 100
Peso inicial

8. Introducir los crisoles con muestra seca a la mufla a 550C por 8 horas
aproximadamente.
9. Apagar la mufla y esperar a que se enfri los crisoles.
10. Sacarlos de la mufla con ayuda de las pinzas para crisol y colocarlos en el
desecador por unos 30 minutos o hasta que se enfren.
11. Pesar los crisoles en la balanza analtica.
12. Realizar los clculos correspondientes para sacar el % de cenizas

% Cenizas totales = ( m2 m0 ) x 100

(m1-m0)
Dnde:
m2: masa en gramos de la cpsula con las cenizas
m1: masa en gramos de la cpsula con la muestra
m0: masa en gramos de la cpsula vaca

Diagrama

Meter los crisoles a la estufa a

80c por 4 horas para poner a peso Meter los crisole Pesar los crisoles y
constante. agregar 1 g de muestra
y dejar enfriar

Meter los crisoles

Meter los crisole
Pesar los crisoles con con muestra a la
con muestra seca
muestra seca
estufa a 80c
y dejar enfriar

23
 Hacer los clculos: Meter la muestra Meter los crisole

seca a la mufla con muestra

a 550c calcinada

Hacer los clculos: Pesar los

crisoles con

muestra calcinada
Resultados

% de humedad crisol 110 = (1.4138 0.0313) x 100 = 97.786

(1.4138)

Numero de crisol Peso Inicial Peso Final % de Humedad

110 1.4138 0.0313 97.786

256 1.1212 0.024 97.859
235 1.1108 0.0244 97.803
50 1.2116 0.0269 97.780

Numero de
Peso Inicial Peso Final % de Humedad
capsula
205 10.1333 0.2464 97.568
93 11.1558 0.2691 97.588
226 10.2486 0.2454 97.606
260 11.4171 0.2747 97.594

24
 % Cenizas totales crisol 110 = ( 20.9843 20.978 ) x 100 = 0.446%
(22.3918-20.9843)

Numero de cpsula con la cpsula con las % cenizas

cpsula vaca
crisol muestra cenizas totales
110 20.978 22.3918 20.9843 0.446
256 19.6506 20.7718 19.6555 0.437
235 20.0683 21.1791 20.0728 0.405
50 14.5617 15.7733 14.5625 0.066

Mtodo de combustin hmeda

Objetivo
Determinacin de carbono orgnico

Fundamento del mtodo

Volumtrico

Reactivos
Dicromato de potasio 1N.

Pesar 49.03 g de k2 cr2 o7 (previamente secado e estufa a 100 c por 2 horas) y

disolver en agua destilada y diluir a 1 litro.

cido sulfrico concentrado, mayor de 96 % p/p grado tcnico.

Solucin de sacarosa de 4.343 ppm de carbono.

Pesar 1.038 g de sacarosa en un beaker y disolver. Transferir esa solucin a un

baln aforado de 100 ml, enrasando con agua destilada.

Procedimiento
Calibracin de la curva patrn
De la solucin madera de sacarosa, aadir con micro bureta de 10ml en
Erlenmeyer de 125ml, las cantidades que abajo se sealan y luego agregar e
forma sucesiva los dems reactivos

25
 Tabla 2.Datos para la curva de calibracin

ml. solucin Ml de K2Cr2O7 Ml de H2SO4 Ml de agua Concentracin

Madre Concentracin En ppm de C
0 5 10 50 0
0,25 5 10 49,75 1,09
0,50 5 10 49,50 2,17
1,00 5 10 49,00 4,34
1,50 5 10 48,50 6,51
2,00 5 10 48,00 8,69
2,50 5 10 47,50 10,86
3,00 5 10 47,00 13,03
3,50 5 10 46,50 15,20

Trazar un grfico en papel milimtrico de lecturas de los patrones vs el porcentaje

(%) de carbono orgnico.

Nota: un mtodo alternativo consiste en evaporar las alcuotas de sacarosa a 80

C, enfriar a temperatura ambiente, aadir las cantidades de K 2 CR2 O7 y H2 SO4
correspondientes y luego 50ml de agua. (proceda luego como se explica ms
adelante en las muestras).

Procedimiento
Para esta determinacin seguimos en general la tcnica de walkley y black que
consiste en tratar el suelo con exceso de dicromato potsico en medio sulfrico.
Para calcular el dicromato consumido nos valemos del cambio de color que
+++
experimenta el sistema Cr2 O7 = 2 Cr que nos permite conocer
espectrofotomtricamente la cantidad de dicromato reducido el cual es funcin del
carbono orgnico existente en el suelo.

Para obtener una solucin clara que permita su fotometra hemos preferido
hacerlo por centrifugacin, ya que para lograr una mayor rapidez, ya para eliminar
el posible ataque del papel del filtro.

Los valores de transmitancia obtenidos se comparan con los que resultan al tratar
de igual forma muestras que contengan cantidades de carbono orgnico
conocidas.

26
Para las lecturas de transmitancia usamos espectrofotmetros Coleman y una
longitud de onda de 580, u otro tipo.

En forma ms detallada se hace:

Pese 0.5 g a 1.0g de suelo seco al aire y tamizado a 2 mm, en un

Erlenmeyer de 125ml. Si el suelo es arenoso o muy bajo en carbono
orgnico, es preferible pesar 1 g de suelo.

Aada con el dispensador automtico 5 ml de la solucin de K 2Cr2O7 IN,

agite suavemente antes de aadir el cido.

Con la bureta automtica, aada rpidamente 10 ml de H2SO4

(concentrado) y agite inmediatamente por 5 a 10 segundos. Hacer esto bajo
campana extractora de gases y dejar en reposo por 30 minutos.

Aada 50 ml de H2O en el mismo orden que se agreg el cido, mezclar y

dejar en contacto durante toda la noche a fin de que se complete la
reaccin.

Al da siguiente, si la solucin est clara decante entre 10 y 12 ml a un tubo

Keltt o celda de Spectronic 20; si la solucin esta turbia transfiera entre 10-
12 ml a un tubo de centrifuga, centrifugue por 5 minutos a 3000 rpm.

Una vez transferida la solucin problema, leer en u fotocolormetro con filtro

anaranjado (590 nm) o a 650 nm en un espectrofotmetro con foto tubo
azul, en ambos casos el cero del aparato deber ser ajustado con un blanco.

Utilizando la curva patrn, convertir las lecturas de las muestras en % de

carbono orgnico. Es conveniente preparar una tabla de valores de lecturas
del aparato vs % de carbono orgnico.

Nota: si las lecturas son superiores a las del patrn ms alto (por exceso), repetir
la determinacin con la mitad del peso de la muestra de suelo y multiplicar por dos
los resultados. Si las lecturas son menores que las del patrn menor (por efecto),
pesar el doble de la muestra y divida entre dos los resultados obtenidos.

27
Rango y sensibilidad
El procedimiento se ajustara a la parte lineal de la ley de Beer en 0 y 5 % de
carbono orgnico con sensibilidad de 1 mg de carbono orgnico.

Las mayores interferencias que tiene esta determinacin son con los cloruros,
nitratos, iones ferrosos y mangnicos, pues dichos componentes son capaces de
+4
reducir los iones Cr a Cr+3 dando resultados por exceso. De todas estas
interferencias la ms marcada es la del ion clorurocl-1 puesto que en pequeas
+6
concentraciones es capaz de reducir el Cr . Esta interferencia es fcilmente
eliminable con una solucin de sulfato de plata al 2%, aadida al H2SO4 usado.
Las dems interferencias deben estar en muy altas concentraciones para
introducir errores ponderables en el mtodo.

Observaciones al mtodo
Todo el procedimiento debe realizarse bajo campana de extraccin de gases.
Adems deben prevalecer en el proceso analtico iguales condiciones operativas
en cuanto a tiempo de contacto y reposo de reactivos, etc.

La curva patrn, debe construirse dos veces al ao y checarse con dos patrones
diariamente.

Dado que la digestin es una reaccin incompleta, hay que explicarle un factor de
correccin.

La heterogeneidad de las muestras de suelo, es un problema importante en la

distribucin del carbono orgnico y sus porcentajes de recuperacin y contenido
son aproximaciones donde la variabilidad donde de los tipos de suelo y las
diferentes profundidades a las cuales se tome la muestra.

Siendo el cido sulfrico un material corrosivo y deshidratante, hay que manejarlo

con sumo cuidado; e caso de que entre en contacto con su piel, lmpiese
rpidamente con papel y luego lvese con agua a presin; nunca debe lavarse
primero con agua.

28
Clculos
Dado que la oxidacin promedio que se produce durante la reaccin, es solo del
75 % el factor de correccin es de 100/75= 1.333

La construccin de la curva, viene dada por:

% C.O. =mg c. X 1/1000 X 1.333 X 100/ 0.5 g

Trazar un grfico en papel milimetrado de absorbancia vs ppm de c. puesto que

las lecturas en el fotocolormetro son en porciento de transmitancia, para
transfrmalo en absorbancia se usa la ecuacin:

A= 2 log. T.

Sobre esta curva, se determina los % de C.

Luego, si se desea, puede estructurarse una tabla valores. Para ello se tabula %
de carbono correspondientes a cada lectura foto colorimtrica.

NOTA: Este experimento no se pudo realizar por falta de reactivos.

Diagrama. Metodo de combustion humeda (walkley and black)

29
Mtodo de Kjeldahl
El nitrgeno es un elemento indispensable para la vida, forma parte de las
principales biomolculas de todos los seres vivos. Es tambin uno de los
elementos ms abundantes de la Tierra, pues en su forma gaseosa (N2)
constituye 78% de la atmsfera. Sin embargo, la cantidad de nitrgeno presente
en muchos suelos es escasa, debido a su propia dinmica y a su ciclo
biogeoqumico.

Objetivo
Determinar el nitrgeno total

Fundamento
Mtodo Volumtrico comprende tres fases fundamentales:

1) Digestin de la muestra. La muestra de suelo se somete a una digestin por

calentamiento con cido sulfrico y por una mezcla de sales que aceleran y
facilitan tanto la oxidacin de la materia orgnica como la conversin de todas las
formas de nitrgeno en N+3, que en medio cido se encuentran en forma de
radical amonio (NH4+); es decir, se llevan las formas orgnicas a formas
minerales de nitrgeno.

2) Destilacin. Una vez transformado el nitrgeno en NH4+, se expone a una base

fuerte como el hidrxido de sodio para formar hidrxido de amonio, que por la
accin del calor se descompone en amoniaco (NH3) y agua.

3) Valoracin. El amoniaco desprendido por la reaccin se recoge en un

30
Soluciones y reactivos
1) Solucin de cido brico con indicador: Pesar 20 g de cido brico (H3BO3)
y disolver en 750 ml de agua destilada. Calentar para la completa disolucin del
cido. Dejar enfriar y agregar 20 ml de la siguiente mezcla de indicadores: 0.099 g
de verde de bromocresol y 0.066 g de rojo de metilo disueltos en 100 ml de
alcohol etlico al 96%. El pH de la mezcla debe de ser de 5.0, si es ms cido
agregar algunas gotas de solucin de hidrxido de sodio 0.1 N, hasta que la
solucin adquiera una coloracin prpura o alcance el pH indicado. Completar el
volumen a 1 L con agua destilada y mezclar.

2) Solucin de hidrxido de sodio 0.1 N: Pesar 4 g de hidrxido de sodio

(NaOH), disolver en agua destilada y aforar a 1 L.

3) Mezcla de catalizadores: pesar 62.5 g de sulfato de potasio (KSO4) y 6.25 g

de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O). Homogeneizar la mezcla. 4)
Solucin de hidrxido de sodio 10 N: Pesar 200 g de hidrxido de sodio (NaOH),
disolver en agua destilada y aforar a 500 ml. El agua para preparar la solucin
debe ser hervida previamente para eliminar el CO2, dejndola enfriar antes de
agregarla.

5) Solucin de cido sulfrico 0.01 N: Diluir 0.28 ml de cido sulfrico

concentrado (H2SO4) hasta completar un volumen de 1 L con agua destilada. La
concentracin del cido debe ser estandarizada con la solucin valorada de
carbonato de sodio.

6) Solucin valorada de carbonato de sodio: Pesar 0.25 g de carbonato de

sodio (NaCO3), previamente secado en la estufa durante 2 horas a 105oC,
disolver en agua destilada y aforar a 50 ml.

7) Solucin de anaranjado de metilo: Pesar 0.1 g de anaranjado de metilo,

disolver en agua destilada y aforar a 100 ml.

Valoracin de la normalidad del cido sulfrico 0.01 N: Tomar 3 alcuotas

de 10 ml de la solucin de NaCO3. Agregar 5 o 6 gotas de anaranjado de metilo

31
como indicador. Titular con la solucin de cido sulfrico 0.01 N. Calcular la
normalidad real sustituyendo en la siguiente frmula:

Normalidad del H2SO4 = (0.050 g/ 53) X (1/ Promedio de ml gastados en las tres
alcuotas).

8) cido sulfrico concentrado (H2SO4).

9) Granallas de zinc.

Procedimiento
A. Digestin.
1. Pesar una muestra de suelo de 0.25 a 1 g, que depender de la materia
orgnica contenida en el suelo, entre ms materia orgnica tenga un suelo
menos sern los gramos de muestra.

2. Colocar la muestra de suelo en un matraz Kjeldahl seco.

3. Adicionar 2 g de mezcla de catalizadores.

4. Agregar 5 ml de cido sulfrico concentrado.

5. Poner a calentar en el digestor a una temperatura media, hasta que la

muestra se torne clara. La temperatura debe ser regulada de modo que los
vapores de cido sulfrico se condensen en el tercio inferior del cuello del
matraz Kjeldahl.

6. Hervir la muestra por una hora a partir de ese momento.

7. Una vez terminada la digestin, apagar el digestor y tapar con un frasco los
matraces para dejar enfriar.

B. Destilacin.
1. Aadir al matraz Kjeldahl fro 25 ml de agua destilada y mezclar
vigorosamente hasta una disolucin completa.

2. Transferir el lquido a un matraz Erlenmeyer de 500 ml. Colocar de 5 a 6

perlas de ebullicin.

32
 3. Adicionar 3 granallas de zinc. Aadir 15 ml de la solucin de hidrxido de
sodio 10 N, sosteniendo el matraz inclinado de modo que se deposite en el
fondo.

4. Colocar en la salida del aparato de destilacin un vaso de precipitados de

50 ml, que contenga 10 ml de la solucin de cido brico ms indicador.

5. Conectar el flujo de agua e iniciar la destilacin. Destilar hasta que el

volumen alcance la marca de 20 ml en el vaso de precipitados de 50 ml.
Una vez alcanzado dicho volumen, retirar el matraz y apagar el aparato.

C. Valoracin
1. Titular el nitrgeno amoniacal con la solucin de cido sulfrico 0.01 N
hasta que vire de verde a rosado fuerte.

Clculos
Calcular la concentracin de nitrgeno, sustituyendo en la siguiente frmula:

Dnde:

T = ml de cido sulfrico valorado gastados en la muestra.

B = ml de cido sulfrico valorado gastados en el blanco. N = normalidad exacta

del cido sulfrico.

S = peso de la muestra de suelo.

En la tabla 3 se presentan valores de nitrgeno que sirven para evaluar la calidad

de un suelo.

Tabla 3. Criterios para evaluar un suelo con base en su contenido de nitrgeno total (Moreno, 1978)

33
Diagrama Mtodo Kjeldahl

Digestin

Muestra + 2g de mezcla
Pesar
Catalizadora +
0.25 a 1g
5ml H2SO4 Concentrado

Calentar en
Una vez claro Digestor a
Dejarlo 1hr en el Temperatura media Nota:
Digestor hirviendo Esperar a que se
Aclare.

Taparlo y dejarlo

Enfriar

34
Destilacin

5 perlas de ebullicin
25ml H2O destilada + 3 granallas de Zinc
Mezclar vigorosamente En un matraz de 500ml

Destilar
Matraz Inclinado
10ml de AC. Brico + indicador
15ml de NaOH
Vaso 50ml

Destilar hasta alcanzar

APAGAR TODO 20ml en vaso pp

Titulacin

Realizar un
H2SO4 al 0.01N
Blanco
Hasta el cambio de color
De Verde a Rosa fuerte

Clculos:

N (%) = (T-B) (N) (1.4)

S
35
T= ml gastados H2SO4 muestra
B = ml gastados H2SO4 blanco
N = Normalidad exacta de H SO
Resultados
I) Blanco

Gasto del cido sulfrico = 32.33

%N= (18.67) (0.0102) (1.4) = 0.3913

0.6813

II) Muestra de heces fecales con nopal

Gasto de H2SO4 = 46.2

%N= (46.2 32.3) (0.0102) (1.4) = 0.2913

0.6813

0.2913X 6.25 = 1.8208% de protena

6. Conclusin
A lo largo del curso se aprendi de cuatro aspectos muy importantes que se deben
tomar en cuenta cuando se realiza un biorreactor.

Tanque
Instrumentacin
Tcnicas analticas
Servicios auxiliares

Estos cuatros aspectos en conjunto nos ayudan a elaborar de manera correcta un

biorreactor. Se aprendi a como disear desde el tanque donde se va llevar a

36
cabo el bioproceso hasta saber manejar programas de instrumentacin y todo
para tener un mejor conocimiento. En cada uno de los aspectos se aprendieron
cosas nuevas y se agudizaron aprendizajes.

Cuando se hace referencia al aspecto del tanque hay que hacer mencin que se
aprendi como es que hay que disear el tanque, de que dimensiones, su forma,
el material del cual estar construido entre otras cosas. Cabe mencionar que el
tanque que se dise no fue del todo el que se tena planeado desde el inicio por
circunstancias que interfirieron en el tiempo que se tena, por lo que se ideo uno
que fuera lo ms cercano al ideal y que su funcin fuera la misma.

De igual manera como sucedi con el tanque, con los otros 3 aspectos sucedi los
mismo por cuestiones de tiempo lo planeado no fue lo que se realiz pero si se
hicieron las cosas lo ms cercano a lo planeado.

Hemos aprendido a identificar los que utilizaremos y para qu sirve cada uno de
ellos, se trabaj en equipo presentado distintas soluciones y tomando la decisin
adecuada entre todo el equipo, an nos falta mucho por hacer pero hemos
identificado nuestros equipos para poner en marcha nuestro proceso fermentativo.

37